JPS62299763A - 免疫学的測定試薬 - Google Patents
免疫学的測定試薬Info
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- JPS62299763A JPS62299763A JP61142885A JP14288586A JPS62299763A JP S62299763 A JPS62299763 A JP S62299763A JP 61142885 A JP61142885 A JP 61142885A JP 14288586 A JP14288586 A JP 14288586A JP S62299763 A JPS62299763 A JP S62299763A
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、発明の詳細な説明
Ａ産業上の利用分野
本発明は、免疫学的測定試薬に関するものである。
Ｂ発明の概要
本発明は、ウサギ由来の標識抗体とヤギ由来の固相抗体
とを結合したことからなる、従来の試薬には期待できな
かった固相への非特異的吸着、測定範囲、測定感度の向
上、口内・日間変動の少ない免疫学的測定試薬に関する
ものである。
とを結合したことからなる、従来の試薬には期待できな
かった固相への非特異的吸着、測定範囲、測定感度の向
上、口内・日間変動の少ない免疫学的測定試薬に関する
ものである。
Ｃ従来の技術
従来の固相に用いている免疫学的測定法には、競合法と
非競合法があす、ｆ１４合法の代表例に第１抗体固相法
が、また非競合法の代表例にはサンドイツチ法と呼ばれ
ている方法がある。
非競合法があす、ｆ１４合法の代表例に第１抗体固相法
が、また非競合法の代表例にはサンドイツチ法と呼ばれ
ている方法がある。
そのうちの固相法についてみろと、ウサギ、ヤギに由来
した標識抗体の抗血清を使用するのが一般的であった。
した標識抗体の抗血清を使用するのが一般的であった。
その理由は、
１） ウサギの飼育が比較的容易で、その飼育面積も狭
くてよいこと、 ２）系統が明確な個体の入手が容易であること、３）採
血量が比較的覆いことから、得られる抗血清量が多いこ
と、 などの利点が挙げられる。
くてよいこと、 ２）系統が明確な個体の入手が容易であること、３）採
血量が比較的覆いことから、得られる抗血清量が多いこ
と、 などの利点が挙げられる。
Ｄ発明が解決しようとする問題点
ところが、このような従来部用されていたウサギ、ヤギ
に由来する抗血清をイム、ノブロブリンＧ（以下、Ｉｇ
Ｇと略記）に精製すると共に、グルコースオキシダーゼ
（以下ＣＯＤと略）でＩｆｆｍした標識抗体の同種由来
の抗体を吸着させた固相への非特異的吸着率を見ろと、
ウサギの場合では、およそ０．０４８〜０．３６８％、
ヤギの場合、およそ０．０７１〜０．１６０％と高い値
となってしまう。
に由来する抗血清をイム、ノブロブリンＧ（以下、Ｉｇ
Ｇと略記）に精製すると共に、グルコースオキシダーゼ
（以下ＣＯＤと略）でＩｆｆｍした標識抗体の同種由来
の抗体を吸着させた固相への非特異的吸着率を見ろと、
ウサギの場合では、およそ０．０４８〜０．３６８％、
ヤギの場合、およそ０．０７１〜０．１６０％と高い値
となってしまう。
この現家は、以下のような問題、すなわち、１）測定範
囲が狭い、 ２）測定感度が悪い、 ３）日内・日間変動が大きい、 という問題を招来して不都合である。
囲が狭い、 ２）測定感度が悪い、 ３）日内・日間変動が大きい、 という問題を招来して不都合である。
Ｅ問題点を解決するための手段
本発明はこのような不都合を解消するについて種々検討
を行った結果到達したものであって、ウサギ由来の標識
抗体とヤギ由来の胃相抗体とを結合したことからなる免
疫学的測定試薬、に関するものである。
を行った結果到達したものであって、ウサギ由来の標識
抗体とヤギ由来の胃相抗体とを結合したことからなる免
疫学的測定試薬、に関するものである。
Ｆ作 用
本発明による標識抗体は、固相を用いる免疫学的測定法
において、その感度を左右する主な要因の１つである標
識抗体の固相への非特異的吸着を標識抗体と固相の組合
せにより抑制し、測定範囲の拡大、感度の向上、口内・
日間変動の減少等を可能としたものである。
において、その感度を左右する主な要因の１つである標
識抗体の固相への非特異的吸着を標識抗体と固相の組合
せにより抑制し、測定範囲の拡大、感度の向上、口内・
日間変動の減少等を可能としたものである。
Ｇ実施例
以下、実施例および比較例を示して本発明の構成および
効果を説明するが、略語は次の通りとした。
効果を説明するが、略語は次の通りとした。
ａフェトプロティン ： ＡＦＰ
ポリスチレンボール ：ＰＢ
なお、各種血清からＩｇＧｒｚｐＪるための調製法を第
１図に、またＩｇＧ−ＧＯＤ標識抗体の調製法を第２図
に、ＩｇＧ被覆固相の調Ｍ法を第３図に示した。
１図に、またＩｇＧ−ＧＯＤ標識抗体の調製法を第２図
に、ＩｇＧ被覆固相の調Ｍ法を第３図に示した。
実施例 １
ウサギ抗ＡＦＰ−Ｉ ｇＧ （ノルディック製、ロット
番号、１６−１８４）−ＣＯＤ標識抗体とヤギ抗ＡＦＰ
−１ｇＧ被覆ＰＨの組合せを形成し、これについて標識
抗体の固相への非特異的吸着の抑制の程度をテストして
その結果を次の表に示した。
番号、１６−１８４）−ＣＯＤ標識抗体とヤギ抗ＡＦＰ
−１ｇＧ被覆ＰＨの組合せを形成し、これについて標識
抗体の固相への非特異的吸着の抑制の程度をテストして
その結果を次の表に示した。
実施例 ２
正常ウサギＩｇＧ（マイルズ製、ロット番号、００１９
）−ＣＯＤ標識抗体と正常ヤギＩｇＧ（カッペル製、ロ
ン１一番号、２４５１１）被覆ＰＢの組合せを形成し、
実施例１と同様のテストを行い次の表に併せて示した。
）−ＣＯＤ標識抗体と正常ヤギＩｇＧ（カッペル製、ロ
ン１一番号、２４５１１）被覆ＰＢの組合せを形成し、
実施例１と同様のテストを行い次の表に併せて示した。
比較例 １
ヤギ抗ＡＦＰ−１ｇＧ−ＧＯＤ標識抗体とヤギ抗ＡＦＰ
−１ｇＧ彼ｉＰ Ｂ（７）組合セ’ｅ 形成し、実施例
１と同様のテストを行い次の表に併せて示し浩 比較例 ２ ウサギ抗ＡＦＰ−Ｉ ｇＧ−ＧＯＤ標識抗体とウサギ抗
ＡＦＰ−１ｇＧ被１ｉＰＢの組合せを形成し、実施例１
と同様のテストを行い次の表に併せて示した。
−１ｇＧ彼ｉＰ Ｂ（７）組合セ’ｅ 形成し、実施例
１と同様のテストを行い次の表に併せて示し浩 比較例 ２ ウサギ抗ＡＦＰ−Ｉ ｇＧ−ＧＯＤ標識抗体とウサギ抗
ＡＦＰ−１ｇＧ被１ｉＰＢの組合せを形成し、実施例１
と同様のテストを行い次の表に併せて示した。
比較例 ３
正常ヤギＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体と正常ヤギＩｇＧ被覆
ＰＢの組合せを形成し、実施例１と同様のテス１−を行
い次の表に併せて示した。
ＰＢの組合せを形成し、実施例１と同様のテス１−を行
い次の表に併せて示した。
比較例 ４
正常ウサギＩｇＧ−ＧｏＤｍｍ抗体と正常ウサギＩｇＧ
被覆ＰＢの組合せを形成し、実施例１と同？、１のテス
トを行い次の表に併せて示した。
被覆ＰＢの組合せを形成し、実施例１と同？、１のテス
トを行い次の表に併せて示した。
１ ０、０１５ ０．０７８２
Ｑ、Ｑ１７ ０．１９０３
０、１１５ ４ ０．
１４８なお、この評価法は第４図に示した方法に準拠し
、ＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体画分の固相への吸着Ａカウノ
ト／３０秒、添加ＩｇＧ−ＧＯＤ漂識抗体 Ｂカウント
７３０秒とし、（Ａ／Ｂ）Ｘｉｏｏ （％）により算出
した。
Ｑ、Ｑ１７ ０．１９０３
０、１１５ ４ ０．
１４８なお、この評価法は第４図に示した方法に準拠し
、ＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体画分の固相への吸着Ａカウノ
ト／３０秒、添加ＩｇＧ−ＧＯＤ漂識抗体 Ｂカウント
７３０秒とし、（Ａ／Ｂ）Ｘｉｏｏ （％）により算出
した。
上の表に示すように、ウサギの標識抗体にヤギの固相抗
体を組合せたときの非特異的吸着率の挙効は、０．０１
５〜０．０１７％と低い。
体を組合せたときの非特異的吸着率の挙効は、０．０１
５〜０．０１７％と低い。
これに対して、ウサギの標識抗体−ウサギの固相抗体、
ヤギの標識抗体−ヤギの固相抗体の組合せでは、０．０
７８〜０．１９０％と高い値となった。また、酵素をペ
ルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファクーゼあるいはβ
−Ｄカラクトンダー七を使用した時も同様の結果となっ
た。
ヤギの標識抗体−ヤギの固相抗体の組合せでは、０．０
７８〜０．１９０％と高い値となった。また、酵素をペ
ルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファクーゼあるいはβ
−Ｄカラクトンダー七を使用した時も同様の結果となっ
た。
実施例 ３
実施例１、比較例１〜２の組合せにおいて、測定範囲お
よび測定感度を比較した。
よび測定感度を比較した。
酵素検出系の操作手順は、第５図フエリノアン化カリウ
ムールミノールの化学Ｒ光？ｉニＪ： ツな。
ムールミノールの化学Ｒ光？ｉニＪ： ツな。
この結果を第６図に示したが、ウサギの標識抗体−ヤギ
の固相抗体を組合せたときの測定範囲および測定感度は
、ウサギの標識抗体−ウサギの固相抗体あるいは、ヤギ
の標識抗体−ヤギの固相抗体の組合せの場合よりも擾れ
ていることが確認できた。
の固相抗体を組合せたときの測定範囲および測定感度は
、ウサギの標識抗体−ウサギの固相抗体あるいは、ヤギ
の標識抗体−ヤギの固相抗体の組合せの場合よりも擾れ
ていることが確認できた。
実施例 ４
実施例１と比較例１．２のものを用いて、それぞれの日
内および日間変動係数を求めた。
内および日間変動係数を求めた。
なお、日内変動係数の測定は３点の、また日間変動係数
の測定の際には２点の試料を使用して行い、以下の結果
を得た。
の測定の際には２点の試料を使用して行い、以下の結果
を得た。
なお、表中の口は、測定回数である。
この表より、実施例１は比較例１，２より測定値の日内
・日間変動が小さいことが確認できた。
・日間変動が小さいことが確認できた。
Ｈ発明の効果
このように、本発明に従って標識用抗体由来がウサギで
あり、固相用抗体の由来がヤギである組合せにより構成
した免疫学的測定試薬では、ウサギの標識用抗体−ウサ
ギの固相用抗体、ヤギの標識用抗体−ヤギの固相用抗体
に比較して、固相への非特異的吸着、測定範囲および測
定感度、口内・日間変動のいずれの点においても浸れた
ものとなり、従来の測定試薬には期待しきれない効果を
享受することができる。
あり、固相用抗体の由来がヤギである組合せにより構成
した免疫学的測定試薬では、ウサギの標識用抗体−ウサ
ギの固相用抗体、ヤギの標識用抗体−ヤギの固相用抗体
に比較して、固相への非特異的吸着、測定範囲および測
定感度、口内・日間変動のいずれの点においても浸れた
ものとなり、従来の測定試薬には期待しきれない効果を
享受することができる。
第１図は各種血清かＩｇＧを得るための調製法を示した
工程図、第２図はＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体の調製法を示
した工程図、第３図（よＩｇＧ被覆固相の調製法を示し
た工程図、第４図は非特異的吸着率の測定法を示した工
程図、第５図は酵素検出手順を示した工程図、第６図は
酵素検出の結果を示したグラフである。
工程図、第２図はＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体の調製法を示
した工程図、第３図（よＩｇＧ被覆固相の調製法を示し
た工程図、第４図は非特異的吸着率の測定法を示した工
程図、第５図は酵素検出手順を示した工程図、第６図は
酵素検出の結果を示したグラフである。
Claims (1)
- ウサギ由来の標識抗体とヤギ由来の固相抗体とを結合し
たことからなる免疫学的測定試薬。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61142885A JPS62299763A (ja) | 1986-06-20 | 1986-06-20 | 免疫学的測定試薬 |
| KR1019870006204A KR960016337B1 (ko) | 1986-06-20 | 1987-06-19 | 샌드위치식 면역분석용 키트 |
| DE3787834T DE3787834T3 (de) | 1986-06-20 | 1987-06-19 | Reagenz-Kit zur Verwendung in Sandwich-Immunotesten. |
| EP87108799A EP0249983B2 (en) | 1986-06-20 | 1987-06-19 | Reagent kit for use in sandwich immunoassay |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61142885A JPS62299763A (ja) | 1986-06-20 | 1986-06-20 | 免疫学的測定試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62299763A true JPS62299763A (ja) | 1987-12-26 |
Family
ID=15325855
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61142885A Pending JPS62299763A (ja) | 1986-06-20 | 1986-06-20 | 免疫学的測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62299763A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA009332B1 (ru) * | 2004-12-14 | 2007-12-28 | Александр Павлович Францев | Способ коррекции иммунного состояния организма у больных спидом |
-
1986
- 1986-06-20 JP JP61142885A patent/JPS62299763A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA009332B1 (ru) * | 2004-12-14 | 2007-12-28 | Александр Павлович Францев | Способ коррекции иммунного состояния организма у больных спидом |
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