JPS62285A - キラ−因子Ｋｈ−２及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なキラー因子Ｋｈ−ＩＩ及びその製造法に
関するものでめる。

更に詳細には、本発明は、塩類存在下で高活性の新規な
キラー因子Ｋｈ−ｆｆ及びその製造法に関するものであ
る。

従来、キラー活性を有する酵母は数多く見出されている
。（化学と生物Ｖｏｌ　２５．　Ｎｎ、　６１５１−１
６１頁１９８５）また、これら酵母によって生産される
それぞれのキラー因子についてもかなシ詳細に解明され
るに至っている。

しかしながら、従来、高濃度食塩存在下で生育するキラ
ー因子生産菌が高濃度食塩存在下でキラー活性を示すキ
ラー因子を生産するという報告はみられない。

本発明者らは、高濃度食塩存在下で、生育、シ。

かつ、活性を有するキラー因子を生産する菌が見出せれ
ば、醤油醸造の菌そう制御に有効に利用できるとの発想
のもとに、該菌を求めて鋭意研究したところ、この目的
に合致する一菌株を分離することに成功したのである。

新たに分離された菌株はハンセヌラ・７ノマラ（Ｈａｎ
ａｅｎｕｌａ　ａｎｏｍａｌａ　）に属するものと認め
られた（ザ・イースト・ア・タキソノミツク・スタディ
・サード・リパイスド・アンド・エンラージド・エディ
ジョンによる）ので、ハンセヌラ・アンマラＫｈ　−Ｉ
Ｉと命名され、微工研にＦ’ＢＩＬＭ　Ｉ’−８１６０
として寄託された。

ハンセヌラ・アノマ、ＦＫｈ−Ｈの菌学的性質は円形又
は伸長形をなす。

２、胞子は山高帽状を呈す。

３、ＹＭ液体培地で２０℃６日間の培養により。

ガスの発生が認められ１表面に弱く生育し、皺状を呈す
。培地はやや濁シ、粉状の沈澱物を生成する。

４、　　ＹＭＱ天培地で２０℃６日間の培養によシ。

よく生育し、コロニーは隆起状となる。コロニーの表面
はスムースで、きらきら坪く光沢を有し。

ムコイド状を呈す。

５、　　＄ＩＪの資化性及びガス発生の有無資化性　ガ
ス発生 グルコース　　　　　　　　＋　　　＋ガラクトース　
　　　　　＋　　　十 シュークロース　　　　　＋　　　＋ マルトース　　　　　　　＋　　　十 ラクトース　　　　　　　−− ２フイノース　　　　　　＋　　　＋ メリビオース　　　　　　−− イヌリン　　　　　　　　＋　　　− キシロース　　　　　　　＋　　　− 可溶性澱粉　　　　　　　　十　　試験せずトレハロー
ス　　　　　　　十　　　　−アラビノース　　　　　
　十　　　− α−メチルグルコシド　　　　十　　　　−イノシトー
ル　　　　　　−− ６塩類添加培地でキラー因子Ｋｈ　−Ｈをよく生産する
。次の表は谷塩類を８チにしたＹＭ培地におけるキラー
活性の生産を示すものである。

Ｚ　食塩濃度６〜１０チで最適生ａを示す。第５図は各
食塩濃度のＹＭ培地（ｐＨ４，８）における６０℃４日
培養の生育曲線をＯ，Ｄ、６６０ｎｍ　　の吸光度で示
す。

８、高食塩濃度でも十分生育する。第６図は食塩１６％
添加培地における増殖曲線を示し１ｇ７図は食塩１８％
添加培地における増殖曲線を示す。

９．５）１３〜６に至適培養ｐｉ４がある。第８図は各
−におけるＹＭ培地（食塩０チ）で６０℃４日間培養し
た生育曲線である。

１０、！１０℃に最適培養温度がある。第９図は各温度
におけるＹＭ培地（食塩０％、ｐＨ４，８）で４日間培
養した生育曲線である。

ハンセヌラ・アノマラＫｈ　−ＩＩの培養は、キラー因
子Ｋｈ　−Ｉｔを生産しうる培地で行なわれる。

責化し得る炭素源、窒素源、栄養料等適宜含有する培地
であればいかなる培地でもよい。また、醤油諸法、醤油
諸法液汁等または、これらを含有する培地で培養するこ
とも好ましい。

次に示すのは、一般的で菌体の増殖及びキラー因子Ｋｈ
　−Ｉｆの生産に好ましいＹＥＰＤ　培地である。

（ＹＥＰＤ培地） グルコース　　　　　　　　　　　　２％ポリペプトン
　　　　　　　　　２％ 酵母エキス　　　　　　　　　　１チ ＮａＣ１８チ １Ｍマツキルパイン緩衝液　　　　１０チ（ｐＨ４．８
） 培養は１５〜２５℃程度で、５〜６日間靜置装養によっ
て行なわれる。

得られた培養液は濾過して、培養ｐ液とし、これを７オ
ロフアイバーＨＩＩ’−１０（アミコン社製）で濃縮し
、濃縮液を、セファデックスＧ−２５でケ゛ル濾過にか
け、キラー因子Ｋｈ　−Ｈの溶出画分をウルトラフィル
ターＵＫ−１０（アトパンティク社製）にて限外濾過に
かけ、得られた濃縮液をＣＭ−セファデックスＣ−２５
でイオン交換し。

キラー因子Ｋｈ　−ＩＩ溶出画分をウルトラフィルター
ＵＫ−１０にて限外Ｐ３ｍにかけ、得られた濃縮液を真
空凍結乾燥して、キラー因子Ｋｈ　−ｆｆの乾燥白色粉
末を得る。

次に、ここに得られたキラー因子Ｋｈ　−ｌの理化学的
性質を示す。

１、分子量：約７０万ダルトン（ゲル濾過法による測定
） ２、元素分析：Ｃ：４４．２０％、Ｈ：６．６３％。

Ｎ：６．７９％。

６、等電点：ｐｉ−１＝３．５９ ４、紫外線吸収スはクトル：第１図に示す進υ。

５、赤外線吸収スはクトル：第２図に示す通り＆　酵母
に対する致死作用：塩類存在下においてのみ致死作用を
示す。

Ｚ　致死作用区１　：　ｐｉ（３，Ｏ〜６．０（２チ食
塩存在下）１５℃でチゴサツ力ロマイセス・ルキシーに
対する活性曲線は第５図に示す通り。（キラー活性はメ
チレンブルーを含有するＹＭ培地に感受性菌をスプレー
し、カップをのせ。

その中にキラー因子を含む溶液１０μｌを入れ、２０℃
、４日間培養後の阻止用の面積ｄで表示した） ８、分解性：パパインによって分解されない。

顕画プロテアーゼによって徐々に分解される。

９　温度感受注二食塩２％添加培地における谷温度にお
けるキラー相対活性の経時変化は第４図に示す通りであ
る １０、　　キラースペクトル：キラー因子Ｋｈ−…のキ
ラースペクトルは表１に示される。（食塩２％添加培地
による） 次に本発明の実施例を示す。

実施例１゜ クルコース　　　　　　　　　　２チ ボリベプトン　　　　　　　　　２％ 酵母エキス　　　　　　　　　　１％ ＮａＣ１８チ １Ｍマツキルパイン緩衝液　　　　１０チ（Ｐｔ１４．
８） 上記組成のＹＥＰＤ培地にハンセヌラ・アノマラｘｈ　
−ＩＩ、ＦＦＪＲＭ　Ｐ−８１６０を接種し、２０℃で
、５日間静置培養した。

得られた培養液２０１をバイア０スーパーセルで濾過し
、得られた培養炉液２０Ａ？をフオロファイバーＨＩＰ
−１０（アミコン社製）で５０屑ｌに濃縮した。

得られた培養濃縮液５０ｍをセファデックスＧ−２５で
ゲル濾過し、キラー因子Ｋｈ　−Ｍ溶出画分を分離し、
これをウルトラフィルターＵＫ−１０（アトパンティク
社製）で限外ｔｐ遇する。

得られたゲル濾過濃縮液５ＱｍＩ３を０１ν１−セファ
デッシスＣ−２５でイオン交換にかけ、キラー物’Ｊ［
出画分金分離し、これをウルトラフィルターＵＫ−１０
にて限外ｐ過にかけ、得られたイオン父換睦縮液５０ゴ
を真空凍結乾燥し、キラー因子Ｋｈ　−ＩＩの凍結乾燥
白色粉末２６３Ｉｎ９を得た３、

【図面の簡単な説明】

第１図は、キラー因子島−■の紫外線吸収スペクトルを
示す図で、第２図はその赤外線吸収スペクトルを示す図
で、第６図はその致死作用−を−示す図で、第４図はそ
の温度感受性を示す図で。 第５図はハンセヌラ・γノマラＫｈ−ＩＩ　　の各食塩
濃度における生育曲線を示す図で、第６図はその食塩１
６％添加培地における増殖曲線を示す図で。 第７図はその食塩ｉｓ＊添加培地における増殖曲線を示
す図で、第８図はその各−における生育曲線を示す図で
、第９図はその谷温度における生育曲線を示す図である
。 代理人　弁理士　戸　１）親　男 ＠３図 Ｈ ＠４図 第　　５　　図 第　６　　図 日 第　　７　７ １　　ｌ　　　４　　　　　　　　　　１ＬＩ日 手続ネ市正書 昭和６１年　７月２５日

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有するキラー因子Ｋｈ−I
   I。 １、分子量：約７０万ダルトン（ゲル濾過法による測定
   ） ２、元素分析：Ｃ：４４．２０％、Ｈ：６．６３％、Ｎ
   ：６．７９％、 ３、等電点：ｐＨ＝３．５９ ４、紫外線吸収スペクトル：第１図に示す通り。 ５、赤外線吸収スペクトル：第２図に示す通り。 ６、酵母に対する致死作用：塩類存在下においてのみ致
   死作用を示す。 ７、致死作用ｐＨ：ｐＨ３．０〜６．０（２％食塩存在
   下）１５℃でチゴサッカロミセス・ルキ シーに対する活性曲線は第３図に示す通り ８、分解性：パパインによつて分解されない。 麹菌プロテアーゼによつて徐々に分解され る。 ９、温度感受性：食塩２％添加培地における各温度にお
   けるキラー相対活性の経時変化 は第４図に示す通りである。 １０、キラースペクトル：キラー因子Ｋｈ−IIのキラー
   スペクトルは表１に示される。（食 塩２％添加培地による） 表１ ▲数式、化学式、表等があります▼ 産菌を培養し、培養物よりキラー因子Ｋｈ−IIを採取す
   ることを特徴とするキラー因子Ｋｈ−IIの製造法。