JPS6249040B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS6249040B2 JPS6249040B2 JP57102347A JP10234782A JPS6249040B2 JP S6249040 B2 JPS6249040 B2 JP S6249040B2 JP 57102347 A JP57102347 A JP 57102347A JP 10234782 A JP10234782 A JP 10234782A JP S6249040 B2 JPS6249040 B2 JP S6249040B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent according
- reagent
- alkali
- ferrocyanide
- ethylenediaminetetraacetate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 44
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims abstract description 7
- -1 methylbenzothiazolone hydrazone Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 5
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 12
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 claims description 7
- JJYPMNFTHPTTDI-UHFFFAOYSA-N 3-methylaniline Chemical compound CC1=CC=CC(N)=C1 JJYPMNFTHPTTDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 claims description 6
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- AWIVZNKPSYRYGJ-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1,3-benzothiazole 1-oxide Chemical compound C1=CC=C2S(=O)C(C)=NC2=C1 AWIVZNKPSYRYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 claims description 3
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims 2
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000005691 oxidative coupling reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 abstract 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 abstract 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000006701 autoxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- CHEDYEULCNAXSQ-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-(2-methylphenyl)hydroxylamine Chemical compound CCN(O)C1=CC=CC=C1C CHEDYEULCNAXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 2
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 2
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RNMCCPMYXUKHAZ-UHFFFAOYSA-N 2-[3,3-diamino-1,2,2-tris(carboxymethyl)cyclohexyl]acetic acid Chemical compound NC1(N)CCCC(CC(O)=O)(CC(O)=O)C1(CC(O)=O)CC(O)=O RNMCCPMYXUKHAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QPKNFEVLZVJGBM-UHFFFAOYSA-N 2-aminonaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=CC2=C(O)C(N)=CC=C21 QPKNFEVLZVJGBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 3-cholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N acetoacetic acid Chemical compound CC(=O)CC(O)=O WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000004956 cyclohexylene group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- HLWRUJAIJJEZDL-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetate Chemical group [Na+].OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O HLWRUJAIJJEZDL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
本発明は、特に水溶液の形で優れた安定性を有
する、H2O2又はH2O2供与系を検出するための試
薬に関する。 H2O2により惹起される、メチルベンゾチアゾ
ロンヒドラゾン又はその誘導体と芳香族アミンと
の間の色素形成下に進行する酸化的カツプリング
を利用するH2O2又はH2O2供与系を検出するため
の試薬は公知である。これらの試薬の利点は、形
成された色素がその量の点でかつそれに相応して
色の濃さの点でH2O2量に比例しかつベールの法
則により色の濃さを測定することによりH2O2定
量測定を可能にする点に見られる。この試薬の他
の利点は、H2O2供与系、特に酵素系と一緒でも
使用できることである。一般に、H2O2を供与す
るこの種の酵素系は、測定すべき基質を試験溶液
中でH2O2の形成下に酸化するオキシダーゼから
成る。この形成されたH2O2はペルオキダーゼの
存在において前記の酸化的カツプリングを色素形
成下に生ぜしめる。しかし公知試薬の著しい欠点
は、その不安定性にある。このカツプリング成分
は色素形成下に自動酸化する傾向を有する。この
欠点は、これらの試薬の調製した水溶液で特に著
しい。しかし試薬の乾燥形もまた安定性の点で満
足させるものではない。 それ故、本発明は、この欠点を前記の利点を維
持しながら排除しかつ自動酸化に対する敏感性が
著しく改良された冒頭に挙げた種類の試薬を開示
するという課題を基礎とする。本発明の他の課題
は、H2O2量に相応する色素形成の直線性を改良
することである。 本発明によりこの課題は、安定化剤としてアル
カリフエロシアン化物、キレート剤及びアルカリ
アジドから成る群類から選択される物質少なくと
も１種を含有し、その際オキシダーゼを含有して
いてよい、緩衝物質及びペルオキシダーゼを含有
する、発色剤としてのメチルベンゾチアゾロンヒ
ドラゾン又はその誘導体及びそれと発色下に酸化
的にカツプリングし得る芳香族アミンをベースと
するH2O2又はH2O2供与系を検出するための安定
化された試薬により解決される。 殊に、本発明による試薬では発色剤はメチルベ
ンゾチアゾロンヒドラゾン（MBTH）とは芳香
族環のスルホネート基により異なつているメチル
ベンゾチアゾロンヒドラゾンスルホネート
（MBTH―Ｓ）から成る。 原則的に、芳香族アミンカツプリング成分とし
ては、キノイド構造を形成することができかつハ
ロゲン原子、低級アルキル基、ヒドロキシアルキ
ル基及び／又はスルホン酸基により置換されてい
るすべての芳香族化合物が好適である。好適なア
ミンは“アナリユーチカル・ケミストリー
（Analytical Chemistry）”，33巻、723〜724
（1961年）に挙げられている。それと共に、フエ
ノール化合物をカツプリング成分として使用する
こともでき、例えばナフトールジスルホン酸又は
アミノナフトールジスルホン酸。本発明範囲では
ｍ―トルイジン、特にエチルヒドロキシトルイジ
ン又はＮ―エチル―Ｎ―（２―スルホ―エチル）
―ｍ―トルイジンを使用すると優れている。 アルカリフエロシアン化物としてはナトリウム
―、カリウム―、リチウム―及びアンモニウム塩
を使用することができる。優れているのはカリウ
ム塩である。 キレート剤としては、錯体を形成し得る公知の
この種の物質が該当する。アミンポリアセテー
ト、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸又はその
ナトリウム塩、ニトリロトリ酢酸、Ｎ―ヒドロキ
シエチレンジニトリロテトラ酢酸、シクロヘキサ
ンジアミンテトラ酢酸、シクロヘキシレンジニト
リロテトラ酢酸、ジエチレントリアミンペンタ酢
酸及び３，６―ジオキサオクタメチレンジニトリ
ロテトラ酢酸が優れている。特に優れているのは
エチレンジアミンテトラ酢酸ナトリウム塩であ
る。 キレート剤の作用の仕方は知られていない。前
記の不所望な自動酸化反応は、キレート剤により
無害の錯体に変換された重金属イオンの触媒的作
用下に進行するのではないことは明らかである。
それというのも触媒量の重金属イオンの添加によ
り自動酸化反応は惹起されないからである。 アルカリアジドとしてはナトリウム塩が優れて
いるが、カリウム―、リチウム―及びアンモニウ
ム塩を使用することもできる。 最高の結果は、アルカリフエロシアン化物、キ
レート剤及びアルカリアジドを同時に含有する本
発明による試薬により得られる。優れている組成
では、その試薬は、調製した試薬水溶液１当り
フエロシアン化物１〜500mg、エチレンジアミン
テトラアセテート１〜1000mg及びアルカリアジド
５〜500mgを含有する。 発色剤の濃度が0.01〜５ミリモル／であり、
芳香族アミンの量が0.01〜10ミリモル／である
と有利である。フエロシアン化物10〜50mg、エチ
レンジアミンテトラアセテート100〜1000mg及び
アルカリアジド50〜500mgを含有する組成は特に
優れている。 緩衝物質としては、ほぼ中性範囲、つまり約PH
5.0〜9.0で緩衝作用をするものが好適である。一
般に好適な濃度は0.02〜0.5モル／である。好
適なペルオキシダーゼ量は0.005〜10×103U／
である。 本発明による試薬は吸収性担体、例えば紙、多
孔性プラスチツクシート、多孔性ガラス顆粒等上
に施すのにも好適である。優れた担体は試験片に
関して公知であるようなものである。この場合に
は、H2O2検出は試験すべき試料溶液を本発明に
よる試験を含有する薄片状又は帯状担体上に滴下
することにより又は所定量の担持物質を試験溶液
中に装入することにより定性的に行なうことがで
きる。後者の場合、担体を用いない試薬の場合と
同様にして定量的測定を実施することができる。 既に記載したように、本発明による試薬は
H2O2供与系を測定するにも好適である。それは
前反応でH2O2の形成下に化学量論的に反応する
化合物が該当する。代表的な例は、オキシダーゼ
により定量的に反応する物質、例えばグルコー
ス、コレステリン、尿酸、グリセリン、アミノ
酸、キサンチン、ラクテート等である。この場
合、付加的に本発明による試薬は相応するオキシ
ダーゼを含有し、それ故尿酸の場合は例えばウリ
カーゼである。 本発明による種々の安定化剤の使用下に本発明
により達成される安定効果は後記の表から明らか
である。表は、MBTH又はMBTH―S0.2ミリモ
ル／、エチルヒドロキシトルイジン0.6ミリモ
ル／及びリン酸カリウム（PH7.0）0.1モル／
を25℃で含有する水溶液の吸光度上昇を示す。
する、H2O2又はH2O2供与系を検出するための試
薬に関する。 H2O2により惹起される、メチルベンゾチアゾ
ロンヒドラゾン又はその誘導体と芳香族アミンと
の間の色素形成下に進行する酸化的カツプリング
を利用するH2O2又はH2O2供与系を検出するため
の試薬は公知である。これらの試薬の利点は、形
成された色素がその量の点でかつそれに相応して
色の濃さの点でH2O2量に比例しかつベールの法
則により色の濃さを測定することによりH2O2定
量測定を可能にする点に見られる。この試薬の他
の利点は、H2O2供与系、特に酵素系と一緒でも
使用できることである。一般に、H2O2を供与す
るこの種の酵素系は、測定すべき基質を試験溶液
中でH2O2の形成下に酸化するオキシダーゼから
成る。この形成されたH2O2はペルオキダーゼの
存在において前記の酸化的カツプリングを色素形
成下に生ぜしめる。しかし公知試薬の著しい欠点
は、その不安定性にある。このカツプリング成分
は色素形成下に自動酸化する傾向を有する。この
欠点は、これらの試薬の調製した水溶液で特に著
しい。しかし試薬の乾燥形もまた安定性の点で満
足させるものではない。 それ故、本発明は、この欠点を前記の利点を維
持しながら排除しかつ自動酸化に対する敏感性が
著しく改良された冒頭に挙げた種類の試薬を開示
するという課題を基礎とする。本発明の他の課題
は、H2O2量に相応する色素形成の直線性を改良
することである。 本発明によりこの課題は、安定化剤としてアル
カリフエロシアン化物、キレート剤及びアルカリ
アジドから成る群類から選択される物質少なくと
も１種を含有し、その際オキシダーゼを含有して
いてよい、緩衝物質及びペルオキシダーゼを含有
する、発色剤としてのメチルベンゾチアゾロンヒ
ドラゾン又はその誘導体及びそれと発色下に酸化
的にカツプリングし得る芳香族アミンをベースと
するH2O2又はH2O2供与系を検出するための安定
化された試薬により解決される。 殊に、本発明による試薬では発色剤はメチルベ
ンゾチアゾロンヒドラゾン（MBTH）とは芳香
族環のスルホネート基により異なつているメチル
ベンゾチアゾロンヒドラゾンスルホネート
（MBTH―Ｓ）から成る。 原則的に、芳香族アミンカツプリング成分とし
ては、キノイド構造を形成することができかつハ
ロゲン原子、低級アルキル基、ヒドロキシアルキ
ル基及び／又はスルホン酸基により置換されてい
るすべての芳香族化合物が好適である。好適なア
ミンは“アナリユーチカル・ケミストリー
（Analytical Chemistry）”，33巻、723〜724
（1961年）に挙げられている。それと共に、フエ
ノール化合物をカツプリング成分として使用する
こともでき、例えばナフトールジスルホン酸又は
アミノナフトールジスルホン酸。本発明範囲では
ｍ―トルイジン、特にエチルヒドロキシトルイジ
ン又はＮ―エチル―Ｎ―（２―スルホ―エチル）
―ｍ―トルイジンを使用すると優れている。 アルカリフエロシアン化物としてはナトリウム
―、カリウム―、リチウム―及びアンモニウム塩
を使用することができる。優れているのはカリウ
ム塩である。 キレート剤としては、錯体を形成し得る公知の
この種の物質が該当する。アミンポリアセテー
ト、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸又はその
ナトリウム塩、ニトリロトリ酢酸、Ｎ―ヒドロキ
シエチレンジニトリロテトラ酢酸、シクロヘキサ
ンジアミンテトラ酢酸、シクロヘキシレンジニト
リロテトラ酢酸、ジエチレントリアミンペンタ酢
酸及び３，６―ジオキサオクタメチレンジニトリ
ロテトラ酢酸が優れている。特に優れているのは
エチレンジアミンテトラ酢酸ナトリウム塩であ
る。 キレート剤の作用の仕方は知られていない。前
記の不所望な自動酸化反応は、キレート剤により
無害の錯体に変換された重金属イオンの触媒的作
用下に進行するのではないことは明らかである。
それというのも触媒量の重金属イオンの添加によ
り自動酸化反応は惹起されないからである。 アルカリアジドとしてはナトリウム塩が優れて
いるが、カリウム―、リチウム―及びアンモニウ
ム塩を使用することもできる。 最高の結果は、アルカリフエロシアン化物、キ
レート剤及びアルカリアジドを同時に含有する本
発明による試薬により得られる。優れている組成
では、その試薬は、調製した試薬水溶液１当り
フエロシアン化物１〜500mg、エチレンジアミン
テトラアセテート１〜1000mg及びアルカリアジド
５〜500mgを含有する。 発色剤の濃度が0.01〜５ミリモル／であり、
芳香族アミンの量が0.01〜10ミリモル／である
と有利である。フエロシアン化物10〜50mg、エチ
レンジアミンテトラアセテート100〜1000mg及び
アルカリアジド50〜500mgを含有する組成は特に
優れている。 緩衝物質としては、ほぼ中性範囲、つまり約PH
5.0〜9.0で緩衝作用をするものが好適である。一
般に好適な濃度は0.02〜0.5モル／である。好
適なペルオキシダーゼ量は0.005〜10×103U／
である。 本発明による試薬は吸収性担体、例えば紙、多
孔性プラスチツクシート、多孔性ガラス顆粒等上
に施すのにも好適である。優れた担体は試験片に
関して公知であるようなものである。この場合に
は、H2O2検出は試験すべき試料溶液を本発明に
よる試験を含有する薄片状又は帯状担体上に滴下
することにより又は所定量の担持物質を試験溶液
中に装入することにより定性的に行なうことがで
きる。後者の場合、担体を用いない試薬の場合と
同様にして定量的測定を実施することができる。 既に記載したように、本発明による試薬は
H2O2供与系を測定するにも好適である。それは
前反応でH2O2の形成下に化学量論的に反応する
化合物が該当する。代表的な例は、オキシダーゼ
により定量的に反応する物質、例えばグルコー
ス、コレステリン、尿酸、グリセリン、アミノ
酸、キサンチン、ラクテート等である。この場
合、付加的に本発明による試薬は相応するオキシ
ダーゼを含有し、それ故尿酸の場合は例えばウリ
カーゼである。 本発明による種々の安定化剤の使用下に本発明
により達成される安定効果は後記の表から明らか
である。表は、MBTH又はMBTH―S0.2ミリモ
ル／、エチルヒドロキシトルイジン0.6ミリモ
ル／及びリン酸カリウム（PH7.0）0.1モル／
を25℃で含有する水溶液の吸光度上昇を示す。
【表】
【表】
該表の数値は、本発明による試薬が本発明によ
る安定化用試薬を含有しない試薬に比べて極めて
優れた安定性を有することを示す。 測定は、その都度の溶液にペルオキシダーゼ
1U／mlを添加し、吸光度を測定し、１時間後に
再び吸光度を測定しかつ吸光度差を測定して実施
した。 本発明による試薬がオキシダーゼの存在におい
ても優れた安定性を有することは次の実施例から
明らかである。 例 リン酸カリウム，PH7.0 0.1モル エチルヒドロキシトルイジン 0.4ミリモル MBTH―Ｓ 0.2ミリモル ウリカーゼ 300U ペルオキシダーゼ 1000U フエロシアン化カリウム 20mg EDTA―Na2 200mg アジ化ナトリウム 100mg より成る本発明による試薬を水１中に溶解しか
つ吸光度を測定した。25℃で1.5時間後に再び吸
光度を測定した。 比較のために、フエロシアン化カリウム、
EDTA及びアジ化ナトリウムを含有しない相応す
る試薬を製造した。 後者の本発明によらない試薬では吸光度変化
0.172E／時間が認められた。本発明試薬では相
応する変化は0.0072E／時間であつた。
る安定化用試薬を含有しない試薬に比べて極めて
優れた安定性を有することを示す。 測定は、その都度の溶液にペルオキシダーゼ
1U／mlを添加し、吸光度を測定し、１時間後に
再び吸光度を測定しかつ吸光度差を測定して実施
した。 本発明による試薬がオキシダーゼの存在におい
ても優れた安定性を有することは次の実施例から
明らかである。 例 リン酸カリウム，PH7.0 0.1モル エチルヒドロキシトルイジン 0.4ミリモル MBTH―Ｓ 0.2ミリモル ウリカーゼ 300U ペルオキシダーゼ 1000U フエロシアン化カリウム 20mg EDTA―Na2 200mg アジ化ナトリウム 100mg より成る本発明による試薬を水１中に溶解しか
つ吸光度を測定した。25℃で1.5時間後に再び吸
光度を測定した。 比較のために、フエロシアン化カリウム、
EDTA及びアジ化ナトリウムを含有しない相応す
る試薬を製造した。 後者の本発明によらない試薬では吸光度変化
0.172E／時間が認められた。本発明試薬では相
応する変化は0.0072E／時間であつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 緩衝物質及びペルオキシダーゼを含有する、
発色剤としてのメチルベンゾチアゾロンヒドラゾ
ン又はその誘導体及びそれと発色下に酸化的にカ
ツプリングし得る芳香族アミンをベースとする
H2O2又はH2O2供与系を検出するための安定化さ
れた試薬において、安定化剤としてアルカリフエ
ロシアン化物、キレート剤及びアルカリアジドか
ら成る群類から選択される物質少なくとも１種を
含有することを特徴とする、H2O2又はH2O2供与
系を検出するための安定化された試薬。 ２ メチルベンゾチアゾロンヒドラゾンスルホネ
ートを含有する特許請求の範囲第１項記載の試
薬。 ３ 芳香族アミンとしてｍ―トルイジンを含有す
る特許請求の範囲第１項又は第２項記載の試薬。 ４ アルカリフエロシアン化物をカリウム塩とし
て含有する特許請求の範囲第１項から第３項まで
のいずれか１項記載の試薬。 ５ キレート剤としてアミンポリアセテートを含
有する特許請求の範囲第１項から第４項までのい
ずれか１項記載の試薬。 ６ 調製した溶液１当りフエロシアン化カリウ
ム１〜500mg、エチレンジアミンテトラアセテー
ト１〜1000mg及びアジ化ナトリウム５〜500mgを
含有する特許請求の範囲第５項記載の試薬。 ７ 調製した溶液１当りフエロシアン化カリウ
ム10〜50mg、エチレンジアミンテトラアセテート
100〜1000mg及びアジ化ナトリウム50〜500mgを含
有する特許請求の範囲第６項記載の試薬。 ８ 吸収性担持材料に含浸されている特許請求の
範囲第１項から第７項までのいずれか１項記載の
試薬。 ９ 緩衝物質及びペルオキシダーゼを含有する、
発色剤としてのメチルベンゾチアゾロンヒドラゾ
ン又はその誘導体及びそれと発色下に酸化的にカ
ツプリングし得る芳香族アミンをベースとする
H2O2又はH2O2供与系を検出するための安定化さ
れた試薬において、安定化剤としてアルカリフエ
ロシアン化物、キレート剤及びアルカリアジドか
ら成る群類から選択される物質少なくとも１種を
含有し、その際オキシダーゼも含有することを特
徴とする、H2O2又はH2O2供与系を検出するため
の安定化された試薬。 １０ メチルベンゾチアゾロンヒドラゾンスルホ
ネートを含有する特許請求の範囲第９項記載の試
薬。 １１ 芳香族アミンとしてｍ―トルイジンを含有
する特許請求の範囲第９項又は第１０項記載の試
薬。 １２ アルカリフエロシアン化物をカリウム塩と
して含有する特許請求の範囲第９項から第１１項
までのいずれか１項記載の試薬。 １３ キレート剤としてアミンポリアセテートを
含有する特許請求の範囲第１項から第４項までの
いずれか１項記載の試薬。 １４ 調製した溶液１当りフエロシアン化カリ
ウム１〜500mg、エチレンジアミンテトラアセテ
ート１〜1000mg及びアジ化ナトリウム５〜500mg
を含有する特許請求の範囲第１３項記載の試薬。 １５ 調製した溶液１当りフエロシアン化カリ
ウム10〜50mg、エチレンジアミンテトラアセテー
ト100〜1000mg及びアジ化ナトリウム50〜500mgを
含有する特許請求の範囲第１４項記載の試薬。 １６ 吸収性担持材料に含浸されている特許請求
の範囲第９項から第１５項までのいずれか１項記
載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE31245900 | 1981-06-23 | ||
| DE19813124590 DE3124590A1 (de) | 1981-06-23 | 1981-06-23 | Stabilisiertes reagenz zum nachweis von h(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)o(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58899A JPS58899A (ja) | 1983-01-06 |
| JPS6249040B2 true JPS6249040B2 (ja) | 1987-10-16 |
Family
ID=6135170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57102347A Granted JPS58899A (ja) | 1981-06-23 | 1982-06-16 | Ｈ↓２ｏ↓２又はｈ↓２ｏ↓２供与系を検出するための安定化された試薬 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0071730B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58899A (ja) |
| AT (1) | ATE10859T1 (ja) |
| DE (2) | DE3124590A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005292110A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Shino Test Corp | 非特異的発色の抑制方法 |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58141797A (ja) * | 1982-02-17 | 1983-08-23 | Hitachi Ltd | 複数項目分析方法 |
| US4587220A (en) * | 1983-03-28 | 1986-05-06 | Miles Laboratories, Inc. | Ascorbate interference-resistant composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances |
| US4615972A (en) * | 1983-11-04 | 1986-10-07 | Immuno Concepts, Inc. | Stabilization of indicators for detecting enzyme activity |
| JPH0653074B2 (ja) * | 1984-02-24 | 1994-07-20 | 大日本印刷株式会社 | 体液検査体 |
| EP0355864A3 (en) * | 1984-03-15 | 1991-09-18 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method of quantitatively measuring an oxidative substance by using triphenyl methane type leuco compounds as coloring matter |
| DE3411997A1 (de) * | 1984-03-31 | 1985-10-17 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue redox-indikatoren |
| US4810633A (en) * | 1984-06-04 | 1989-03-07 | Miles Inc. | Enzymatic ethanol test |
| US4672029A (en) * | 1984-12-06 | 1987-06-09 | Eastman Kodak Company | Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes |
| DE3446637A1 (de) * | 1984-12-20 | 1986-07-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel zur verbesserung des nachweises h(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)0(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)-liefernder oxidase-reaktionen und seine verwendung |
| EP0213156A1 (en) * | 1985-02-11 | 1987-03-11 | Travenol-Genentech Diagnostics | Stabilized enzyme substrate solutions |
| DE3618752A1 (de) * | 1986-06-04 | 1987-12-10 | Bayer Ag | 4,6-dinitrobenzthiazolonhydrazone(2) |
| DE3625852A1 (de) * | 1986-07-31 | 1988-02-04 | Miles Lab | Verbesserte testmittel und verfahren zu deren herstellung |
| JPS63163164A (ja) * | 1986-12-25 | 1988-07-06 | Konica Corp | 多層分析素子 |
| JP2632391B2 (ja) * | 1988-11-16 | 1997-07-23 | 和光純薬工業株式会社 | ペルオキシダーゼの安定化方法 |
| CA1336062C (en) * | 1989-03-17 | 1995-06-27 | Chemtrak, Inc. | Hydrogen peroxide stabilization in assays |
| IT1231737B (it) * | 1989-08-31 | 1991-12-21 | Instrumentation Lab Spa | Metodo per la inibizione di colorazione aspecifica e spontanea nei reattivi basati sulla reazione di trinder mediante l'uso di chelanti. |
| US5206006A (en) * | 1989-08-31 | 1993-04-27 | Instrumentation Laboratory Spa | Stabilized trinder reagent |
| JPH04200396A (ja) * | 1990-11-30 | 1992-07-21 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 過酸化水素の酵素学的高感度測定法及びそのための試薬 |
| JPH07155196A (ja) * | 1993-12-10 | 1995-06-20 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 生体成分の測定法 |
| CN114214389B (zh) * | 2022-02-21 | 2022-07-12 | 北京沃森赛瑟生物技术有限公司 | 脂蛋白胆固醇检测方法和试剂盒 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5231754A (en) * | 1975-06-14 | 1977-03-10 | Olympus Optical Co Ltd | Objective lens with high percentage of contraction |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE29498E (en) * | 1972-05-12 | 1977-12-20 | Istituto Sieroterapico e Vaccinogeno Toscano "SCLAVO", S.p.A. | Process for the enzymatic determination of glucose with a glucose-oxydazed/peroxidazed enzyme system |
| DE2600526C3 (de) * | 1976-01-08 | 1981-06-19 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von mit Sauerstoff unter Oxidaseeinwirkung H↓2↓O↓2↓ bildenden Substanzen und Reagens zu seiner Durchführung |
| US4119405A (en) * | 1978-02-13 | 1978-10-10 | Miles Laboratories, Inc. | Test means and method for interference resistant determination of oxidizing substances |
| JPS5520471A (en) * | 1978-08-01 | 1980-02-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Hydrogen peroxide quantifying method |
| US4291121A (en) * | 1979-04-13 | 1981-09-22 | Miles Laboratories, Inc. | Bilirubin-resistant determination of uric acid and cholesterol |
| CA1134247A (en) * | 1979-04-13 | 1982-10-26 | Giovanni Berti | Bilirubin-resistant determination of uric acid |
| JPS5783287A (en) * | 1980-11-14 | 1982-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Elimination of hydrogen peroxide |
-
1981
- 1981-06-23 DE DE19813124590 patent/DE3124590A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-06-16 JP JP57102347A patent/JPS58899A/ja active Granted
- 1982-06-23 EP EP82105552A patent/EP0071730B1/de not_active Expired
- 1982-06-23 AT AT82105552T patent/ATE10859T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-06-23 DE DE8282105552T patent/DE3261611D1/de not_active Expired
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5231754A (en) * | 1975-06-14 | 1977-03-10 | Olympus Optical Co Ltd | Objective lens with high percentage of contraction |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005292110A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Shino Test Corp | 非特異的発色の抑制方法 |
| JP4691627B2 (ja) * | 2004-03-31 | 2011-06-01 | 株式会社シノテスト | 非特異的発色の抑制方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3261611D1 (en) | 1985-01-31 |
| EP0071730A1 (de) | 1983-02-16 |
| ATE10859T1 (de) | 1985-01-15 |
| JPS58899A (ja) | 1983-01-06 |
| DE3124590A1 (de) | 1983-01-27 |
| EP0071730B1 (de) | 1984-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS6249040B2 (ja) | ||
| KR920001449B1 (ko) | 효소적산화에 의한 검체의 비색적 측정방법 및 시약 | |
| CA1155737A (en) | Process and diagnostic agents for the detection of redox reactions | |
| RU2052819C1 (ru) | Способ определения электрононасыщенного ароматического амина, являющегося маркером содержания аналита в биологической жидкости, и средство для его осуществления | |
| JPS6412343B2 (ja) | ||
| JPS61146196A (ja) | Ｈ↓２ｏ↓２の測色的測定を改善するための方法び試薬 | |
| US3595755A (en) | Detection of hydrogen peroxide | |
| JPS5813398A (ja) | 過酸化水素もしくは過酸化水素を形成する基質またはペルオキシダ−ゼもしくはペルオキシダ−ゼのように作用する物質を検出するための剤および方法 | |
| JPS6258718B2 (ja) | ||
| JP3537507B2 (ja) | クレアチニンの検出方法及び検出具 | |
| JPH0427839B2 (ja) | ||
| US5858691A (en) | Method and agent for the simultaneous colorimetric and electrochemical measurement of an analyte | |
| AU673793B1 (en) | Ascorbate resistant detection of hydrogen peroxide | |
| CS250653B2 (en) | Means for searched component's presence determination e. g. glucose in tested sample | |
| JPS5819279B2 (ja) | Ｎａｄ（ｐ）ｈ又はサリチル酸塩を測定する方法及び試薬 | |
| JPS61138163A (ja) | 発色性カップラー及び過酸化水素又は他の被分析物の測定へのその使用 | |
| US5434055A (en) | Compositions useful in anaerobic determination of analytes | |
| CS199692B2 (en) | Method of photometric determination of hydrogen peroxides | |
| JPS6336759B2 (ja) | ||
| JPS5810655A (ja) | 過酸化水素ないし過酸化水素生成性基質を検出するための試薬及び方法 | |
| US4810642A (en) | Method and test composition for determination of hydrogen peroxide | |
| JPH0532040B2 (ja) | ||
| EP0926244B1 (en) | Methods and reagents for quantitatively determining ascorbic acid | |
| US4116773A (en) | Enzymatic reagent and method for increasing the sensitivity of enzymatic substrate analyses using oxygen rate analyzers | |
| US5955027A (en) | Reagent composition, testing piece, and assay kit |