JPS6196466A - 全血試料分析用具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、全血試料の分析用具に関するものである。さ
らに詳しくは本発明は、全血試料を分析する際に、全血
中のへマクリット値の変動に影響を受けることなく、そ
の血漿部分に含まれるアナライトを定量することを可能
にする分析用具に関するものである。

［発明の背景］ 従来、血液の生化学検査は試料として患者から採取した
血液をそのまま用いることはできず、分離操作を経て全
血から血漿（あるいは血清、以下においては、特に断わ
らない限り、これらを総称して血漿という）を分取して
、これを試料とする方法が利用されてきた。また、血漿
中のアナライトを分析するには、試験管と液体試薬類を
用いる通常の湿式の比色化学分析法を利用するのが一般
的であった。

従来の生化学検査は、上記の「血漿の分離」および「湿
式化学分析」が必須の工程であるので、準備と操作が煩
雑であり、かつ時間と熟練を要するものである。このた
め従来の生化学検査法は、患者と対面中に検査結果を即
時的に診断に利用したいという医師の要求等を満足させ
ることは困難である。

生化学検査の簡易化と即時化のためにいくつかの方法が
既に提案されている。それらの方法の大部分は、準備段
階としての「血漿分離」を行うことなく全血を直接に試
料とすること、および「湿式化学分析」の代りに試薬や
血球濾過機能等を予め組込んだ乾式のシート状分析用具
（たとえば、一体型多層分析要素）を用いることを特徴
としている。

以上の点から提案された全血を試料とする乾式の検査法
の例としては、特開昭４９−１１３９５号公報記載の方
法および分析器具を挙げることができる。この方法は、
分析用具として、上から順に、二枚の多孔性グラスフィ
ルター、薄膜フィルター及び検出試薬含有酢酸セルロー
スシートの四層を積み重ねた円盤状の器具で、その上に
全血を滴下すると、グラスフィルターにより白血球や赤
血球その他の有形成分は除去され、血漿は試薬と混合さ
れて酢酸セルロースシート上で発色反応が行われるよう
にしたものである。

また、他の例としては特開昭５７−５３６６１号公報記
載の全血から血漿を分離する器具及び方法がある。この
方法は、特殊なガラス繊維層を血球フィルターとして用
いるものであり、このフィルターを全血分析用具に用い
るに際しては、通常の多層診断材、すなわち単に試薬を
含浸させた試験紙型（たとえば、特開昭５４−１５１０
９６号公報記載）の乾式診断材の上に重ねた形式のもの
とすることが開示されている。

しかし、これらの方法及び器具は血球などの有形成分の
分離のためには有効であるが、全血中の血球部分の容積
、すなわちヘマトクリット値（以下Ｈｃｔ値と記す）の
変動に対する考慮がなされていないので、分析試薬と反
応する血漿量が試料ごとに変化するとの問題がある。す
なわち、全血は血球部分と血漿部分とからなるものであ
るが、そのＨｃｔ値がヒトによって、およそ２０〜７０
％の間で変動し、一定していない。たとえば、　Ｈｃｔ
値がそれぞれ３０％と５０％の全面を試料にして、これ
らの分析用具に１ｏｏｕＪＬを滴下したときには、試薬
と反応する血漿量は前者は７０川見、後者は５０終文と
相違するため、定量分析の原理から逸脱してしまうこと
になる。さらに検査対象のアナライトの種類によって、
その存在量が血漿部分と血球部分とでは大幅に違うもの
が多く、この点も定量分析の障害となる。

従って、全血を直接検査試料とした場合には、これまで
に開示されている分析用具では検査値に関して大きな問
題点が生じる。

一方、特公昭５３−２１６６７号および特開昭５５−９
０８５９号の各公報には、全血試料を点着したとき、こ
れを展延する作用、即ち液体試料計量作用がある多孔性
展開層（以下、展開層と記す）を備えた一体型多層分析
要素が開示されている。液体試料計量作用をもつ展開層
とは、液滴をその上に点着させたとき、液の広がりの面
積がほぼ液量に比例するように液を広げ、ついでその液
を、下側に配置された層に供給する機能を示す層である
。たとえば点着液量が５ル見のときの液の　　。

広がりが０　、５　ｃｒｒｆ、１０４文では１．Ｏｃｍ
’、１５牌文では１．５ｃｍ″のごとく、液を広げる作
用であり、これを計量作用、あるいは展延、展開と呼ん
でいる。この計量作用によって、この種の展開層を有す
る多層分析要素は、その展開層の表面に異なる量の試料
液が点着されても、単位面積当りの展開層自身が含む液
量及びその下層の試薬層等に供給される液量は常に一定
に平準化されることが大きな特徴である。

しかし上記発明の展開層の液体試料計量作用は全血試料
全体の量に対して機能するものであり、やはり　Ｈａｔ
値についての考慮がなく、また血球などの有形成分は試
薬層に浸透しにくいため、得られる分析値の定量性は充
分でない。

全血を直接試料とした分析が乾式の多層分析要素を用い
て可能であるというためには、その乾式分析法が従来の
湿式分析法で試料として血漿を用いる分析法と同じ検査
値が出せるものでなければならない、すなわち、全血中
の血漿部分におけるアナライト量を高い精度で定量でき
る方法でなければならない。

特開昭５５−１６４３５６号公報の多層分析要素は、そ
の上に点着された全血を展開させ、かつ血球部分を完全
に濾過するために織物とゼラチン層とを組合せて利用す
るものである。このため血漿量について液体試料計量作
用が生じるようにされている。しかし、分析対象アナラ
イトが高分子のものである場合には、その移動拡散に対
して全血中の血球部分による阻害が生じ、アナライトを
試薬層まで到達させることが難しい゛との問題があり、
精度が充分でないとの問題がある。

［発明の目的および要旨］ 本発明は、全血試料を用いながら、そのヘマトクリット
値の変動にかかわらず、高い精度にてアナライトの定量
を可能にする乾式の分析用具を提供することを目的とす
る。

また本発明は、全血試料を用いながら、そのヘマトクリ
ット値の変動にかかわらず、高い精度にて高分子量のア
ナライトの定量を可能にする乾式の分析用具を提供する
ことを目的とする。

本発明は、血球濾過層、液体試料計量作用のある展開層
、少なくとも一層の試薬層を含む検出機能層、および光
透過性水不透過性支持体がこの順に積層されてなる全血
試料分析用具を提供するものである。

また本発明は、血球濾過層、分析試薬を含有する層液体
試料計量作用のある展開層、および光透過性水不透過性
支持体がこの順に積層されてなる全血試料分析用具をも
提供する。

［発明の効果］ 本発明の全血試料分析用具゛は、全血を直接試料とし、
その中のアナライト量を乾式にて定量することを可能に
する分析用具である。従って１本発明の分析用具は、血
漿分離の煩雑な操作を必要とせず１分析操作が事実上、
全血試料の一滴を用具上に点着するだけでアナライトを
高い精度にて定量分析できるとの優れた特徴を有してい
る。

本発明の全血試料分析用具では、液体試料計量作用のあ
る展開層の表面に、血球濾過層が密着載置されているの
で、展開層における液体試料計量作用が働く以前に血球
の濾過が行なわれる。従って、血漿についてのみ液体試
料計量作用が働き、全血を試料としていながら、その検
査（１ｆｉは血漿部分のアナライト量となる。また展開
層におけるアナライトの移動拡散に対する全血中の血球
部分による阻害が生じないため、アナライトが高分子量
のもの、あるいはアナライトが高分゛子物と結合してい
るようなものであっても、全血を直接試料にして定量で
きる。

本発明の全血試料分析用具では、展開層の上に血球濾過
層のある多孔材を載置し、それを通して展開層に液体試
料を供給しても、展開層の液体試料計量作用が全く損な
われることがなく、かえって・そのような構成にて分析
用具を形成することにより、全血試料の血漿中のアナラ
イトの分析が高い精度でできるとの機能を示す、従って
、そのような目的に従来利用されてきた血漿分離と湿式
分析量の組合わせからなる分析方法に比較して、本発明
の分析用具を用いることにより、分析操作の簡易化およ
び即時化が実現され、患者と対面中に検査結果をすぐに
診断に利用したいという医師の要求を満たすことができ
る。

［発明の構ｔ１ 本発明に用いられる液体試料計量作用のある展開層は、
既に公知であり、アナライトや分析条件等に応じて様々
な種類のものから選択することができる。例えば特公昭
５３−２１６７７号公報記載の非繊維等方的多孔性媒体
層（例、メンブレンフィルターおよびプラッシュポリマ
ー）、繊維質（異方的）多孔性媒体層（例、織物生地お
よび編物生地）等を用いることができる。

しかし、以下に述べるように、展開層と血球濾過層を一
体成型する場合は、織布または編布からなる展開層を用
いることが好ましい。

上記展開層に用いることができる織物生地（織布）とし
ては、特開昭５５−１６４３５６号、特開昭５７−６６
３５９号等の各公報に開示の広範囲の種類の織物生地が
あげられる。織物生地のうちではたて（経）糸とよこ（
緯）糸とで織った平織物が好ましく、平織物のうちでは
細布生地、金山生地、ブロード生地、ボブリン生地等が
好ましい、織物生地を構成する糸としては、後述する編
物生地を構成する糸と同様の素材からなる糸があげられ
、糸の形態としてはフィラメント糸、紡績糸（加捻糸）
のいずれをも用いることができ、これらのうちでは紡績
糸が好ましい、織物生地の糸の太さは、綿紡績糸番手で
表わして一般に約２０５から約１５０３、好ましくは約
４０５から約１２０３相当の範囲、または絹糸デニール
で表わして一般に約３５Ｄから約３０００、好ましくは
約４５０から約１３０Ｄ相当の範囲である。また、織物
生地の厚さは、一般に約１００４ｍから約５００　ｇｍ
、好ましくは約１２０７ｚｍから約３５０μｍの範囲で
ある。織物生地の有する空隙率は、一般に約４０％から
約９０％、好ましくは約５０％から約８５％の範囲であ
る。

上記展開層に用いることができる編物生地（Ｉａ布、す
なわち編んだ布状物）としては、広範囲の種類の編物生
地があげられ、それらのうちではたて（経）メリヤスお
よびよこ（緯）メリヤスが好ましい、たてメリヤスとし
ては、−ｆｆｉアトラス編生地、トリコット編生地、ダ
ブルトリコット編生地、ミラニーズ編生地、ラッシェル
編生地等を用いることができ、よこメリヤスとしては、
平編生地、パール編生地、ゴム編生地、両面編生地等を
用いることができる０編物生地を編成する糸としては、
綿、絹、羊毛等の天然繊維の糸、ビスコースレーヨン、
キュプラ等の再生セルロース、セルロースジアセテート
、セルローストリアセテート等の半合成有機ポリマー、
ポリアミド（各種のナイロン類）、アセタール化ポリビ
ニルアルコール（ビニロン等）、ポリアクリロニトリル
、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリプ
ロピレン、ポリウレタン等の合成有機ポリマーの細繊維
からなる糸または単繊維からなる糸、天然繊維と再生セ
ルロース、半合成または合成有機ポリマー繊維との混合
Ｆａ雄からなる糸があげられる。

糸の形態としては、フィラメント糸、紡績糸（加捻糸）
のいずれをも用いることができ、これらのうちでは紡績
糸が好ましい０編物生地の糸の太さ！＋　坊兎七誌玄妥
モ弔を駅ｌブー処ｔヂ玄（１ａｎ＜礒、己約１５０３、
好ましくは約６Ｏ３から約１２０５相当の範囲、または
絹糸デニールで表わして一般に約３５０から約１３０Ｄ
、好ましくは約４５Ｄから約９０Ｄ相当の範囲である０
編物生地の編成工程時のゲージ数としては、一般に約２
０から約５０の範囲、編物生地の厚さは一般に約１１０
０１Ｌから約６００４ｍ、好ましくは約１５０＃Ｌｍか
ら約４００ｇｍの範囲１編物生地の有する空隙率は一般
に約４０％から約９０％、好ましくは約５０％から約８
５％の範囲である。たてメリヤスのうちでは、縦方向の
伸縮が少なく、また編物展開層のラミネーション１程に
おける操作が容易である点、また裁断時に編目がほどけ
ない等の点でトリコット編生地、ラッセル編生地、ミラ
ニーズ編生地、ダブルトリコツト編生地が好ましい。

なお、本発明の全血試料分析用具に用いられる展開層は
、液体試料計量作用を有する展開機能以外にも、試薬等
を含有させることにより数々の機能を有することができ
る。たとえば、展開層に検出試薬を含ませ、そこで分析
反応が行なわれるようにすることもでき、このような態
様も本発明に含まれる。

本発明においては、液体試料計量作用のある展開層は一
体型多層分析要素に含まれていることが好ましい、上記
展開層を含む一体型多層分析要素の構成の例は、特公昭
５３−２１６１７号、特開昭５５−１６４３５６号など
の各公報に記載されている。

一体型多層分析要素の基本構成の例としては、第１図に
示したような、最上層（最外層）として展開層１１、最
下層に光透過性（透明）・水不透過性１３があって、そ
の間に、必要に応じて検出機能層１２を組込んだ層構成
のものがあげられる。検出機能層は少なくとも一層の試
薬層を含む層である。だだし、展開層に試薬を含ませる
ことによって、展開層と検出機能層とを一層にてまかな
うようにすることもできる。検出機能層としては、試薬
層以外に、反応層、反応検出層、濾過層、半透膜機能層
、バリヤ層、光遮蔽層、光反射層、吸水層など多くの種
類のものがある。検出機能層の数も、一層から多数の層
に至るまで特に制限はない、この検出機能層は一層一機
能の場合と、たとえば反応層に光反射性の光遮蔽物質を
含ませ、反射測光時における白色反射濃度の安定性を高
める役割をさせるなど一層に数々の機能をもたせる場合
とがある。

液体試料計量作用のある展開層をもつ一体型多層分析要
素は、血液の分析対象アナライト別にそれぞれスライド
の形態とした多くの製品が市販されている０本発明の分
析用具の調製に際しては、これらのものをそのまま、ま
たは変形、修飾などを施して利用することができる。あ
るいは、液体試料計量作用のある展開層をもつ一体型多
層分析要素を、各種の文献を参考にして、アナライトや
分析条件等に応じて作成することもできる。

本発明の全血試料分析用具は展開層の上に血球濾過層が
配置されてなる分析用具であり、゛第２図に例示されて
いるように、展開層２１、検出機能層２２．および光透
過性（透明）・水不透過性支持体２３からなる多層分析
要素の展開層２１の上に血球濾過層２４が配置されてな
る構成からなる分析用具である。これらの展開層２１、
検出機能層２２、および光透過性（透明）・水不透過性
支持体２３は、それぞれ第１図に示した一体型多層分析
要素の基本構成における展開層１１、検出機能層１２、
および光透過性（透明）・水不透過性支持体１３に対応
するものである。また第２図の２１．２２および２３か
らなる積層体も、第１図における１１．１２および１３
を積層した一体型多層分析要素に対応するものである。

本発明に用いられる血球濾過層の材料としては、全血中
から血球部分を除去する機能を有する濾過材、たとえば
ガラス繊維フィルター、メンブランフィルタ−１綿ウ一
ル繊維製品などを挙げることができる。これらはいずれ
も本発明の血球濾過層として使用しうるが、迅速かつ完
全に血球を濾過できるものとしてガラス繊維フィルター
が特に好ましい。

このガラス繊維フィルターは既に種々のメーカーから重
囲されてお各１．それらの市田品かちス繊維の長さと直
径、空隙率や吸収量等を指標にして血球濾過能のよいも
のを選んで用いることができる。また、公知技術に基づ
いてガラス繊維フィルターを調製する°ことができるこ
とは勿論である。

ガラス繊維フィルターの実例としては、特開昭５７−５
３６６１号公報に挙げであるもの、東洋１［！〆■より
市販されているＧＡ−１００（厚さ約４５０＃Ｌｍ）、
ＧＡ−２００（厚さ約７５０μｍ）及びＧＢ−１０ＯＲ
（厚さ約４００４ｍ）などがある。

この血球濾過層は、全血濾過後そこに留る赤血球の色が
、透明支持体側からの反射測光のときに見えないように
することが必要である。そのため測光時に濾過層を取除
くことも一つの方法ではあるが、血球濾過層の全部また
は底部に、染料、顔料などの光遮蔽物質を含ませて、血
球濾過層の全部または一部に光遮蔽層の機能を持たせる
ことが望ましい、たとえば、二酸化チタンあるいは硫酸
バリウム等の白色顔料を血球濾過層の底部に充填すれば
、これらの充填物が赤血球の色を遮蔽し、かつ反射測光
時の反射層の役割をすることができる。

また、血漿が血球から汚染等の影響を受けるのを防止す
るために溶血防止剤あるいは抗凝固剤を血球濾過層に含
ませてもよい、そのほか、必要に応じて凝固促進剤等の
薬剤を加えてもよい。

血球濾過層の厚さは、血球濾過機能が充分に作用し、か
つ分析操作が適切な時間内に終了するような範囲内から
選択する。具体的な厚さとしては、好ましくは１００ル
ｍから２０００延ｍまでの範囲内、より好ましくは１５
０ＪＬｍからｌｏ。

Ｏμｍの範囲内の厚さのものから選択する。また血球濾
過層の大きさは、展開層全面を覆う大きさのものでもよ
く、あるいは展開層の一部のみを覆う大きさのもの（す
なわち、いわゆるパッチ）でもよい、ただし、血球濾過
層が小さいと血球濾過層の側面より血球が漏出する恐れ
があるので、その場合には、パッチの側面を疎水性材料
でシールする必要がある。また、血球濾過層が展開層全
面を覆う大きさを有する場合には、血球濾過層の表面を
、点着部を残して疎水性インクでスクリーン印刷被覆し
てもよい。

展開層上に設置する血球濾過層は、その両層の境界面を
液が円滑に通過し、かつ液切れ部分が形成されないよう
に展開層上に均一な密着状態にて配置されることが必要
である。この密着状態を形成する方法としては、静電的
な付着力を利用したり、あるいは血球濾過層の外縁を適
当な方法で展開層表面上に押圧し、液流を妨げない状態
で接着する等の方法がある。また展開層の素材によって
は展開層と血球濾過層とを一体成型してもよい。

展開層と血球濾過層を一体成型するには、いくつかの方
法が考えられ、その例としては、予め形成された展開層
上に血球濾過層を抄紙成型する方法があげられる。具体
的にはまず初めに展開層の素材を選択し比較的密な展開
層を形成する０次いで血球濾過層の素材を選択し抄紙方
法により、展開層より密度の粗ないわゆるかさ高性のあ
る血球濾過層を展開層に改ねて一体成型するのが簡便で
ある。たとえば、ブロード生地を展開層として選んだ場
合、ブロード生地を構成する糸を構成する繊維と同質ま
たはより太いあるいはより長い繊維を分散したスラリー
を上記ブロード生地上に抄紙成型することにより血球濾
過層を容易に得ることができる。

本発明の血球濾過層を含む一体型多層分析要素を用いて
全血中のアナライトを定量するには、まず血球濾過層の
上に一定量の全血を点着し、所定時間インキューベージ
１ンした後、フィルム中の発色濃度を透明支持体側から
反射測光によって測定し、あらかじめ作成しである検量
線から、全血中の血漿部分のアナライト量を算出する方
法が一般的に利用される。

血球濾過層に点着する全血の量は、その層により一過さ
れて下の展開層に到達する血漿量が数ｋｌから数１ＯＪ
ＬｆＬの間に入るよう、　Ｈａｔ値の変動の巾を考慮し
て決めることが好ましい。

たとえば点着全血量を３０終交と定めた時、試料のＨａ
ｔ値が３０〜６０％の間に分布すると仮定ナスＪ＃　挿
管μ／−）　？　１　ｕ−ＯＮ盲９　ｕ　Ｏ（ｒｓ血將
ｊ８！ｌｔ公が存在するので、このうち血球濾過層に留
る分を差引いた血漿が展開層に到達することになる。

血漿量を展開層に充分に供給するためには、ガラス繊維
フィルターを用いた場合、血球濾過層に吸収される血漿
量に対して５０％を越える血漿量が濾過されて展開層に
到達するように全血試料の点着量を決めるか、あるいは
一定の点着量に対して上記の血漿量を一過するように血
球濾過層を構成する事が好ましい。

本発明の全血試料分析用具の分析対象となるアナライト
には特に制限はなく、本発明の分析用具は全血中の任意
のアナライトの定量分析に利用することができる。ただ
し、本発明の全血試料分析用具は、糖類、蛋白質、酵素
などの高分子量のアナライト、特にビリルビンなどの難
拡散性のアナライトなどを全血試料を用いて分析する場
合に有利である。アナライトの種類に応じた分析試薬お
よび多層分析要素の構成などについては既に種々知られ
ており、所望の分析目的の全血試料分析用具の調製に際
してそれらの公知技術を利用することができることは前
述のとおりである。

次に本発明の実施例を示す。

［実施例１］ 特公昭５７−２８２２７号公報および特開昭５９−５４
９６２号公報に記載された実施例に準じて、ポリエチレ
ンテレフタレート製透明支持体（厚さ：１８０．ｇｍ）
の上に、試薬層（厚さ＝２０μｍ）およびＴｉＯ２を含
む反射層（厚さニアｇｍ）を積層形成し、その上に液体
試料計量作用を有するメンブランフィルタ−（富士写真
フィルム■製ＦＭ−３００）（厚さ：１５０ｇｍ、最小
孔径：３ルｍ、空隙率：平均８５％）を圧着ラミネート
して展開層としてグルコース定量用（７）　一体型多層
°分析要素を製造した。なお、上記の試薬層と反射層の
塗布液はそれぞれ以下の組成からなるものである。

区ス」ヒＥ並羞： 脱イオンゼラチン　　　　　　２００ｇグルコースオキ
シダーゼ １５０００１ｔＪ ペルオキシダーゼ　　　２５００．０ＩＵ４−アミノア
ンチビリ７　　　１２ｇ １．７−シヒドロキシナフタレン　５ｇポリオキシエチ
レン ノニルフェニルエーテル　　　　２ｇ 反」Ｌｉ１」Ｅ捷： 脱イオンゼラチン　　　　　　　ＬｏｇＴｉ０２微粒子
　　　　　　　　８０ｇポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル　　　　２ｇ 上記の多層分析要素の展開層の上に、束祥濾紙■製ガラ
ス繊維フィルターＧＡ−２００（厚さ：約７５０　ｇｍ
、空隙率：約９０％）を全面に密着載置して本発明の全
血試料分析用具として次の実験を行った。

試料としてＨｃｔ値３５％、血漿中のグルコース濃度が
１２２■ｇ／ｄ文の全血を用い、全血試料分析用具への
全血の点−Ｒ量を変動させたときの試薬層への液の広が
りの面積を測定し、また発色濃度を反射測光（測定波長
：５１０ｎｍ）により測定した。測定結果を第１表に示
す。

第１表 全血点着量　　発色面の面積　　発色濃度（ｕ！Ｊ、）
　　　　　（ｃｒｎ”）　　　　（００）２５　　　　
　０．９０　　　０．８１２３０　　　　　１．０５　
　　０．８０Ｂ３５　　　　　１．２０　　　０．８１
０上記の結果により、展開層の上に血球濾過層を設置し
、それを通して展開層に試料液を供給しても、展開層の
液体試料計量作用が全く損なわれることがない゛ことが
わかった。

［実施例２］ 全ビリルビン定量用一体型多層分析要素を・次のごとく
製造した。

ポリエチレンテレフタレート透明支持体（厚さ：１８０
μｍ）の上に吸水層−１（乾燥膜厚；Ｉ　Ｑ　＋＋　ｒ
ｎ　）幻Ｉ−Ｆ（匝に鵬０　／　＃：　轟ｎ／ｌ　百、
　Ｉ　Ａμｍ）を順次塗布形成し、その上にブロード織
り１００双の界面活性剤処理された綿布を上記の吸水層
上に湿式ラミネートして多孔性試薬層のマトリックスと
した。さらに上記多孔性試薬層のマトリックスに試薬層
塗布液Ｉおよび試薬層塗布液！■を順次塗布含浸させ全
ビリルビン定量用一体型多層分析要素を製造した。なお
、吸水層−１と吸水層−２の塗布液、試薬層塗布液Ｉお
よび試薬層塗布液Ｈの組成はそれぞれ以下の通りである
。

−１′、　　　： 鹸化度８８％（２０℃における ４％水溶液の粘度５ｃｐｓ） ポリビニルアルコール　　　１００ｇ ５０％ポリ（２−ヒドロキシ− ３−オキシプロピレン）−ｎ− ノニルフェニルエーテル水溶液５ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８９５ｍｊ
Ｌ以下余白 Ｈ’？、−２Ｉ： 鹸化度９９％（２０℃における ４％水溶液の粘度３０　ｃｐｓ　） ポリビニルアルコール　　　８０ｇ ５０％ポリ（２−ヒドロキシ− ３−オキシプロピレン）−ｎ− ノニルフェニルエーテル水ｆａ液５ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９１５
　ｍ文人え星１崖１ユニ ７−（２，３−ジヒドロキシプロピル）テオフィリン ［４７９−１８−５］　　　　１５０ｇスルホサルチル
酸　　　　　　　３０ｇヒドロキシプロピルメタクリレ
ート拳 Ｎ−（α−スルホメチル−α 一メチルエチル）アクリルアミド ６：４共重合体（１，５％水溶液） ０００ｇ ２．４−ジクロロベンゼン ジアゾニウム・スルホサルチレート １．９ｇ １１　： 酸化チタン微粉末　　　　　　　５５ｇ７−　（２，３
−ジヒドロキシプロピル）テオフィリン ［４７９−１８−５］　　　　１５０ｇ５０％ポリ（２
−ヒドロキシ− ３−オキシプロピレン）−ｎ− ノニルフェニルエーテル水溶液 １０ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０００ｍ立
以上の操作で製造された全ビリルビン定量用一体型多層
分析要素の展開層の上に、東洋一濾紙■製ガラス繊維フ
ィルターＧＢ−１００Ｒ（厚さ：約４００１Ｌｍ、空隙
率：約９０％）の直径６ｍｍ円形のものを枠で押えて密
着載置して血球濾過層とし、本発明における全血試料分
析用具を作成した。

この分析用具の血球濾過層の上にＨａｔ値の異なる全血
試料を３０鉢交点着し、１分後に血球吐過層を引きはが
し、３７℃で６分間インキュベートし、透明支持体側よ
り反射濃度（００、測定波長５４０ｎｍ）を測定した。

測定結果を第２表に示す。

以下余白 第２表　ビリルビン定量結果 ＢＩＬ　　　Ｈａｔ　　　　ＯＤ　　　定量値　　基準
値濃度　（＄）　　　　Ｃ％）　　（ｍｇ／ｄｉ　）　
　（ｍｇ／ｄＪＬ　）レベル　３５　　０．５２５　１
７　、２　１７　、　ＬＩ　　　５５　　０．５２４　
１７　、１　１７　、０６５　　０．５２２　１７　、
０　１７　、　ルベル　４０　　０．３８Ｂ　　　９　
、９　　９　、７ＩＩ　　　５３　　０．３８５　　９
．７　　９．８〜６０　　０．３８？　　　９　、８　
　９　、８レベル　３０　　　Ｇ、３２３　　６　、４
　　６　、３ｍ　　　５４　　０．３２０　　６．２　
　６．３６２　　０．３２１　　６　、３　　６　、３
第２表において、ＢＩＬ濃度とはビリルビン濃度、定量
値とは上記の全血試料分析用具を用いて測定した反射濃
溶（ＯＤ）から換竺したＢＩＬ遣度であり、基準値とは
公知の血漿を試料とする湿式分析法（Ｊ−Ｇ法）による
定量値である。

上記の結果から、本発明の全血試料分析用具を用いた場
合に、Ｈａｔ値の変動には無関係に同一レベルのビリル
ビン濃度の全血に対しては、はぼ同一の吸光度と定量値
を示すことが判明した。更に上記の定量値は、全血を濾
過して得た血漿を用いる湿式法によってビリルビンを定
量した値とも優れた一致を示し、本発明の分析用具が全
血試料分析用具として有用であることが判明した。

［実施例３］ 実施例２で作成した全血試料分析用具における展開層の
液体試料計量作用をテストしたところ、８〜１２ｐ見の
間で低濃度検体においては、全く同一の定量値１　、０
　ｔａｇ／ｄｉを与えることが観察された。また中濃度
検体において８川見では５．６ｍ、ｇ／ｄ又、９ＩＬｆ
Ｌでは５　、７＋ｗｇ／ｄ見、１０終文では５　、８　
ｍｇ／ｄ見、１１ル文では５　、６　ｍｇ／ｄＪ１　、
そして１２ル見では５　、６　ｍｇ／ｄＪＬの値を与え
た。よって、本発明の全血試料分析用具の液体試料計量
作用が優れていることが確認された。

［実施例４］ 特開昭５９−１２３５５号公報に記載の実施例６に準じ
て、ポリエチレンテレフタレート透明支持体（厚さ：１
８０１Ｌｍ）の上に指示薬含有層（乾燥膜厚：８Ｂｍ）
を塗布形成し、その上に液体遮断層を圧着ラミネートし
、更に基質分解性物質含有層（乾燥膜厚：ｌＯルｍ）、
光反射層（乾燥膜厚：６７ｚｍ）、および接着層（乾燥
膜厚：２ＩＬｍ）を順に塗布形成し、最後にブロード織
り綿布からなる展開層を圧着ラミネートして、ＢＵＮ（
尿素窒素）分析用の一体型多層分析要素を作成した。な
お、指示薬含有層、液体遮断層、基質分解性物質含有層
、光反射層、および接着層の塗布液の組成および製造法
はそれぞれ以下の通りである。

六　　　　　　　　　　　　二 ブロモクレゾールグリーン　　８．１ｇ酢酸ビニル・ア
クリル酸エステル 共重合体ラテックス （セビアンＡ−５８２１、 ダイセル−製）　　　　　　５１０ｇ クエン＃　　　　　　　　　　　　４．５ｇ水　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　５５０ｍ１１止１亘
１： ２％シリコーン（東しシリコーン　５Ｈ−ａｏｉｉ、束
し■製）へキサン溶液に、セルロース拳ジおよびトリア
セテートより製造されたメンブランフィルタ−（富士写
′真■製ＦＭ−３００）（厚さ：１４０μｍ、空隙率：
約８５％、最小孔径：３７ｚｍ）を浸漬後、乾燥して製
造した。

ｌ： 脱イオンゼラチン　　　　９．０ｇ／ゴｐ−ノニルフェ
ノキシ ポリグリシドール　　　０．２ｇ／ｍ″エチレンジアミ
ンテトラ酢酸 四ナトリウム　　　　３．４５ｇ／ｒｎ’Ｎ−２−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ′−３−プロパンスルホン
酸 （ＥＰＰＳ）ナトリウム塩 ３　、４５　ｇ　／　ｍ’ 燐酸水素二ナトリウム ０．１１５ｇ／ｒｎ’ １．４−ジチオスレイトール ［３４８３−１２−３］ ０　、９　ｍ　ｇ　／　ｍ’ ウレアーゼ　　　　３６，０ＯＯＵ／ゴビスビニルスル
ホニル メチルエーテル　　　　５４　ｍ　ｇ　／　ｒｒｆ以上
をｐＨ８，０に緩衝させる。

尺ｊＪｒ屋］し虻漉： 二酸化チタン微粒子　　　　　　４０ｇゼラチン　　　
　　　　　　　４０ｇ ｐ−ノニルフェノキシ ポリグリシドール　　　　　１．５ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４００ｍ
ｇ撓］し瞥】」１腋： ゼラチン　　　　　　　　　　　２５ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　５００ｍｇｐ−ノニルフェ
ノキシ −ポリグリシトール　　　　　１．５ｇ上記の分析要素
の上に、東洋濾紙■製のガラス繊維フィルターＧＢ−１
０ＯＲ（直径７■の円盤状）をα−シアノアクリレート
系の接着剤を用い、グラスファイバー円盤の周囲二箇所
で軽く接着して血球濾過層を形成し、本発明に従う全血
試料分析用具とした。この分析用具を用いて次の実験を
行った。

試料としてヘパリン処理した全血２５終文を血球癌過層
上に点着したところ１点着後１分以内に血漿量９．５ル
見が展開層に拡散した。赤血球の流出及び溶血は全く観
察されなかった。

さらに、上記展開した試料を前記特開昭５９−１２３５
５号公報に記載の実施例６の測定方法に従うて分析操作
し、別に、同一の全血試料を遠心法で分離した血漿を９
．５終交、ガラス繊維フィルターを有さない前記ＢＵＮ
分析用多層分析要素に点着して分析したところ１両者は
ほぼ同様の値を与えた。

［実施例５］ 各種ガラス繊維フィルターによる全血試料の血球・血漿
分離性能の評価を行なった。

東洋症紙■製の各種ガラス繊維フィルター（第３表に示
す）を円盤状に打ち抜き、液体試料計量作用のあるセル
ロース薄層クロマトグラフィー用板（Ｄ　Ｃ−Ｐｌａｓ
ｔｉｋｆａｌｔｅｎ　Ｃｅ１ｌｕｌｏｓｅ　Ａｒｔ、　
５５７７Ｍｅｒｃｋ社製）上に置き、その上にヘパリン
処理した全血を点着した。約１分後にグラスファイバー
濾紙を除去し、血漿のみがクロマト板上に拡散した円形
を面積計にて定量した。

以下余白 第３表 フィルター　厚さ　密度　　直径　体積　吸収量ｍｍ　
　ｇ／ｃｍ’　　ｍｍ　　ｍｍ”　　ｍｍ″Ｎｏ　　　
　　　　　　　　　　　　（Ｖ）　　（Ｖｂ）Ｉ　　Ｃ
Ａ１００　　Ｏ，４５０，２４７１？、３　１５．４２
　　ＧＡｌｏｏ　　Ｏ，４５０，２４４，５７，２Ｂ、
４３　　ＣＡ２００　０．７５　０．２３　　６　　２
１．０　１８．８４　　ＧＢｌｏｏＲＯ，４００，２４
７１５，４１３，１３一方、同一のクロマトグラフィー
板に遠心法にて分離した血清３．５．７．９．１１．１
３．１５ｇＭをそれぞれ点着して形成された展開部分の
面積を同様に測定した結果、それぞれ、　０．５０．０
．８８．１．１９．１．５７．１．８３．２．２３．２
．５７ｃｍ″であることが判明した。この結果から上記
クロマトグラフィー板の液体試料展開作用が確認され、
検量線（血’Ｅｔ量＝５．ａ３ｘ展開面ａ）が得られた
。この検量線を用いて、上記展開面積から血漿の展開量
を算出した。結果を第４表に示す。

第４表 フィ　点着量　　血漿量　　吸収量　Ｖｓ／Ｖｂルター
　ｔｉ−ｎ　　　　ｍｍ”　　　　ｍｍ”　　　％Ｎｏ
　　　　　　　　（Ｖ　ｓ）　　　（Ｖ　ｂ）１　　４
０　　１３．２　１５．４　　　Ｂ５２　　２０　　　
８．２　　６．４　１２８３０　　　８．６　　６．４
　１３４ ４０　　１２．３　　６．４　１９２ ３　　３０　　　６．９１８．８　　３７４０　　１２
．５　１８．８　　６６ ５０　　１５．０　１８．８　　８０ ４　　３０　　１０．９　１３．６　　８０４０　　１
４．２　１３．６　１０４ ［実施例６］ 全血試料のへマクリット値と血漿症過量の関係を調べた
。

東洋性紙■製ガラス繊維うイルターＧＢ−１０ＯＲ（直
径７ｍｍ、吸収量［Ｖｂ］＝１３．６）を用い、全血試
料の点着量を２５川立として、実施例５と同様に実験を
行なった。測定結果を第５表に示す。

第５表 Ｈｃｔ値　血漿量　　血漿量　　Ｖｓ／Ｖｃ　Ｖｓ／Ｖ
ｂ（実測値）（計算値）　　（％）　　（％）（Ｖ　ｓ
）　ｇ　ｌ　（Ｖ　ｃ）　ｇ見３０　　１１　　　１７
．５　　６３　　８１５０　　　９．５　１２．５　　
７６　　７０７０　　　７．６　　７．５１０１　　５
６

【図面の簡単な説明】

第１図は一般的な多層分析要素の構成を示す層構成模式
図であり、第２図は本発明の全血分析用具の標準的な構
成を示す層構成模式図である。 １１．２１：展開層 １２．２２：検出機能層 １３．２３：光透過性（透明）・ 水不透過性支持体 ２４：血球吐過層

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血球濾過層、液体試料計量作用のある展開層、少な
   くとも一層の試薬層を含む検出機能層、および光透過性
   水不透過性支持体がこの順に積層されてなる全血試料分
   析用具。 ２、上記血球濾過層が光遮蔽物質を含むことを特徴とす
   る特許請求の範囲第１項記載の分析用具。 ３、上記血球濾過層がガラス繊維からなるシート状フィ
   ルターであることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
   載の分析用具。 ４、上記血球濾過層が厚さ１００〜２０００μｍの範囲
   にあることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の分
   析用具。 ５、全血試料中のビリルビン定量用であることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項記載の分析用具。 ６、血球濾過層、分析試薬を含有する液体試料計量作用
   のある展開層、および光透過性水不透過性支持体がこの
   順に積層されてなる全血試料分析用具。 ７、上記血球濾過層が光遮蔽物質を含むことを特徴とす
   る特許請求の範囲第６項記載の分析用具。 ８、上記血球濾過層がガラス繊維からなるシート状フィ
   ルターであることを特徴とする特許請求の範囲第６項記
   載の分析用具。 ９、上記血球濾過層が厚さ１００〜２０００μｍの範囲
   にあることを特徴とする特許請求の範囲第６項記載の分
   析用具。 １０、全血試料中のビリルビン定量用であることを特徴
   とする特許請求の範囲第６項記載の分析用具。