JPS6310686B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は脳脊髄膜炎菌（meningococcus）多糖
類の安定化に関する。特に、本発明はＡ群の脳脊
髄膜炎菌萃膜多糖類の安定化に関する。さらに本
発明は安定化された脳脊髄膜炎菌多糖類を含有す
る脳脊髄膜炎菌性疾患に対するワクチンの製造に
関する。 脳脊髄膜炎菌により惹起される脳脊髄膜炎に対
する既知のワクチンは血清学的群ＡおよびＣの脳
脊髄膜炎菌から単離され得る群に特異的な多糖類
を必須の活性成分として含有している。多糖類は
脳脊髄膜炎菌培養液から単離され種々の沈澱およ
び抽出手段により精製される〔E.C.Gotschlich氏
他の「プログレス・イン・イミユンバイオロジカ
ル・スタンダード（Progr・immunbiol.
standard）」第５巻第485〜491頁（1972）および
「ダブリユー・エツチ・オー（WHO）・テクニカ
ル・レポート」第594号第66／67頁（1976）参
照〕。 脳脊髄膜炎菌多糖類およびそれから製造される
ワクチンはしばしば何ら満足にいく貯蔵安定性を
有せず、このことが活性物質の免疫賦与効果に影
響している。乾燥した、すなわち凍結乾燥した状
態においてすらも、脳脊髄膜炎菌ワクチンは極度
の不安定性を示す。乾燥した塊中における１％以
下の水分含量においてすらも、約４℃で貯蔵され
ていて数ケ月の間に、それより高い温度では１週
間以内ですでに検知しうる程度にまでこの物質は
加水分解される。従つて、脳脊髄膜炎菌多糖類は
一般に冷凍状態で貯蔵される。 脳脊髄膜炎菌多糖類を加水分解すると解重合を
生じそしてそれらを含有しているワクチンの免疫
原性の望ましからぬ減少を招来する。解重合はク
ロマトグラフイーにより分子量の変化を測定する
ことによつて追跡されうる。 リジアス・インステイテユート・フオア・ザボ
ルクゲゾンドハイト（Rijks Institut voorthe
Volkgezondheid）により1977年になされた研究
（Bull.Wdl.Hlth.Org.第55巻第43―48頁参照）か
ら、乳糖が脳脊髄膜炎菌多糖類の貯蔵に対する安
定性を相当改良することが知られている。従来使
用されてはいるが不満足なマンニツトによる安定
性をはるかにしのぐ乳糖による安定性の増大につ
いては何等説明されていない。 今や驚くべきことに、凍結乾燥条件下に脱水さ
れ続いて可逆的に水和するような水和物形成性化
合物が脳脊髄膜炎菌多糖類を安定化させうること
が見出された。 特に、これら化合物はサツカロース、ラフイノ
ース、グルコース、トレハロース、グリセロホス
フエートおよびグルタメートならびに乳糖であ
る。サツカロースおよびラフイノースが好ましく
他の上記化合物の一つと組合せるかあるいは単独
で用いられる。乳糖単独の場合を除いて、これら
は脳脊髄膜炎菌多糖類のための安定剤として本発
明の主題を形成している。 安定化には、水溶液中の脳脊髄膜炎菌多糖類約
100μg当り少くとも0.3mg好ましくは１〜100mgの
化合物が添加される。上記重量による量はワクチ
ンに適した水溶液の約１ml中に含まれる。 従つて、本発明の一主題は、脳脊髄膜炎菌多糖
類の水溶液中に、サツカロース、ラフイノースあ
るいはグルタメートの少くとも１種を多糖類の
100μg当り少くとも0.3mgの量で添加し、そして得
られる混合物を乾燥することからなる脳脊髄膜炎
菌多糖類の安定化における改良にある。 好ましい態様において混合物は次いで凍結乾燥
される。かくして安定化された脳脊髄膜炎菌多糖
類の水溶液はワクチン製造のための中間生成物あ
るいは非経口投与に適したワクチン製剤を表わ
す。 所望ならば乳糖と混合してサツカロース、ラフ
イノースあるいはグルタメートをも含有している
脳脊髄膜炎菌多糖類含有ワクチンを提供すること
が本発明のもう一つの目的である。 脳脊髄膜炎菌多糖類例えば群Ａのそれらの安定
剤として、所望ならば乳糖と混合してサツカロー
ス、ラフイノースあるいはグルタメートを使用す
ることが本発明のもう一つの目的である。 本発明の好ましい態様においては、少くとも１
種の安定化作用化合物が投与されるべきワクチン
溶液の１ml当り５〜20mgの濃度で使用される。も
し安定剤の含量が高すぎる（例えばサツカロース
で100mg／ml以上である）ならば、高張溶液が生
じ、従つて相当する多糖類ワクチンの非経口投与
の場合にこの濃度を越えるのは適当でない。 本発明化合物は脳脊髄膜炎菌多糖類に溶液の凍
結乾燥後に優れた安定性を付与するが、脳脊髄膜
炎菌多糖類の安定化のために安定剤を単独でなく
他の化合物と共に使用することが時として適当で
ある。かかる混合物は時に相乗効果を示し、脳脊
髄膜炎菌多糖類の貯蔵に対する安定性をさらに改
良する。かかる相乗作用は上記安定剤二種類の混
合物においてモル比１：２〜２：１の場合に特に
観察される。 脳脊髄膜炎菌多糖類を調製するには、「ダブリ
ユー・エイチ・オー（WHO）・テクニカル・レ
ポート」第594号第66〜67頁（1976）の記載によ
り操作するのが適当であり、それは以下の通りで
ある。 脳脊髄膜炎菌培養液あるいはその培養上澄み液
を0.1〜0.3％のセチルトリメチルアンモニウムブ
ロマイド〔セタブロン（Cetavlon）（登録商標）〕
と合し、２〜24時間後に沈降あるいは遠心分離に
より沈殿を単離する。この沈降物を0.8〜２モル
好ましくは１モルの塩化カルシウム水溶液で抽出
し、20〜30％好ましくは25％（ｖ／ｖ）までのエ
タノールと合しそして上澄みを遠心分離により単
離する。中間生成物をさらに70〜85％好ましくは
80％（ｖ／ｖ）までのエタノールを添加すること
により沈殿させ次いで遠心分離により単離する。 次いで中間生成物を中性ないし弱塩基性水性媒
質例えば0.1〜0.4M酢酸ナトリウム溶液中にと
り、次いでフエノールで抽出する。緩衝液で飽和
したフエノール溶液が使用される（組成：フエノ
ール100g＋緩衝液40ml）。水相を0.1M塩化カルシ
ウム溶液で透析し、超遠心分離に付す。次いで多
糖類をアルコール好ましくはエタノールを用いて
沈殿させ且つ乾燥させる。この物質を−20℃で貯
蔵する。 次いで所望ならば他の添加剤と混合した少くと
も１種の安定化化合物を上記したようにして得ら
れる再溶解脳脊髄膜炎菌多糖類に添加しこの混合
物を凍結乾燥する。 ワクチンに加工されたかかる生成物は本発明の
主題である。これらは例えば以下の組成を有す
る。 例 １ N.メニンギテイデイス群Ａ多糖類 2.5mg サツカロース 250mg 37℃で３ケ月間貯蔵する間に、凍結乾燥生成物
は実際上重合度の減少を何ら示さない。貯蔵の開
始時に0.26であつたKd値は0.29に上昇する。これ
に対比して同じ条件下に乳糖で安定化された試料
はKd値0.26から0.35への増大を示す。 ワクチンとしての投与には、凍結乾燥物を生理
学的に忍容されうる溶媒25ml中に溶解する。この
ためには、NaCl7mg／ml、PH7.4のりん酸ナトリ
ウム緩衝液0.015モル／ｌおよびナトリウムチメ
ルホネート0.05mg／mlを含有する溶液が使用され
る。 例 ２ N.メニンギテイデイス群Ａ多糖類 2.5mg 乳 糖 125mg サツカロース 125mg 凍結乾燥した物質を56℃で貯蔵している間に多
糖類のKd値は２ケ月以内に0.26から0.48に上昇す
る。乳糖250mgあるいはサツカロース250mgと合し
た生成物は同じ貯蔵期間後にKd値0.7以上を示
す。 Kdはセフアロース（Sepharose）（登録商標）
4Bでクロマトグラフ処理することにより測定さ
れ以下の等式により決められる。 Kd＝Ve―Vo／V_T―Vo Ve＝クロマトグラフイーの開始から多糖類抗原
の主要成分の溶離最大にいたるまでの溶離液の
量 Vo＝全部排除される物質例えば高分子ブルーデ
キストランの溶離容量 V_T＝全部含有される物質例えば放射性標識され
た水の溶離容量 この規定は０〓Kd〓１を意味する。限界値に
は完全に物質が排出される場合（Kd＝０）ある
いは物質が完全に包含される場合（Kd＝１）に
到達する。Kd値が高ければ分子寸法は減少して
いる。本発明の場合、Kd値の上昇は脳脊髄膜炎
菌多糖類が解重合していることを示す。 脳脊髄膜炎菌多糖類Ａ群の安定化 脳脊髄膜炎菌多糖類Ａ群の溶液に安定化剤を加
え、凍結乾燥した。貯蔵後、該多糖類の安定化の
指標としてKd値が測定された。結果は次のとお
りである。

【表】

【表】 注） １）および２）はそれぞれ実施例１および
２において示されている。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 脳脊髄膜炎菌多糖類の水溶液に、サツカロー
   ス、ラフイノースあるいはグルタメートの少くと
   も１種を多糖類100μg当り少くとも0.3mg添加し、
   そして得られる混合物を乾燥することからなる、
   脳脊髄膜炎菌多糖類の安定化方法。 ２ 脳脊髄膜炎菌多糖類の水溶液が非経口投与に
   適した製剤である前記特許請求の範囲第１項に記
   載されている方法。