JPS58899A - Ｈ↓２ｏ↓２又はｈ↓２ｏ↓２供与系を検出するための安定化された試薬 - Google Patents

Ｈ↓２ｏ↓２又はｈ↓２ｏ↓２供与系を検出するための安定化された試薬

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JPS58899A
JPS58899A JP57102347A JP10234782A JPS58899A JP S58899 A JPS58899 A JP S58899A JP 57102347 A JP57102347 A JP 57102347A JP 10234782 A JP10234782 A JP 10234782A JP S58899 A JPS58899 A JP S58899A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明に、特に水溶液の形で優れ九安定性を有する、Ｈ
２０！又ｕ　Ｈ２０！供与系を検出する丸めの試薬に関
する。
Ｈ，ｏ、により惹起される。メチルベンゾチアゾロンヒ
ドラゾン又はその誘導体と芳香族アミンとの間の色素形
成下に進行する酸化的カップリングを利用するＨ２Ｏ，
父はＨ，Ｏ，供与系【検出する丸めの試薬は公知でおる
。これらの試薬の利点は、形成された色素がその量の点
でかつそれに相応して色の濃さの点でＨ！０．量に比例
しかつペールの法則により色の濃さｔｍ定することによ
’）　Ｈ＊Ｏｚ定量測定を可能にする点に見られる。こ
の試薬の他の利点は、Ｈ３Ｏ１供与系１％に酵素系と一
緒でも使用できることである。一般に、Ｈ，Ｏ。
全供与するこの種の酵素系は、測定すべき基質を試験溶
液中でＨ，０，の形成下に酸化するオキシダーぜから成
る。この形成されたＨｓＯｓ社ベルオギシダーゼの存在
において前記の酸化的カップリングを色素形成下に生ぜ
しめる。しかし公知試薬の著しい欠点は、その不安定性
にある。このカップリング成分は色素形成下に自動酸化
する傾向を有する。この欠点は、これら試薬の調製した
水Ｎ液で特に着しい。しかし試薬の乾燥形もまた安定性
の点で満足させるものではない。
それ故１本発明は、この欠点を前記の利点を維持しなが
ら排除しかつ自動酸化に対する敏感性が著しく改良され
た冒頭に挙げたＳｔ＊の試薬を開示するという課題を基
礎とする。本発明の他のａｉｉは、　ＨＩＯＩ量に相応
する色素形成の直線性を改良することでおる。
本発明によシこの課題は、安定化剤としてアルカリ７エ
ロシアン化物、今レート剤及びアルカリアジドの＃類か
らの一質少なくとも１樵を含有し、その際オ中シダーぜ
を含有していてよい、緩衝−質及びベルオキシダー４ｔ
−含有する。
発色剤としてのメチルペンゾテアゾロンヒド２シン又は
その誘導体及びそれと発色下に酸化的にカップリングし
祷る芳香族ア建ンｔ−Ｑ−スとするＨ８０２又はＨｌｏ
、供与系を検出するための安定化された試薬により解決
される。
殊に１本発明による試薬でに発色剤はメチル４ンゾチア
ゾロンヒドラゾン（ＭＢＴＨ）とは芳香族環のスルホネ
ート基により異なっているメチルベンゾチアゾロンヒド
ラゾンスルｙｔ＜４−）（ＭＢＴＨ−８）から成る。　
　　− 原則的に、芳香族アミンカップＩＪング成分としては、
キノイド構造を形成することｔ；できかつハロゲン原子
、低級アルキル基、ヒドロキシアルキル基及び／又はス
ルホン酸基によ多置換されているすべての芳香族化合物
ｄｉ好適である。
好適なアミンは″アナリューテカルφケきストリ　−　
（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）”、
　　３３　巻、　７２３〜７２４（１９６１年）に挙げ
られている。
それと共に、フェノール化合物ｔカップ１Ｊング成分と
して使用することもでき、例えばナフトールジスルホン
酸又はアミノナフトールジスルホン酸。本発明範囲では
ｍ−１ルイジン、特にエチルとドロ命シトルイジン又は
Ｎ−モチルーＮ−（２−スルホ−エチル）−ｍ−トルイ
ジンを使用すると優れている。
アルカリフェロシアン化物としてはナトリウム−、カリ
ウム−、リチウム−及びアンモニウム塩を使用すること
ができる。優れているのはカリウム塩である。
キレート剤としては、備体會形成し得る公知のこの種の
物質が該当する。アインＩリアセテー）、ｆｌ、ｔばエ
チレンシア建ンテトツ酢酸又はそのナトリウム塩、ニト
リロトリ酸５２、Ｎ−ヒドロキシエチレンジニトリロテ
トラ酢酸、シクロヘキサンジアミンテトラ酢酸、シタロ
ヘキシレンジニトリロテトラ酢酸、ジエチレントリアミ
ンペンタ酢酸及び３．６−シオキサオクタメチレンジニ
トリロテトラ酢酸が優れている。特に優れているのはエ
チレンシア建ンテト２酢酸ナトリウム塩である。
キレート剤の作用の仕方は知られていない。
前記の不所望な自動酸化反応は、キレート剤によ１ｍ書
の錯体に蜜換畜れ九重金属イオンの触媒酌作用下に進行
するのではないことは明らかである。それというのも触
媒量の重金属イオンの添加により自動酸化反応は惹起さ
れないからである。
アルカリアジドとしてはナトリウム塩が優れているが、
カリウム−、リチウム−及びアンモニウム塩を便用する
こともできる。
最高の結果は、アルカリフエａシアン化物。
キレート剤及びアルカリアジドを同時に含有する本発明
による試薬によシ得られる。優れて−る組成では、その
試薬は、調製し九試薬水１！Ｉｆ１１当りフェロシアン
化物１〜５００１１Ｉ９．エチレンジアミンテトラアセ
テート１〜１０１００Ｏ及びアルカリアジＦ５〜５００
ダを含有する。
発色剤の１１１度が０．０１〜５ミリモル／ｌであり、
芳香族アミンの量が０．０１〜１０建リモル／ｊである
と有利である。ツエロシアン化物１０〜５０ダ、エチレ
ンシアオンテトラアセテート１００〜１００１００Ｏ及
びアルカリ７ｔ）’５０〜５００ｍ９を含有する組成は
特に優れている。
緩衝物質としては、はぼ中性範囲、′）オリ約ＰＨ５，
０〜Ｑ、　Ｏで緩衝作用をするものが好適である。一般
に好適な濃度はα０２〜０．５モル／ｊである。好適な
ベルオキシダーぜ量は０．００５〜１０　Ｘ　１０”Ｕ
／Ｉである。
本発明による試薬は吸収性担体１例えば紙。
多孔性プラスチックシート、多孔性ｆラス顆粒等上に施
すのにも好適でるる。優れ九担体は試験片に関して公知
であるようなものである。仁の場合には、Ｈ２０！検出
は試験すべき試料溶液を本発明による試薬を含有する薄
片状又は帯状担体上に滴下することくより又は所定量の
担持物質を試験溶液中に装入することにより定性的に行
なうことができる。後者の場合、担体を用いない試薬の
場合と同様にして定量的測定を実施することができる。
既に記載したように、本発明による試薬Ｆｉ当馬０！供
与１ｋｌＩｌ定するのにも好適である。それは前反厄で
Ｈ２−の形成下に化学量論的に反応する化合物が咳当す
る。代表的な例は、オキシダーぜによシ定量的に反応す
る物質、例えばダルコース、コレステリン、尿酸、グリ
セリン、アミノ酸、゛中すンチン、ラクテート等である
。この場合、付加的に本発明による試薬は相応するオキ
シダー４を含有し、それ故尿酸の場合は例えばウリカー
ゼである。
本発明による種々の安定化剤の使用下に本発明により達
成される安定効果は後記の表から明らかであ本。表は、
ＭＢＴＨ又はＭＢ’Ｉ’Ｈ−１！１０．２ｉリモル／１
．エチルヒドロキシトルイジン０゜６きリモル／ｌ及び
リン酸カリウム（ｐＨＴ、ｏ）０．１１ル／１１−２５
℃で含有する水溶液ノｒＩｋｆｔ度上昇を示す。
表　　　１ ０、なし　　　　　　　　　　　Ｌ０６０　　　０．１
２６１、ニトリロトリ酢酸　　１ミリモル　０．４８５
　　　　　０．０２８２、　　Ａ　　　　　　　　　　
１　　＃　　　　０．０＋５　　　　　０．０１５３、
　　Ｂ　　　　　　　　　　ｌ　　ｌ　　　　Ｏ，０＋
５　　　　　０．０１５４、　　Ｃ１＃　　　　０．０
４０　　　　　００１５５、　　Ｄ　　　　　　　　　
　ｌ　　＃　　　　０．０６３　　　　　０．０１３６
、　　Ｋ　　　　　　　　　　１　　＃　　　　０．０
５２　　　　　０．０１３７、ジエチレントリア電ン１
　　＃　　　　　　　　　　　　　００３９８、アセチ
ルアセトン　　１　１　　　０．５８１　　　　００３
０９、チオセずカルバジド　１　　＃　　　　０．１２
０　　　　０．０２３１０、Ｉ［４［Ｆ・（ＣＮ）＠）
ｌ　　ｌ　　　　Ｏ，０５３０，０２６１１、ＮａＮ５
　　　　　　　　　ｌ　　Ｉ　　　　Ｏ，２０９０，０
２６’１２Ｋａ（：Ｆ・（Ｃ）ｉ）・〕αＩＩ　　　０
１０１６　　　　０００５Ａ−エチレンジニトリロテト
ラ酢ｆｆ（ｇＤ’ｒＡ）Ｂ＝エチレンジニトリロテトラ
酢酸ジナトリクム塩（ｇＤＴ＊−ＮＩＬ） Ｃ＝１，２−シクロヘキシレンジニトリロテトラ酢酸 Ｄ−ジエチレントリア建ンペンメ酢酸 Ｅ＝３．６−シオキサオクタメチレンジニトリロテトラ
酢酸 蚊表の数値は、本発明による試薬が本発明による安定化
用試薬を含有しない試薬に比べて極めて優れ九安定性を
有することを示す。
測定は、その都度の溶液にベルオキシダーぜＩＵ／−を
添加し、吸光度を測定し、１時間後に再び吸光度を測定
しかつ吸光度差を測定して実施した。
本発明による試薬がオキシダーぜの存在においても優れ
た安定性を有することは次の実施例から明らかで゛ある
。
例 リン酸カリウム、　−７，００，１モルエテルヒドロｍ
ｌ’）ルイジン　　　　　　０．４　ミＩＪモルＭＢＴ
Ｈ−８０，２（り毫ル ウリカーゼ　　　　　　　　３００　Ｕベルオキシダー
ぜ　　　　１０００　　Ｕ７エロシアン化カリウム　　
　２０■ ｇＤＴＡ−Ｎ＆、　　　　　　　　２００　ダアジ化ナ
トリウム　　　　　１００η より成る本発明による試薬を水１ｊ中に溶解しかつ吸光
度を測定した。２５℃でＬ５時間後に再び吸光度を測定
した。
比較の丸めに、フェロシアン化カリウム、１１ＤＴＡ　
　及びアジ化ナトリウムを含有する相応する試薬ｔ−製
造し丸。
後者の本発明によらなｉ試薬では吸光度変化０．１７２
Ｒ／時間が認められた。本発明試薬では相応する変化は
０．００７２１１／時間であった。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　緩衝物質及び（ルオΦシダー４を含有する、発色剤
    としてのメチルベンゾチアゾロンヒドラゾン又は七〇−
    導体及びそれと発色下に酸化的にカップリングし得る芳
    香族アミンをペースとするａｔｏｍ又はＨ，Ｏ，供与系
    を検出するための安定化された試薬において、安定化剤
    としてアルカリ７エロシアン化物、＋レート剤及びアル
    カリアジドの群類からの物質少なくと４１８ｔｔ−含有
    し、その際オキシダー４會含有していてよい、ｎ、ｏ、
    又ＵＨｇＯ１Ｈｇ系を検出する次めの安定化された試薬
    。 ２　メチルベンゾチアゾロンヒドラゾンスルホネートを
    含有する特許請求の範囲第１項記載の試薬。 ＆　芳香族アミンとしてｒｍ−）ルイジンを含有する特
    許請求の範Ｓ第１項又は第２項に記載の試薬。 屯　アルカリフェロシアン化物をカリウム塩として含有
    する特許請求の範囲第１項〜第３項のいずれか１項に記
    載の試薬。 ＆　キレート剤としてアミン４リアセテートを含有する
    特許請求の範囲第１項〜第番項いずれか１項に記載の試
    薬。 ６、調製しえ溶液１１轟ｊ１７エロシアン化カリウムｌ
    −５００ダ、エチレンシアミンテトラアセテート１〜１
    ０００１９及びアジ化ナトリウム５〜５００１１１Ｆ會
    含有する特許請求の範囲第６項記載の試薬。 ７、調製し九溶液１１轟ｊＩ７エロシアン化カリウム１
    ０〜６０ダ、エチレンジアミンナト２アセテート１００
    〜１０００ダ及びアジ化ナトリウム５０〜５００ダを含
    有する特許請求の範！！８１１１６項記載の試薬。 ＆　吸収性担持材料に含浸されている特許請求の範囲第
    １項〜第７項のいずれか１項に記載の試薬。
JP57102347A 1981-06-23 1982-06-16 Ｈ↓２ｏ↓２又はｈ↓２ｏ↓２供与系を検出するための安定化された試薬 Granted JPS58899A (ja)

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