JPS62234040A

JPS62234040A - Ｄｃ１０４３物質

Info

Publication number: JPS62234040A
Application number: JP7629786A
Authority: JP
Inventors: Hirofumi Nakano; 洋文中野; Mitsunobu Hara; 光信原; Isao Kawamoto; 勲川本; Katsuhiko Ando; 勝彦安藤; Makoto Morimoto; 森本　眞; Tadashi Ashizawa; 芦沢　忠
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1986-04-02
Filing date: 1986-04-02
Publication date: 1987-10-14
Also published as: JPH0586774B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、ＤＣ１０４３物質およびその製法に関する。

ＤＣ１０４３物質は抗腫瘍作用を有し、抗腫瘍剤として
有用である。

従来の技術従来、抗腫瘍抗生物質として一般式〔式中、ＲはＣＨ３（イルジンＭ）又はＣＨ２０Ｈ（イ
ルジンＳ）を表す〕で表されるイルジン類が知られてい
る〔メルクインデックス（Ｍｅｒｃｋ　Ｉｎｄｅｘ）１
０版、第７１４頁〕。

発日が解決しようとする問題、。

優れた抗腫瘍作用を有する物質は常に求められている。

！ＩＡ玉邂迭工玉カ差±ｌ盈本発明は一般式（式中、ＲはＣＨ，又はＣＨａＯＨを表す）で表される
抗腫瘍作用を有する新規物質、ＤＣ１０４３物質に関す
る。上記一般式において、Ｒ＝ＣＨ。

の化合物をＤＣ１０４３Ａ％Ｒ＝ＣＨ２０Ｈの化合物を
ＤＣ１０４３Ｂとそれぞれ称す。

以下にＤＣ１０４３Ａ及びＤＣ１０４３Ｂの理化学的性
質を示す。

（１）　　ＤＣ１０４３Ａの理化学的性質■元素分析値
：Ｃニア７．５９％、Ｈ：　８．６２％、０：１３．７
９％ ■分子量：２３２ ■分子式：ｃｌＳ）Ｉ２゜Ｏ３ ■紫外部吸収スペクトル（ＭｅＯ）１中）３００ｎｒａ
（極大吸収を示す波長） ■紫外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）　：第１図 ■ＰＭＲスペクトル（ＤＭＳローｄ６中、７ＭＳ基準）
０．３２　（ＩＨ，ｍ）、　０．６３　（ＩＨ，ｍ）、
　０．８１　（１）１．　ｍ）。

０．９８　（ＩＨ，ｍ）、　１．１０　（３Ｈ，Ｓ）、
　１．１３　（３Ｈ，ｓ）。

１．１８　（３８，ｓ）、　１．４３　（３）！、　ｓ
）、　２．４３　（２Ｎ、　ｓ）。

４．８９　（１８，ｓ）、　６．４７　（１１（、ｓ）
■ＣＭＲスペクトル（ロＭＳＯ−ｄ、中、７ＭＳ基準）
５．０．７．６．１４．５．２４．５．２７．９．２８
．７．３１．５゜４２．９．４４．０．７５．９．１２
６．６．１３５．９．１３６．０゜１４７．２．１９９
．８ ■溶解性：クロロホルム、ＤＭＳＯ，メ９／−ル、酢酸
エチル、アセトンに易溶、水には難溶。

■薄層クロマトグラフィーニジリカゲル薄層（にｉｅｓ
ｅ１ｇｅ＋　５０＾ｒｔ　５７１５．　Ｂ８Ｍｅｒｃｋ
社製）でトルエン：アセトン（７：　３　Ｖ／Ｖ）の展
開系でＲｆは０．８４であり、ヘキサン：酢酸エチル（
２０：ＩＶ／Ｖ）（７）展開系でＲ「は０．３である。

（２）　　ＤＣ１０４３Ｂの理化学的性質■元素分析値
：Ｃニア２．５８％、Ｈ：８．０６％。

０：１９．３５％ ■分子量；２４８ ■分子式：　Ｃ１５ＨｚｏＯｓ ■紫外部吸収スペクトル（ＭｅＯｆｌ中）３２０ｎｍ（
極大吸収を示す波長） ■赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）　：第２図 ■ＰＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ、中、７ＭＳ基準）
ＯＪ２　（ＩＨ，ｍ）、　０．６４　（ＩＨ，ｍ）、　
０．８１　（１）１．　ｍ）。

１．０２　（ＩＨ，ｍ＞、　１．０９　（３Ｈ，Ｓ）、
　１．２０　（３）１．　Ｓ）。

１．４４　（３Ｈ，ｓ）、　２．２３　（ＩＨ，ｄ）、
　２．５９　（ＩＨ，ｄ）。

３．３０　（２８，ｍ）、　４．８２　（ＩＨ，ｔ）、
　４．８６　（ＩＨ，ｓ）。

６．４８　（１）１．　ｓ） ■ＣＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６中、７ＭＳ基準）
５．１．７．７．１４．５．２３．肌２４．７．３１．
６．３８．３゜５０．４．６８．１．７６．１．１２１
．５．１３６．２．１３７．６゜１４４．９．１９９．
７ ■溶解性：クロロホルム、ＤＭＳＯ，メタノール、酢酸
エチル、アセトンに易溶、水には難溶。

■薄層クロマトグラフィーニジリカゲル薄層（Ｋｉｅｓ
ｅｌｇｅｌ　５０　Ａｒｔ　５７１５．　Ｅ９Ｍｅｒｃ
ｋ社製）でトルエン：アセトン（７：　３　Ｖ／Ｖ）の
展開系でＲｆは０．６４であり、ヘキサン：酢酸エチル
（７：　３　Ｖ／Ｖ）の展開系でＲｆは０．３である。

次に、ＤＣ１０４３Ａ及びＤＣ１０４３Ｂの抗菌作用、
急性毒性及び抗腫瘍作用について説明する。

１）抗菌作用各種細菌に対する最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）を寒天稀
釈法（ｐ　Ｈ７，０）により測定し、その結果を第１表
に示す。

第　　　　１　　　　表２）急性毒性マウスに対する腹腔内投与におけるＤＣ１０４３Ａ及び
ＤＣ１０４３Ｂの急性毒性の値（Ｌ　Ｄ　Ｓ。）は、そ
れぞれ２Ｌ＋ｇ／ｋｇ及び５　ｍｇ　／　ｋｇである。

３）　抗腫瘍作用実験例１゜サルコーマ１８０固型腫瘍に対する治療効果体重的２０
ｇのｄｄＹ雄マウマウス１群６匹サルコーマ１８０［水
型腫瘍細胞５Ｘ１０’個を腋窩部皮下に移植した。移植
後２４時間目に第２表に示す濃度のＤＣ１０４３Ａを５
日間連続投与した。

ＤＣ１０４３Ａは水にはほとんど溶けないので、ＤＣ１
０４３Δ１０ｍｇあたり２５ｍｇのＴｗｅｅｎ　Ｂ　□
を加えよく混和し、これに燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ
）溶液を加えて懸濁液を作製した。これをＰＢＳで希釈
して必要な濃度の溶液を作製した。

このとき’ｊｗｅｅｎ　８０のみを含む同様の溶液を対
照として使用しているが、これは実験動物に全く影響を
与えなかった。

ＰＢＳの組成はＮａＣ１０，８ｇ／ｄ１．ＫＣｊ！０．
０２ｇ／ｄｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４１，１５ｇ／ｊ！。

ＫＨｉＰＯ＊　０．０２ｇ／ｄｉ、ｐＨ７，２のもので
ある。

比較例として、腫瘍細胞移植後、２４時間にイルジンＳ
を含むＰＢＳ溶液０．２ｍｌを１回腹腔内に投与した。

移植７日後のＴ／Ｃ（Ｔ　：試験例の平均腫瘍体積（ｍ
ｍ’）、Ｃ：対照例（ＰＢＳ溶液０．２ｍｌを腹腔内投
与したもの）の平均腫瘍体積（＋ｎｍ’）　）を測定し
た。その結果を第２表に示す。

第　　　　２　　　　表実験例２゜リンホサイティック・リニーケミアＰ−３８８腫瘍に対
する治療効果体重的２２ｇのＣＤＦ、雄マウス１群５匹に、リンホサ
イティック・リューケミア（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔ　ｉｃ
ｌｅｕｋｅｍｉａ　）　Ｐ　−３８８１１１瘍細胞ｌＸ
ｌ０＠個を腹腔内移植した。移植後２４時間目にＤＣ１
０４３Ａの溶液０．２ｍｌを５日間連続して腹腔内に投
与した。

比較例として、イルジンＳをＤＣ１０４３Δと同様に投
与した。

移植後の平均生存日数及び延命率Ｔ／Ｃ（％）を測定し
た。その結果を第３表に示す。

第　　　　３　　　　表次に、ＤＣ１０４３物質の製造法について説明する。使
用する微生物としては、プレウロータス属に属し、ＤＣ
１０４３物質を生産する能力を有するものであればいず
れも用いられる。その具体例としては、プレウロータス
・ジャポニカ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ　ｊａｐｏｎｉｃｕ
ｓ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ２０１９５があげられる。

本発明に用いる培地としては、炭素源、窒素源。

無機物質を程よく含有していれば天然培地又は合成培地
のいずれも用いられる。

炭素源としては、ブドウ糖、澱粉、デキストリン、マン
ノース、フラクトース、シュークロース。

糖蜜、アルコール類（メタノール、エタノール等）有機
酸（酢酸、ギ酸、クエン酸、リンゴ酸等）等が用いられ
る。

窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム
、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム。

尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コ
ーン・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸等が用い
られる。

無機物としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸
第１鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、リン酸第１カリウム、
リン酸第２カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネ
シウム、炭酸カルシウム等が用いられる。

さらに必要に応じて、ＤＣ１０４３物質の生産を促進す
る物質、例えは、ビオチン、ビタミン等を培地に添加し
てもよい。

培養法としては、液体培養法、とくに深部攪拌培養法が
もっとも適している。培養温度は２０〜３５℃、好まし
くは２２〜３０℃で、培地のｐＨはアンモニア水、炭酸
アンモニア水などを添加して、ｐＨ４〜８、好ましくは
５〜７に調整する。

液体培養で通常１日ないし７日培養を行うと、ＤＣ１０
４３物質が培養液中に生成蓄積される。培養液中の生成
量が最大に達したときに培養を停止、　し、菌体を戸別
して得られる培養液中よりＤＣＩ０４３物質を精製単離
する。

培養ｐ液からのＤＣ１０４３物質の単離精製には、微生
物代謝生産物を、その培養液から単離するだめにふつう
用いられる分離、精製の方法（例えば、抽出法、イオン
交換樹脂法、シリカゲル法）が利用される。

以下本発明の態様を実施例によって説明する。

実施例１゜種菌としては、プレウロータス・ジャポニカＡＴＣＣ２
０１９５を用いた。

該菌株の１白金耳を３００ｍｌ容量の三角フラスコ中の
下記組成の種培地５　Ｑｍｌに植菌し、２５℃で４８時
間振とう培養した。

種培地組成：ペプトン５ｇ／１．エビオス５ｇ／ｌ。

グルコースｌｏｇ／Ｌ野菜ジュース２００ｍ１／ｊ！。

ＣａＣ０＊　３ｇ／ｌ、ｐＨ６，０種培養液を３０１容量のジャーファーメンタ−中の下記
組成の発酵培地１８１に５％（容量）の割合で移し、２
５℃で通気攪拌方式（回転数３５゜ｒ、ｐ、　ａｔ０通
気量１３　ｆ／ｍ１ｎ）により培養を行った。

発酵培地組成：シュークロース５０ｇ／ｌ、乾燥酵母２
０ｇ／ｌ、ＫＨｚＰＯ４０，５ｇ／ｌ。

ＭｇＳＯ４’７Ｈ＊ＯＯ，５ｇ／ｊ！、ＣａＣ０５Ｏ，
５ｇ／ｌ、ｐＨ７，０培養中培地のｐＨは制御しないで、２００時間培養した
。培養液より菌体および沈澱物を戸別し、炉液１５ｆを
得た。ｐ液のｐＨを塩酸で５に調整した後、膣液を０．
８βの非イオン性多孔性樹脂（商品名［ダイヤイオン５
Ｐ２０７ｊ三菱化成社製）に通塔して活性物質を吸着さ
せた。水：メタノール（４：　Ｉ　Ｖ／Ｖ）の３βで、
不純物を溶出後、メタノールで活性物質を溶出した。

メタノール溶出区分６１を約２０　Ｑｍｌまで濃縮し、
少量のクロマトグラフィー用シリカゲル（関東化学社製
）にまぶして粉末状とした。この粉末サンプルを、予め
トルエンで懸濁後カラムに充填したシリカゲル（１００
１１＋）のカラムにのせた後、トルエンを通塔すること
によって不純物を除去した。次いでトルエン：アセトン
（５０：ＩＶ／Ｖ）で溶出するとＤＣ１０４３Ａを含む
両分が溶出された。次いでトルエンニアセトン（２０：
ＩＶ／Ｖ）で溶出するとＤＣ１０４３Ｂを含む両分が溶
出された。これらの各々の活性画分をさらにシリカゲル
（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　Ｓｉ　６０　Ｍｅｒｃｋ社製
）を用い、中程度の圧力をかけながら、ヘキサン、酢酸
エチル系の溶媒で展開すると、ヘキサン：酢酸エチル（
２０：　Ｉ　Ｖ／Ｖ）　テＤｃｌ　０４３Ａの両分が溶
出された。次いで、ヘキサン：酢酸エチル（７：３Ｖ／
Ｖ）でＤＣ１０４３Ｂの両分が溶出された。それぞれの
画分を集め濃縮して、純粋なりＣ１０４３Ａ　　３０ｍ
ｇ及びＤＣ１０４３Ｂ　　１２０＋ｇを得た。

実施例２゜実施例１において発酵培地組成を次のものに代えて行う
以外は実施例１と同様に行いＤＣ１０４３Δ　１５ｍｇ
及びＤＣ１０４３Ｂ　　８０■を得た。

発酵培地組成：デキストリン５０ｇ／Ｌ大豆粉２０ｇ／
ｌ、ＣａＣＯ５５ｇ／１．Ｋ）１２ＰＯ４０、５ｇ　／
　１　、　Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏｓ・７Ｈ２００，５ｇ／ｊ！
。

ｐ　Ｈ７，０発明の効果ＤＣ１０４３物質は優れた抗腫瘍作用を示す。

【図面の簡単な説明】

第１図はＤＣ１０４３Ａの赤外部吸収スペクトルを示す
。第２図はＤＣ１０４３Ｂの赤外部吸収スペクトルを示す
。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＲはＣＨ＿３又はＣＨ＿２ＯＨを表す）で表さ
れるＤＣ１０４３物質。
（２）プレウロータス属に属し、ＤＣ１０４３物質を生
産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に
ＤＣ１０４３物質を生成蓄積させ、該生成蓄積したＤＣ
１０４３物質を採取することを特徴とするＤＣ１０４３
物質の製法。