JPS62232324A - 雑種植物の製造方法 - Google Patents
雑種植物の製造方法Info
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- JPS62232324A JPS62232324A JP61075699A JP7569986A JPS62232324A JP S62232324 A JPS62232324 A JP S62232324A JP 61075699 A JP61075699 A JP 61075699A JP 7569986 A JP7569986 A JP 7569986A JP S62232324 A JPS62232324 A JP S62232324A
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Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
ｌ？デ
本発明は、細誓融合法を用いて効率よくブラシカ属植物
を作出する方法に関するものである。
を作出する方法に関するものである。
植物体への再分化といった多数のステップからなり、各
ステップは例えば植物種等Ｉこよりても条件が異カシ、
必ずしもこれら一連のプロセスが徨々の植物について十
分確立されているとはいえない。また、雑種植物を得る
ためにはこれら一連のプロセスにおりて、目的とする雑
種植物のみを選択的に選抜できるような条件を各植物種
につ込て決めなければならない。
ステップは例えば植物種等Ｉこよりても条件が異カシ、
必ずしもこれら一連のプロセスが徨々の植物について十
分確立されているとはいえない。また、雑種植物を得る
ためにはこれら一連のプロセスにおりて、目的とする雑
種植物のみを選択的に選抜できるような条件を各植物種
につ込て決めなければならない。
ｚ、 Ｐｆｌａｎｚｅｎｚｆｆｉｃｈｔｇ、 ♂９．
コ２♂−ｘｃｒｚ（／り／、２）には、Ｂ、ｏｌｅｒａ
ｃｅａ由米のプロトプラストとＢ。
コ２♂−ｘｃｒｚ（／り／、２）には、Ｂ、ｏｌｅｒａ
ｃｅａ由米のプロトプラストとＢ。
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ由来のプロトプラストとをポリエ
チレングリコール（ＰＩＩＣＧ）を含む溶液中で融合さ
せた後培養して、コロニーを形成させ、該コロニーを０
．２Ｗ／ｌのベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を含むＬ
８培地中で再分化させてこれらの種間雑種植物を作出す
ることが報告されている。
チレングリコール（ＰＩＩＣＧ）を含む溶液中で融合さ
せた後培養して、コロニーを形成させ、該コロニーを０
．２Ｗ／ｌのベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を含むＬ
８培地中で再分化させてこれらの種間雑種植物を作出す
ることが報告されている。
的とするものである。
この目的は本発明に従って、ブラシカキャンペストリス
由来のプはドプラストと予めヨード化合物で処理したブ
ラシカオレラセア由来のプロトプラストとを、ポリエチ
レングリコールおよびジメチルスルホキシドを含む溶液
中で融合させた後培養してコロニーを形成させ、該コロ
ニーを植物ホルモンとして少くともインドール−３−酢
酸およびゼアチンを含む培地中で培養することを特徴と
する雑種植物の製造方法によシ達成される。
由来のプはドプラストと予めヨード化合物で処理したブ
ラシカオレラセア由来のプロトプラストとを、ポリエチ
レングリコールおよびジメチルスルホキシドを含む溶液
中で融合させた後培養してコロニーを形成させ、該コロ
ニーを植物ホルモンとして少くともインドール−３−酢
酸およびゼアチンを含む培地中で培養することを特徴と
する雑種植物の製造方法によシ達成される。
以下本発明を説明するに、本発明で使用するブラシカキ
ャンペストリス（Ｂ、ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ）として
は、ハクサイ、コマツナ、アブラナ等が挙げられ、また
、ブラシカオレラセア（Ｂ。
ャンペストリス（Ｂ、ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ）として
は、ハクサイ、コマツナ、アブラナ等が挙げられ、また
、ブラシカオレラセア（Ｂ。
ｏｌｅｒａｃｅａ ）としては、キャベツ等が挙ケラれ
る。
る。
プロトプラストは、常法に従−１植物体また３０℃、４
ｔθ〜♂Ｏｅｐｍの条件で３〜４を時間程度酵素処理し
てプロトプラスト化することによって得ることができる
。
ｔθ〜♂Ｏｅｐｍの条件で３〜４を時間程度酵素処理し
てプロトプラスト化することによって得ることができる
。
その際、使用するＢ、 ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓの植物体
またはその部分は予め暗所に一〜ダ日間保持しておき、
その後例えば、０．３〜０．４１ Ｍシュークロースを
含むＮＮ４７培地（Ｐｌａｎｔａ、 ７．２． ！！！
−３７０、 ／９＆？ ）中で、Ｊ〜／Ｊ−℃、／！
〜２０時間程夏暗所に保持しておくのがよい。
またはその部分は予め暗所に一〜ダ日間保持しておき、
その後例えば、０．３〜０．４１ Ｍシュークロースを
含むＮＮ４７培地（Ｐｌａｎｔａ、 ７．２． ！！！
−３７０、 ／９＆？ ）中で、Ｊ〜／Ｊ−℃、／！
〜２０時間程夏暗所に保持しておくのがよい。
この様に植物体を暗所に保持することによりでん粉の生
成が抑制され、プロトプラスト調製の際プロトプラスト
の破壊が抑えられ、活性の高いプロトプラストを得るこ
とが可能となる。
成が抑制され、プロトプラスト調製の際プロトプラスト
の破壊が抑えられ、活性の高いプロトプラストを得るこ
とが可能となる。
得られたプロトプラストは、ポリエチレングリコール（
ＰＥＧ）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含
む溶液中で融合させるが、Ｂ、 ０１ｅｒａＣｅａ由来
のプロトプラストは、予めヨードアセトアミド、モノヨ
ード酢酸等のヨード化合物を最終濃度で７〜．２０ ｍ
Ｍ含む溶液中、３〜！℃、１０〜３０分間処理しておく
。かかるヨード化合物処理によってＢ、 ｏｌｅｒａｃ
ｅａ 由来のプロトプラストはそれ単独では分裂能がな
く彦る。
ＰＥＧ）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含
む溶液中で融合させるが、Ｂ、 ０１ｅｒａＣｅａ由来
のプロトプラストは、予めヨードアセトアミド、モノヨ
ード酢酸等のヨード化合物を最終濃度で７〜．２０ ｍ
Ｍ含む溶液中、３〜！℃、１０〜３０分間処理しておく
。かかるヨード化合物処理によってＢ、 ｏｌｅｒａｃ
ｅａ 由来のプロトプラストはそれ単独では分裂能がな
く彦る。
プロトプラストを融合させる溶液は、ＰＩＩｉＧおよび
ＤＭＳＯを、それぞれ、１Ｏ−４ｔＯ％訃よび！〜、２
！チ、好ましくは、！〜／！チおよび１０〜／！チの範
囲で含む０．０！〜０．／ ｊ Ｍグリシン−ＮａＯＨ
，ｐＨ２，！〜／θ、！の溶液（Ｐｌａｎｔ Ｃｅ１
ｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、ｊ、／り６−／９♂、／り？り等
が好適に使用できる。かかる溶液中に、上記プロトプラ
ストを等密度で合計が３〜４ｔｘｉｏｍ個／−となるよ
うに混合し、−０〜３０℃で１〜３０分間保持し、次す
でＷＪ液（Ｐｌａｎｔの分子量は、！、６４ｔＯ〜？、
０００位の水溶性のものがよい。
ＤＭＳＯを、それぞれ、１Ｏ−４ｔＯ％訃よび！〜、２
！チ、好ましくは、！〜／！チおよび１０〜／！チの範
囲で含む０．０！〜０．／ ｊ Ｍグリシン−ＮａＯＨ
，ｐＨ２，！〜／θ、！の溶液（Ｐｌａｎｔ Ｃｅ１
ｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、ｊ、／り６−／９♂、／り？り等
が好適に使用できる。かかる溶液中に、上記プロトプラ
ストを等密度で合計が３〜４ｔｘｉｏｍ個／−となるよ
うに混合し、−０〜３０℃で１〜３０分間保持し、次す
でＷＪ液（Ｐｌａｎｔの分子量は、！、６４ｔＯ〜？、
０００位の水溶性のものがよい。
上述のようにして融合処理した処理液を遠心分離して沈
澱画分を集め、これを例えばＯＪ ｍｙ／ｌナフタリン
酢酸（ＮＡＡ）、０．！η／ｌＢＡ Ｐ、 ０．ｊ ｍ
ｙ／ｌ Ｊ４ｔ −Ｄ ０．４ｔ Ｍ シュークロース
を含むＫＭ液体培地（Ｐｌａｎｔａ ／２４．１０！
−／１０．／９７！ ）中、３〜／ＡＸ１０聾個／ばと
なるよりに懸濁し、２３〜２７℃、／θ０−２００１ｕ
ｘ （／ ７時間日長）下で培養する。この培養液に週
／回の頻度で新しいＫＭ培地を追加しな本発明において
は、このコロニーを、植物ホルモントシテ、インド−ル
ーー？−酢酸（工ＡＡ）およびゼアチンを含む再分化培
地、例えば、Ｋ３アガロース培地（Ｚ、 Ｐｆｌａｎｚ
ｅｎｐｈｙｓｉｏｌ、 ７／。
澱画分を集め、これを例えばＯＪ ｍｙ／ｌナフタリン
酢酸（ＮＡＡ）、０．！η／ｌＢＡ Ｐ、 ０．ｊ ｍ
ｙ／ｌ Ｊ４ｔ −Ｄ ０．４ｔ Ｍ シュークロース
を含むＫＭ液体培地（Ｐｌａｎｔａ ／２４．１０！
−／１０．／９７！ ）中、３〜／ＡＸ１０聾個／ばと
なるよりに懸濁し、２３〜２７℃、／θ０−２００１ｕ
ｘ （／ ７時間日長）下で培養する。この培養液に週
／回の頻度で新しいＫＭ培地を追加しな本発明において
は、このコロニーを、植物ホルモントシテ、インド−ル
ーー？−酢酸（工ＡＡ）およびゼアチンを含む再分化培
地、例えば、Ｋ３アガロース培地（Ｚ、 Ｐｆｌａｎｚ
ｅｎｐｈｙｓｉｏｌ、 ７／。
＋ｔＪ−ｊ −￥ｊｊ （／り２ｇ））で２３〜−７℃
、＝、θ０θ〜ｅ、０００１ｕｘの条件下に培養する。
、＝、θ０θ〜ｅ、０００１ｕｘの条件下に培養する。
再分化培地には更にＢＡＰ、カイネチン等の植物ホルモ
ンを添加することができるが、少くともＩＡＡ及びゼア
チンを含むことが必要であ）、いずれかを含まない培地
で培養を行なってあう、またゼアチンは／〜／Ｑ岬／ｌ
が適当である。その際、予めコロニーをに３ソフトアガ
ー培地（同上）等の増殖培地で、４３〜２７℃、／、０
０θ−３，０００ｌｕｘの条件下に培養してカルスを形
成しておき、これを上記の再分化培地で培養するのが好
まし−。
ンを添加することができるが、少くともＩＡＡ及びゼア
チンを含むことが必要であ）、いずれかを含まない培地
で培養を行なってあう、またゼアチンは／〜／Ｑ岬／ｌ
が適当である。その際、予めコロニーをに３ソフトアガ
ー培地（同上）等の増殖培地で、４３〜２７℃、／、０
０θ−３，０００ｌｕｘの条件下に培養してカルスを形
成しておき、これを上記の再分化培地で培養するのが好
まし−。
上記再分化培地で約／ケ月毎に新しい培地に植え継ぎな
がら培養を続けると、２〜３ケ月に亘ってシュートが形
成される。このシュートが形の発根培地で発根させ、次
いで、バーミキュライト等に移植して生長させると目的
とする種間雌株植物を得ることができる。
がら培養を続けると、２〜３ケ月に亘ってシュートが形
成される。このシュートが形の発根培地で発根させ、次
いで、バーミキュライト等に移植して生長させると目的
とする種間雌株植物を得ることができる。
以下に実施例を挙げて本発明を説明する。
実施列／
（１） プロトプラストの！Ａ人
コマツナ（Ｂ、ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ）を無菌的に２
１ ”Ｃ、！、０００１ｕｘの条件下、３週間生育させ
、その後３日間−よ℃、ＩＪ［ｔＦｆｒに置く。その後
本葉を刻み、０．３６Ｍシュークロースを含むＮ１（４
７培地に入れ、／Ｑ″Ｃで７６時間暗条件下に保持した
。
１ ”Ｃ、！、０００１ｕｘの条件下、３週間生育させ
、その後３日間−よ℃、ＩＪ［ｔＦｆｒに置く。その後
本葉を刻み、０．３６Ｍシュークロースを含むＮ１（４
７培地に入れ、／Ｑ″Ｃで７６時間暗条件下に保持した
。
次すで、それをθ、！優セルラーゼおよび０．０！チペ
クチナーゼを含む０．Ｊ ｊ Ｍシュークロース溶液（
ｐ）１ ｊｊ ）に移して３０℃、３０θｐｍの条件で
一時間処塩した。
クチナーゼを含む０．Ｊ ｊ Ｍシュークロース溶液（
ｐ）１ ｊｊ ）に移して３０℃、３０θｐｍの条件で
一時間処塩した。
酵素処理液をろ過して未消化物を除去し、ろ液を／ ０
０ ｒｐｍで１分間遠心分離して沈澱画分を集め、約１
８１０６個／ Ｉ （ｆ Ｗ（ｆｒｅｓｈｗｅｉｇｈｔ
））の収率でグａ）ゲラストを得た。
０ ｒｐｍで１分間遠心分離して沈澱画分を集め、約１
８１０６個／ Ｉ （ｆ Ｗ（ｆｒｅｓｈｗｅｉｇｈｔ
））の収率でグａ）ゲラストを得た。
一方、キャベツ（Ｂ、 ｏ：Ｌｅｒａｃｅａ ）を無菌
的に発芽させたｙ〜！日目の下圧軸を細分して、２％セ
ルラーゼを含む０３Ｍシュークローズ溶液（ｐＢ！、６
）中で３０℃、ｔ Ｏｓｐｍの条件で２時間酵素処理し
た。
的に発芽させたｙ〜！日目の下圧軸を細分して、２％セ
ルラーゼを含む０３Ｍシュークローズ溶液（ｐＢ！、６
）中で３０℃、ｔ Ｏｓｐｍの条件で２時間酵素処理し
た。
酵素処理液をろ過して未消化物を除去し、ろ液を？ ｏ
ｏ ｒｐｍで１分間遠心分離して沈澱画分を集め、約
ＪＸ１０５個／＃（ｆＷ）の収率でプロトプラストを得
た。
ｏ ｒｐｍで１分間遠心分離して沈澱画分を集め、約
ＪＸ１０５個／＃（ｆＷ）の収率でプロトプラストを得
た。
（２） ヨードアセトアミド処理
上記（１）で調製したキャベツの下圧軸由来のプロトプ
ラスト２Ｘ１０’個を、ｗ６液！−に懸濁し、これに６
０ｍＭヨードアセトアミド液を最終一度が／ｊｍＭとな
るように添加し、り”Ｃ／ を分間、暗条件下で処理し
た。
ラスト２Ｘ１０’個を、ｗ６液！−に懸濁し、これに６
０ｍＭヨードアセトアミド液を最終一度が／ｊｍＭとな
るように添加し、り”Ｃ／ を分間、暗条件下で処理し
た。
処理後？θ０ｒｐｒｎ、ｊ分間遠心分離してプロトプラ
ストを集め、Ｗ！液で洗浄してミー上記（１）および上
記（２）で調製したプロトプラストをそれぞれ等密度で
合計が３〜４ｔＸ１０’個／−となるように混合し、予
め≦備ρのシャーレに一〇−，２ｊμｔの童で置いた７
０％ＰＫＧおよびＩＯ％ＤＭＳＯを含む０．１３ＭりＩ
Ｊ シン−ＮａＯＨ（ｐ）ｉ １０）溶液の上に静かに
２０−．２６ μｉ加え１．２ｔ℃で１０分間放置した
。次いで、６−のＷ！液を加えて一時間靜置後？θθｒ
ｐｍで１分間遠心分離して沈澱画分を得た。
ストを集め、Ｗ！液で洗浄してミー上記（１）および上
記（２）で調製したプロトプラストをそれぞれ等密度で
合計が３〜４ｔＸ１０’個／−となるように混合し、予
め≦備ρのシャーレに一〇−，２ｊμｔの童で置いた７
０％ＰＫＧおよびＩＯ％ＤＭＳＯを含む０．１３ＭりＩ
Ｊ シン−ＮａＯＨ（ｐ）ｉ １０）溶液の上に静かに
２０−．２６ μｉ加え１．２ｔ℃で１０分間放置した
。次いで、６−のＷ！液を加えて一時間靜置後？θθｒ
ｐｍで１分間遠心分離して沈澱画分を得た。
咋
Ａ、ＢＡＰ訃よびコ譲−りと０，４ｔ Ｍグルコ−（７
７時間日長〕下で培養を行った。週／回の頻度で新しｌ
、−ＩＫＭ培地を追加しながら更に培養を続けたところ
、約３週間で０．３〜０．７ｇｍΩのコロニーが形成さ
れた。
７時間日長〕下で培養を行った。週／回の頻度で新しｌ
、−ＩＫＭ培地を追加しながら更に培養を続けたところ
、約３週間で０．３〜０．７ｇｍΩのコロニーが形成さ
れた。
次いで、０．０！η／ｌのコ、グーＤ、０．Ｊ−η／Ｌ
ｔＤＢＡＰ、／’Ｉｆ／Ｌのゼアチン、０．／ Ｍのシ
ュークロースおよび０．０７％のジェルライトを含むに
３ソフトアガー培地に移し、−〜３週間培養したところ
、コ關程度のカルスに生長した。
ｔＤＢＡＰ、／’Ｉｆ／Ｌのゼアチン、０．／ Ｍのシ
ュークロースおよび０．０７％のジェルライトを含むに
３ソフトアガー培地に移し、−〜３週間培養したところ
、コ關程度のカルスに生長した。
このカルスを０．／岬／ｌの工ＡＡ、ｊｑ／１０ゼアチ
ン、ｏ、ｒｗｑ７ｔのＢＡＰあるいは０．７η／ｌ Ｉ
Ａ Ａ、 ２１ｑ／ｌゼアチン、λ岬／ｌカイネチン
および／％アガロースを含むに３アガローヌ培地に移し
て、／ケ月毎に新しい培地に植継ぎながら培養を続けた
。培養後２〜３ケ月にわたってシュートが形成された。
ン、ｏ、ｒｗｑ７ｔのＢＡＰあるいは０．７η／ｌ Ｉ
Ａ Ａ、 ２１ｑ／ｌゼアチン、λ岬／ｌカイネチン
および／％アガロースを含むに３アガローヌ培地に移し
て、／ケ月毎に新しい培地に植継ぎながら培養を続けた
。培養後２〜３ケ月にわたってシュートが形成された。
シュートが形成されたカルスを０．Ｏｊ １９／ｌのＧ
Ａ、、Ｑ、０／岬／ｌのＮＡＡ、！％シュークロースお
よび一チアガロースを含むＢ！培地に移し、Ｊｊ−２７
℃、コ、ｏｏｏ−ダ、ｏｏ。
Ａ、、Ｑ、０／岬／ｌのＮＡＡ、！％シュークロースお
よび一チアガロースを含むＢ！培地に移し、Ｊｊ−２７
℃、コ、ｏｏｏ−ダ、ｏｏ。
１ｕｘ （／７ ｈｒ日長）の条件下で発根させた。
次いで、バーミキュライト、培土に植え継いで、ダケ月
間育てた。
間育てた。
得られた植物体を下記の方法によって雑種検定したとこ
ろ、約？７％の植物体が雑種植物であることがわかった
。
ろ、約？７％の植物体が雑種植物であることがわかった
。
雑種検定は、常法ｌこ従い、染色体数、抜型解析、’Ｌ
ＡＰ（ロイシンアミノペプチダーゼ）のフイソザイムの
電気泳動パターンおよび形態的特徴を基に解析した。得
られた雑種植物におけるこれらの特徴は全て合致して込
た。
ＡＰ（ロイシンアミノペプチダーゼ）のフイソザイムの
電気泳動パターンおよび形態的特徴を基に解析した。得
られた雑種植物におけるこれらの特徴は全て合致して込
た。
本発明方法に依れば、Ｂ、ｏｌｅｒａｃｅａとＢ。
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓの種間雑種植物を効率よく得るこ
とができる。
とができる。
出 願 人 三菱商事株式会社
三菱化成工業株式会社
代 理 人 弁理士 長谷用 −
ほか／名
Claims (2)
- （１）ブラシカキャンペストリス（Ｂｒａｓｓｉｃａ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｅ）由来のプロトプラストと予めヨ
ード化合物で処理したブラシカオレラセア （Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）由来のプロト
プラストとを、ポリエチレングリコールおよびジメチル
スルホキシドを含む溶液中で融合させた後培養してコロ
ニーを形成させ、該コロニーを、植物ホルモンとして少
くともインドール−３−酢酸およびゼアチンを含む培地
中で培養することを特徴とする雑種植物の製造方法。 - （２）ブラシカキャンペストリス由来のプロトプラスト
が、予め暗所に保持されたブラシカキャンペストリスか
ら得られたものである特許請求の範囲第１項記載の製造
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61075699A JPH0671398B2 (ja) | 1986-04-02 | 1986-04-02 | 雑種植物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61075699A JPH0671398B2 (ja) | 1986-04-02 | 1986-04-02 | 雑種植物の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62232324A true JPS62232324A (ja) | 1987-10-12 |
| JPH0671398B2 JPH0671398B2 (ja) | 1994-09-14 |
Family
ID=13583723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61075699A Expired - Lifetime JPH0671398B2 (ja) | 1986-04-02 | 1986-04-02 | 雑種植物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0671398B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8058505B2 (en) | 2005-10-26 | 2011-11-15 | Sakata Seed Corporation | Cybrid plant of the genus Lactuca and method for producing the same |
| CN109310061A (zh) * | 2016-03-31 | 2019-02-05 | 日本烟草产业株式会社 | 将物质导入植物的方法 |
-
1986
- 1986-04-02 JP JP61075699A patent/JPH0671398B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| H.R.SCHENCK G.ROBBELEN Z.PFLANZENZUCHTG=1982 * |
| LASZLO MENCZEL GENETICS=1983 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8058505B2 (en) | 2005-10-26 | 2011-11-15 | Sakata Seed Corporation | Cybrid plant of the genus Lactuca and method for producing the same |
| EP2944692A1 (en) | 2005-10-26 | 2015-11-18 | Sakata Seed Corporation | Cybrid plant of the genus lactuca and method for producing the same |
| CN109310061A (zh) * | 2016-03-31 | 2019-02-05 | 日本烟草产业株式会社 | 将物质导入植物的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0671398B2 (ja) | 1994-09-14 |
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