CN107721990B - 一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用 - Google Patents
一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用。异吲哚酮类新化合物的结构式如式
、II、III或IV所示。该类新化合物具有显著抑制LPS诱导的NO的产生，其IC50分别为：8.9 mM（I），12.4 mM（II），18.2 mM（III），22.7 mM（IV），可用于制备抗炎药物。因此，本发明提供的异吲哚酮类化合物具有抗炎治疗的临床应用潜力。
Description
技术领域
本发明涉及药物化合物领域，具体地，涉及一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用。
背景技术
炎症是机体对各种致炎因子所产生的防御性反应，是最常见的病理过程。炎症的发生在局部组织会产生一系列的复杂变化，临床上主要表现有红、肿、热、痛及功能障碍，同时炎症可引起全身反应，包括发热、嗜睡、肌肉蛋白质降解加速等。当机体受到致炎因子入侵时，会激活体内的单核细胞、巨噬细胞等合成和释放多种内源性生物活性物质，如前列腺素、一氧化氮、血管活性胺等，导致血管通透性增加，炎症细胞趋化，从而诱导炎症的发生。此外，炎症与许多慢性疾病如关节炎，骨质疏松，哮喘，癌症等密切相关。
巨噬细胞是机体内重要的一种免疫细胞，是体内启动炎症介质产生的主要细胞，并且具有抗感染、抗肿瘤和免疫调节的作用。巨噬细胞能够被多种炎症性因子所激活，如细胞因子、细菌脂多糖LPS、细胞外基质蛋白以及其他化学介质等。LPS是十分重要的致炎因子，它能够刺激体内的巨噬细胞合成和释放多种内源性活性因子，进而诱发炎症。利用LPS处理巨噬细胞是常用的体外炎症模型造模手段。
目前临床上常用的抗炎药主要有两类：非甾体抗炎药和甾体类抗炎药。虽然这两类抗炎药都有一定的临床抗炎效果，但长期大量使用会产生一系列不良反应和耐受性，如胃粘膜损伤、肝脏损伤、肾脏损害等。为解决药物的耐受性及不良反应，寻找新的抗炎药物以及相关新颖骨架类型的药物成为抗炎药物研究领域的热点。
天然产物是药物先导化合物的重要来源。海洋真菌来源的天然产物，具有可持续性，对环境友好，代谢产物丰富多样等特点，一直是药物筛选的重要源头。真菌的代谢产物具有广泛的生理活性，如抗菌，抗肿瘤，免疫调节，抗炎，酶抑制等多种活性。目前，从海洋真菌中寻找新的药源分子已成为国际国内研究的热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物。
本发明的另一个目的在于提供一种上述海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供上述海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物在制备抗炎药物中的应用。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物，其结构式如式I、II、III或IV所示：
如上所述异吲哚酮类化合物的制备方法，所述异吲哚酮类化合物是从海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3的发酵液中分离获得的；所述海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3于2017年8月4日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC No：60217，分类命名为Diaporthe sp.。保藏单位的地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
作为优选实施方案，如上所述异吲哚酮类化合物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3接入种子培养基，摇床培养，得到种子培养液；
S2.将种子培养液接入发酵培养基中，静置培养；
S3.将发酵产物过滤得到菌体，菌体用甲醇提取多次，浓缩提取液得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯粗提物，将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离；用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，收集10％～50％乙酸乙酯/石油醚部分，再以硅胶、凝胶、C-18反相等柱层析分离技术，即得到式I，II，III，IV所示的异吲哚酮类化合物。
优选地，所述种子培养液组成按重量比为：葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.1％～0.5％，琼脂1.5％～2.5％，氯化钠1.5％～4％，水93～98％。
优选地，所述摇床培养的条件为摇床转速150～200rpm，28～35℃培养4～10天。
优选地，所述发酵培养基为固体大米发酵培养基，其组成为大米与海水按照1：1的质量比混合。
优选地，S2所述静置培养的条件为25～35℃静置1～2个月。
本发明还要求保护如上所述的海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物在制备抗炎药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物，该类化合物具有显著抑制LPS诱导的NO的产生，其IC50分别为：8.9μM(I)，12.4μM(II)，18.2μM(III)，22.7μM(IV)，可用于制备抗炎药物。因此，本发明提供的异吲哚酮类化合物具有抗炎治疗的临床应用潜力。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物的制备方法，所述异吲哚酮类化合物是从海洋真菌间座壳属真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3的发酵液中分离得到的。海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3是从广东珠海海域红树林植物海漆Excoecaria agallocha L.的新鲜叶子中分离得到。
所述海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3于2017年8月4日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC No：60217，分类命名为Diaporthe sp.。保藏单位的地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
异吲哚酮类化合物的具体制备方法如下：
S1.海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3的种子液培养：将海洋真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3接入种子培养基，在摇床转速180rpm，30℃培养6天，得到种子培养液；种子培养基组成按重量比为：葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.5％，琼脂2.5％，氯化钠3％，水98％。
S2.海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3的发酵培养：利用固体大米发酵培养基(大米：海水＝1：1)，将种子培养液中的菌株转接入发酵培养基中，于室温35℃静置2个月；
S3.将上述培养好的菌体用甲醇提取3次，浓缩提取液，将获得的浓缩浸膏用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯粗提物。将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离；用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，收集10％～50％乙酸乙酯/石油醚部分，再以硅胶、凝胶、C-18反相等柱层析分离技术，即得到化合物I，II，III，IV。
实施例2
对新化合物I，II，III，IV进行结构测试解析，得到以下实验数据：
新化合物I:C25H29NO5，HRESI-MS：424.2123[M+H]+(计算值424.2124)；
新化合物II:C25H29NO5，HRESI-MS：424.2124[M+H]+(计算值424.2126)。
新化合物III：C26H32NO6，HRESI-MS：454.2234[M+H]+(计算值454.2230)。
新化合物IV：C26H32NO6，HRESI-MS：454.2233[M+H]+(计算值454.2230)。
化合物I，II，III，IV的NMR数据见表1和表2。
表1.化合物I和II的NMR数据(CDCl3，500MHz/125MHz,ppm)
表2.化合物III和IV的NMR数据(CDCl3，500MHz/125MHz,ppm)
根据上述数据结果，确认化合物I，II，III，IV的结构式如下：
实施例3
化合物I-IV的抗炎细胞筛选模型
1、细胞的培养与处理：体外培养RAW 264.7细胞，使用含10％FBS的DMEM高糖培养基，在37℃、5％二氧化碳浓度条件下进行常规维持培养和传代。
2、化合物干预：调整RAW 264.7细胞密度为1×105cells/孔并处于对数生长期，加入LPS(终浓度1μg/mL)诱导巨噬细胞处于炎症状态，使用DMSO将待测化合物或吲哚美辛配成不同的药物浓度，每个浓度设3个平行复孔，并设置阳性对照孔(只加LPS)，阴性对照孔(细胞和培养基)，空白对照孔(培养基)。培养24小时后，取细胞上清液50μL加入新的96孔板中，加入NO检测试剂盒的试剂I和II各50μL，利用Griess法测定NO的含量。
抑制率＝([NO2 -]LPS-[NO2 -]LPS+sample)/([NO2 -]LPS-[NO2 -]untreated)×100
3、化合物对细胞活力的影响：MTT可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的蓝色结晶，并沉积在活细胞中，而死细胞并无此功能。
取对数生长期的RAW 264.7细胞，按1×105cells/孔接种于96孔板，100μL每孔。加入LPS(终浓度1μg/mL)诱导巨噬细胞处于炎症状态，使用DMSO将待测化合物或吲哚美辛配成不同的药物浓度，每个浓度设3个平行复孔，并设置阳性对照孔(只加LPS)，阴性对照孔(细胞和培养基)，空白对照孔(培养基)。培养24小时后，每孔加入1mg/mL的MTT溶液50μL,培养4小时后，吸出培养基，在向每孔加入150μL的DMSO。震荡摇匀。用酶标仪测定在490nm波长处的吸光度值(A)。药物对细胞生长的抑制作用以存活率表示，存活率越高，表示药物毒性越低。
存活率(％)＝[(A1–A0)/(A2-A0)]×100％，其中A0空白对照的吸光度值，A1为样品的吸光度值，A2为阳性对照孔的吸光度值。测定5个浓度的样品，绘制剂量-抑制率曲线，得出其CC50值。每个样品重复测定三次。筛选结果如表3。
表3
Claims (8)
1.一类海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物，其特征在于，所述异吲哚酮类化合物的结构式如式II、III或IV所示：
2.权利要求1所述的异吲哚酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述异吲哚酮类化合物是从海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3的发酵液中分离获得的；所述海洋真菌Diaporthesp.SYSU-HQ3于2017年8月4日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC No：60217。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述异吲哚酮类化合物的制备方法包括如下步骤：
S1.将海洋真菌Diaporthe sp.SYSU-HQ3接入种子培养基，摇床培养，得到种子培养液；
S2.将种子培养液接入发酵培养基中，静置培养；
S3.将发酵产物过滤得到菌体，菌体用甲醇提取多次，浓缩提取液得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯粗提物，将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离；用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，收集10％～50％乙酸乙酯/石油醚部分，再以硅胶、凝胶、C-18反相柱层析分离技术，即得到式II，III，IV所示的异吲哚酮类化合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养液组成按重量比为：葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.1％～0.5％，琼脂1.5％～2.5％，氯化钠1.5％～4％，水93～98％。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述摇床培养的条件为摇床转速150～200rpm，28～35℃培养4～10天。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基为固体大米发酵培养基，其组成为大米与海水按照1：1的质量比混合。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，S2所述静置培养的条件为25～35℃静置1～2个月。
8.权利要求1所述的海洋真菌来源的异吲哚酮类化合物在制备抗炎药物中的应用。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|---|
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| CN104987316A (zh) * | 2015-04-27 | 2015-10-21 | 中山大学 | 一种海洋真菌来源的聚酮类化合物及其治疗ii型糖尿病的应用 |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Tenellones A and B from a Diaporthe sp.: Two Highly Substituted Benzophenone Inhibitors of Parasite cGMP-Dependent Protein Kinase Activity;Chaowei Zhang，等;《J. Nat. Prod.》;20050402;第68卷;第611-613页 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115536670A (zh) * | 2022-10-31 | 2022-12-30 | 广东职业技术学院 | 一种海洋真菌来源的新型噻唑类化合物及其制备方法和在纺织品中的抑菌应用 |
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