JPS62103571A - 新生細胞の発生判定方法とその装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血清を用いた腫ようの診断方法とこの方法を実
施するための装置に関する。

早期かつ信頼できる腫ようの診断への関心が最近高くな
ってきており、腫ようの診断における有用性を求めて多
くの解析的方法に検討が加えられている０色々な組織や
器官における腫ようを探すことは相当骨の折れる作業で
ある。つまり、多くの人をスクリーンする場合かなりの
数の試料を採らなければならず、また接近しにくい器官
の細胞試料の作成が早期の腫ようの診断に対する大きな
障害になっている。特にスクリーンのためには血清の直
接検査が他のすべての方法より適している。

人間の血清の準備は臨床分析においてごく日常的なこと
なのでその検査は特に注目されている。

したがって、血清は多くの人から容易かつ迅速に得られ
る。このことはスクリーンのために特に重要である。

血清検査による悪性腫ようの診断において、いわゆる腫
ようマーカーは大事な役割をはなす、腫ようマーカーは
新生細胞の発生を示唆し得るすべてのパラメーターであ
る。腫ようの診断の従来から実施されている比較的費用
のかかる方法のうちでは免疫学的方法が最も頻繁に採用
されている。

本発明の目的は正常の血清と腫よう血清の区別を簡単に
、そして比較的高い精度で行なえる方法とそれを実施す
るための装置を提供することにある。

この目的は、本発明によれば、検査すべき血清あるいは
そのアルブミンまたはグロブリンのフラクションを２５
０ｎｍから３００ｎ＋ｍの少なくとも１゛つの波長の放
射で励起し、所定発光波長において血清の蛍光強度を測
定し、前記蛍光強度の、標準または標準血清の蛍光強度
に対する偏差を確め、この偏差にもとずいて新生細胞の
発生を判定することによって達成できる。従って、正常
の血清の発光光学特性が腫よう血清またはそのタンパク
サブフラクションのそれと僅かではあるがはっきり異な
るという事実を利用した、腫ようの診断のための新規な
分光法が提供される。正常の血清の蛍光スペクトルは約
３３７ｎｍで最大発光を示し、それはタンパク結合トリ
プトファンからま著に発生する。

本発明の一つの態様では、検査される血清の蛍光強度を
約３４０ｒ＋＋＋＋の発光波長で測定し、強度を例えば
ピーク最大に正規化し、標準または標準血清の蛍光強度
と比較する０人間の血清の蛍光スペクトルは新生細胞の
発生によって非常に特徴的に変化するので、正規化され
た蛍光強度の減少にもとずいて新生細胞の発生を判定す
ることができる。

新生細胞がよく発達している場合、変化は例えばスペク
トルの長い波長側で起こる。

絶対蛍光強度は血清ごとに異なるため、蛍光の正常なス
ペクトル分布の偏差を識別するためには蛍光強度だけの
判定では不十分である。このような変化を排除するため
には、蛍光強度をスペクトルの最大発光での強度に関連
付けて正規化する必要がある。そのため、希釈された（
例えば水で１＝２００−１：ｌ０００に希釈された）人
間の血清またはそのタンパク成分の蛍光強度Ｉ９を例え
ば３３７０ｍの最大発光で判定される。２回目の測定で
は蛍光強度Ｉｘが発光スペクトルのながい波長側、つま
り３５０ｎｍと４００ｎｍの波長範囲で、２５Ｑｎｍと
３ｏｏｎｍの間、典型的には２８７ｎｍの励起波長で判
定される。健康な人の場合、両強度の比（Ｉｘ／Ｉｓ）
はある最小値を示す筈である。この最小値を下回る場合
は腫ようを示唆する。この最小値は標準で校正して定め
られる。この標準は健康な人のいくつかの血清試料の平
均でもよく、また例えばＮ−アセチル−Ｌ−）リブトフ
ァンアマイドのような合成の標準でもよい。

ガン性の病気をもった患者の血清の場合強度の比が０．
６３６まで減少し、正常の場合は０．７１４であった。

それぞれの場合、一連の測定前に計器の目盛調べを慎重
に行なった。２つの発光波長で測定することによりガン
性の病気検出の最大確率６０％が得られる。誤診による
陽性が皆無であったのは特筆に値する。

この２つの波長での測定による方法の実施は、発光スペ
クトルを正規化して、記憶された標準血清の発光スペク
トルを減するより簡単で速い。これはスクリーン調査で
の使用における大事な利点である。

本発明の別の態様では、検査される血清またはそのタン
パクの蛍光強度を３２０ｎｍと３３０ｎｍの間の他の発
光波長で測定し、蛍光強度を正規化して標準血清の蛍光
強度と比較する。正規化された蛍光強度の増加は新生細
胞の発生を示唆する。スペクトルの短い波長側を含んで
その領域の強度偏差を測定することによりこの方法の精
度が更に高まる。いわゆる３波長測定、つまりスペクト
ルの短い波長側のスペクトル強度Ｉｙも測定することに
よって真の陽性値を得る確率かかなり増大する。

健康な人の血清の場合、比Ｉｘ／Ｉｅがある最小値に達
し、同時に比ＩＹ／Ｉ９がある最大値に達することが考
えられる。これに相当するガン性の病気をもった患者の
血清の値は上記限界値を越える。血清のサブフラクショ
ン、例えばアルブミンやグロブリン、の場合も同様な結
果になる。

本発明の他の態様では、検査される血清の蛍光強度を生
理的ｐＨ値の溶液および４未満のｐＨ値の酸性溶液中で
測定し、蛍光強度を正規化して、正規化された蛍光強度
の差にもとずいて新生細胞の発生を判定する。健康な人
と腫よう患者それぞれの血清の蛍光光学的特性の他の差
異が蛍光特性のｐＨ依存性を調べることにより知見され
た。健康な人の血清の最大発光はごく少ない変化で３３
６゜５　ｎｍと３３７．５　ｎｍの間にある（ＡＭＩＣ
ＯＳＰＦ　５００計器で測定）、この最大値と比べ、腫
ようの血清の最大発光は短い波長へわずかにシフトして
いる。これは生理範囲のｐＨ値に当てはまる。

しかし、正常の血清を強酸性の溶液、例えば０゜１Ｍ塩
酸、で測定すると生理ｐＨの最大値と比べて最大発光の
ブルーシフトが起こる。これに対して、腫ようの血清の
場合、最大はｐＨ値を下げることによりシフトがほとん
どまたは全く起きない。

従って、強酸性の溶液において腫ようの血清の最大発光
は正常の血清と比べてわずかに長い波長ヘシフトする。

従って、強酸性の溶液において悪性腫よう患者の血清の
トリプトファン最大発光は健康な人の場合と比べてレッ
ドヘシフトする。生理ｐＨ範囲で見られるすべての偏差
は酸性の溶液において単にそのサインを変えるだけであ
る。従って、上記のすべての測定方法は酸性ｐＨ範囲で
適用できる。

しかし、異なっ−た蛍光強度の比が見られた。中性ｐＨ
範囲の場合と同様に、酸性の範囲で測定するときは健康
な人のいくつかの血清試料の平均を計算して、あるいは
標準値でもってそれぞれの比の平均値を定める必要があ
る。

中性および酸性ｐＨ範囲で測定する場合は蛍光強度比の
正常範囲を定めるために多数の制御用血清を測定する必
要はない、生理範囲の強度Ｉｓ、Ｉｘと酸性範囲の強度
Ｉｓ’、Ｉｘ’を測定するだけでよい、長い波長領域で
の測定の場合、比の差（Ｉｘ’／ｒｅ′マイナスＩｘ／
Ｉ＠）は健康な大の血清に対して負の値を出す、正の値
は腫ようを示す、このことからして、この測定方法は比
の正常範囲の実状と関係なく、従って標準血清で校正す
ることは不要である。

本発明の更に別の態様では、検査される血清の蛍光強度
を少なくとも１つの発光波長において動的蛍光消去剤の
ある場合とない場合の両方で測定し、蛍光強度の差にも
とずいて新生細胞の発生を診断する。蛍光消去は通常シ
ュテルン・フォルマー関係、Ｉｌｌ　／　Ｉ　＝　１　
＋ＫｓｖＸ　（Ｌ）　、に従う。

この式で、■９は消去剤のない場合のトリプトファンの
蛍光強度を示し、■は密度りの消去剤がある場合の蛍光
強度を示し、Ｋｓｖは消去定数を示す。

適当な消去剤を加えることにより健康な人の血清の蛍光
は腫よう患者の血清の蛍光と比べて相当高い程度消去さ
れることが判明した。

血清に蛍光消去剤を適用（最初の概算のみにおいて比１
１Ｉ／Ｉはすべての波長で一定）すると波長依存性を示
すので、新生細胞の発生を判定するための（他の）比を
用いることができる。これは、２つの異なる発光波長、
例えば３５０ｎｍと３８０ｎｍあるいは３５０ｎｍと３
２０ｎ（において動的蛍光消去剤のある場合とない場合
の両方で２つの蛍光強度Ｉ＠　Ｉｙとｌｘ　’　１．ｙ
′それぞれの比を判定する；とによって最も容易に行な
える。そして、例えば比の差ＩＸ　／　Ｉｖ　−Ｉｘ　
’　／　Ｉｖ　’　　を診断に使用できる。２つの解析
的波長で測定することにより別の誤差原因、つまり低濃
度でも励起光の吸収を起す可能性のある消去剤のインア
ーフィルター作用、を取り除くことができる。

動的蛍光消去剤としてヨウ化イオンを用いることが望ま
しいが、アクリルアマイド、酸素分子等の分子もタンパ
ク結合トリプトファンの蛍光を減少させることができる
。

この効果を利用するためには次の測定法によればよい。

つまり、腫よう患者の血清を希釈溶液中で例えば０．１
　Ｍ／Ｉｔ、のヨウ化カリウムのある場合とない場合の
両方で測定し、３３７ｎｍで測定した蛍光強度を比較す
る。

本発明の好適な態様では、蛍光強度の測定が２つの異な
った励起波長、好ましくは２８７ｎｍと２９５ｎｍ、と
３つの異なった発光波長、好ましくは３２５ｒ＋ａ＋と
３３７ｎｍと３６５ｎ■で行なわれる。３波長測定の最
高の精度は２つの異なった励起波長を使用することによ
り達成される。２つの異なった励起波長での測定を可能
にするためには各励起波長に対して測定キュベツトが１
つ必要である。

ある場合では１１ＩとＩＸ長い波長の領域で測定され、
他の場合ではＩｌ＋’とＩＹ’短い波長の領域で測定さ
れる。正常の血清の場合、比Ｉｅ／Ｉｘがある最小値に
達し、同時に比ＩＹ’／Ｉｌｌ’がある最大値に達する
ことが考えられる。これに相当するガン性の病気をもっ
た患者の血清の値は上記限界値を越える。　また、以上
に述べた方法を実施するための装置は光源から発せられ
て光フィルターを通過する励起放射を受ける、検査すべ
き血清を含んだ少なくとも１個のサンプルセルを備えて
いる。サンプルセルは光フィルターと光検出器からなる
少なくとも１個の測定器によって囲まれている。後者か
らの信号は増幅されて計算ユニットで比率計算される。

従って、励起に必要な波長範囲で発光する光源またはフ
ィルターによって励起に必要な波長を得る簡単な装置が
提供される。

前記したテストを行なわずに、人間の血清のタンパクサ
ブフラクションをスペクトル判定することの利点が考え
うる。従って、アルブミンやグロブリンのサブフラクシ
ョンを公知の電気泳動またはクロマトグラフィー等で純
化し、ミリリッタ〜あたり０．１から０．３ｍｇの典型
的な濃度に水に溶し、前記した方法のひとつによる蛍光
測定を行なう。

本発明の他の実施例では、必要に応じて、同一の光源か
らの異なった励起波長の光を１つのフィルターを通して
受ける２つのサンプルセルが設けられている。この改変
例は、異なった励起波長の光で１つのサンプルを励起す
るかサンプルの蛍光に影響を与える物質を加えるすべて
の方法に必要なものである。

本発明の別実施例では、ファイバー等からなる励起放射
用の光ガイドをサンプルセルと光源の間に設け、サンプ
ルによって発せられた発光放射を各測定器へ伝える別の
光ガイドを設けである。光ガイドをバンドル状にするこ
とによって進入式力テテールに設計し、立命体内での生
体内測定を可能にできる。

本発明の別実施例は、１つのサンプルセルに対して、励
起と発光放射の両方を伝え光ガイドを１個のみ備え、さ
らに、反射あるいは分散された励起光から発光放射を分
離し、発光放射を測定器へ偏向させるダイクロイックミ
ラーまたは偏向ミラーを備えている０通常、測定される
励起波長と発光波長とからなる波長の各組合せに直径１
００から１５０　ミクロメートルの光ガイドが使用され
る０発生した蛍光は光線分配器によって対応する測定器
に伝えられる。いくつかの波長を例えば回転フィルター
車で単一のファイバーに順送りすることもできる。

最後に、サンプル側の光ガイドの先端部に取り付けられ
たタンパク透過性の膜、好ましくはセルロース膜、にサ
ンプルセルが囲まれた構成も本発明の有利な実施形態で
ある。立命体内で測定する場合の大きな血液成分（例え
ば赤血球）による光学的および機械的な乱れを回避する
ために、光伝部材の端部を薄いタンパク透過性の膜でお
おうと都合がよい、このような膜は赤血球の影響を防ぎ
ながらタンパクの通過を許す、この目的のためにはセル
ロース膜が最適と言える。

光ファイバーによる生体内測定のためには酸や消光剤等
の有害添加物を使用しない方法のみが適していることは
言うまでもない。

サンプルセルを水で満たすことは次の理由で適している
。第一に、侵入する血清がそれによって希釈され、希釈
されない血清に発生するインナーフィルター作用が消滅
する。起こり得る密度勾配は測定時間が短い（約２秒）
から問題にならない。

第二に、検査される物質に気泡が混じる恐が少なくなる
。

（実施例） 第１から３図において、横座標は波長ｎｍを示し、縦座
標は蛍光強度を示す。

第１図で人間の血清の正規化された蛍光スペクトル■が
実線で示されている。それは２８７ｎａ＋の励起波長を
使用して得られ、タンパク結合トリプトファンから閉著
に発生する３３７ｎ＋ｍで最大発光を示す。その帯域は
紫外域全体に亘り、可視域の一部へ延びている。これが
血清が先天的に青緑の蛍光色をもつ理由のひとつである
。

更に、腫よう血清の蛍光スペクトルＩＩにスペクトルシ
フトが起こる。これは第１図の破線から理解でき、それ
は女性腫ようをもつ患者から採った血清の正規化された
発光スペクトルを示している。

その最大発光は■９で示され、■×とＩｖは腫よう血清
の蛍光スペクトルの長い波長（３６５ｎｍ）の領域と短
い波長（３２５ｎｍ）の領域での強度それぞれを示す。

正常の血清の蛍光スペクトルに対する強度のレベル差が
はっきりわかる。

第２図は、生理的ｐＨ値（７，４）と０．１モル塩化水
素酸での正常の血清の正規化された蛍光スペクトルの典
型的なものをそれぞれ■とＩＩＩで示している０強酸の
ｐＨ域で測定すると正常の血清にかなりのブルーシフト
が起こることが明らかである。

これに対して、腫よう血清の正規化された蛍光スペクト
ルが第３図に示されている。スペクトルＩＩは７．４で
測定され、スペクトルＩＶは０．１モル塩化水素酸で測
定された。悪性腫ようをもつ患者から採った血清の酸性
溶液中でのトリプトファン最大発光は健康な人の血清と
比べてレッドシフトしている。強度はそれぞれ最大発光
（Ｉｓと１９′）と３６５ｎｍの長い波長域（Ｉｘと１
ｘ′）で測定された。アポストロフィ印（′）は酸性ｐ
Ｈ値で測定された強度を意味する。

２つの異なる波長での蛍光強度の同時判定は第４図に暗
示された装置で得られる。この装置において、光源１か
らの光は励起フィルター２を通過して、サンプルセル５
内の（例えば血清または高希釈度の血清タンパクフラク
ションの）サンプル４へ到達し、それによって励起およ
び発光が伝搬される。−回の測定器のサンプル量を２１
とすると、２１＋１から１０ｕ１の血清（つまり、その
アルブミンまたはグロブリンフラクションが０．２ｍｇ
から０．６ｍｇ　）を必要とする。サンプルセル５から
蛍光が全方位に発っせられる。その強度は光フイルタ−
８、つと２つの光検出器１１．１２からなる２つの測定
器２５によって２つの波長において同時に測定される。

一方の光フイルタ−８は３３７ｎｍの光を透過させる干
渉フィルターであることが望ましい、他方のフィルター
９は望ましくは３４０ｎｍの波長の光を通す干渉フィル
ターでもカットフィルターでもよい。

光の強度は、光電子増倍管、フォトダイオード、または
フォト・１〜ランシスターからなる光検出器１１．１２
によって測定される。その結果生ずる電気信号は計算器
（図外）に送られ、比率計算される。

２つの光強度の比は器具の影響を受け、特にフィルター
８．９のスペクトル特性と増幅器のスペクトル感度によ
って影響される０人ＭｒＮＣＯＳＰＦ　５００による３
６５ｎＩＩ＋と３３７ｎｍの強度の比は正常の血清の場
合０．７１４＋／−０，００８である（２０サンプルの
平均）。

３つの異なる波長での蛍光強度の同時判定は第５図に暗
示された装置で得られる。この装置において、光源１か
らの光は普通２９５ｎｍの波長の光のみを通すフィルタ
ー３を通過してサンプル４へ到達する。発光の強度は３
つの異なる波長で測定される。３６５ｎｍでは強度ｒｘ
　　（光フイルタ−９と検出器１２＞、３３７ｎｍでは
強度丁８　（光フイルタ−８と検出器１１）、３２５ｎ
ｍては強度Ｉｖ（光フイルタ−７と検出器１０）である
。

第６図の装置では、２個のサンプルセル５を使用して２
つの励起波長に対して測定することが可能である。その
ためにサンプルセル５はサンプル４．６で満たされてい
る。光源１からの励起光は２８７ｎ−の波長の光を通す
第１励起フィルター２分通過してサンプル４へ到達する
。波長２９５ｎｍの励起光は第２励起フィルター３を通
過してサンプル６へ到達する。発光の強度は３つの異な
った発光波長で測定される。つまり、蛍光強度■８とＩ
ｓ　′はサンプル４．５の３３７ｎｍで光フイルタ−８
と検出器１１により測定される。光フイルタ−９，７は
それぞれ波長３６５と３２５の光を通し、蛍光強度ＩＸ
とＩｖがそれぞれ検出器１２．１０で測定される９ 上記の解析的波長は器具に左右されるもので、光源と光
増幅器のスペクトル特性の影響を受ける。

上記の器具と異なる光学部品を使用すると（例えば、シ
ュウチリウムランプを光源として、別の光電子増倍管を
検出器として使用した場合）、最大の変化が起こる波長
で正常のの血清と比べて若干の偏差があり得る。

第６図の装置では中性と酸性のｐＨ値での同時測定も可
能である。このためには励起フィルター３をフィルター
２に、励起フィルター７をフィルター９に、そして検出
器１０を検出器１２に替える必要がある。光源１からの
光は光フイルタ−２を通過して酸化サンプル６と中性サ
ンプル４へそれぞれ到達する０両サンプルセルから全方
位に発つせられる蛍光は各光学フィルター８．９を通過
する。蛍光強度は２つの波長においてそれぞれ２個の光
検出器］１．１２によって同時に測定される。

光フイルタ−８は波長３３７ｎｆｆｉの光を伝え、蛍光
強度ＩＱとＩａ′を出し、光フイルタ−９は波長３６５
ｒ＋ｍと３２５ｎｍの光を伝え、蛍光強度丁ＸとＩＸ　
′を出す。

第７図は蛍光消去法を用いて１つの解析的波長で測定す
る装置を示す。光源１からの励起光は２個の光フイルタ
−２を通過してサンプルセル５内のサンプル４．６へ到
達する。サンプル４は希釈された血清を含み、サンプル
６はそれと同程度に希釈された血清と消光添加剤を含む
。両サンプル４．６から全方位に蛍光が放射される。両
サンプルの蛍光強度は適当な光フィルターを使って３３
７ｎｍの発光波長くまたは、更に長い波長）で測定され
、割算ユニットで関係付けられる。腫よう患者の血清の
比■／ＩｌＩは標準のそれより高い。

第６図の装置は２つの解析的波長で測定することができ
る。光源１からの光は２つのサンプル４．６へ到達し、
それぞれの蛍光は２個ずつの光フィルターと２個の光検
出器によってそれらの解析的波長で測定される。

第８図の装置は第５図の装置と同様だが、生体内測定が
可能である。光学フィルター２を通過した後２９０から
２９６ｎｍの励起波長を発つする光源１からの光はレン
ズ１３によって光ガイド１４に集められる。光ガイド１
４は励起光を測定箇所へ伝える。生成された蛍光は光ガ
イド１４を戻って光検出器へ達する。第８図に示すよう
に、各発光波長の励起蛍光を一本の光ガイドへ案内して
、グイクロイックミラーまたは偏向ミラー１６．１７．
１８でレンズ１９のひとつへ送ることもできる。各測定
器２５の、それぞれ３２５．３３７．３６５ｎｍに調節
されたフィルターを通過した後、各強度■が前述のよう
に判定される。ライトコンダクタ−１５の端部はカテテ
ール状のバンドル２０になっていることが望ましい０強
度変化を補償するために光源１に基準光検出器をつなぐ
ことができる。

第９図はふうせん状のセルロース膜２２をもつカテテー
ル状バンドル２０からなる光ガイド１５の端部材２１を
示す。このセルロース膜はサンプルセル５への血清の侵
入は許すが他の細胞成分の侵入は許さない。２３と２４
は光ガイド１５の芯とクラッドをそれぞれ示す。

【図面の簡単な説明】

第１から３図は蛍光スペクトルの図表、第４から８図は
本発明の方法を実施した装置の概略図、第９図は第８図
の一部の拡大図である。 １・・・光源、　２．８．９・・・フィルター。 ４・・・サンプル、　５・・・サンプルセル、１１．１
２・・・光検出器。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）次の各工程からなる腫ようの診断方法、（ａ）検査
   すべき血清を２５０ｎｍから３ ００ｎｍの間の少なくとも１つの励起波長を使用して励
   起放射で励起する、 （ｂ）少なくとも１つの所定発光波長に おいて少なくとも１つの蛍光強度を測定する、（ｃ）前
   記蛍光強度を標準または標準血 清の蛍光強度と比較する、 （ｄ）前記蛍光強度の偏差にもとずいて 新生細胞の発生を判定する。 ２）前記（ｂ）の工程で前記血清の第１蛍光強度を約３
   ４０ｎｍの発光波長で装置し、前記第１蛍光強度を正規
   化して、正規化された強度を標準または標準血清の蛍光
   強度と比較し、（ｄ）の工程で正規化された第１蛍光強
   度の減少にもとずいて新生細胞の発生を判定する、特許
   請求の範囲第１項に記載の方法。 ３）前記（ｂ）の工程で更に前記血清の第２蛍光強度を
   ３２０ｎｍと３３０ｕｍの間の発光波長で測定し、前記
   第２蛍光強度を正規化して、正規化された強度を標準血
   清の蛍光強度と比較し、（ｄ）の工程で正規化された第
   ２蛍光強度の増加にもとずいて新生細胞の発生を判定す
   る、特許請求の範囲第２項に記載の方法。 ４）前記（ｂ）の工程で前記血清の蛍光強度を４未満の
   ｐＨ値で生理的および酸性溶液中で測定し、前記蛍光強
   度を正規化して、（ｄ）の工程で正規化された蛍光強度
   の差または比にもとずいて新生細胞の発生を判定する、
   特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ５）前記（ｂ）の工程で前記血清の蛍光強度を少なくと
   も１つの発光波長において動的蛍光消去剤のある場合と
   ない場合の両方で測定し、（ｄ）の工程で蛍光強度の差
   または比にもとずいて新生細胞の発生を判定する、特許
   請求の範囲第１項に記載の方法。 ６）前記（ｂ）の工程で動的蛍光消去剤として沃素イオ
   ンを使用する特許請求の範囲第５項に記載の方法。 ７）前記（ａ）の工程で血清のアルブミンまたはグロブ
   リンのサブフラクションを励起放射で励起する特許請求
   の範囲第１項から第６項のいずれかに記載の方法。 ８）前記（ａ）の工程で前記血清が測定前に希釈される
   特許請求の範囲第１項から第７項のいずれかに記載の方
   法。 ９）前記（ａ）の工程で測定が２つの異なった励起波長
   、好ましくは２８７ｎｍと２９５ｎｍで行なわれ、（ｂ
   ）の工程で蛍光強度が３つの異なった発光波長、好まし
   くは３２５ｎｍと３３７ｎｍと３６５ｎｍで測定される
   、特許請求の範囲第１項から第８項のいずれかに記載の
   方法。 １０）検査すべき血清を励起放射で励起して腫ようの診
   断するための装置であって、光源と、光源から発する励
   起放射を受ける血清を含む少なくとも１個のサンプルセ
   ルと、好ましくは、光源とサンプルセルの間に設けられ
   た少なくとも１個の励起フィルターと、発光フィルター
   と光検出器からなり、判定ユニットに連結された、発光
   放射を測定するための少なくとも１個の測定器とを備え
   た装置。 １１）第１および第２サンプルセルと、第１および第２
   サンプルセル内のサンプルを光源からの異なった励起波
   長の光で励起するための第１および第２励起フィルター
   とを備えた特許請求の範囲第１０項に記載の装置。 １２）前記各サンプルセルと光源の間に設けられた励起
   放射用の光ガイドと、サンプルによって発せられた発光
   放射を各測定器へ伝える別の光ガイドとを備えた特許請
   求の範囲第１０項または第１１項に記載の装置。 １３）各測定器へ伝える光ガイドを１個のみ備え、この
   光ガイドが前記励起と発光放射の両方を伝え、さらに、
   反射あるいは分散された励起光から発光放射を分離し、
   発光放射を前記測定器へ偏向させるダイクロイックミラ
   ーないし光線分離器を備えた特許請求の範囲第１２項に
   記載の装置。 １４）前記サンプルと接触する光ガイドの先端部に取り
   付けられたタンパク透過性の膜に前記サンプルセルが囲
   まれた特許請求の範囲第１２項または第１３項に記載の
   装置。