JPS62192399A - インシユリン誘導体およびそれらの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、インシュリン誘導体、それらの製造方法およ
びそれらの用途に関する。

インシュリンは約６，０００ダルトンの分子量を有する
ポリにプチドホルモンである。その２つのアミノ酸鎖Ａ
およびＢはジスルフィド橋により　６一 連結されている。インシュリンは膵臓のβ細胞において
プルインシュリンの形で合成され、そしてＣ−ペプチド
と称される部分の除去を伴うタンパク分解修飾を受けて
活性型として分泌される。それは哺乳動物のグルコース
代謝において重要な機能を果している。それは、血糖低
下作用のほか、タンツクおよび脂肪酸代謝にも影響を及
ぼしている。

インシュリンを真性糖尿病の治療に使用できることは知
られている。プｐタミンまたはスはルミジンまたは類似
の化合物、あるいは亜鉛塩を添加すると、例えば皮下投
与した場合に血糖を長期にわたって持続的に低下する離
溶性インシュリン誘導体が得られる。しかしながら、こ
れらの長期持続性デポ−インシュリン誘導体を用いると
副作用が起ることがある。更に、皮下投与した場合、し
ばしばこれらの難溶性インクニリン化合物は吸収が一様
でない。

これに対し、可溶性インシュリンは速効性がある。しか
しながら、その作用は数時間後に消失する。

そこで、本発明の目的は、筋肉内または皮下投与により
吸収されることができ、しかも易溶性であるのみならず
、可溶性インシュリンまたは作用持続性デポ−インシュ
リンの欠点を有しないか僅かな程度にしか有しないイン
シュリン誘導体を開発することにある。

驚くべきことに、インシュリンを生理学的に許容される
炭素化合物に結合することにより、可溶性インシュリン
に匹敵する速効性を示すが後者よりも、デポ−インシュ
リンに近い著しく長い作用持続時間を有する水溶性イン
シュリン誘導体を製造できることが見出された。

更にまた、驚くべきことに、インシュリンをプロテイナ
ーゼ阻害剤に結合することにより、タンパク分解的不活
性化から守られたインシュリン誘導体を製造できること
が見出された。

更に、驚くべきことに、インシュリンをジスルフィド橋
を介して生理学的に許容される炭素化合物に結合するこ
とにより、明確なインシュリン対炭素化合物化学量論を
有するインシュリン誘導体を得ることができることが見
出された。

本発明は、一般式Ｉ Ｘ−（Ｙｌ−８−８−Ｙ２−Ｚ−”インシュリン”）、
Ｉ又は■ Ａ−８−Ｙ３−Ｚ−”インシュリン”　　　　　　■（
式中、 Ｘは、生理学的に許容される炭素化合物の残基であり、 Ｙ１、Ｙ２＊よびＹ３は、相互に独立して、化学結合ま
たは有機化学橋を意味し、 Ｓは硫黄原子であり、 “インシュリン”は、天然、半合成もしくは合成インシ
ュリンもしくは遺伝子工学により製造されたインシュリ
ンまたはその非必須アミノ基を有しない生物活性アナロ
ーグの生物活性ペプチド部分を表わし、 ２は、インシュリンの生物活性に必須でないアミノ基で
あり、 Ａは、水素原子であるか、またはメルカプトを含有し生
理学的に許容される炭化水素化合物の残基であり、そし
て ｍは、１〜２０の整数である） で示されるインシュリン誘導体に関する。

生理学的に許容される炭素化合物としては、デキストラ
ン、ヒドロキシエチル−デンプン、ゼラチンまたは関連
の分解されもしくは架橋されたコラーゲン化合物、ポリ
アミノ酸化合物、ポリオキシエチレンまたはポリビニー
ルピロリドンおよびそれらの誘導体を用いることができ
るが、可溶性ポリマー、特にポリばプチドまたはタン／
ぞりを用いるのが好ましい。分子量は５００〜ｔ５Ｘ１
０’ダルトンであるが２，０００〜５００，０００ダル
トンが好ましい。

特に好ましいインシュリン誘導体においては用いられる
生理学的に許容される炭素化合物は、酵素阻害剤、特に
プロテイナーゼ阻害剤例えばアルファ１−アンチトリプ
シンである。

Ｙ１、Ｙ２およびＹ３は、相互に独立して、化学結合ま
たは有機化学橋、炭素原子または水素原子がヘテロ原子
特にＨ，ＯｌＰまたはＳにより置き換えられていてもよ
い好ましくは脂肪族、芳香脂肪族または芳香族炭化水素
残基であることができる。

好ましいインシュリン誘導体においては、Ｙ１またはＹ
３は、結合を表わしそしてＹ２は−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ
０−基を含む。

２はインシュリンの生物活性に必須でないアミノ基であ
るが、インシュリンのＢ［のＮ−末端アミノ酸であるの
が好ましい。

特に好ましいインシュリン誘導体の場合には、Ｂ鎖に次
のＮ末端配列を有するインシュリンが用いられる。すな
わち、Ｐｈｅ　（１）　−Ｖａｌ　（２）　−Ａｓｎ　
６）−Ｇｌｕ（４）−Ｈｌｓ（５）−Ｉ、５ｕ（６）。

ｚ−１インシユリン”は天然、半合成または合成インシ
ュリンまたは遺伝子工学により製造されたインシュリン
、またはその生物活性アナローグを表わす。Ｂ鎖がＮ末
端またはＣ末端短縮または延長を受けた１インシユリン
”を用いることも可能である。

しかしながらＮ末端アミノ酸としてＡ鎖にグリシン、そ
してＢ鎖にフェニルアラニンを有するインシュリンを用
いるのが好ましい。

特に好ましく用いられるインシュリンはヒト、ブタまた
はウシのものである。

１インシユリン”は非必須アミノ基２を含まないインシ
ュリンの生物活性にプチド部分を表わす。

人がメルカプトを含有する生理学的に許容される炭化水
素化合物の残基を表わす場合には、かかるものとして炭
素原子または水素原子がヘテロ原子、特にＮ、ＯｌＰま
たはＳによって置き換えられていてもよい脂肪族、芳香
脂肪族または芳香族のものを用いることができる。この
炭素化合物は、１〜５０、好ましくは１〜２０個の炭素
原子、そして０〜３０、好ましくは０〜１５個のヘテロ
原子を含有する。好ましいインシュリン誘導体において
は、メルカプトピリジン、システィン、メルカプトプロ
ピオン酸、メルカプトピリジンカルボン酸、メルカプト
コハク酸、グルタチオン、システアミンまたはチアミン
が用いられる。特に好ましいインシュリン誘導体の場合
には、置換されたピリジル残基、例えば２−ピリジルチ
オが用いられる。本発明はまた、インシュリンの生物活
性に必須でないアミノ基をメルカプトまたは式■ （保護基）−８−Ｙ３−Ｚ−インシュリン　　　　■と
しての保護された形のメルカプト基を含有する基に変え
、そして適切な場合には、チオールと反応させて式■ま
たは■で示される化合物を得ることより成る式Ｉまたは
■で示されるインシュリン誘導体の製造方法に関する。

本発明は特に、こういったタイプの方法であって、イン
シュリンのＡ鎖のＮ末端アミノ酸およびインシュリンの
Ｂ鎖のリジンＢ−２９にアミノ保護基を選択的に付与し
、そしてそのインシュリンのＢ鎖のＮ末端アミノ酸をメ
ルカプトまたは保護された形のメルカプト基を含みそし
てアミノ基と反応し得る化合物と反応させ、それによっ
てそのメルカプト基をインシュリンＢ鎖のＮ末端アミノ
酸に共有結合させ、そしてアミノ保護基および適切な場
合にはメルカプト保護基を除去し、そして適切な場合に
は、式Ｘ−Ｙ１−ＥＩＨで示される化合物と反応させる
ことより成る方法に関する。

好ましい手順においては、まずグリシンＡ−１とリジン
Ｂ−２９のアミノ基をペプチド化学での常法により、例
えばｔ−ブチルオキシカルボニル活性エステル誘導体と
反応させてｔ−ブチルオキシカルボニル基（Ｂｏｏ）を
導入する（生成する誘導体はビスーＢｏＯ−インシュリ
ンと呼ばれる）ことにより選択的に保護する。特に好ま
しい方法においては、ｔ−ブチルオキシカルボニルヒド
ロキシスクシンイミドエステル（Ｂｏｃ−Ｏ８ｕ　；　
Ｃｈｅｗ、　Ｂｓｒ、　（１９７５）　１０８．２７５
８〜２７６３）が用いられる。次にメルカプト基を、適
切な場合にはそれを保護された形で含む化合物の形で導
入する。メルカプト基の保護された形とは、メルカプト
基がジスルフィド結合を介して別のメルカプト含有成分
例えばピリジンチオンに結合した化合物として定義され
る。次いでそのメルカプト含有成分を還元条件下に分裂
除去することができる。

好ましい手順においては、ビスーＢｏｏ−インシュリン
誘導体をチオール、またはメルカプトを保護された形で
含有する反応性成分、例えばチオアルカンイミデート、
チオラクトンまたはピリジルチオエステルと反応させる
。そのメルカプト基は、インタクトのまたは短縮された
インシュリンＢ鎖のＮ末端アミノ基をメルカプト含有活
性エステルと反応させることによって導入され、そして
例えばヒ・ドロキシスクシンイミドの、または０−また
はｐ−ニトロフェノフルのエステルを用いることができ
る。

特に好ましい手順において用いられる反応性成分は、Ｎ
−スクシンイミジル６−（２−ピリジルジチオ）−プロ
ピオネートである。

次いで、そのｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＯ）保
護基をペプチド化学での常法により、例えばトリフルオ
ロ酢酸またはＨＣ１／酢酸混合物（好ましくはトリフル
オロ酢酸）で処理することによって分裂除去する。

前述の方法で製造されたメルカプト含有インシュリン誘
導体を今度は、一般式■で示されるインシュリン誘導体
を製造するために、メルカプトまたは保護された形のメ
ルカプト基を含む生理学的に許容される炭素化合物と接
触させる。

インシュリン−５−ｓ−炭素コンプレックスは、いずれ
もがメルカプト基を保護されたまたは保護されない形で
含むインシュリンと炭素化合物の間にジスルフィドを形
成することにより製造される。

好ましい手順において用いられる生理学的に許容される
炭素化合物はメルカプト含有タン、Ｊり例えばプロテイ
ナーゼ阻害剤またはメルカプト含有担体である。アルフ
ァ１−アンチトリプシンは特に好ましい方法に用いられ
る。しかしながら、最初は保護されたまたは保護されな
い形でメルカプト基を含まない担体を用いることもでき
る。このタイプの担体物質には、メルカプト基含有イン
シュリンと反応させる前に、反応性成分例えばチオラク
トンまたはＮ−スクシンイミジル６−（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）と反応させるが、１
９ＦＤＰと反デｌマ一 応させるのが特に好ましい。

一般式■で示されるインシュリン誘導体の製造には、前
述の方法により製造されたメルカプト含有インシュリン
誘導体をメルカプトまた・は保護された形のメルカプト
基を含有する生理学的に許容される炭素化合物と反応さ
せる。インシュリン−８−３−炭素化合物はジスルフィ
ド形成により製造される。

好ましい手順において用いられるメルカプト含有炭素化
合物は、例えばピリジンチオン、システィン、メルカプ
トプロピオン酸、メルカプト酢酸、ピリジンチオンカル
ボン酸、グルタチオン、システアミン、メルカプトコハ
ク酸またはチアミンである。特に好ましい手順において
は、ピリジンチオンが用いられる。

前述の方法により製造されたアルファ１−アンチトリプ
シン−８−８−インシュリンコンプレックスまたはピリ
ジルー５−８−インシュリンコンプレックスは、インシ
ュリンの生物活性を保持し、生理学的ＩＩＨでさえも水
に可溶でありしかも、筋肉内または皮下投与のいずれに
よっても吸収を受けることができ、アルファ１−アンチ
トリプシン−８−８−インシュリンコンプレックスにあ
ってはタン／１り分解的不活性化から保護され、インシ
ュリンと生理学的に許容される物質の間に明確な化学量
論を有し、そして可溶性インシュリンまたは作用持続性
デポ−インシュリンよりも有利な薬力学的性質を有する
ことにより、特に優れている。

アルファ１−アンチトリプシン−インシュリンコンプレ
ックスの静脈内投与および皮下投与についての薬力学的
データは第１表に示されている。

前述の方法により製造されたインシュリンとアルファ１
−アンチトリプシンまたはピリジンチオンの間のコンプ
レックスは代謝障害例えば真性糖尿病の治療に用いるこ
とができる。

これらのインシュリン化合物は、血液と等張で殺菌性と
され、そして適切な場合には適当な生理学的に許容され
る添加剤および安定剤を含む剤の形で投与することがで
きる。

前記インシュリン誘導体は非経腸的に、例えば静脈内、
筋肉内、皮下的に、あるいはインシュリンポンプにより
投与することができる。

以下に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例　１ アルブミン−８−８−インシュリンコンプレックスａ）
ビスーＢｏｏ−インシュリン １ｇのブタインシュリンを３７．５−のＤＭＸＦ　Ｍ２
Ｓ−のＨ２Ｏおよび２．７−のｊＮ　ＮａＨＣＯ３溶液
に溶解した。次に２−のＤＭＦに溶解した９３０■のｔ
−ブチルオキシカルボニル−ヒドロキシスクシンイミド
エステルを添加した。その混合物を室温で４時間攪拌し
、ｐＨを５０％酢酸で６．９に調節し、そして溶媒を回
転蒸発器で除去した。

油状残留物を１０−のメタノールと混合した後約２５０
−のジエチルエーテルに注いだ。沈殿をガラスフリット
上で除去し、酢酸エチルおよびジエチルエーテルで数回
洗浄し、ＫＯＨおよびＰ　４０１０で乾燥した。次に乾
燥沈殿を６−の０．５％ＮＨ４ＨＣＯ３に溶解し、そし
て０．５％ＮＨ４ＨＣＯ３中の■ ５ｅｐｈａｄｓｘ　　Ｇ　−５０，ｆでのゲル濾過にか
けた。ビスーＢｏａ−インシュリンを含有する両分を合
一した後凍結乾燥した。重量：０．８５り。

ｂ）　　ＰＩ）Ｐ−ビスーＢｏａ−インシュリン６００
μｔのＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ
）プロピオネート（５ＰＤＰ　）溶液（２０ミリモル／
ｌｚ　エタノール中）を６−の０．１モル／を燐酸ナト
リウム、１００ミリモル／ｌ）ｌ＆ｃＬ　−、１）Ｈ７
，５、中の５６ｗｑのビスーＢｏｏ−インシュリン誘導
体を攪拌しながら滴加した。その溶液を室温に３０分間
放置した。２−ピリジル−８−８−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ
ｏ−Ｎｕ−Ｇ１７１−インシュリン−ビス−Ｅｏｏ（Ｐ
ＤＰ−ビス−１３ｏｏ−インシュリン）を５９／ｌ　Ｈ
Ｔ１４１１ＣＯ５、ｐＨａ、ｓ、中の８ｅｐｈａｄ＊ｘ
　Ｇ−５０でのゲル濾過にかけることにより不純物から
分離し、次いで凍結乾燥した。

０）ＦＤＰ−インシュリン ３０ｗＩＩのＰＤＰ−ビスーＢｏｃ−インシュリンを４
０μｔのアニソールを含有する４００μｔのトリフルオ
ロ酢酸に溶解した。その溶液を、水分を排除して、室温
に６０分間および４℃に１５分間放置した。その溶液を
次に約１００−の冷エーテルに注いだ。沈殿をエーテル
で数回洗浄し、３−の５９／ｌ　ｌｉＨ４ＨｃＯｇ　、
ｐＨ８，５、に溶解し、そして不純物を５ｅｐｈａａｅ
Ｘ＠ａ　−５０でのゲル濾過により除去した。次に純粋
なＦＤＰ−インシュリンを凍結乾燥した。０．５ミリモ
ル／ｌジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元後、Ｕｖス
ペクトルにおいてλｍｙ、ｘ　５４５　ｎｍに付加的な
吸収帯が明白となったが、これは遊離のピリジンチオン
に相当する。

６）アルブミン−８−８−インシュリン３６岬のメルカ
プトアルブミンを４−の５０ミリモル／を燐酸カリウム
、２００ミリモル／１ＮａＣｔ、　ｐＨ８，５、に溶解
し、そしてその溶液を同じ緩衝液１−中の３．３１１９
のＰＤＰ−インシュリンと混合した。その反応溶液を室
温に１時間、および４℃に４時間放置した。形成したア
ルブミン−８−８−インシュリンコンプレックスヲＢｉ
ｏｇｅｌ■Ｐ１００でのゲル濾過により反応成分から除
去した。約７２，０００ダルトンの生成物に相当するバ
ンドがＳＤＳゲルにおいて明らかとなり、そしてこれは
ＤＴＴによる還元後約６６，０００ダルトンと６、　Ｏ
ＯＯダルトンの２つのバンドに分かれる。

実施例　２ ＰＤＰ−インシュリンを実施例１と同様にして製造した
。２７ｔｑのアルファ１−アンチトリプシンを、５０ミ
リモル／を燐酸カリウムおよび２００ミリモル／　ｔＮ
ａＣｔ（ｐＨ８，５）および２５ミリモル／ｌジチオス
レイトールを含有する２ゴの溶液に溶解した。その還元
溶液を３７℃に１時間および４℃に１時間放置し、次い
で、還元剤を同緩衝液中の５ｅｐｈａｄｅｘ■Ｇ−５０
でのゲル濾過により除去した。前記緩衝液６−中の２７
■のアルファ１−アンチトリプシン−ＳＨを緩衝液１−
中の３、２　ｍ９のＰＤＰ−インシュリンと混合した。

コンプレックス混合物の処理および後処理は実施例１と
同様にして行った。約６０，０００ダルトンの分子量を
有するバンドは８ＤＳゲルにおいて明らかであった。Ｄ
ＴＴで還元後、これは、約５４，０００および＜Ｓ、０
００ダルトンの分子量を有する２つのバンドに分かれた
。その精製アルファ１−アンチトリプシン−８−８−イ
ンシュリンコンプレックスは、キモトリプシン、トリプ
シンおよびエラスターゼなどのプロテアーゼに対し阻害
作用を示した。

実施例　６ アルフア１−アンチトリプシン−８−８−インシュリン
コンプレックスを、ブタインシュリンをヒトインシュリ
ンに置き換えて実施例２と同様にして製造した。

第１表 可溶性インシュリンまたはアルファ１−アンチトリプシ
ン−インシュリンコンプレックス投与後のウサギ血糖レ
ベルの初期レベルに対する経時変化（％） 静脈内　　　皮　下 ０．５２０３４１８３２４５８５４５８５Ｓ工＝可溶性
インシユリン Ｃ工＝アルファ１−アンチトリプシン−８−８−インシ
ュリンコンプレックス ＩＵ＝国際インシュリン単位 各血糖レベルはウサギ４匹についての測定値の平均であ
る。１１ＩＰのインシュリンを含む物質は２５工Ｕのイ
ンシュリンの血糖低下作用を有するものと仮定された。

実施例　４ ２６一 アルファ１−アンチトリプシン−８−８−インシュリン
コンプレックスを、ウシインシュリンをブタインシュリ
ンの代りに用いて実施例２と同様に製造した。

実施例　５ 膵臓トリプシン阻害剤（ＰＴ工）−Ｓ−Ｓ−インシュリ
ンコンプレックス まず、ＰＴ工を、ｙ、　Ｂｉｏ１、　Ｃｈｅｗ、　２３
５（２）、６９６〜４０４（１９６０）と同様にしてＮ
−アセチル−ＤＬ−ホモシスティンチオラフタンと反応
させた。

メルカプト基を含有する阻害剤が得られた。コンプレッ
クスを得るためのＦＤＰ−インシュリンとの反応は実施
例１と同様にして行った。ＰＴエニー−Ｓ−インシュリ
ンコンプレックスはプラスミンおよびトリプシンに対し
て阻害作用を示した。１２０，０００ダルトンの分子量
を有するバンドは８ＤＳゲルにおいて明らかであった。

実施例　６ アミノ基含有デキストランを実施例３と同様にしてに一
アセチルーＤＬ−ホモシスティンチオラクトンと反応さ
せた。デキストラン１モルあたりのメルカプト含量は約
４モルのメルカプト基であった。このコンプレックスを
得るための引き続（ＰＤＰ−インシュリンとの反応は、
実施例１と同様にして行った。

実施例　７ システインー５−８−インシュリンコンプレックス 実施例１と同様にして製造され、そして５−の５０ミリ
モル／を燐酸ナトリウムおよび１５０ミリモル／　Ｌ　
ＭｈＣＬ、　ｐＨ５，０、に溶解されたＦＤＰ−インシ
ュリン（２５ｑ）を同緩衝液１００μを中の０、７５　
ｇのシスティン塩酸塩と反応させた。その反応後に、遊
離ピリジンチオンを３４３　ｎｍで測定した。反応生成
物を５　ｇ／　Ｌ　ＮＩＬＨＣＯｓ　％　ＰＨ８−３、
中の５ｅｐｈａｄｅ！■Ｇ　−５０，、でのゲル濾過に
より不純物から分離し、そして凍結乾燥した。

実施例　８ チアミン−３−８−インシュリンコンプレックス２−の
５０ミリモル／を燐酸す）　ＩＪウム中の２５ＷＩのＰ
ＤＰ−インシュリンを０．７１９のジチオスレイトール
で処理した。次に、同緩衝液２−中の３■のチアミンテ
トラヒドロフルフリールジスルフィドと反応させた。反
応生成物から、５　ｇ／　Ｌ　　ＮａＨＣＯ３、ｐＨｓ
、　５、中の５ｅｐｈａｄｅｘ■Ｇ　−５０，、でのゲ
ルシ過により不純物を除き、そして凍結乾燥した。

実施例５〜８のインシュリン化合物は、ウサギのモデル
において血糖低下作用を示した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ I またはII ▲数式、化学式、表等があります▼II （式中、 Ｘは、生理学的に許容される炭素化合物の残基であり、 Ｙ＿１、Ｙ＿２およびＹ＿３は、相互に独立して、化学
   結合または有機化学橋を意味し、 Ｓは硫黄原子であり、 “インシュリン”は、天然、半合成もしくは合成インシ
   ュリンもしくは遺伝子工学により製 造されたインシュリンまたはその非必須アミノ基を有し
   ない生物活性アナローグの生物活性ペプチド部分を表わ
   し、 Ｚは、インシュリンの生物活性に必須でないアミノ基で
   あり、 Ａは、水素原子であるか、またはメルカプトを含有し生
   理学的に許容される炭化水素化 合物の残基であり、そして ｍは、１〜２０の整数である） で示されるインシュリン誘導体。 ２）Ｙ＿１、Ｙ＿２およびＹ＿３が、相互に独立して、
   化学結合または有機化学橋、または、炭素原子または水
   素原子がヘテロ原子特にＮ、Ｏ、ＰまたはＳにより置き
   換えられていてもよい脂肪族、芳香脂肪族または芳香族
   炭化水素残基である特許請求の範囲第１項記載のインシ
   ュリン誘導体。 ３）Ｘが可溶性の生理学的に許容されるポリマーまたは
   ポリペプチドの残基である特許請求の範囲第１項記載の
   インシュリン誘導体。 ４）Ｘがプロテイナーゼ阻害剤、好ましくはアルファ＿
   １−アンチトリプシンの残基である特許請求の範囲第１
   項記載のインシュリン誘導体。 ５）Ａが水素原子であるか、または炭素原子または水素
   原子がヘテロ原子、特にＮ、Ｏ、ＰまたはＳにより置き
   換えられていてもよい脂肪族、芳香脂肪族または芳香族
   炭化水素化合物の残基である特許請求の範囲第１項記載
   のインシュリン誘導体。 ６）Ａが１〜５０個の炭素原子を含むが好ましくは１〜
   ２０個の炭素原子および０〜３０、好ましくは０〜１５
   個のヘテロ原子を有する含む特許請求の範囲第１項記載
   のインシュリン誘導体。 ７）Ａがピリジンチオンのもしくは置換ピリジンチオン
   の残基、所望によりアミノ、ヒドロキシルもしくはカル
   ボキシルにより置換されたメルカプトアルカンの残基、
   システインのもしくはシステイン含有ペプチドの残基、
   またはチアミンの残基である特許請求の範囲第１項記載
   のインシュリン誘導体。 ８）インシュリンの生物活性に必須でないアミノ基をメ
   ルカプトまたは式III ▲数式、化学式、表等があります▼III としての保護された形のメルカプト基を含有する基に変
   え、そして適切な場合にはチオールと反応させることよ
   り成る特許請求の範囲第１項記載のインシュリン誘導体
   の製造方法。 ９）インシュリンのＡ鎖のＮ末端アミノ酸および同じイ
   ンシュリンのＢ鎖のリジンＢ−２９にアミノ保護基を選
   択的に付与し、そしてそのインシュリンのＢ鎖のＮ末端
   アミノ酸をメルカプトまたは保護された形のメルカプト
   基を含みそしてアミノ基と反応し得る化合物と反応させ
   、それによつてそのメルカプト基をインシュリンＢ鎖の
   Ｎ末端アミノ酸に共有結合させ、そしてアミノ保護基お
   よび適切な場合にはメルカプト保護基を除去し、そして
   適切な場合には、式Ｘ−Ｙ＿１−ＳＨで示される化合物
   と反応させることより成る特許請求の範囲第８項記載の
   方法。 １０）特許請求の範囲第１項記載の化合物の代謝障害、
   特に真性糖尿病治療への使用。