JPS63219372A - イヌリンフラクトトランスフエラ−ゼの製造法 - Google Patents
イヌリンフラクトトランスフエラ−ゼの製造法Info
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- JPS63219372A JPS63219372A JP5299187A JP5299187A JPS63219372A JP S63219372 A JPS63219372 A JP S63219372A JP 5299187 A JP5299187 A JP 5299187A JP 5299187 A JP5299187 A JP 5299187A JP S63219372 A JPS63219372 A JP S63219372A
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Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産1上凶M」公団
本発明は、イヌリンよりシーD−7ラクトシルフラノー
ス1.2’:2.3’ ジアンハイドライドを生成させ
る酵素・イヌリンフラクトトランスフェラーゼの製造法
に関するものであ従来の技術 □ イヌリン7ラクトトンスフエラーゼは、多糖類・イヌリ
ンを分解して下記構造式のジーD−7ラクトシル7ラノ
ース1.2’:2.3’ シアンハイドライド(略称D
FAIII)を生成させる酵素である。
ス1.2’:2.3’ ジアンハイドライドを生成させ
る酵素・イヌリンフラクトトランスフェラーゼの製造法
に関するものであ従来の技術 □ イヌリン7ラクトトンスフエラーゼは、多糖類・イヌリ
ンを分解して下記構造式のジーD−7ラクトシル7ラノ
ース1.2’:2.3’ シアンハイドライド(略称D
FAIII)を生成させる酵素である。
DFAI[[はフラクトースに似たされやかな甘味を有
する物質である。したがって、イヌリンからDFAII
Iを安価に製造することができれば、この物質を甘味料
として利用することが可能になるが、それに必要なイヌ
リン7ラクトトランスフエ 。
する物質である。したがって、イヌリンからDFAII
Iを安価に製造することができれば、この物質を甘味料
として利用することが可能になるが、それに必要なイヌ
リン7ラクトトランスフエ 。
ラーゼが、従来は入手困難であった。
従来、イヌリンフラクトトランスフェラーゼは、アース
ロバフタ−・ウレアファシェンスにより生産されること
が知られている(特公昭56−26400号)。し、か
じながら、アースロバフタ−・ウレア77シエンスのイ
ヌリンフラクトトランスフェラーゼ産生力は弱く、しか
もイヌリン7ラクトトランスフエラーゼと共に著量のβ
−7ラクトシグーゼ(イヌリンからフラクトースを生成
させDFAII[製造の妨げとなるので、分離のための
精製が不可欠である)を生産するから、この菌を用いる
方法によって高品質のイヌリンフラクトトランスフェラ
ーゼを経済的に得ることは困難である。
ロバフタ−・ウレアファシェンスにより生産されること
が知られている(特公昭56−26400号)。し、か
じながら、アースロバフタ−・ウレア77シエンスのイ
ヌリンフラクトトランスフェラーゼ産生力は弱く、しか
もイヌリン7ラクトトランスフエラーゼと共に著量のβ
−7ラクトシグーゼ(イヌリンからフラクトースを生成
させDFAII[製造の妨げとなるので、分離のための
精製が不可欠である)を生産するから、この菌を用いる
方法によって高品質のイヌリンフラクトトランスフェラ
ーゼを経済的に得ることは困難である。
発明が解決しようとする問題点
したがって本発明の目的は、イヌリンフラクトトランス
フェラーゼを安価に且つ豊富に生産し得る方法を提供す
ることにある。
フェラーゼを安価に且つ豊富に生産し得る方法を提供す
ることにある。
ヴを するための を
上記目的を達成するため、本発明者らは多くの全生物に
ついてイヌリン7ラク)トランス7ヱラーゼ産生能の観
点がらスクリーニングを行い、シュードモナス属に属す
る一細菌すなわちシュードモナス・フルオレッセンスM
ZNo、949(微工研菌寄第9235号)がすぐれた
性質を有することを知った。
ついてイヌリン7ラク)トランス7ヱラーゼ産生能の観
点がらスクリーニングを行い、シュードモナス属に属す
る一細菌すなわちシュードモナス・フルオレッセンスM
ZNo、949(微工研菌寄第9235号)がすぐれた
性質を有することを知った。
本発明は上記知見に基づくものであって、フラクト−ス
のポリマーを含有する培地を用いてシュードモナス属に
属するイヌリンフラクトトランスフェラーゼ生産菌を培
養し、培養物からイヌリン7ラクYトランスフエラーゼ
を採取することを特徴とするイヌリン7ラクトトランス
フエラーゼの製造法を提供するものである。
のポリマーを含有する培地を用いてシュードモナス属に
属するイヌリンフラクトトランスフェラーゼ生産菌を培
養し、培養物からイヌリン7ラクYトランスフエラーゼ
を採取することを特徴とするイヌリン7ラクトトランス
フエラーゼの製造法を提供するものである。
上記MZNo、949株は、広島県尾道市の土壌より分
離されたものであって、その菌学的性質は次のとおりで
ある。
離されたものであって、その菌学的性質は次のとおりで
ある。
(a) 形態
■細胞の形および大きさ二0.5〜0.7μmX 2
、 O〜3.5μmの桿菌 ■運動性:あり。1本以上の極鞭毛を有する。
、 O〜3.5μmの桿菌 ■運動性:あり。1本以上の極鞭毛を有する。
■胞子:なし
■ダラム染色性:陰性
■抗酸性:なし
くb) 生育
■肉汁寒天斜面培養:中程度の発育;透明;やや赤味を
帯びる。
帯びる。
■肉汁液体培11:中程度の発育;表面に膜形成。
■肉汁ゼラチン穿刺培養:液化しない。
■リドマスミルクー変化しない。
■BCPミルク:変化しない。
(c) 生理的性質
■硝酸塩の還元:する。
■脱窒:しない。
■MRテスト :陰性
■vPテスト :陰性
■インドールの生産:なし
■硫化水素の生成:なしくTSI寒天培地)■デン粉の
加水分解:なし [F]クエン酸の利用:あり(クリ入テンセン培地)■
無機窒素源の利用:硝酸塩およびアンモニウム塩を利用
する。
加水分解:なし [F]クエン酸の利用:あり(クリ入テンセン培地)■
無機窒素源の利用:硝酸塩およびアンモニウム塩を利用
する。
[相]色素の生成:水溶性、蛍光性の色素を生成する。
■オキシグーゼ:陽性
■カタラーゼ:陽性
■生育の範囲:p84〜10で生育する。4℃、27℃
で生育する。37℃で生育しない。
で生育する。37℃で生育しない。
[相]酸素に対する態度:好気性
■O−Fテスト ニゲルコースを酸化する。
(Hugh Leifson法)
[相]炭水化物の利用:D−グルコース、L−7ラビノ
ース、トレハロース、イ7シトール、L−バリペルーヒ
ドロキシ安息香酸を利用する。シェフロー人、ゲラニオ
ール、アセトアミド、エタノールを利用しない。
ース、トレハロース、イ7シトール、L−バリペルーヒ
ドロキシ安息香酸を利用する。シェフロー人、ゲラニオ
ール、アセトアミド、エタノールを利用しない。
@アルギニンの脱炭酸:陽性
[相]プロトカテキン酸の分解二オルト型の開裂以上の
諸性状をパーツエイのマニュアル・オブ・デターミネイ
ティブ・バクテリオロジー、$8版(1974)の記載
と照合することにより、重曹がシュードモナス・フルオ
レッセンスIミグラ 18951であることを確認した
。
諸性状をパーツエイのマニュアル・オブ・デターミネイ
ティブ・バクテリオロジー、$8版(1974)の記載
と照合することにより、重曹がシュードモナス・フルオ
レッセンスIミグラ 18951であることを確認した
。
本発明を実施する場合1三用いる培地としては、フラク
トースのポリマーを酵素誘導基質として含有させること
を除けば、特殊なものを必要としない。シュードモナス
属細菌の培養に通常使用される培地、すなわちグルコー
ス等の炭素源および酵母エキス、ペプトン等の有機窒素
源、その他硝酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マ
ンガンなどの無機塩類等を基本成分として適宜組合せた
pH5〜8程度の培地を用いることができる。培地に含
有させるフラクトースのポリマーとしては、イヌリン、
レバン等を用いることができ、その好適濃度は0.01
〜30%、特に好ましくは1〜5%である。
トースのポリマーを酵素誘導基質として含有させること
を除けば、特殊なものを必要としない。シュードモナス
属細菌の培養に通常使用される培地、すなわちグルコー
ス等の炭素源および酵母エキス、ペプトン等の有機窒素
源、その他硝酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マ
ンガンなどの無機塩類等を基本成分として適宜組合せた
pH5〜8程度の培地を用いることができる。培地に含
有させるフラクトースのポリマーとしては、イヌリン、
レバン等を用いることができ、その好適濃度は0.01
〜30%、特に好ましくは1〜5%である。
培養は、シュードモナス属細菌培養の常法に従って行う
ことができる。目的とする酵素は菌体外に生産される。
ことができる。目的とする酵素は菌体外に生産される。
生産は菌の対数増殖期に始まり、定常期にほぼ最大生産
量に達するので、通常は定常期に達したあと適当な時期
に培養を打切る。
量に達するので、通常は定常期に達したあと適当な時期
に培養を打切る。
培養終了後は直ちに遠心分離して菌体を除去する。シュ
ードモナス菌はβ・フラクトシグーゼを生産しないので
、菌体を除いただけの培養液でも粗酵素液として利用で
外るが、これを酵素精製の常法に従って精製すれば、よ
り活性が強く、利用し易いイヌリンフラクトトランスフ
ェラーゼを得ることができる。
ードモナス菌はβ・フラクトシグーゼを生産しないので
、菌体を除いただけの培養液でも粗酵素液として利用で
外るが、これを酵素精製の常法に従って精製すれば、よ
り活性が強く、利用し易いイヌリンフラクトトランスフ
ェラーゼを得ることができる。
得られるイヌリンフラクトトランスフェラーゼは安定で
、冷蔵庫で数カ月間保存可能であり、冷凍庫中ならば、
さらに長期間保存することがでざる。
、冷蔵庫で数カ月間保存可能であり、冷凍庫中ならば、
さらに長期間保存することがでざる。
発明の効果
後記実施例が実証するように、本発明の製法によればア
ースロバフタ−属細菌を用いる従来の製法よりもはるか
に高い収率で、且つ好ましくないβ−フラクトシダーゼ
を含まない状態でイヌリンフラクトトランスフェラーゼ
が得られ、この酵素を安価に且つ豊富に提供することが
可能になる。
ースロバフタ−属細菌を用いる従来の製法よりもはるか
に高い収率で、且つ好ましくないβ−フラクトシダーゼ
を含まない状態でイヌリンフラクトトランスフェラーゼ
が得られ、この酵素を安価に且つ豊富に提供することが
可能になる。
天1例
以下、実施例を示して本発明を説明する。なお、各側に
おいて示した酵素活性は、次の方法により測定したもの
である。
おいて示した酵素活性は、次の方法により測定したもの
である。
酵素活性測定法:適当に希釈した酵素液10m1と2%
イヌリン溶液(pH6,0の0,1M酢酸緩衝液溶液)
10mlとを混合し、37℃で30分間反応させたのち
、長さ10cmのセルに入れ、DFAIIIの生成にと
もなう旋光度変化を測定する。酵素液とイヌリン溶液を
混合した直後の旋光度を基準にして、旋光度を1分間に
プラスo、ooi度だけ変化させる酵素量を1単位とす
る。
イヌリン溶液(pH6,0の0,1M酢酸緩衝液溶液)
10mlとを混合し、37℃で30分間反応させたのち
、長さ10cmのセルに入れ、DFAIIIの生成にと
もなう旋光度変化を測定する。酵素液とイヌリン溶液を
混合した直後の旋光度を基準にして、旋光度を1分間に
プラスo、ooi度だけ変化させる酵素量を1単位とす
る。
実施例 1
イヌリン 1%、ペプトン 1%、K2HP0.0.1
%、NaN0= 0.5%、M8SO,−78200,
05%、M n C+ 2−48200.02%を含む
pH7,0の培地100m1を500m1容坂ロフルペ
ンに分注し、120℃で15分間加熱滅菌した。冷却後
、シュードモナス・フルオレッセンスMZ No。
%、NaN0= 0.5%、M8SO,−78200,
05%、M n C+ 2−48200.02%を含む
pH7,0の培地100m1を500m1容坂ロフルペ
ンに分注し、120℃で15分間加熱滅菌した。冷却後
、シュードモナス・フルオレッセンスMZ No。
949を1白金耳植菌し、27℃で4日間振とう培養し
た。
た。
培養終了後、遠心分離して培養液から菌体を除き、粗酵
素液を得た。その酵素活性は1sooo単位/100m
1であり、β−7ラクトシグーゼの混在は認められなか
った。
素液を得た。その酵素活性は1sooo単位/100m
1であり、β−7ラクトシグーゼの混在は認められなか
った。
比較のためシュードモナス菌にかえてアースロバフタ−
・ウレアファシェンスを用い、他は同様にして得られた
粗酵素液の酵素活性は、50単位/100@lであった
。
・ウレアファシェンスを用い、他は同様にして得られた
粗酵素液の酵素活性は、50単位/100@lであった
。
実施例 2
イヌリンにかえて同量のレバンを含有させた培地を用い
たほかは実施例1と同様にして、粗酵素液を得た。その
酵素活性は18000単位/100m1であり、β−7
ラクトシダーゼの混在は認められなかった。
たほかは実施例1と同様にして、粗酵素液を得た。その
酵素活性は18000単位/100m1であり、β−7
ラクトシダーゼの混在は認められなかった。
比較のためシュードモナス菌にかえてアースロバフタ−
・ウレアファシェンスを用い、他は同様にして得られた
粗酵素液の酵素活性は、50単位/100m1であった
。
・ウレアファシェンスを用い、他は同様にして得られた
粗酵素液の酵素活性は、50単位/100m1であった
。
Claims (3)
- (1)フラクトースのポリマーを含有する培地を用いて
シュードモナス属に属するイヌリンフラクトトランスフ
ェラーゼ生産菌を培養し、培養物からイヌリンフラクト
トランスフェラーゼを採取することを特徴とするイヌリ
ンフラクトトランスフェラーゼの製造法。 - (2)イヌリンフラクトトランスフェラーゼ生産菌とし
てシュードモナス・フルオレッセンスMZNo.949
(微工研菌寄第9235号)を用いる特許請求の範囲第
1項記載の製造法。 - (3)フラクトースのポリマーとしてイヌリンまたはレ
バンを含有する培地を用いる特許請求の範囲第1項記載
の製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5299187A JPS63219372A (ja) | 1987-03-10 | 1987-03-10 | イヌリンフラクトトランスフエラ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5299187A JPS63219372A (ja) | 1987-03-10 | 1987-03-10 | イヌリンフラクトトランスフエラ−ゼの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63219372A true JPS63219372A (ja) | 1988-09-13 |
Family
ID=12930389
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5299187A Pending JPS63219372A (ja) | 1987-03-10 | 1987-03-10 | イヌリンフラクトトランスフエラ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS63219372A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5057418A (en) * | 1988-03-07 | 1991-10-15 | Mitsubishi Kasei Corporation | Process for the preparation of difructose dianhydride iii |
-
1987
- 1987-03-10 JP JP5299187A patent/JPS63219372A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5057418A (en) * | 1988-03-07 | 1991-10-15 | Mitsubishi Kasei Corporation | Process for the preparation of difructose dianhydride iii |
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