JPS62265981A - ランゲルハンス島を分離するための方法と装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は膵臓組織からランゲルハンス島を分離するだめ
の新規な方法と装置に関し、特に膵臓全体から該ランゲ
ルハンス島の大規模かつ高速の回収に関する。

［発明の背景コ 最近６０年間、人体の糖尿病の処理は、牛や豚や、時に
は羊の膵臓組織から再生されたインシュリンを毎日注射
することによっていた。さらに最近には、豚のインシュ
リンを化学的に変態させるか、または遺伝子的にに変態
させたＥ、ｃａｌｉセルが用いられている。最近の２．
３年は１人間の膵臓移植が試みられているが、成功率は
向上し、移植された膵臓が２午間もａ能を保っていると
はいえ、その方法−は、なお、信頼できるとは考えられ
ていない。

Ｆｒａｎｋｌｉｎ　　Ｌｉｍに特許された米国特許Ｎｏ
。

４．３５２．８８３で、ランゲルハンス島を含む種々の
細胞をカプセルに包む方法が述べられている。このカプ
セル叱方は、ランゲルハンス島を哺乳類の体内に移植し
、それによって該島が循環している血糖レベルに反応し
てインシュリンを解放し病気を治癒することができるこ
とを考慮しており、しかも拒絶現象は生じないのである
。さらに最近、出願人に特許されたヨーロッパ特許出願
Ｎｏ。

０．１２７，７１３およびＮｏ、　０．１２７，９８９
出願公告に記載されているように、Ｌｉｍ法に改良が加
えられ、その結果、マイクロカプセル化されたランゲル
ｌ＼ンス島が一年以上も糖尿病の哺乳動物中で生き続け
て血糖レベルを制御することができるようになった。そ
のような改良は、もっと大きな動物に対する実験と、最
終的には糖尿病に対する治療として人体における臨床的
評価が行われるための理由になった。

動物、例えば子牛の膵臓からランゲル／＼ンス島を分離
する、現在の方法は、小さな規模で手仕事で実行されて
いる。膵臓は小片に切りきざまれ、膵臓組織は、結合し
ている組織を分解してランゲルハンス島を離すために小
さなチューブ中でコラーゲンを接触させ、さらにそのラ
ンゲル／＼ンス島は遠心分離される。この処理は、ラン
ゲルｌ＼ンス島が膵臓組織砕片からよごれなく分離され
るために反復処理を必要とする。この操作は、材料の小
さな体積だけが扱われるので退屈な仕事であり、しばし
ば、細胞の多くを死なせてランゲルハンス島の採取量を
低くする。

現在のランゲルハンス島分離法は全体として上記の特許
出願され、出願公告された出願に記載されているマイク
ロカプセル化法の臨床的評価に必要な量のランゲルハン
ス島を生産するのに不適当である。本発明は、ランゲル
ハンス島を再生するために、高速で効率よく、そしてほ
ぼ自動的に膵臓組織をプロセスする方法と装置を提供す
ることによってこの問題を除去することを目的とする。

［発明の概要］ 本発明の１つの特徴は、膵臓組織からランゲルハンス島
を分離するための、多段のプロセスを含む方法が提供さ
れていることである。そのプロセスの第１段は、ランゲ
ルハンス島（以下、膵島と記す）を他の膵臓組織から離
して、水に懸濁した膵島と膵臓組織デブリス（ｉｉｅｂ
ｒｉｓ）を与えるための膵臓組織処理を含んでいる。

第１段で実行される、その段階に特有な処理操作は、そ
の膵臓を提供した動物源によって異る。

牛やラット源からの膵臓の場合には、膵島を覆っている
特有の膜があり、そのため、膵島を分離するために消化
酵素の使用が必要である。

膵島が膜によって覆われている場合の、膵臓組織の好ま
しい処理は、先ず膵臓組織を酵素溶液で潅流し、次に薄
いスライスに切断され、そのスライスは、膵臓組織のあ
るものを分解して外部結合組織から膵島をＭ８するため
に、酵素溶液（できるだけコラーゲン溶液）中でさらに
消化される。

豚および人間源からの膵臓の場合には、膵島を囲む固有
膜は存在しない、そのような膵臓組織の好ましい処理は
、先ず、膵臓が酵素溶液（できるだけコラーゲン溶液）
で潅流され、しばらくして２．３０大きなピースに切断
される０次に、その大きなピースは物理的解離機（でき
るだけ、鉛直方向に並んだ数対のかみ合溝付口−ラの形
のもの）を通すと、その解離機が機械的動作で、膵島を
結合組織から分離させる。

この方法の次の段階は、膵臓組織のデブリスを水性懸濁
から分離することである。この分離段階は、膵島は通す
けれどデブリスは保持する、めのあらいスクリーンを用
いて懸濁液をろ過することにより、最も便利に実行され
る。

本発明の方法の第３の段階は、膵島を懸濁液から、ひき
続いて順次に分離することである。再び、この分離はス
クリーンによるろ過で最も便利に実行される。そのろ過
は、できるだけ、複数のフィルタ段階を用いて実行され
のが望ましい。次に、ろ過された膵島は後で使用するた
めに、フイルタ媒体から集められる。

本発明のもう１つの特徴は、膵臓組織から膵島を再分離
するために膵臓組織をプロセッシングする、複数の要素
を有する装置を提供することである。第１の要素は、膵
島を他の膵臓組織から離して膵島と膵臓組織デブリスの
懸濁水を提供する処理手段である。牛科動物、ラットの
膵臓およびこれらと同様の膵臓の場合には処理手段は、
のぞましくは消化酵素溶液を入れるための第１の入口、
消化される膵臓組織スライスを入れる第２の入口、液状
ダイジェスト用および半ば消化された膵。

脳組織を保持するが遊離膵島を出口を通って容器の外に
ろ過させるスクリーン用の出口を備えた消化容器を有す
る。容器中に置かれたスクリーンは、この構造物中の第
１の分離手段として機億する。消化容器はのぞましくは
Ｖｅｌｃｒｏ　（商標）によって裏打ちされ、そのＶｅ
ｌｃｒａ　　は、消化されない膵臓の物質を容器中に捕
えておくことを助ける。

豚、人間の膵臓やこれらと同様な膵臓の場合には、処理
手段はのぞましくは粗く切った膵臓組織用の上部の入口
と、鉛直方向に積重ねて配着され、上部から底部へ粗い
溝からだんだんに細い溝になる複数対のかみ合溝付ロー
ラをもつ解離機を有する。膵臓と酵素溶液の粗い混合物
がそのかみ合ローラまたはギヤを通過して流れるに従っ
て膵臓組織は次第に細い形に砕かれる。第１段の分離手
段として作用するスクリーンは、分離された膵臓が容器
外へ通り、膵臓デブリスが保持されるように、−県下の
ローラの下で、下部の出口の上に、解離機内に置かれて
いる。

解離機内では、溝付ローラは任意の大きさく通常、各々
直径２インチ）をもつことができ、任意の、都合のよい
速さく通常、毎分５〜１０回転、のぞましくは８　ｒｐ
ｍ　）で動作することができる。

第２の分離手段は、のぞましくは消化容器または解離機
からの出口と連通し、場合によっては入ってきた懸濁液
を受は入れるフィルタを備えている。

フィルタはのぞましくは、複数の平行なフィルタ室を有
し、各フィルタ室は第１の入口から第１の出口への膵島
懸濁の流路を横切っておかれているフィルタ素子によっ
て相互に分離され、第１の出口から最後のフィルタ室と
つながっていて膵島から分離した水性媒体が排出される
。フィルタ素子はその表面上に膵島を捕捉する。したが
って、それは第１の入口から出口まで、フィルタを通る
流れの向きに穴のサイズがだんだん減少するものである
のが望ましい。

さらに、フィルタは、複数の第２の入口をもち、それら
の数は前記フィルタ室の数に対応し、また、第２の入口
の各々はフィルタ室の各々と連通している。さらに、フ
ィルタは、複数の第２の出口を有し、それぞれの出口は
、それぞれのフィルタ室と連通している。この構造によ
って、ろ過された膵島を第２の出口を経てフィルタ室か
ら取出すために、洗滌液（例えばＨａｎｋの塩基性塩溶
液）を、第２の入口の１つから、これに対応する第２の
出口へ、フィルタ室のフィルタ素子の面を横切って、そ
れぞれのフィルタ室を通過させることができる。

１つ、またはさらに多くの収集容器が、フィルタから洗
滌された膵島を収容して集めるために、フィルタの第２
の出口と連通して備えられている。

［￥施例〕 本発明においては、種々の動物源からの膵臓、主として
牛および豚の膵１ｉ１（Ｌかし、人間の膵臓も含む）が
、膵島を再分離するために処理される。

膵臓の前処理は、もしそれが望まれるならば膵臓の全体
をコラーゲン溶液（第１．２図）で潅流し、潅流された
組織を細長く切り、脂肪、膜および結合組織を分離する
ことにより行われる。

前処理した組織の細片、または細片状、または切断前の
原形のままの組織は、必要な場合には、膵島を分離する
ための消化の目的で、次に、切断される。この切断を実
行するため、損傷が最も少く、一様に薄いｍｓ切片をつ
くることが望まれる。このような結果は、特に大量の材
料が切断処理されなければならないときには、手仕事で
達成することは困難である。新規な組織切断用力フタが
この要求を満たすために開発され、それは第３図に示さ
れている。この新規なカー、夕は本発明の付加的な特徴
を構成する。

新規な、組織切断用カッタ（以下、組織カッタと記す）
１０は、相互に間隔をおいて位置し、下部フレーム１６
に水平に設置された個々の鋼板１４から成る下部バンク
１２を有する。鋼板１４のバンク１２には平行な横方向
の溝１８がある。

鋼板１４の間隔は、膵臓スライスの厚さを決定し、通常
は中心から中心まで１．５ｍｓである０組織カッタｌＯ
は必要に応じて１個の膵臓１９または複数の膵臓をスラ
イスするように寸法がきめられることができる０通常、
バンク１２の各溝１７のサイズは９．５　Ｘ　１９麿■
である。

相互に間隔を置いて位置している切断ナイフ２２のバン
ク２０は上部フレーム２４中に設置され、そのフレーム
２４は鋼板１４の下部バンク１２に対して、切断ナイフ
の上部バンク１２のピボットａ動のため、下部フレーム
１６の後部にピボットに２６を介してピボットに支承さ
れている。切断ナイフ２２も中心から中心まで１．５１
の間隔で位置し、一定間隔で配置されている鋼板１４と
互い違いに配置されている。クランク機構（第３図に示
されているハンドル２８）は、組織をスミイスするため
に上部フレーム２４が下部フレーム１６に対して前後に
運動することができるように、上部フレーム２４に連関
して設けられている。

カッタ１０を用いるときには、膵臓組織は、通常、はじ
めに１０ｍｍのストリップにスライスされて下部バンク
１２のｔＩｖＩ１８に入れられる０次に、上部フレーム
２４はピボット２６のまわりのピボット′ｉＪＬ動によ
ってゆっくりと下げられる一方、同時に上部フレーム２
４は前後に運動し、その結果、ナイフ２２が鋼板１４の
間の間隙に入って組織を一様にスライスする。

これで、膵臓組織は、それから膵島を分離するために装
置５０（第４図を見よ）中で次の処理をする準備ができ
たことになる。スライスされた組織は消化容器５２に入
れられ、その容器はふた５６．５８をもつ長い円柱ボデ
ィ５４を有する。

組織人出口６０は、スライスされたｍＩａを円柱ボディ
５４の内側に入れるために、ふた５６に設けられている
。　Ｖｅｌｃｒｏ裏材（ライナ）は、膵島が分離される
とき、残った組織を保持するために、円柱ボディ５４の
中に備えられている。かくはん器６４は消化中、組織の
かくはん用に容器内に鐙かれている。

ふた５８は、消化容器５２がだての位置に向けられたと
き、その容器の底部を形成し、膵臓組織の消化のための
再循環酵素溶液を入れるための液体入口６６と、消化容
器５２から消化液を排出するための液体出口６８を備え
ている。フィルタスクリーン７０は、分離された膵島を
通過させる一方、不必要な組織のデブリスが液体出口６
８を通って容器５２の外に出るのを防止するため、下部
のふた５８のすぐ近くに設けられている。空気孔７２が
上部のふた５６に設けられている。

適当な量の酵素液（通常は殺菌されたコラーゲン溶液）
が膵臓組織とともに消化容器５２に導入される。消化容
器５２は往復運動ユニー、ドア６に裾前けられる。消化
容器５２は揺り動かしている間は、図に示されているよ
うに、水平に向けられているが、通常は消化容器５２の
内容物の適当なかくはんを確実にするため、揺り動かし
ている方向に対しである角度の向きに向けられている。

酵素液と膵臓組織は揺り動かされ、その結果、結合組織
から膵島が分離される０通常、消化は酵素の消化を速め
るために暖かい温度（めぞましくは約３７℃）で行なわ
れる。その温度は、例えば装置５０全体を所望の温度の
熱浴に入れ、または木ジャケット消化容器を用いる任意
の便利な手段によって、容器５２の内部で維持されるこ
とができる。

消化された材料は容器５２を水平の向きから鉛直な向き
にゆっくりと傾けて、出口６８を通って容器５２から排
出される０通常、膵臓組織とともに酵麦溶液を揺り動か
した後、容器５２の内容物を排出する一連の動作は、す
べての組織が消化するまで行われる。

酵素溶液と分離された膵島を含んでいる消化された材料
は消化容器５２からフィルタすなわちふるい装置７８へ
渡される。そのフィルタ７８の構造は、第１０図に詳細
に示されている。フィルタ７８はフィルタ素子８４によ
って８つの平行な分室８２に、内部が分割されている中
空のボディを有する０図には、８つの分室が示されてれ
ているけれど１分室の個数は他の数例えば４個であって
もよい。

酵素溶液人口８６は、端部の隔壁８８を経て最右端の分
室８２と連通しており、また、配管によって、消化容器
５２の酵素溶液出口６８に接続されている。酵素溶液出
口９２は他端の隔壁９４を経て最左端の分室８２と連通
している。

通常、スクリーン８４は、最右端の分室から最左端の分
室の向きに、穴のサイズがだんだん減少する。用いられ
た、実際のスクリーンの穴は、ろ過される膵島のサイズ
に依存するけれど、通常、最も粗いものは約１５０　ｐ
−麿から２５０延鵬であり、最も細かいものは約５０用
腫である。

また、フィルタ７８は、スクリーン８４の面上を通る洗
滌液を導入するために、分室８２の各々と連通している
先部液入口９５を有する。排出口９６も、各分室８２か
ら洗滌液によって流された材料の排出のために、各々の
分室８２と連通している。

洗滌液入口９５は共通の頭部９８に接続され。

該頭部９８は陽動ポンプ１０２を介してライン１０４経
由で洗滌液溜ｌＯＯと連通している。

フィルタ７８は消化容器５２から消化液を受けとる間は
、酵素溶液入口８６を鉛直に向けている（すなわち該フ
ィルタユニット７８を第４図に示されている位置から９
０＠回転してたいる）、そして酵素溶液がフィルタ７８
を通って酵素溶液出口９２にしみ通るとき、膵島はスク
リーン８４上に保持されている。脂肪が分室８２に沈澱
するのを防止するため、フィルタ７８は１通常、消化容
器５２の温度とほぼ同じ温度に維持されている。

これは１例えば、装置全体を熱浴に入れ、または、洗滌
液容器１００を暖かい恒温バス１０２に浸すことによっ
て洗滌液を暖めることによって達成できる。もし後者の
方法が用いられるならば、所望の消化温度が維持される
ことを確かにするために、酵素溶液は消化容器５２へも
どる途中で熱交換機を通される。

酵素溶液は最左端のスクリーン８４を通過した後、出口
９２によってフィルタ７８を離れて溜め容器１０４に向
い、その容器１０４からライン１０６を経由して消化容
器５２に再循環させられる。酵素溶液の損失を最小にす
るために、スクリーン８４の洗滌が始まる前にすべての
酵素溶液が排出されたことを確実にすることを試みるた
めの一連の運動を、フィルタ７８において行われる。

フィルタ段階が完了すると、次に、フィルタすなわちふ
るい７８は、第４図に示されているように、洗滌液入口
９５が鉛直方向に、酵素溶液入口が水平方向に向くよう
に再び方向づけされる。溜めタンク１００からの洗滌液
１例えばＨａｎｋの塩基性塩溶液はマニフォルド９８に
導入され、そこから洗滌液は洗滌液入口９５へ分配され
る。

洗滌液は入口９５を通って分室８２の各々に入り、膵島
を流し落すためにスクリーン８４の面上を横切って通過
する。フィルタ７８は、それから洗涜媒体中に膵島を流
し落すことを容易にするために、スクリーン表面から膵
島を分離するために振り動かされることができる。各々
の分室８２からの洗滌液は、それぞれの出口９６を経て
、バイブ１１０経由で４つの別々の収集びん１０８に排
出される。出口９６の中の隣同志の一対はパイプ１１０
の１つに接続されている。

収集びん１０８は、それらを氷水バス、１１２に立てる
ことによって氷点近くの温度に保たれている。収集びん
ｌＯ８には、血清かまたは酵素不活性剤が入っている０
通常、消化容器の振り動かしと排出の５〜ｌＯサイクル
が１つの膵臓（通常、全部で１００〜１５０ｃｃ）から
の組織材料を完全に消化するのに必要である。そのサイ
クルが完了する毎に、収集容器１０８の内容は浄化され
る。

通常、節化は収集びん１０８の内容を遠心分離し、次に
その沈殿物をＦｉｃｏｌｌｅ度勾配遠心法で、さらに分
離をする。浄化された膵島を完全に洗滌した後、膵島は
培養基の中で再構成される。収集された膵島の成育回部
性はＴｒｙｐａｎの青変反応でテストすることによって
定められる。

消化容器５２へ供給された膵臓組織スライスの各々の一
塊りに対して、装置５０の種々の操作が自動的に実行さ
れることができる。装ｆｉ５０は、生育可能な膵島を分
離するために、膵臓組織を高速で処理することができる
０通常、約３５分の全サイクルタイムの後に、スライス
された牛の膵臓組織の通常の１００ｃｃの塊りから２０
０，０００以上の生育可能な膵島を分離することができ
る。

第１〜４図を参照して上述された装置は、牛やラットや
これらと同様に膜組織を有する膵臓から膵島を分離する
ために有用である。膜組織の酵素消化は、豚や人間の膵
臓のように膜が存在しない、他のタイプの膵臓には不必
要である。もっとおだやかな処理が膵島を分離するため
に必要である。もし第１〜４図を参照して前述した方法
を適用すると、所望の、分離した膵島が得られるよりも
、むしろ豚の膵臓組織が完全に分解して個々の細胞の懸
濁になるであろう。

豚や人間の膵臓から膵島を再分離する処理のための方法
と装置は第５〜１０図に示されている。

潅流によって膵臓を予備処理した後（第１図、第２図）
、膵臓２００は手で比較的厚いスライス２０２に切断さ
れる（第５図、第６図）、その厚い膵臓組織のスライス
２０２は、次に、膵島分離装置ｉ！１２０４へ送られる
。

膵臓組織スライス２０２は、最初に解離機２０６によっ
て処理される。解離機２０６は上部送りローラ２０ｇと
３セツトのローラ２１０゜２１２および２１４を有し、
ローラ２１０゜２１２および２１４は相互にかみ合う溝
付面を有する。ローラセット２１０，２１２．２１４は
、上のローラセットから下のローラセットに向って順次
にこまかい溝をもっている。ローラは任意の適当な不活
性物質、通常、「テフロン」　（ポリ、テトラフルオロ
エチレン）の商標で知られている高分子によって構成さ
れることができる。ローラセット２１０，２１２および
２１４と送りローラ２０８はモータ２２２によって共通
に駆動されるため、駆動チェーン２２０によって結合さ
れている。解離機２０６はその中で膵臓組織スライス２
０６を処理するため水性媒体で満されている。

順々に溝が細くなるローラセット２１０，２１２および
２１４を通過することによって膵臓組織の分裂と膵島の
分離が生じ、結合組織だけが下部出口２１８の近くに配
置された粗いフィルタスクリーン２１６上に残留する。

水性媒体のレベルは、膵臓片が、各セットのローラを通
過するにしたがって、それぞれのローラセットのレベル
に下げられる。

解離機２０６の出口２１８から膵島はフィルタ２２４へ
送られる。フィルタ２２４は、第４図のフィルタ７８に
ついて上述したものとほぼ同様に構成されている。

フィルタ２２４のさらに詳細な図が第１０因に示されて
いる。同図かられかるように、膵島懸濁液の入口２２６
は複数の分室２２８のうちの最初の分室と連通し、分室
２２８の各々は、スクリーン２３０によって隣接分室と
分離されている。スクリーン２３０は分室２２８を通っ
て、ろ液の出口２３２へ向う膵島懸濁液の流れの向きに
サイズが次第に減少する穴を有する。通常、フィルタス
クリーン２３０の穴は５００ル１から３０延朧の範囲で
ある。

洗滌液頭部２３４もパイプ２３６を介して分室２２８の
各々と連通し、排出ライン２３８も分室２２８の各々と
連通している。排出ライン２３８を通る液体の流れは、
空気駆動のクランプ機構２４０の駆動により、選択的に
塞化される。

洗滌液頭部２３４は、ライン２４６を経て、恒温水へス
２４４に浸されている洗滌液溜め２４２に接続されてい
る。洗滌液溜め２４２から頭部２３４への洗滌液の流れ
は能動ポンプ２４８によって制御される。排出ライン２
３８は氷水バス２５２中に浸されている収集びん２５０
に接続されている。

フィルタ２２４に入る膵島懸濁液中の膵島は、フィルタ
２２４が第７図および第２０図で示されている方位から
９０°の向きに向けられた状態で、フィルタスクリーン
２３０上に分離される。

もはや膵島を含んでいない、ろ過の残液は出口２３２に
よってフィルタ２２４から排液収集容器２５４へ送り出
される。

フィルタ２２４からの膵島の採集は、第１〜４図の実施
例に関して、フィルタ７８に対して前述したものと同じ
方法で実行される。２つの隣接したスクリーン２３０か
ら採取された材料は、収集容器２５０に集められて４つ
の別々の部分を与えるために合体される。これらの部分
の膵島は、第１〜４図について既に述べられているのと
同様の処理で清浄にされる。

例　　１ 生後３〜４箇月の子牛（約３００１ｂｇ）から得られた
膵臓を地域のと殺場から入手した。膵臓は、動物の死後
２５分以内に、内臓が死体から離されたその場で収集さ
れた。膵臓は冷たいＤａｋｉｎ溶液（Ｐａｒｋｅｒ著「
組織培養の方法」を見よ）中に１５分間置かれ、次にそ
の媒液を冷たい輸送媒体（１０％の成牛の血清とアプロ
チニン１００ユニツト／ＴＬ１を含有するＨａｎｋ１１
！基性塩溶液（ｐＨ７，２、０，０５％グルコーゼ））
へ移した０組織を１つの媒液から他の媒液に移すこの移
動は膵臓をと殺場から実験室へ輸送する間に行われた。

膵臓は、ウオームアツプと洗滌媒液（これは輸送培液で
あるが血清とアプロチニンを含有していない）中で約１
０分間暖められた後、１５０ａｊのコラーゲン溶液で１
０　ｄ　／　ｍ１ｎｕｔｅの割合で潅涼された。酵素溶
液はＳｉｇ諺ａ　Ｔｙｐｅ　Ｖコラーゲンを５００ｄｌ
ｌ）ウオームアツプと洗滌媒液で溶解してつくられ、該
溶液は同じ０．４５ミクロン膜フイルタ（Ｐａｌｌ、　
Ｕｌｔｉｐｏｒ　ＤＦＡ　３００１　ＡＣＰ）を２回通
過させることによって殺菌し、１０％の殺菌された成牛
の血清が加えられた。膵臓と溶液の、この相の期間にお
ける温度は３０℃から３５℃の間で変化した。

次に、膵臓は約ｌｏｗ■のストリップに切断され、それ
から脂肪、膜および結合組織ができるだけ除去された６
次に、このストリップは第１．第２図に示されているス
ライサー中に置かれて薄いスライスに切断された。酵素
液による膵臓の予備消化の結果として１個別のスライス
は得られなかった。１対の鉗子を用いて組織は３００ａ
Ｊの暖かい（約３７℃）のコラーゲン溶液が入っている
フラスコ中に集められた。集められた組織は原材料の約
１００ｍ１を示していた。溶液は、膵島の消化および分
離のサイクルを開始するため第３図の消化容器中に入れ
られた。消化容器中で、膵臓組織は、１５秒に１回、２
秒間の揺さぶり運動が割込む９０秒のかくはんを受けた
。このかくはんの後、２分間の連続的な揺さぶり運動が
行なわれ、最後に３０秒間の排出が行なわれた。この処
理は、組織が消化されるまで自動的に綴り返された。

第５図のフィルタにおいては、牛の膵臓のために、２５
０，１５０，１１５および５３ミクロンのサイズ（穴サ
イズ）のスクリーンが用いられた。酵素溶液中に膵島の
懸濁を含んでいる消化容器からの消化液は、フィルタに
送られ、懸濁物質を分離するためにスクリーンを通過さ
せられた。

すべての残留液を注意深く排出した後、ろ過によって膵
島を含んでいない酵素液は、次のサイクルで用いるため
に、消化容器に再循環された。

次に、スクリーンはＨａｎｋの塩基性塩溶液で洗滌され
、それから、スクリーン上の沈積物を離すために、洗滌
媒液の他の１部を用いながらフィルタは２０秒間揺さぶ
られた。４つのスクリーンからの溶出液は４つのびんに
別々に集められた。膵島の大部分は第１．第２および第
３のフラクションに見出された。

採取物は遠心分離され、さらに沈澱物は別々に、２５，
２３．２０および１１％の濃度を用いたＦｉｃｏｌｌ密
度勾配遠心分離された。完全に洗滌した後、膵島は培養
媒体中で再構築され、適当に希釈されたサンプルが！＃
１全１微鏡下を教えらだ、膵島の生育可能性は↑ｒｙｐ
ａｎの青変によって示された。

４つの異なる実験からの収量がきわめられ、表１に示さ
れている。この表かられかるように、多数の生育可能な
膵島を子牛の膵臓から短時間のサイクル（全サイクルタ
イムは３６分であった）で収集することができる。

表　　　１ 実験　フラツジ　フラクション　各実験の膵島番号　ヨ
ン番号　当り膵島数　　の総数（１１０３）　　　　　
（！　１０３）３　　　　　　　１　ｌ　４ 平均収量１　　　　　６４　　　　　２４５木全フラク
ションは　１から４までである。

例　　２ 生後６〜７箇月の、体重的１７５　ｌｂｓの豚からの膵
臓がと殺場から得られた。膵臓を切取ったときは、その
動物の死後２３〜２５分であった。この時間に、死体は
６０℃の熱タンクに８分間さらされ、それによってこの
動物の内部の温度は約２℃上昇した。膵臓が切取られた
後、それはまず、約２分間冷たい０ａｋｉｎ溶液（前記
例１を見よ）に浸され、次に、実験室に運ぶため、氷で
冷した輸送媒液（前記例１と同様であるがアプロチニン
は含有されていない）中に置かれた。

外部の脂肪と結合組織を取去った後、膵管にはカニュー
ルが挿入され、その器官は暖かい（３７’Ｃ）Ｈａｎｋ
の塩基性塩溶液中に入れられた０次に膵臓は２００ｍ１
の予め暖められた酵素溶液で急速に（約３〜５分間で）
伸ばされた。その酵素溶液は２００ｄの輸送媒液に１５
０のｍｇのＳｉｇｍａ　Ｌ１ｐｅＸＩコラーゲンを溶解
して作られた６組織の柔らかさの度合いによって定めら
れたように、約１０〜１２分の全培養時間の後に、膵臓
は２，３の大きな片に切断され、第８図に示されている
解離機に与えられた。

解離機は、使用に先立ち、暖かい（３７℃）Ｈａｎｋ溶
液で上部のギヤまたはローラセットのレベルまで満され
た。解離機のギヤを駆動させながら、１洋１組織は装置
に入れられた。１洋１組織が最初のギヤセットを越える
と、ノ液のレベルは第２のギヤセットまで下り、第１．
第２のギャセ−／　トを越えると、第３のギヤセットま
で液が下る０次に、装置から溶液が排出され、少賃の緩
衝液でゆすぐ。装置の底部で出口の上に位置決めされた
２つのスクリーン（穴のサイズが１５００および１００
１００Ｏは、消化しない組織と結合組織を保持した。

解離機は第９図の形状をもつフィルタに接続され、組織
／膵島の懸濁液が重力によってフィルタ室を通って流れ
、廃液は廃棄される。スクリーンによって保持された材
料は洗われ、暖かい緩衝症びんに集められた。膵臓組織
の分裂から収集までの全サイクルタイムは５分である。

採取材料は遠心分離され、前記例１において記載されて
いるようにして清浄化された。

【図面の簡単な説明】

第１．第２図は本発１１において膵臓組織につい達成さ
れ１１＃る予備処理没階を示す図、第３図は本発明の処
理のために牛の膵臓組織をスライスするために有用なス
ライス装置の斜視図、第４図は本発明の一実施例の、ス
ライスされた牛の膵臓組織を処理するための膵臓組織処
理装置を示す図、第５、第６図は本発明の処理のため、
豚の膵臓組織のスライシングを説明する図、第７図は本
発明の一実施例の、スライスされた豚の膵臓組織の処理
のための膵臓組織処理装置を示す図、第８図は第７図の
装置に用いられる解離機の斜視図、第９図は第８図の解
ＩＩｍの下部を示す図、第１Ｏ図は第７図の装置に用い
られるフィルタ装置の斜視図である。 特許出願人　　コノート　ラポトリイズリミテッド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、膵臓組織からランゲルハンス島を分離するための方
   法において、 膵島を他の膵臓組織から離し、膵島と膵臓組織デブリス
   の水性懸濁を与えるために膵臓組織を処理し、 前記膵臓組織デブリスを前記水性懸濁から分離し、 次に、前記膵島を前記水性懸濁から分離することを特徴
   とするランゲルハンス島を分離するための方法。 ２、前記膵臓組織が牛またはラットの膵臓組織であり、
   前記処理が酵素消化を含んでいる特許請求の範囲第１項
   に記載のランゲルハンス島を分離するための方法。 ３、前記膵臓組織が豚または人間の膵臓組織であって前
   記処理が解離機を含んでいる特許請求の範囲第１項に記
   載のランゲルハンス島を分離するための装置。 ４、前記膵臓組織デブリスの分離がろ過によって達成さ
   れる特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれか１項
   に記載のランゲルハンス島を分離するための方法。 ５、前記膵島の分離がろ過によって達成される特許請求
   の範囲第１項ないし第４項のいずれか１項に記載のラン
   ゲルハンス島を分離するための方法。 ６、前記ろ過は、穴のサイズが順々に減少してゆく一連
   のスクリーンを次々に通って前記水性懸濁を通過させる
   ことによって達成され、こし取られた膵島は、それぞれ
   のスクリーンの表面を横切って水性洗滌媒体を通過させ
   ることによって回収される特許請求の範囲第５項に記載
   のランゲルハンス島を分離するための方法。 ７、膵臓組織からランゲルハンス島を分離するための装
   置において、 他の膵臓組織から膵島を離し、膵島と膵臓組織デブリス
   の水性懸濁を与えるための処理手段５２、２０６と、 前記水性懸濁から膵臓組織デブリスを分離するための第
   １の分離手段７０、２１６と、 膵島を前記水性懸濁から分離するための第２の分離手段
   ７８、２２４を有することを特徴とするランゲルハンス
   島を分離するための装置。 ８、前記処理手段は、消化酵素溶液のための第１の入口
   ６６、消化されるべき、スライスされた膵臓組織のため
   の第２の入口６０および液体ダイジェストのための出口
   ６８をもつ消化容器５２を含み、前記第１の分離手段は
   、部分的に消化された膵臓組織を保持するが、分離され
   た膵島を出口６８を通って消化容器５２の外へ通過させ
   るために前記容器５２内に位置決めされているスクリー
   ン７０を有する特許請求の範囲第７項に記載のランゲル
   ハンス島を分離するための装置。 ９、前記処理手段は、粗く切断された膵臓組織のための
   上部入口２０８、上部から底部に向って粗いピッチから
   こまかいピッチに進む溝をもち、鉛直に積重ねられて配
   置された複数対のかみ合溝付ローラ（２１０、２１２、
   ２１４）および分離された膵島のための下部出口２１８
   を有する解離機２０６を含み、前記第１の分離手段は膵
   臓組織デブリスを保持するが、分離された膵島を出口２
   １８を通って解離機２０６の外へ通過させるために前記
   解離機内に位置決めされているスクリーン２１６を有す
   る特許請求の範囲第７項に記載のランゲルハンス島を分
   離するための装置。 １０、前記第２の分離手段はフィルタ手段７８、２２４
   を有し、該フィルタ手段７８、２２４は、 フィルタ素子８４、２３０によって相互に分離されてい
   る複数の平行なろ過分室８２、 ２２８と、 前記第１の分離手段５２、２２４からの前記膵島の懸濁
   を受入れるために前記第１の分離手段５２、２２４の出
   口６８、２１８と流通している、前記分室８２、２２８
   の第１の分室への第１の入口８６、２２６と、 前記第１の入口８６、２２６からの前記膵島懸濁の流れ
   の通路を設定し、膵島を前記フィルタ素子８４、２３０
   の表面に捕捉するための、前記分室の最後の分室からの
   第１の出口９２、２３２と、 数においては前記分室８２、２２８の数に対応し、前記
   分室の各々と流通して配設されている複数の第２の入口
   ９５、２３６と複数の第２の出口９６、２３８であって
   、そのような分室内で前記第２の入口９５、２３６の１
   つから前記第２の出口９６、２３８の１つへ、フィルタ
   素子８４、２３０の表面を横切って、洗滌液を流し、ろ
   過された膵島をフィルタ素子８４、２３０の表面から洗
   取り、前記第２の出口 ９６、２３８の対応する出口を通してフィルタから洗出
   させるための第２の入口９５、２３６と第２の出口９６
   、２３８を有する特許請求の範囲第７項ないし第９項の
   いずれか１項に記載のランゲルハンス島を分離するため
   の装置。 １１、各々の前記分室８２、２２８内の前記フィルタ素
   子８４、２３０は、第１の分室から最後の分室に向って
   順々に減少する穴サイズを有する特許請求の範囲第１０
   項に記載のランゲルハンス島を分離するための装置。