JPS62299765A - 単クローン性抗体及びこれを用いるシコードウリジンψの測定法 - Google Patents
単クローン性抗体及びこれを用いるシコードウリジンψの測定法Info
- Publication number
- JPS62299765A JPS62299765A JP61143484A JP14348486A JPS62299765A JP S62299765 A JPS62299765 A JP S62299765A JP 61143484 A JP61143484 A JP 61143484A JP 14348486 A JP14348486 A JP 14348486A JP S62299765 A JPS62299765 A JP S62299765A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pseudolysine
- monoclonal antibody
- phi
- antibody
- measuring
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 claims description 7
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 claims description 7
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 6
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 claims description 5
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 claims description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 11
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 abstract description 8
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 abstract description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 abstract description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 abstract 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 abstract 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 8
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は単クローン性抗体に関し、更に詳細には進行筋
のマーカーであるシュードウリジンφ（ｐｓｅｄｏｕｒ
ｉｄｌｎｅψ）に対する単クローン性抗体に関する。
のマーカーであるシュードウリジンφ（ｐｓｅｄｏｕｒ
ｉｄｌｎｅψ）に対する単クローン性抗体に関する。
近年癌関連抗原に対する単クローン性抗体を用いた臨床
検査診断が盛んに実施されてきている。また、癌になる
と増加することが知られている物質である癌胎児性抗原
（ＣＥＡ ）、α−フェトプロチンなどに対する抗体を
用いて同様なことが行われている。
検査診断が盛んに実施されてきている。また、癌になる
と増加することが知られている物質である癌胎児性抗原
（ＣＥＡ ）、α−フェトプロチンなどに対する抗体を
用いて同様なことが行われている。
ところで、癌になると増加する物質、すなわち腫瘍マー
カーと呼ばれている物質の中で、巡行癌患者尿中に増加
するものとしてシュードウリジンφが知られている。こ
の物質はトランスファー・す？ヌクレイツクアンド（ｔ
−ＲＮＡ ）の構成成分の１つであり、その増加の原
因は、癌組織におけるｔ−ＲＮＡのブレークダウン（ｂ
ｒ＠ａｋｄｏｗｎ ）が正常組織に比較し、先進して
いるためであるといわれているが、その増加のメカニズ
ムの詳細については未解明である。
カーと呼ばれている物質の中で、巡行癌患者尿中に増加
するものとしてシュードウリジンφが知られている。こ
の物質はトランスファー・す？ヌクレイツクアンド（ｔ
−ＲＮＡ ）の構成成分の１つであり、その増加の原
因は、癌組織におけるｔ−ＲＮＡのブレークダウン（ｂ
ｒ＠ａｋｄｏｗｎ ）が正常組織に比較し、先進して
いるためであるといわれているが、その増加のメカニズ
ムの詳細については未解明である。
現在、このシュードウリジンφ（以下
「ψ」と略称することがある）の量を測定し、これから
進行癌の存在を判定する試みがなされているが、ψの定
量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でおこた
われるため、サンプルの前処理等が煩雑であυ、多検体
を測定するには非常に長時間を要するという欠点があっ
た。
進行癌の存在を判定する試みがなされているが、ψの定
量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でおこた
われるため、サンプルの前処理等が煩雑であυ、多検体
を測定するには非常に長時間を要するという欠点があっ
た。
本発明者らは、簡便なψの測定法を開発すべく、種々検
討をおこなった結果、ψに対する単クローン性抗体を新
たに作成し、これを用いることにより、尿サンプルの前
処理操作を行うことな（ＥＬＩＳＡ法を応用した多検体
同時測定方法を実施することができ、測定の迅速化、簡
素化がはかれることを見出した。
討をおこなった結果、ψに対する単クローン性抗体を新
たに作成し、これを用いることにより、尿サンプルの前
処理操作を行うことな（ＥＬＩＳＡ法を応用した多検体
同時測定方法を実施することができ、測定の迅速化、簡
素化がはかれることを見出した。
したがって、本発明は、進行癌のマーカーであるφに対
する単クローン性抗体及びこれを用いるψの測定方法を
提供するものである。
する単クローン性抗体及びこれを用いるψの測定方法を
提供するものである。
本発明のψに対する単クローン性抗体は、例えば次の如
くして調製される。
くして調製される。
すなわち、まず、ψを用いて動物を免疫し、その動物の
牌細胞を採取する。この工程において、ψはそれ単独で
は免疫原となり得ないので、適当なキャリア・プロティ
ン（ＣａｒｒｉｅｒＰｒｏｔｅｉｎ ）と結合させたの
ち、免疫原として用いる。ψとしては、例えば進行８患
者の尿中から公知の方法、例えばシグマ（Ｓｉｇｍａ
）社から販売されている標品を用いることができ、キャ
リア・プロティンとしては、・・ブテン部分を免疫担当
細胞が紹識することを可能にする目的で用いられるプロ
ティン、例えばキーホール・リンペット・ヘモシアニン
、牛血清アルブミン等を用いることができる。また、こ
のψとキャリア・テロティンを結合する方法としては、
例えば、核酸塩基の糖部分を過ヨウ素酸で酸化したのち
にキャリア・プロティンと結合させる等の方法が挙げら
れるー更に、免疫動物としては、マウス、ラット等が挙
げられる。
牌細胞を採取する。この工程において、ψはそれ単独で
は免疫原となり得ないので、適当なキャリア・プロティ
ン（ＣａｒｒｉｅｒＰｒｏｔｅｉｎ ）と結合させたの
ち、免疫原として用いる。ψとしては、例えば進行８患
者の尿中から公知の方法、例えばシグマ（Ｓｉｇｍａ
）社から販売されている標品を用いることができ、キャ
リア・プロティンとしては、・・ブテン部分を免疫担当
細胞が紹識することを可能にする目的で用いられるプロ
ティン、例えばキーホール・リンペット・ヘモシアニン
、牛血清アルブミン等を用いることができる。また、こ
のψとキャリア・テロティンを結合する方法としては、
例えば、核酸塩基の糖部分を過ヨウ素酸で酸化したのち
にキャリア・プロティンと結合させる等の方法が挙げら
れるー更に、免疫動物としては、マウス、ラット等が挙
げられる。
次に得られた免役動物の牌細胞を骨髄肺細胞と融合し、
ノ・イブリドーマを得る０細胞融合においては、公知の
？リエチレングリコールを用いる方法及びウィルスを用
いる方法のいずれを用いても良いが、ノ・イブリドーマ
のスクリーニングに当っては、キャリア・プロティンに
対する抗体産生ハイブリドーマを除去するだめの留意が
必要である。このためには、免疫に用いたキャリア・プ
ロティンと異なった種由来のプロティンとψを結合させ
たものを抗原としてスクリーニングする等の方法を用い
ることが望ましい。
ノ・イブリドーマを得る０細胞融合においては、公知の
？リエチレングリコールを用いる方法及びウィルスを用
いる方法のいずれを用いても良いが、ノ・イブリドーマ
のスクリーニングに当っては、キャリア・プロティンに
対する抗体産生ハイブリドーマを除去するだめの留意が
必要である。このためには、免疫に用いたキャリア・プ
ロティンと異なった種由来のプロティンとψを結合させ
たものを抗原としてスクリーニングする等の方法を用い
ることが望ましい。
斯くして得られるハイプリドーマから産生される、本発
明の単クローン性抗体は、次に示す如き性質を有する。
明の単クローン性抗体は、次に示す如き性質を有する。
（１）抗体のクラス： Ｉ？Ｇ。
（２）抗体価二８〜１６倍
（３）交差反応性：
（１）ウリジン ９５〜９９％
（１１）ワラシル ３０〜４０％
叙上の如くして得られた単クローン性抗体を用いてψを
測定する場合の例を挙げれば次の通りである。
測定する場合の例を挙げれば次の通りである。
すなわち、９６ウエルプレートに、ψと牛血清アルブミ
ン（ＢＳＡ ）の結合物を２μり／穴で添加したのち、
４℃で、１２〜２４ｈｒ放置する。次に各ウェルに１％
ＢＳ人を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ ）を１０
０ｐｌずつ添加することにより、抗体その他のタン、Ｑ
りの非特異的吸Ｍｋ防止する。次に試料（尿など）を各
ウェルに５０μを添加し、さらに。
ン（ＢＳＡ ）の結合物を２μり／穴で添加したのち、
４℃で、１２〜２４ｈｒ放置する。次に各ウェルに１％
ＢＳ人を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ ）を１０
０ｐｌずつ添加することにより、抗体その他のタン、Ｑ
りの非特異的吸Ｍｋ防止する。次に試料（尿など）を各
ウェルに５０μを添加し、さらに。
本発明の単クローン性抗体（２０倍希釈液）を各ウェル
に５０μを添加する。よくかくはんしたのちに、４℃で
１時間放置する。反応混合物をＰＢＳでよく先浄したの
ちに、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｆＧ
抗体の１０００倍希釈液を各ウェルに１００ｐｔずつ添
加する。室温で３０分間反応させたのちに、ＰＢＳでよ
く洗い、水分を切ったのちに基質溶液（）Ｑラニトロフ
ェニルフォスフエー） Ｉ ＱＦ／ｙｔｌ 、 ｐＨ９
，８ゾエタノールアミンパツ７アー）を１００μｔずつ
加え、３７℃で３０分間反応させる。各ウェルの４０５
ｎｍにおける吸光度をＥＩＡリーダーで測定することに
より試料中に存在するψ量の定量を行なう０ 〔本発明の効果〕 以上のように本発明の単クローン性抗体を用いれば、試
料の前処理をおこなうことなくψの測定をおこなうこと
ができ、しかもＨＰ Ｌ Ｃの如き犬がかりな装置も必
要としないので、簡便かつ迅速に進行癌の有無を判定す
ることができる。
に５０μを添加する。よくかくはんしたのちに、４℃で
１時間放置する。反応混合物をＰＢＳでよく先浄したの
ちに、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｆＧ
抗体の１０００倍希釈液を各ウェルに１００ｐｔずつ添
加する。室温で３０分間反応させたのちに、ＰＢＳでよ
く洗い、水分を切ったのちに基質溶液（）Ｑラニトロフ
ェニルフォスフエー） Ｉ ＱＦ／ｙｔｌ 、 ｐＨ９
，８ゾエタノールアミンパツ７アー）を１００μｔずつ
加え、３７℃で３０分間反応させる。各ウェルの４０５
ｎｍにおける吸光度をＥＩＡリーダーで測定することに
より試料中に存在するψ量の定量を行なう０ 〔本発明の効果〕 以上のように本発明の単クローン性抗体を用いれば、試
料の前処理をおこなうことなくψの測定をおこなうこと
ができ、しかもＨＰ Ｌ Ｃの如き犬がかりな装置も必
要としないので、簡便かつ迅速に進行癌の有無を判定す
ることができる。
次に実施例を挙げ、本発明を説明する。
実施例１
（１） 免疫原の調製：
癌患者の尿中から常法により分離したψと、キャリアプ
ロティンであるキーホール・すｙペットやヘモシアニン
（Ｋｅｙｈｏ ｌｅ ｌｙｍｐｅ ｔｈｅｍｏｃｙａｎ
ｉｎｓ ； ＫＬＨ） ｆエルランガー（Ｂｒｌａｈｇ
ｅｒ ）とビーザー（Ｂｉｅｓｅｒ ）の方法（過ヨウ
素酸酸化法）により結合した。すなわちψを過ヨウ素酸
で酸化し、過剰の過ヨウ素酸をエチレングリコールで分
解したのち、アルカリ性（ｐＨ９〜９．５）条件下でＫ
ＬＨと結合させ、シック塩基を形成させる。ついでＮａ
ＢＩ３で還元し、安定化合物を生成させる。
ロティンであるキーホール・すｙペットやヘモシアニン
（Ｋｅｙｈｏ ｌｅ ｌｙｍｐｅ ｔｈｅｍｏｃｙａｎ
ｉｎｓ ； ＫＬＨ） ｆエルランガー（Ｂｒｌａｈｇ
ｅｒ ）とビーザー（Ｂｉｅｓｅｒ ）の方法（過ヨウ
素酸酸化法）により結合した。すなわちψを過ヨウ素酸
で酸化し、過剰の過ヨウ素酸をエチレングリコールで分
解したのち、アルカリ性（ｐＨ９〜９．５）条件下でＫ
ＬＨと結合させ、シック塩基を形成させる。ついでＮａ
ＢＩ３で還元し、安定化合物を生成させる。
この反応混合物を緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＩ
（７，４）中で一晩透析し、未反応のψを除き、このあ
と凍結乾燥に付し一２０℃の冷凍庫中に保存した。
（７，４）中で一晩透析し、未反応のψを除き、このあ
と凍結乾燥に付し一２０℃の冷凍庫中に保存した。
（２）単クローン性抗体の作成：
（ｉｔ （１１で得たψとＫＬＨ結合物金、７０イン
ドの完全アジュバント（Ｐ”ｒｅｕｎｄ’ｓ Ｃｏｍｐ
ｌｅｔｅＡｄｊｕｖａｎｔ ）と等全混合し、エマルシ
ョンとしたのち、 ＢＡＬＢ ／ ｅマウスの腹腔内
に一匹当り５０μ２投与した。２回目以降は不完全アジ
ュバント（ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ
）を用いたエマルションを、１０日間隔で２回腹腔内に
投与した。最終免疫はψ−Ｋｌ、Ｈ１００μｔ／ｄ溶液
を０．２ｄ静脈内投与した。
ドの完全アジュバント（Ｐ”ｒｅｕｎｄ’ｓ Ｃｏｍｐ
ｌｅｔｅＡｄｊｕｖａｎｔ ）と等全混合し、エマルシ
ョンとしたのち、 ＢＡＬＢ ／ ｅマウスの腹腔内
に一匹当り５０μ２投与した。２回目以降は不完全アジ
ュバント（ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ
）を用いたエマルションを、１０日間隔で２回腹腔内に
投与した。最終免疫はψ−Ｋｌ、Ｈ１００μｔ／ｄ溶液
を０．２ｄ静脈内投与した。
（１言）最終免疫の３日後に、過免疫マウスから摘出し
た牌細胞とＢＡＬＢ ／ ｅマウス由来ミエローマ細胞
株ａｐ ２／ Ｏ−Ａｇ １４を？リエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）４０００を用いて融合した。細胞は９６穴
プレートに１００μｔ／穴ずつ加え、２４時間後に培地
の半量をノ・ット（ＨＡＴ ）培地に交換し２日おきに
培地交換した。７〜１０日後にＨＡＴ耐性の・・イブリ
ドーマの成長がみられてくる。この時期に培地をＨＴに
変え、約１０日間培養したのちにハイプリドーマ生育培
地に変えた。
た牌細胞とＢＡＬＢ ／ ｅマウス由来ミエローマ細胞
株ａｐ ２／ Ｏ−Ａｇ １４を？リエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）４０００を用いて融合した。細胞は９６穴
プレートに１００μｔ／穴ずつ加え、２４時間後に培地
の半量をノ・ット（ＨＡＴ ）培地に交換し２日おきに
培地交換した。７〜１０日後にＨＡＴ耐性の・・イブリ
ドーマの成長がみられてくる。この時期に培地をＨＴに
変え、約１０日間培養したのちにハイプリドーマ生育培
地に変えた。
（ｉ） 抗体産生細胞のスクリーニングはψと牛血清
アルプミｙ（ａｓ人）を結合させたものを抗原として用
い２抗体エライザ（ＥＬＩＳＡ）法によシ行った。この
方法によシ最も憂慮されるキャリアプロティンに対する
抗体を産生ずるハイプリドーマの除外に成功した。次に
ψによる阻害がかかるか否かを検討すること罠よりψと
特異的に反応する単クローン性抗体を産生ずるハイプリ
ドーマを選択した。ここで選択された細胞株に限界希釈
法によりクローン化し単クローン性抗体産生ハイブリド
ーマクローンを樹立した。
アルプミｙ（ａｓ人）を結合させたものを抗原として用
い２抗体エライザ（ＥＬＩＳＡ）法によシ行った。この
方法によシ最も憂慮されるキャリアプロティンに対する
抗体を産生ずるハイプリドーマの除外に成功した。次に
ψによる阻害がかかるか否かを検討すること罠よりψと
特異的に反応する単クローン性抗体を産生ずるハイプリ
ドーマを選択した。ここで選択された細胞株に限界希釈
法によりクローン化し単クローン性抗体産生ハイブリド
ーマクローンを樹立した。
（３） 単クローン性抗体の性質：
ψに対する単クローン性抗体は２種得られ抗体のクラス
はいずれもＩｆＧ、であった。抗体価は８〜１６倍（培
養上清を２段階希釈し、それぞれとψ−ＢＳ人を反応さ
せるＥＬＩＳＡを行った時、最も高い吸光度の持続する
希釈倍率を抗体価とした）であった０ また、種々のプリン、ビリミシン修飾、非修飾ヌクレオ
シドおよび塩基類との交差反応性を検討したところウリ
ジンに９５〜９９％、ウラシルに３０〜４０％の交差反
応性を示したが、他の化合物とは交差反応は示さなかっ
た。その結果から、この抗体の認識するエピトープはψ
の塩基部分であると判断された。
はいずれもＩｆＧ、であった。抗体価は８〜１６倍（培
養上清を２段階希釈し、それぞれとψ−ＢＳ人を反応さ
せるＥＬＩＳＡを行った時、最も高い吸光度の持続する
希釈倍率を抗体価とした）であった０ また、種々のプリン、ビリミシン修飾、非修飾ヌクレオ
シドおよび塩基類との交差反応性を検討したところウリ
ジンに９５〜９９％、ウラシルに３０〜４０％の交差反
応性を示したが、他の化合物とは交差反応は示さなかっ
た。その結果から、この抗体の認識するエピトープはψ
の塩基部分であると判断された。
実施例２
ψの１０．５．２．５．１．２５．０．６３ｐ９／ｘｔ
ｌ溶液を、あらかじめψ−ＢＳＡ ０．２μｔ／穴でコ
ートされた９６穴プレートへ５０μｌずつ加え、実施例
１で得られた単クローン性抗体の２０倍希釈液を５０ｐ
ｔずつ加え、競合阻害試験を行った。この結果、第１図
に示すように遊離のψの用量に依存して抗体とψ−ＢＳ
Ａの結合が阻害されることが明らかとなった。
ｌ溶液を、あらかじめψ−ＢＳＡ ０．２μｔ／穴でコ
ートされた９６穴プレートへ５０μｌずつ加え、実施例
１で得られた単クローン性抗体の２０倍希釈液を５０ｐ
ｔずつ加え、競合阻害試験を行った。この結果、第１図
に示すように遊離のψの用量に依存して抗体とψ−ＢＳ
Ａの結合が阻害されることが明らかとなった。
実施例３
実施例２のψ溶液に代えて試料として正常人及び癌患者
の尿を用い、同様に競合阻害試験をおこなった。実施例
２の結果から得た検量線を用い、試料中のψ量を測定し
た。この結果を下表に示す。
の尿を用い、同様に競合阻害試験をおこなった。実施例
２の結果から得た検量線を用い、試料中のψ量を測定し
た。この結果を下表に示す。
以下庁２白
ネ各試料は次の通りである。
１ 正常人尿
２ 癌患者尿 （肝臓癌、肺転移）
３ （原発性肝癌）
４ （胆管細胞癌）
５ （胃＠）
６ （原発性肝癌）
７ （急性骨髄性白血病）
本本カッコ内は、正常人尿中のψ量に対する各試料のψ
景の比を示すものである。
景の比を示すものである。
第１図は、ψの用量と４０５１ｍの吸光度の関係を示す
図面である。 以上
図面である。 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、シュードウリジンφに対する単クローン性抗体。 ２、次の性質、 （１）抗体のクラス：ＩｇＧ＿１ （２）抗体価：８〜１６倍 （３）交差反応性： （ｉ）ウリジン ９５〜９９％ （ｉｉ）ウラシル ３０〜４０％ を有する特許請求の範囲第１項記載の単クローン性抗体
。 ３、被検体にシュードウリジンφに対する単クローン性
抗体を加え、生じたシュードウリジンφ−単クローン性
抗体複合物量を測定することを特徴とするシュードウリ
ジンφの測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61143484A JPS62299765A (ja) | 1986-06-19 | 1986-06-19 | 単クローン性抗体及びこれを用いるシコードウリジンψの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61143484A JPS62299765A (ja) | 1986-06-19 | 1986-06-19 | 単クローン性抗体及びこれを用いるシコードウリジンψの測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62299765A true JPS62299765A (ja) | 1987-12-26 |
| JPH0421479B2 JPH0421479B2 (ja) | 1992-04-10 |
Family
ID=15339776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61143484A Granted JPS62299765A (ja) | 1986-06-19 | 1986-06-19 | 単クローン性抗体及びこれを用いるシコードウリジンψの測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62299765A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0279994A (ja) * | 1988-09-19 | 1990-03-20 | Nichirei Corp | モノクローナル抗体の作製方法 |
| WO1999020748A1 (fr) * | 1997-10-16 | 1999-04-29 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Anticorps monoclonal anti-uracile et hybridome produisant cet anticorps |
| WO2001029207A1 (fr) * | 1999-10-19 | 2001-04-26 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Anticorps monoclonal anti-uracil |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5916058B2 (ja) * | 2011-08-26 | 2016-05-11 | 国立大学法人東北大学 | 細胞ストレス状態のバイオマーカー |
| JPWO2016052368A1 (ja) * | 2014-09-29 | 2017-07-13 | 富士レビオ株式会社 | 修飾核酸塩基を含む標的核酸の測定方法およびキット |
-
1986
- 1986-06-19 JP JP61143484A patent/JPS62299765A/ja active Granted
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS=1974 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0279994A (ja) * | 1988-09-19 | 1990-03-20 | Nichirei Corp | モノクローナル抗体の作製方法 |
| WO1999020748A1 (fr) * | 1997-10-16 | 1999-04-29 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Anticorps monoclonal anti-uracile et hybridome produisant cet anticorps |
| WO2001029207A1 (fr) * | 1999-10-19 | 2001-04-26 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Anticorps monoclonal anti-uracil |
| US6927035B1 (en) | 1999-10-19 | 2005-08-09 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd | Antiuracil monoclonal antibody |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0421479B2 (ja) | 1992-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR900003923B1 (ko) | 인체 암종양과 관련된 항원에 대한 단일클론성 항체 | |
| JP2774491B2 (ja) | ヒトの消化器ガンに対するモノクローナル抗体 | |
| JPH08509216A (ja) | 免疫原性癌タンパクおよびペプチドとその使用法 | |
| JPH02500004A (ja) | 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクローナル抗体 | |
| GB2098730A (en) | Immunolocalisation | |
| EP0171083B1 (en) | Monoclonal antibody, process for preparing same, reagent for detecting cancer antigen containing the monoclonal antibody and process for preparing same | |
| JPS62299765A (ja) | 単クローン性抗体及びこれを用いるシコードウリジンψの測定法 | |
| EP0245520B1 (en) | Monoclonal antibody against glutathione s-transferase and its use in the diagnosis of cancer | |
| Wikstrand et al. | Investigation of a synthetic peptide as immunogen for a variant epidermal growth factor receptor associated with gliomas | |
| JPS63222699A (ja) | 単クローン性抗体及びこれを用いるシユードウリジンψの測定法 | |
| JPS62299766A (ja) | 単クロ−ン性抗体及びこれを用いる１−メチルアデノシンの測定法 | |
| WO1988004670A1 (en) | Bilirubin antigen, monoclonal antibody therefor, process for their preparation, and their use | |
| JPH03240498A (ja) | 抗体およびそれを使用した免疫分析方法 | |
| JPS63209596A (ja) | モノクロ−ナル抗体及びその使用方法 | |
| JP3479453B2 (ja) | 尿中テガフールの測定法 | |
| JPS61167699A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS61183300A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS62261961A (ja) | 抗イデイオタイプ抗体を用いた抗ヒト肝特異抗原抗体量の測定方法および肝疾患診断への応用 | |
| JP2553343B2 (ja) | 癌抗体の測定法 | |
| JP2896931B2 (ja) | モノクローナル抗体、それを用いた測定法、試薬キット、検索法及び薬剤ミサイル | |
| JPS61289880A (ja) | 新規ハイブリド−マ，その製造法および用途 | |
| JPS61249999A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPH06113831A (ja) | ハイブリドーマおよびその抗体 | |
| JPS6312295A (ja) | 甲状腺癌特異抗原に対するモノクロ−ナル抗体 | |
| JPH0315395A (ja) | 単クローン性抗体及びこれを用いるモノオキシゲネース・チトクロームｐ―４５０関連タンパク質の測定法 |