JPS6289627A - 経鼻投与用貧血治療剤 - Google Patents
経鼻投与用貧血治療剤Info
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- JPS6289627A JPS6289627A JP61129470A JP12947086A JPS6289627A JP S6289627 A JPS6289627 A JP S6289627A JP 61129470 A JP61129470 A JP 61129470A JP 12947086 A JP12947086 A JP 12947086A JP S6289627 A JPS6289627 A JP S6289627A
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- A61K9/0043—Nose
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
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- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ヒトエリス口ポエチン（以下ヒトＥ Ｐ ＯＪと略記す
ることもある）は主として腎で産生される糖タンパクで
あり骨髄に存在する赤芽球系幹細胞に働いて赤血球系細
胞への分化を促進する体液性造血因子として知られてお
り、種々の貧血症に対する治療薬として期待されている
。
ることもある）は主として腎で産生される糖タンパクで
あり骨髄に存在する赤芽球系幹細胞に働いて赤血球系細
胞への分化を促進する体液性造血因子として知られてお
り、種々の貧血症に対する治療薬として期待されている
。
一方、タンパク質類の多くは一般的に難吸収性のためあ
るいは胃や腸で吸収される前に消化・分解されてしまう
ために、通常注射による血管内および組織内投与が行わ
れているが、注射による投与は患者に著しい苦痛や不便
を与えるために患者の不満が少なくない。
るいは胃や腸で吸収される前に消化・分解されてしまう
ために、通常注射による血管内および組織内投与が行わ
れているが、注射による投与は患者に著しい苦痛や不便
を与えるために患者の不満が少なくない。
近年注射剤に代わる投与手段として直腸内投与。
気管内投与，点眼投与，経鼻投与が提唱されており、特
に経鼻投与に於いてイン／ユリンやカルントニン等が有
効な吸収率を示したことから経鼻投与が新しい治療手段
としての可能性を有していることが示唆される。
に経鼻投与に於いてイン／ユリンやカルントニン等が有
効な吸収率を示したことから経鼻投与が新しい治療手段
としての可能性を有していることが示唆される。
ヒトＥＰＯは前述のタンパク質類と同じＷａＱに属して
いると考えられ、従ってヒトＥＰＯの注射以外の投与手
段の確立が望まれるが未だ成功した例はない。
いると考えられ、従ってヒトＥＰＯの注射以外の投与手
段の確立が望まれるが未だ成功した例はない。
かかる伏況に於いて本発明者等は貧血動物モデルを用い
てヒトＥＰＯを経鼻投与したところ、意外にも良好な吸
収性を示し、かつ貧血治療に有効であることを見出し、
本発明を完成した。
てヒトＥＰＯを経鼻投与したところ、意外にも良好な吸
収性を示し、かつ貧血治療に有効であることを見出し、
本発明を完成した。
本発明は新規経鼻投与用貧血治療剤の提供に係るもので
ある。
ある。
すなわち本発明はヒ１−ＥＰＯを臀効成分とする経は投
与用貧血治療剤であり、さらに詳しくはヒトＥＰ○と界
面活性剤を含む水性および／又は非水性媒体とから成る
経鼻投与用貧血治療剤である。
与用貧血治療剤であり、さらに詳しくはヒトＥＰ○と界
面活性剤を含む水性および／又は非水性媒体とから成る
経鼻投与用貧血治療剤である。
本発明に用いられるヒ）ＥＰＯとは前述の如き赤血球系
細胞への増殖９分化成熟をつかさどる微量生理活性物質
として規定される。従ってヒトＥＰＯは天然に存在する
形態のみならず、その医薬活性を有する誘導体および類
縁体を含むものである。
細胞への増殖９分化成熟をつかさどる微量生理活性物質
として規定される。従ってヒトＥＰＯは天然に存在する
形態のみならず、その医薬活性を有する誘導体および類
縁体を含むものである。
ヒトＥＰＯは種々の手段によって得ることができ、例え
ば正常人尿や再生不良性患者圧あるいは血漿（血清を含
む）から抽出する方法（Ｍｉｃａｋｅ等 Ｊ、 Ｂ、
Ｃ、ｌ旦、２−５５５８ （１９７７）；ＪＰＬｅｗｉ
ｎ等Ｊ、 Ｌａｂ、 ＣＩ ｉｎ、 Ｍｅｄ、 ｆｌｆ
ｌ ９８７１９６５）、ヒト腎癌細胞の組織培養物から
得る方法（特開昭５４−５５７９０号）、ヒトＥＰＯ産
生能を有するヒ） ＩＪンパ芽球様細胞から得る方法（
特開昭５７−４０４Ｊ１１号）等の他、ヒトリンパ球や
ヒト細胞株を細胞融合して得られるハイブリドーマを培
養して得る方法やヒトＥＰＯのメンセンジャーＲＮＡ
（ｍＲＮＡ）を採取することにより、そのｍＲＮＡを利
用して組換ＤＮＡ体を作成し、適当な宿主細胞（例えば
大腸菌の如き細菌類、酵母類、植物又は動物の細胞株等
）で産生させるような所謂、遺伝子工学的方法によって
も得られる（例えば５ｙｌｖｉａ等Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
Ｉ。
ば正常人尿や再生不良性患者圧あるいは血漿（血清を含
む）から抽出する方法（Ｍｉｃａｋｅ等 Ｊ、 Ｂ、
Ｃ、ｌ旦、２−５５５８ （１９７７）；ＪＰＬｅｗｉ
ｎ等Ｊ、 Ｌａｂ、 ＣＩ ｉｎ、 Ｍｅｄ、 ｆｌｆ
ｌ ９８７１９６５）、ヒト腎癌細胞の組織培養物から
得る方法（特開昭５４−５５７９０号）、ヒトＥＰＯ産
生能を有するヒ） ＩＪンパ芽球様細胞から得る方法（
特開昭５７−４０４Ｊ１１号）等の他、ヒトリンパ球や
ヒト細胞株を細胞融合して得られるハイブリドーマを培
養して得る方法やヒトＥＰＯのメンセンジャーＲＮＡ
（ｍＲＮＡ）を採取することにより、そのｍＲＮＡを利
用して組換ＤＮＡ体を作成し、適当な宿主細胞（例えば
大腸菌の如き細菌類、酵母類、植物又は動物の細胞株等
）で産生させるような所謂、遺伝子工学的方法によって
も得られる（例えば５ｙｌｖｉａ等Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
Ｉ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ ＵＳＡ、ＬＬ２７０８ （１９８
４）を参照）。前記の動物細胞株は種々の細胞株を用い
ることができるが好ましくはヒト又は哨乳動物由来の培
養細胞株であり、例えばＣＯ８細胞、チャイニーズハム
スター卵巣（ＣＨＯ）細胞、マウスＣ−１２７細胞など
を挙げることができる。これ等の方法によって得られた
ヒトＥＰＯは、医薬として使用できる純度を宵し、且つ
貧血治療に有効な十分な酸素運搬機能を宵する成熟赤血
球細胞を増殖させることができる限り、全て本発明に使
用することができる。
４）を参照）。前記の動物細胞株は種々の細胞株を用い
ることができるが好ましくはヒト又は哨乳動物由来の培
養細胞株であり、例えばＣＯ８細胞、チャイニーズハム
スター卵巣（ＣＨＯ）細胞、マウスＣ−１２７細胞など
を挙げることができる。これ等の方法によって得られた
ヒトＥＰＯは、医薬として使用できる純度を宵し、且つ
貧血治療に有効な十分な酸素運搬機能を宵する成熟赤血
球細胞を増殖させることができる限り、全て本発明に使
用することができる。
ヒトＥＰＯの投与量は患者の症状により異なるが、注射
による投与の場合、通常成人１人当たり０．１〜５００
μｇ好ましくは５〜１００μｇのヒ）ＥＰＯを含む製剤
を一週間に１〜７回投与し得るので、経鼻投与の場合は
ヒトＥＰＯの量は注射による投与よりも幾分多めとする
のがよい。
による投与の場合、通常成人１人当たり０．１〜５００
μｇ好ましくは５〜１００μｇのヒ）ＥＰＯを含む製剤
を一週間に１〜７回投与し得るので、経鼻投与の場合は
ヒトＥＰＯの量は注射による投与よりも幾分多めとする
のがよい。
本発明に使用される界面活性剤はヒ）ＥＰＯが州粘膜か
ら吸収されるのを促進するような所謂、吸収助剤として
作用するものであればよく、例えばコール酸ナトリウム
、タウロコール酸ナトリウムなとの胆汁酸塩、塩化ベン
ザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等のごときカチオン
界面活性剤、ポリオキンエチレンラウリルエーテル硫酸
ナトリウムなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル
硫酸塩、ラウリル硫酸ナトリウムなどのアルキル硫酸塩
等のごときアニオン界面活性剤、ソルビタンモノステア
レート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンセスキ
オレエートなどのソルビタン脂肪酸エステル、グリセリ
ルモノステアレート、クリセリルモノオレエートなとの
グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレートなどのポリオキシエチレンソルビタン
脂肪酸エステル等のごとき非イオン界面活性剤、イミダ
ゾリニウムベタイン型の両性界面活性剤、レシチンのご
ときリン脂質等を挙げることができる。
ら吸収されるのを促進するような所謂、吸収助剤として
作用するものであればよく、例えばコール酸ナトリウム
、タウロコール酸ナトリウムなとの胆汁酸塩、塩化ベン
ザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等のごときカチオン
界面活性剤、ポリオキンエチレンラウリルエーテル硫酸
ナトリウムなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル
硫酸塩、ラウリル硫酸ナトリウムなどのアルキル硫酸塩
等のごときアニオン界面活性剤、ソルビタンモノステア
レート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンセスキ
オレエートなどのソルビタン脂肪酸エステル、グリセリ
ルモノステアレート、クリセリルモノオレエートなとの
グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレートなどのポリオキシエチレンソルビタン
脂肪酸エステル等のごとき非イオン界面活性剤、イミダ
ゾリニウムベタイン型の両性界面活性剤、レシチンのご
ときリン脂質等を挙げることができる。
界面活性剤の量は使用する界面活性剤によって異なるが
、通常０．００１〜１０ （ｗ／ｖ）％、好まし く
は０．０１〜１（ｗ／ｖ）％の範囲がら選択することが
できる。しかしながら界面活性剤はＱ−粘膜に対する刺
激性を有することから、一定量以上添加しても吸収率に
変化か認められない場合はできるだけ界面活性剤の量を
少なくすることが望ましい。
、通常０．００１〜１０ （ｗ／ｖ）％、好まし く
は０．０１〜１（ｗ／ｖ）％の範囲がら選択することが
できる。しかしながら界面活性剤はＱ−粘膜に対する刺
激性を有することから、一定量以上添加しても吸収率に
変化か認められない場合はできるだけ界面活性剤の量を
少なくすることが望ましい。
本発明の水性または非水性媒体の例として、水性媒体は
水、生理食塩水、・緩衝液などを、また非水性媒体はエ
チルオレートの如き高級脂肪酸エステル、エタノール、
ベンノルアルコール、プロピレオ、グリコール、ポリエ
チレングリコール、グリセロール等の如きアルコール類
、オリーブ油、ゴマ？由、ダイズｌ由、ツバキｌ由、ト
ウモロコシｌ由、ナタネ曲、ラノカセイ油等の如き植物
油、パラフィン、ラノリン、ワセリン等の如き鉱物油ツ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）、 ジメチルスルホキ
サイド（ＤＭＳＯ）などを挙げることができる。これ等
の水性または非水性媒体は鼻粘膜に適用できる範囲内で
単独であるいは２種以上混合して使用することによって
、溶液、懸濁液、浮濁液、軟膏とするができる。
水、生理食塩水、・緩衝液などを、また非水性媒体はエ
チルオレートの如き高級脂肪酸エステル、エタノール、
ベンノルアルコール、プロピレオ、グリコール、ポリエ
チレングリコール、グリセロール等の如きアルコール類
、オリーブ油、ゴマ？由、ダイズｌ由、ツバキｌ由、ト
ウモロコシｌ由、ナタネ曲、ラノカセイ油等の如き植物
油、パラフィン、ラノリン、ワセリン等の如き鉱物油ツ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）、 ジメチルスルホキ
サイド（ＤＭＳＯ）などを挙げることができる。これ等
の水性または非水性媒体は鼻粘膜に適用できる範囲内で
単独であるいは２種以上混合して使用することによって
、溶液、懸濁液、浮濁液、軟膏とするができる。
本発明の経鼻投与用貧血治療剤はまた安定化側吸着防止
剤、防腐剤を含んでもよく、安定化剤や吸着防止剤の例
としてアルブミン、セラチンの如キタンパク質、エリト
ロース、トレオロースノ如きテトロース、アラビノース
、キノロース、リボース、リキソース、リブロース、キ
／ルロースの如キペントース、グルコース、ガラクトー
ス、マンノース、夕ロース、フルクトース、ソルボース
。
剤、防腐剤を含んでもよく、安定化剤や吸着防止剤の例
としてアルブミン、セラチンの如キタンパク質、エリト
ロース、トレオロースノ如きテトロース、アラビノース
、キノロース、リボース、リキソース、リブロース、キ
／ルロースの如キペントース、グルコース、ガラクトー
ス、マンノース、夕ロース、フルクトース、ソルボース
。
タガトース、プ７コース、の如きヘキソース、さらには
ペブタノース、オクタツース等の単糖類、マルチュロー
ス、マルトース、セロビオース、ケンチオビオース、メ
リビオース、ラクトース、ツラノース、ソホロース、ト
レハロース、イントレハロース、／ニークロース、ラク
チュロースの如き三糖類、マルトトリオース、セロトリ
オース。
ペブタノース、オクタツース等の単糖類、マルチュロー
ス、マルトース、セロビオース、ケンチオビオース、メ
リビオース、ラクトース、ツラノース、ソホロース、ト
レハロース、イントレハロース、／ニークロース、ラク
チュロースの如き三糖類、マルトトリオース、セロトリ
オース。
マン二ノトリオース、パノース、ブランチオース。
ラフィノースの如き三糖類、スタキオース、セロテトラ
オース、スコロドースの如き四糖類等のオリゴ糖類、さ
らにはデオキシリボース、ラムノース、フコース、キノ
ボース、チベロース、コリドースの如きデオキシ糖、グ
ルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、グロサミ
ン、カッサミンの如きアミノ糖、グルクロン酸、ガラチ
ュロン酸。
オース、スコロドースの如き四糖類等のオリゴ糖類、さ
らにはデオキシリボース、ラムノース、フコース、キノ
ボース、チベロース、コリドースの如きデオキシ糖、グ
ルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、グロサミ
ン、カッサミンの如きアミノ糖、グルクロン酸、ガラチ
ュロン酸。
マンヌユロン酸の如きウロン酸またはそのラクト／、イ
ノ／トール、フェル／トール、＋：ニル／トールの如キ
ンクリトール、グリセロール、エリスリトール、アドニ
トール、アラビトール、マンニトール、ソルビトール、
ガラクチトール、セドヘプチトール、ベルセイトールの
如き糖アルコール又はその無水物等の単糖類誘導体、デ
キストラ／。
ノ／トール、フェル／トール、＋：ニル／トールの如キ
ンクリトール、グリセロール、エリスリトール、アドニ
トール、アラビトール、マンニトール、ソルビトール、
ガラクチトール、セドヘプチトール、ベルセイトールの
如き糖アルコール又はその無水物等の単糖類誘導体、デ
キストラ／。
セルロースの如き多糖類、塩化ナトリウム、リン酸カリ
ウムの如き無機塩、クエン酸塩、酢酸塩の如きを機塩、
グリシン、アラニンの如きアミノ酸、グルタチオン、チ
オ硫酸ナトリウムの如き含硫還元剤、ポリエチレングリ
コールなどが挙げられ、また防腐剤の例として安息香酸
、安息香酸す） ＩＪウム、バラオキシ安息香酸エステ
ル、クロロブタノール、クレゾール、フェノール等を挙
げることができる。
ウムの如き無機塩、クエン酸塩、酢酸塩の如きを機塩、
グリシン、アラニンの如きアミノ酸、グルタチオン、チ
オ硫酸ナトリウムの如き含硫還元剤、ポリエチレングリ
コールなどが挙げられ、また防腐剤の例として安息香酸
、安息香酸す） ＩＪウム、バラオキシ安息香酸エステ
ル、クロロブタノール、クレゾール、フェノール等を挙
げることができる。
さらに本発明の経鼻投与用貧血治療剤は所望によりセル
ロース誘導体、天然ガム類、ビニル重合体、アクリル酸
電合体の如きゲル基剤を加えることによってゲル剤とす
ることもできる。
ロース誘導体、天然ガム類、ビニル重合体、アクリル酸
電合体の如きゲル基剤を加えることによってゲル剤とす
ることもできる。
本発明の経鼻投与用貧血治療剤は種々の方法で鼻腔内に
投与することができる。例えば貧血治療剤の粘度が低い
場合は点鼻容器より鼻腔内へ滴下する方法やスプレー容
器より鼻腔内へ噴霧する方法を、貧血治療剤の粘度が高
い場合にはチューブより鼻腔内に直接投与する方法や鼻
腔内に挿入可能な器具に一定量をとり鼻腔内に投与する
方法を選択することができる。
投与することができる。例えば貧血治療剤の粘度が低い
場合は点鼻容器より鼻腔内へ滴下する方法やスプレー容
器より鼻腔内へ噴霧する方法を、貧血治療剤の粘度が高
い場合にはチューブより鼻腔内に直接投与する方法や鼻
腔内に挿入可能な器具に一定量をとり鼻腔内に投与する
方法を選択することができる。
参考例１人尿からのヒトＥＰＯの製造
５ｔｅｐｌ） 人尿からの部分′ＨＩ製ＭｉＶａｋｅ
等の方法（Ｊ、 Ｂ、Ｃ，２ｉ２．５５５８ （１９７
７） ） に従って再生不良性貧血患者尿から１）Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘＧ５０による脱塩２）ＤＥＡＥセルロー
スによるバッチ吸着３）エタノール沈殿４）ＤＥＡＥア
ガロースカラムクロマトグラフィーを用いて部分精製さ
れたヒトＥＰＯを得た。得られた部分精製ヒ）ＥＰＯを
２４％プロパツール（和光紬薬社製）を含む０．１％ト
リフルオロ酢酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）溶液に溶解せし
めたのちＨＰＬＣによる精製を行った。
等の方法（Ｊ、 Ｂ、Ｃ，２ｉ２．５５５８ （１９７
７） ） に従って再生不良性貧血患者尿から１）Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘＧ５０による脱塩２）ＤＥＡＥセルロー
スによるバッチ吸着３）エタノール沈殿４）ＤＥＡＥア
ガロースカラムクロマトグラフィーを用いて部分精製さ
れたヒトＥＰＯを得た。得られた部分精製ヒ）ＥＰＯを
２４％プロパツール（和光紬薬社製）を含む０．１％ト
リフルオロ酢酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）溶液に溶解せし
めたのちＨＰＬＣによる精製を行った。
ＨＰＬＣ装置は日立６３８−５０型を用い２８０ｎｍと
２２０ｎｍの紫外部吸収により検出を行った。
２２０ｎｍの紫外部吸収により検出を行った。
５ｔｅｐ２） 逆相クロマトグラフィー２４％ｎ−プ
ロパツールを含んだｏ、１ｏＡト リフルオロ酢酸溶
液で予め平衡化したＭＭＣ−Ｃ８カラム （６ｍｍＸ３
０ｃｍ山村化学社製）に上記で得られた試料を注入し、
…Ｉ記平衡化溶液で溶出させた。未吸着画分が溶出後、
ｎ−プロパツールの７９度を２６％に高めて溶出させた
。ＥＰＯ活性の両分を集めた後、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−
１００（Ａｍｉｃｏｎ 社製商品名）を用いた限外ろ過
により０．１〜０．２ｍｌ に１縮した。
ロパツールを含んだｏ、１ｏＡト リフルオロ酢酸溶
液で予め平衡化したＭＭＣ−Ｃ８カラム （６ｍｍＸ３
０ｃｍ山村化学社製）に上記で得られた試料を注入し、
…Ｉ記平衡化溶液で溶出させた。未吸着画分が溶出後、
ｎ−プロパツールの７９度を２６％に高めて溶出させた
。ＥＰＯ活性の両分を集めた後、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−
１００（Ａｍｉｃｏｎ 社製商品名）を用いた限外ろ過
により０．１〜０．２ｍｌ に１縮した。
５ｔｅｐ３） 高速分子篩クロマトグラフィー上記濃
縮試料を２６％ｎ−プロパツールを含む０、１％ＴＦＡ
ｍ液で予メ平衡化したＴＳＫ−Ｇ３ｏｏｏｓｗカラム
（７，８ｍｍＸ６０ｃｍ東洋Ｕ達社製）に注入し、前記
平衡液で溶出させた。分子量２５０００〜３００００の
位置ｉ： Ｅ Ｐ Ｏ活性をｉするピークが得られたの
で、この部分を集めて凍結乾燥した。比活性は約 ９Ｘ
ｆＯｕ／ｍｇ であった。
縮試料を２６％ｎ−プロパツールを含む０、１％ＴＦＡ
ｍ液で予メ平衡化したＴＳＫ−Ｇ３ｏｏｏｓｗカラム
（７，８ｍｍＸ６０ｃｍ東洋Ｕ達社製）に注入し、前記
平衡液で溶出させた。分子量２５０００〜３００００の
位置ｉ： Ｅ Ｐ Ｏ活性をｉするピークが得られたの
で、この部分を集めて凍結乾燥した。比活性は約 ９Ｘ
ｆＯｕ／ｍｇ であった。
各ステップに於ける比活性を表Ｉに示す。
表Ｉ
＊アッセイ法 ｒｓｃｏｖｅ Ｎ、Ｎ等（Ｊ、 Ｃｅ
ｌ Ｊ、 Ｐｈｙｓ ｉ ｏ １． Ｅ、Ｌ ３０
９ （１９７４） ）の方法に従った。
ｌ Ｊ、 Ｐｈｙｓ ｉ ｏ １． Ｅ、Ｌ ３０
９ （１９７４） ）の方法に従った。
参考例２ ＣＨＯ細胞にょるヒ）ＥＰＯの製造特願昭５
９−２８１８６２ 号出願（発明の名称「真核細胞の形
質転換のための補助ＤＮＡを含むベクター」）に開示さ
れた方法に従って、ヒ）ＥＰＯをコードする遺伝子を組
込んだプラスミドをチャイニーズハムスター卵巣細胞（
ＣＨＯ細胞）で形質発現させることによってヒトＥＰＯ
を得た。要約すると以下の如くである。
９−２８１８６２ 号出願（発明の名称「真核細胞の形
質転換のための補助ＤＮＡを含むベクター」）に開示さ
れた方法に従って、ヒ）ＥＰＯをコードする遺伝子を組
込んだプラスミドをチャイニーズハムスター卵巣細胞（
ＣＨＯ細胞）で形質発現させることによってヒトＥＰＯ
を得た。要約すると以下の如くである。
ヒト胎児肝細胞から得られたヒトＥＰＯをコードする遺
伝子を組込んだラムダＨＥＰＯＦＬ１３クローンからの
ＤＮＡをＥｃｏＲｌ で消化させ、ヒ）ＥＰＯをコー
ドする遺伝子を含む小さなＲ１フラグメントを取り出し
プラスミドＲＫＩ−４のＥｃｏＲｌ 部位へ挿入した。
伝子を組込んだラムダＨＥＰＯＦＬ１３クローンからの
ＤＮＡをＥｃｏＲｌ で消化させ、ヒ）ＥＰＯをコー
ドする遺伝子を含む小さなＲ１フラグメントを取り出し
プラスミドＲＫＩ−４のＥｃｏＲｌ 部位へ挿入した。
このヒ）ＥＰＯ遺伝了を組込んだプラスミドＲＫＩ−４
をＤＨＦＲ−欠損ＣＨＯ細胞に組入れて形質転換させた
。ＣＨＯ細胞を核酸を欠如したアルファ媒地中で培養す
ることによって少なくとも１つのＤＨＦＲ遺伝子を何す
る細胞を選択した後、段階的にメトトレキサートの濃度
を高めてゆくことによってヒトＥＰＯを産生させた。最
終的な培養土浦中のヒ）ＥＰＯの比活性は２０ｕ／ｍｌ
であった。得られたヒトＥＰＯを含む培養液は０．
１％ＢＳＡを含む生理食塩水にて透析した後実験に供し
た。
をＤＨＦＲ−欠損ＣＨＯ細胞に組入れて形質転換させた
。ＣＨＯ細胞を核酸を欠如したアルファ媒地中で培養す
ることによって少なくとも１つのＤＨＦＲ遺伝子を何す
る細胞を選択した後、段階的にメトトレキサートの濃度
を高めてゆくことによってヒトＥＰＯを産生させた。最
終的な培養土浦中のヒ）ＥＰＯの比活性は２０ｕ／ｍｌ
であった。得られたヒトＥＰＯを含む培養液は０．
１％ＢＳＡを含む生理食塩水にて透析した後実験に供し
た。
参考例１および２で得たヒトＥＰＯを柴田腎炎ラットお
よびＬｅｗｉｓ肺癌マウスに１日数回にて１週間経鼻投
与したところ、赤血球数の増加回復が見みれた。さらに
はその投与期間中に特別な毒性は何ら観察されなかった
。
よびＬｅｗｉｓ肺癌マウスに１日数回にて１週間経鼻投
与したところ、赤血球数の増加回復が見みれた。さらに
はその投与期間中に特別な毒性は何ら観察されなかった
。
つぎに実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明する。
精製水にて全量 １００ とする。
精製水にて全量 １００ とする。
精製水にて全量 １００ とする。
精製水にて全量 １００ とする。
精製水にて全量 １００ とする。
精製水にて全量 １００ とする。
精製水にて全ｉ １００ とする。
ポリエチレングリコールにて全量 １００ とする
。
。
Claims (3)
- （１）ヒトエリスロポエチンを有効成分とする経鼻投与
用貧血治療剤。 - （２）ヒトエリスロポエチンと界面活性剤を含む水性お
よび／または非水性媒体とから成 る経鼻投与用貧血治療剤。 - （３）ヒトエリスロポエチンと界面活性剤を含む水性お
よび／または非水性媒体およびゲ ル基剤とから成る特許請求の範囲第２項記 載の経鼻投与用貧血治療剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60-121126 | 1985-06-04 | ||
| JP12112685 | 1985-06-04 |
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|---|---|
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| JPH0676336B2 JPH0676336B2 (ja) | 1994-09-28 |
Family
ID=14803522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61129470A Expired - Lifetime JPH0676336B2 (ja) | 1985-06-04 | 1986-06-03 | 経鼻投与用貧血治療剤 |
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|---|---|
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| DE (1) | DE3618561A1 (ja) |
| FR (1) | FR2587216B1 (ja) |
| GB (1) | GB2177914B (ja) |
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-
1986
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- 1986-06-03 JP JP61129470A patent/JPH0676336B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-03 FR FR8607946A patent/FR2587216B1/fr not_active Expired
- 1986-06-03 DE DE19863618561 patent/DE3618561A1/de not_active Withdrawn
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