JPS61274680A - サイクロデキストリングリコシルトランスフエラ−ゼの製造法 - Google Patents
サイクロデキストリングリコシルトランスフエラ−ゼの製造法Info
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- JPS61274680A JPS61274680A JP11603985A JP11603985A JPS61274680A JP S61274680 A JPS61274680 A JP S61274680A JP 11603985 A JP11603985 A JP 11603985A JP 11603985 A JP11603985 A JP 11603985A JP S61274680 A JPS61274680 A JP S61274680A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、主としてＴ−サイクロデキストリンを生産し
うるサイクロデキストリン・グリコシルトランスフェラ
ーゼを製造する方法に関する。
うるサイクロデキストリン・グリコシルトランスフェラ
ーゼを製造する方法に関する。
（従来の技術）
サイクロデキストリン（ＣＤ）は６〜１２個のグルコー
ス分子がα−１・４−グルコシド結合で環状に結合した
非還元性のマルトオリゴ糖である。
ス分子がα−１・４−グルコシド結合で環状に結合した
非還元性のマルトオリゴ糖である。
このＣＤはその分子空洞内に種々の物質を取り込んで包
接化合物を形成し、取り込まれた物質の物理・化学的性
質を変化させる。例えば、酸化しやすい化合物や光分解
しやすい化合物を安定化させたり、揮発性の化合物を不
揮発化させることができる。そのため、医薬品、化粧品
、農薬１食品など広い分野で利用されている。ＣＤのう
ちよく知られているのはグルコース数が６のα−サイク
ロデキストリン（α−ＣＤ）、グルコース数が７のβ−
サイクロデキストリン（β−ＣＤ）およびグルコース数
が８のＴ−サイクロデキストリン（Ｔ−ＣＤ）である。
接化合物を形成し、取り込まれた物質の物理・化学的性
質を変化させる。例えば、酸化しやすい化合物や光分解
しやすい化合物を安定化させたり、揮発性の化合物を不
揮発化させることができる。そのため、医薬品、化粧品
、農薬１食品など広い分野で利用されている。ＣＤのう
ちよく知られているのはグルコース数が６のα−サイク
ロデキストリン（α−ＣＤ）、グルコース数が７のβ−
サイクロデキストリン（β−ＣＤ）およびグルコース数
が８のＴ−サイクロデキストリン（Ｔ−ＣＤ）である。
これらＣＤは澱粉にサイクロデキストリン・グリコシル
トランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）を作用させる酵素
反応により調製される。 ＣＧＴａｓｅは主としてバシ
ラス属の菌の培養により得られる。（’ＧＴａｓｅの種
類により得られるＣＤ混合物中のα−ＣＤ。
トランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）を作用させる酵素
反応により調製される。 ＣＧＴａｓｅは主としてバシ
ラス属の菌の培養により得られる。（’ＧＴａｓｅの種
類により得られるＣＤ混合物中のα−ＣＤ。
β−ＣＤ、ｒ−ＣＤなどの割合が異なる。既知のＣＧＴ
ａｓｅはいずれもα−ＣＤを主として生産するか。
ａｓｅはいずれもα−ＣＤを主として生産するか。
β−ＣＤを主として生産するものである。例えば。
α−ＣＤを主として生産するＣＧＴａｓｅとしては、特
開昭５０−６３１８９号公報にバシラス・ステアロサー
モフィラスから得られるＣＧＴａｓｅが、そして特公昭
５６−４３２１２号公報にバシラス・マセランスから得
られるＣＧＴａｓｅが開示されている。β−ＣＤを主と
して生産するＣＧＴａｓｅとしては、特開昭４８−４０
９９６号公報にバシラス・メガテリウムから得られるＣ
ＧＴａｓｅが、特開昭４９−１２４２８５号公報にバシ
ラス・オーベンシスから得られるＣＧＴａｓｅが、特公
昭５３−３１２２３号公報に好アルカリ性バシラス属菌
から得られるＣＧＴａｓｅが、そして特開昭５５−１３
８３９０号公報にはミクロコツカス・ルテウスから得ら
れるＣＧＴａｓｅが開示されている。このようにα−Ｃ
Ｄおよびβ−ＣＤを生産しうるＣＧＴａｓｅを用いてこ
れらＣＤは工業的に生産されている。しかし、γ−ＣＤ
を効果的に生産しうるＣＧＴａｓｅは知られていない。
開昭５０−６３１８９号公報にバシラス・ステアロサー
モフィラスから得られるＣＧＴａｓｅが、そして特公昭
５６−４３２１２号公報にバシラス・マセランスから得
られるＣＧＴａｓｅが開示されている。β−ＣＤを主と
して生産するＣＧＴａｓｅとしては、特開昭４８−４０
９９６号公報にバシラス・メガテリウムから得られるＣ
ＧＴａｓｅが、特開昭４９−１２４２８５号公報にバシ
ラス・オーベンシスから得られるＣＧＴａｓｅが、特公
昭５３−３１２２３号公報に好アルカリ性バシラス属菌
から得られるＣＧＴａｓｅが、そして特開昭５５−１３
８３９０号公報にはミクロコツカス・ルテウスから得ら
れるＣＧＴａｓｅが開示されている。このようにα−Ｃ
Ｄおよびβ−ＣＤを生産しうるＣＧＴａｓｅを用いてこ
れらＣＤは工業的に生産されている。しかし、γ−ＣＤ
を効果的に生産しうるＣＧＴａｓｅは知られていない。
そのため、ｒ−ＣＤを工業的規模で製造することができ
ない。α−ＣＤは溶解度が大きいが包接能力に劣り、β
−ＣＤはその逆の性質を有する。他方、ｒ−ＣＤは溶解
度が大きく、かっ包接能力にも優れる。そのため、γ−
ＣＤの工業規模での製造が望まれており、γ−ＣＤを効
果的に生産しうるＣＧＴａｓｅの製造法の開発が望まれ
ている。
ない。α−ＣＤは溶解度が大きいが包接能力に劣り、β
−ＣＤはその逆の性質を有する。他方、ｒ−ＣＤは溶解
度が大きく、かっ包接能力にも優れる。そのため、γ−
ＣＤの工業規模での製造が望まれており、γ−ＣＤを効
果的に生産しうるＣＧＴａｓｅの製造法の開発が望まれ
ている。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明は上記従来の欠点を解決するものであり。
その目的とするところはγ−ＣＤを効果的に生産しうる
ＣＧＴａｓｅの製造法を提供することにある。
ＣＧＴａｓｅの製造法を提供することにある。
（問題点を解決するための手段）
本発明のサイクロデキストリングリコジルトランスフェ
ラーゼの製造法は、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に
属する微生物を培地に培養して、主としてＴ−サイクロ
デキストリンを生産しうるサイクロデキストリン・グリ
コシルトランスフェラーゼ（Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ
ｇｌｙｃｏｓｙｌ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）を得、
そのことにより上記目的が達成される。バシラス属菌は
アルカリ性培地に生育する好アルカリ性菌であり、その
うちでも特に、バシラスＡＬＳ株が利用される。
ラーゼの製造法は、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に
属する微生物を培地に培養して、主としてＴ−サイクロ
デキストリンを生産しうるサイクロデキストリン・グリ
コシルトランスフェラーゼ（Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ
ｇｌｙｃｏｓｙｌ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）を得、
そのことにより上記目的が達成される。バシラス属菌は
アルカリ性培地に生育する好アルカリ性菌であり、その
うちでも特に、バシラスＡＬＳ株が利用される。
本発明方法に用いられるＣＧＴａｓｅを生産しうる微生
物は土壌から分離・採集した新菌株である。この新菌株
は、後述する菌学的性状をもとにパージエイズ マニュ
アル オブ ディタミネイティブバクテリオロジー 第
８版（１９７４年） （Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａ
１ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ、 ａｔｈｅｄｉｔｉｏｎ、１９７４）の
細菌分類書を参考にして同定され、バシラス属に属する
細菌であり、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ） Ａｌ１株
（受託番号：微工研菌寄第８２２９号（ＦＥＲＭ Ｐ−
８２２９））と命名された。
物は土壌から分離・採集した新菌株である。この新菌株
は、後述する菌学的性状をもとにパージエイズ マニュ
アル オブ ディタミネイティブバクテリオロジー 第
８版（１９７４年） （Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａ
１ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ、 ａｔｈｅｄｉｔｉｏｎ、１９７４）の
細菌分類書を参考にして同定され、バシラス属に属する
細菌であり、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ） Ａｌ１株
（受託番号：微工研菌寄第８２２９号（ＦＥＲＭ Ｐ−
８２２９））と命名された。
皿望負民！
本発明方法に用いられるＢａｃｉｌｌｕｓ Ａｌ１株の
薗学的性質を表１に示す。表１において特に記載のない
限り培養温度は３０℃である。この菌はｐＨ７，０でほ
とんど生育しないため、別に滅菌・調製した炭酸ナトリ
ウム１％溶液を加えｐｏｌｏの培地を得。
薗学的性質を表１に示す。表１において特に記載のない
限り培養温度は３０℃である。この菌はｐＨ７，０でほ
とんど生育しないため、別に滅菌・調製した炭酸ナトリ
ウム１％溶液を加えｐｏｌｏの培地を得。
これを用いて培養を行った。
表１
□
本発明方法に用いられる菌株は、上記菌学的諸性質をも
とにパージエイズ・マニュアル・オブ・ディタミネイテ
ィブ・バタテリオロジー 第８版（１９７４年）および
ザ・ジーナス・バシラス（ユナイテッド・ステイツ・デ
パートメント・オブ・アグリカルチエア、 １９７３年
）を参考にして、バシラス属に属する１菌種と同定され
た。この菌株はアルカリ性培地で生育するため＊ ＣＧ
Ｔａｓｅを生産する既知のバシラス属の好アルカリ性菌
との比較を行った。その結果を表２に示す。
とにパージエイズ・マニュアル・オブ・ディタミネイテ
ィブ・バタテリオロジー 第８版（１９７４年）および
ザ・ジーナス・バシラス（ユナイテッド・ステイツ・デ
パートメント・オブ・アグリカルチエア、 １９７３年
）を参考にして、バシラス属に属する１菌種と同定され
た。この菌株はアルカリ性培地で生育するため＊ ＣＧ
Ｔａｓｅを生産する既知のバシラス属の好アルカリ性菌
との比較を行った。その結果を表２に示す。
（以下余白）
表２から本発明方法に用いられる菌株は、既知の上記バ
シラス属の好アルカリ性菌のいずれとも異なるため、バ
シラス属の新菌株であることが判明した。
シラス属の好アルカリ性菌のいずれとも異なるため、バ
シラス属の新菌株であることが判明した。
隻Ｉ魚註
培地は格別である必要はなく９通常の培地が用いられる
。炭素源としては、可溶性澱粉、デキストリン、アミロ
ペクチン、アミロースなどが用いられる。コーン、馬鈴
薯、甘藷などを用いることもできる。窒素源としてはペ
プトン、酵母エキス。
。炭素源としては、可溶性澱粉、デキストリン、アミロ
ペクチン、アミロースなどが用いられる。コーン、馬鈴
薯、甘藷などを用いることもできる。窒素源としてはペ
プトン、酵母エキス。
大豆粉、コーンディスティラーズソリュブル、カゼイン
、肉エキスなどが用いられる。無機塩類としては、 Ｋ
ＪＰＯ＊＋ ＣａＣ１ｔ＋ Ｍｇ５ｏ４． ＮａＪＰＯ
４・（ＮＨ＊）ｚＨＰ０４などが用いられる。アルカリ
性の培地にするため別に滅菌処理したＮａ＊ＣＯｓを１
％程度加えてｐｕを９．５〜１０．０に調製する。培養
温度は３０〜４０℃。
、肉エキスなどが用いられる。無機塩類としては、 Ｋ
ＪＰＯ＊＋ ＣａＣ１ｔ＋ Ｍｇ５ｏ４． ＮａＪＰＯ
４・（ＮＨ＊）ｚＨＰ０４などが用いられる。アルカリ
性の培地にするため別に滅菌処理したＮａ＊ＣＯｓを１
％程度加えてｐｕを９．５〜１０．０に調製する。培養
温度は３０〜４０℃。
好ましくは３８℃であり、２０〜７２時間好気的に攪拌
または振盪しながら培養を行う。
または振盪しながら培養を行う。
Ｕ１汰
上記培養液から本酵素（ＣＧＴａｓｅ）を採取・精製す
るには既知の精製法が単独もしくは併用して利用されう
る。例えば、培養液を濾過または遠心分離にかけて菌体
を除去し、これを限外濾過または透析にかける。さらに
、硫安などによる塩析；メタノール、エタノール、アセ
トンなどによる有機溶媒沈澱；澱粉などの吸着体による
吸着溶出； ＤＥＡＨ−セファデックス（商品名）によ
る吸着溶出などの方法により精製され得る。
るには既知の精製法が単独もしくは併用して利用されう
る。例えば、培養液を濾過または遠心分離にかけて菌体
を除去し、これを限外濾過または透析にかける。さらに
、硫安などによる塩析；メタノール、エタノール、アセ
トンなどによる有機溶媒沈澱；澱粉などの吸着体による
吸着溶出； ＤＥＡＨ−セファデックス（商品名）によ
る吸着溶出などの方法により精製され得る。
囮皇蛮血■皿主因
バシラスＡＬ６株の上記培養液を遠心分離し、上澄液を
濃縮し透析処理して得られた酵素液０．５ｍ＋１を２０
％可溶性澱粉を含有するｐＨ７，０のＭ／３５ベロナー
ル緩衝液１．５ｓＪｔに加え、５５℃で２００時間反応
せた後、５分間煮沸させて反応を停止させる。
濃縮し透析処理して得られた酵素液０．５ｍ＋１を２０
％可溶性澱粉を含有するｐＨ７，０のＭ／３５ベロナー
ル緩衝液１．５ｓＪｔに加え、５５℃で２００時間反応
せた後、５分間煮沸させて反応を停止させる。
この反応液０．５ｓＪｔに、２５０μｇのグルコアミラ
ーゼを含有するｐＨ５，０のＭ／３５ベロナール緩衝液
２．５ｖｓｌを加え、４０℃で３時間反応させて残余の
澱粉および／またはオリゴ糖を分解させた後、５分間煮
沸させて反応を停止させる。これをラジアルバックＮＨ
ｔカラム（ウォーターズ アソシエイツ社製）を用いた
高速液体クロマトグラフィーにかける。あらかじめ求め
た検量線によりγ−ＣＤを定量する。αおよびβ−ＣＤ
も定量されうる。ここで用いられる酵素液とはすべて上
記処理により得られた酵素液をいう。
ーゼを含有するｐＨ５，０のＭ／３５ベロナール緩衝液
２．５ｖｓｌを加え、４０℃で３時間反応させて残余の
澱粉および／またはオリゴ糖を分解させた後、５分間煮
沸させて反応を停止させる。これをラジアルバックＮＨ
ｔカラム（ウォーターズ アソシエイツ社製）を用いた
高速液体クロマトグラフィーにかける。あらかじめ求め
た検量線によりγ−ＣＤを定量する。αおよびβ−ＣＤ
も定量されうる。ここで用いられる酵素液とはすべて上
記処理により得られた酵素液をいう。
■素立民！
このようにして得られる酵素（ＣＧＴａｓｅ）の理化学
的性質を以下に示す。
的性質を以下に示す。
■作用および基質特異性
５％、１０％および１５％の各可溶性澱粉溶液（ｐＨ７
，０）に本酵素を加えて、上記「酵素活性の測定法」の
項に準じて反応を行い、経時的にＣＤ生成量を測定した
。その結果を第１図に示す、第１図において、破線は５
％溶液中のＣＤの生成量。
，０）に本酵素を加えて、上記「酵素活性の測定法」の
項に準じて反応を行い、経時的にＣＤ生成量を測定した
。その結果を第１図に示す、第１図において、破線は５
％溶液中のＣＤの生成量。
実線は１０％溶液中のＣＤの生成量、そして一点鎖線は
１５％溶液中のＣＤの生成量を示す。ＣＤの生成量は溶
液中の濃度で示す。β−ＣＤとｒ−ＣＤとの生成比は約
２７ ： ７３であり、α−ＣＤは検出されなかった。
１５％溶液中のＣＤの生成量を示す。ＣＤの生成量は溶
液中の濃度で示す。β−ＣＤとｒ−ＣＤとの生成比は約
２７ ： ７３であり、α−ＣＤは検出されなかった。
このように本酵素は澱粉に作用しＣＤ、特に。
ｒ−ＣＤを高比率で生成する。本酵素は澱粉に作用して
ヨード反応を消失させるが、還元力の増加はほとんど認
められない。
ヨード反応を消失させるが、還元力の増加はほとんど認
められない。
■至適ｐｉおよび安定ｐＨ範囲
本酵素を１０％可溶性澱粉溶液に５５℃にて、 ｐＨ５
，２〜１０．２の１２種類のｐ）！条件下で２１時間作
用させた。それぞれの活性を測定し、その結果を第２図
に示す、第２図から至適ｐＨは約７．０であることがわ
かる。
，２〜１０．２の１２種類のｐ）！条件下で２１時間作
用させた。それぞれの活性を測定し、その結果を第２図
に示す、第２図から至適ｐＨは約７．０であることがわ
かる。
本酵素液をｐＨ４，７〜１１．２の９種類のｐＨ条件下
で。
で。
３０℃で１時間保持した。その残存活性を測定した結果
を第３図に示す。第３図から安定ｐＨ範囲は６．０〜１
０．７であることがわかる。
を第３図に示す。第３図から安定ｐＨ範囲は６．０〜１
０．７であることがわかる。
■作用適温の範囲
本酵素を１５％可溶性澱粉溶液にｐｉ ７．０で２００
時間反応せた０反応温度は４５℃、 ５０℃、５５℃、
６０℃、６５℃および７０℃の６種類に設定した。そ
れぞれの活性を測定し、その結果を第４図に示す。第４
図から至適温度は６０℃であることがわかる。
時間反応せた０反応温度は４５℃、 ５０℃、５５℃、
６０℃、６５℃および７０℃の６種類に設定した。そ
れぞれの活性を測定し、その結果を第４図に示す。第４
図から至適温度は６０℃であることがわかる。
■ｐＨ，温度などによる失活の条件
本酵素液を９Ｈ７，０で５５℃および６０℃にて３０分
間保持した。残存活性を第５図に実線で示す。第５図か
ら本酵素は上記条件下で５５℃まで安定であるが６０℃
では１０分間で失活することがわかる。次に、同様の条
件下でそれぞれ１０ｍＭのカルシウム塩を添加して３０
分間保存した。その結果を第５図に破線で示す。第５図
からカルシウム塩による影響は認められないことが明ら
かである。
間保持した。残存活性を第５図に実線で示す。第５図か
ら本酵素は上記条件下で５５℃まで安定であるが６０℃
では１０分間で失活することがわかる。次に、同様の条
件下でそれぞれ１０ｍＭのカルシウム塩を添加して３０
分間保存した。その結果を第５図に破線で示す。第５図
からカルシウム塩による影響は認められないことが明ら
かである。
■阻害、活性化および安定化
１５％可溶性澱粉溶液に本酵素および下記の添加剤を加
え、５５℃にて２００時間反応せた。生成したＣＤ量を
測定して相対活性を算出した。その結果を表３に示す。
え、５５℃にて２００時間反応せた。生成したＣＤ量を
測定して相対活性を算出した。その結果を表３に示す。
（以下余白）
表３
表３から本酵素の活性は上記化合物の存在で阻害される
ことが明らかである。
ことが明らかである。
■分子量
セファデックスＧ−１００によるゲル濾過によれば分子
量は約４５．０００である。
量は約４５．０００である。
（作用）
このような理化学的性質から本酵素は既知のＣＧＴａｓ
ｅとは全く異なる性質を有し、γ−ＣＤを高比率で生産
しうる酵素であることがわかる。本発明方法によればＢ
ａｃｉｌｌｕｓ Ａｌ１株を通常の細菌培養培地を用い
て好気培養することによりこのような酵素が培地中に容
易に製造され、この酵素を用いることにより澱粉からγ
−ＣＤを高比率で含有するＣＤが製造されうる。
ｅとは全く異なる性質を有し、γ−ＣＤを高比率で生産
しうる酵素であることがわかる。本発明方法によればＢ
ａｃｉｌｌｕｓ Ａｌ１株を通常の細菌培養培地を用い
て好気培養することによりこのような酵素が培地中に容
易に製造され、この酵素を用いることにより澱粉からγ
−ＣＤを高比率で含有するＣＤが製造されうる。
（実施例）
以下に９本発明方法を実施例により説明する。
叉施透上
可溶性澱粉１ｇ、コーンディスティラーズソリｓ フル
５ ｇ 、 ＫｔＨＰＯ＊ ０．１ ｇ オよびＭｇ５
Ｏ＊４Ｈｔ００．０２ｇに水を加えて９０■ｌとし、坂
ロフラスコに入れて常法により滅菌した。別に、滅菌処
理した１ｏ％ＮａｔＣＯｓ １０＋＊ Ｉｔを加えてｐ
Ｈ１ｏの培地を得た。これにＢａｃｆｌｌｕｓ Ａｌ１
株を１白金耳接種し、３８℃で２日間振盪培養した。培
養液を遠心分離して菌体を除き。
５ ｇ 、 ＫｔＨＰＯ＊ ０．１ ｇ オよびＭｇ５
Ｏ＊４Ｈｔ００．０２ｇに水を加えて９０■ｌとし、坂
ロフラスコに入れて常法により滅菌した。別に、滅菌処
理した１ｏ％ＮａｔＣＯｓ １０＋＊ Ｉｔを加えてｐ
Ｈ１ｏの培地を得た。これにＢａｃｆｌｌｕｓ Ａｌ１
株を１白金耳接種し、３８℃で２日間振盪培養した。培
養液を遠心分離して菌体を除き。
酵素液を得た。この酵素液０．５＋ｓｆを用い「酵素活
性の測定法」の項に準じてＣＤの調製を行った。
性の測定法」の項に準じてＣＤの調製を行った。
得られた反応液中にはβ−ＣＤが０．１２％、そしてγ
−ＣＤが０．５１％の割合で含有されていた。
−ＣＤが０．５１％の割合で含有されていた。
ス１１１１
可溶性澱粉１５ｇ、大豆ミール２０ｇ、 ＣａＣ１ｘ
１ ｇ。
１ ｇ。
ＮａｔＨＰＯｔ−１２Ｈｚ０９ ｇおよび大豆油１０Ｉ
Ｉ１１に水を加えて９００１１ｉとし、２Ｉｌのジャー
ファーメンタ−に入れて常法により滅菌した。別に滅菌
処理した１０％ＮａＨＣＯ＋ １００＋＋Ｊ！を加えて
ｐＨ９，３の培地を調製した。これに実施例１における
１日間培養後の培養液１０ｍ１を加え、３８℃で２日間
通気攪拌培養した。培養液を遠心分離して菌体を除き、
酵素液を得た。この酵素液０．５ｓｊ！を用い「酵素活
性の測定法」の項に準じてＣＤの調製を行った。得られ
た反応液中にはβ−ＣＤが０．０７％、そしてγ−ＣＤ
が０．２１％の割合で含有されていた。
Ｉ１１に水を加えて９００１１ｉとし、２Ｉｌのジャー
ファーメンタ−に入れて常法により滅菌した。別に滅菌
処理した１０％ＮａＨＣＯ＋ １００＋＋Ｊ！を加えて
ｐＨ９，３の培地を調製した。これに実施例１における
１日間培養後の培養液１０ｍ１を加え、３８℃で２日間
通気攪拌培養した。培養液を遠心分離して菌体を除き、
酵素液を得た。この酵素液０．５ｓｊ！を用い「酵素活
性の測定法」の項に準じてＣＤの調製を行った。得られ
た反応液中にはβ−ＣＤが０．０７％、そしてγ−ＣＤ
が０．２１％の割合で含有されていた。
叉星糎主
２６％硫安水中で加熱処理した馬鈴薯澱粉をミニチュア
カラムに５ＩＩＩＩｌとなるように充填した。これを９
％エタノールで洗浄し、５℃に冷却した。
カラムに５ＩＩＩＩｌとなるように充填した。これを９
％エタノールで洗浄し、５℃に冷却した。
実施例１で得られる２日間培養後の培養液を遠心分離に
かけて得られた上澄液１５０ｍ１ｌをカラムに５℃で通
液して酵素を澱粉に吸着させた。カラムを９％エタノー
ル４０ｃａｌで洗浄した後、澱粉吸着酵素を取り出し、
エタノールで洗浄後、乾燥した。
かけて得られた上澄液１５０ｍ１ｌをカラムに５℃で通
液して酵素を澱粉に吸着させた。カラムを９％エタノー
ル４０ｃａｌで洗浄した後、澱粉吸着酵素を取り出し、
エタノールで洗浄後、乾燥した。
このようにして澱粉吸着酵素が２．５ｇ得られた。
この澱粉吸着酵素０．０１ ｇを用い「酵素活性の測定
法」の項に準じてＣＤの調製を行った。得られた反応液
中にはβ−ＣＤが０．０５％、そしてｒ−ＣＤが０．２
８％の割合で含有されていた。また上記上澄液を通液し
たときのカラムから溶出する吸着廃液にはＴ ＣＧＴ
ａｓｅ活性が認められなかった。
法」の項に準じてＣＤの調製を行った。得られた反応液
中にはβ−ＣＤが０．０５％、そしてｒ−ＣＤが０．２
８％の割合で含有されていた。また上記上澄液を通液し
たときのカラムから溶出する吸着廃液にはＴ ＣＧＴ
ａｓｅ活性が認められなかった。
（発明の効果）
本発明によれば、このように、 Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ａ
ｌ１株を培養することにより、γ−ＣＤを効果的に生産
しろるＣＧＴａｓｅが製造される。この酵素を用いれば
。
ｌ１株を培養することにより、γ−ＣＤを効果的に生産
しろるＣＧＴａｓｅが製造される。この酵素を用いれば
。
γ−ＣＤが工業規模で安価に生産されうる。γ−ＣＤは
溶解度が大きく、かつ包接能力にも優れるという性質を
有するため２食品、医薬品、化粧品など多方面での利用
が可能となる。
溶解度が大きく、かつ包接能力にも優れるという性質を
有するため２食品、医薬品、化粧品など多方面での利用
が可能となる。
４、 ゛ の なｆＢ
第１図は本発明方法により得られた酵素を各種基’Ｉｔ
ｔＲ度で反応させたときの反応時間とＣＤＯ生酸量との
関係を示すグラフ、第２図は本酵素の至適ｐＨを示すグ
ラフ、第３図は本酵素の安定ｐＨ範囲を示すグラフ、第
４図は本酵素の至適温度を示すグラフ、第５図は本酵素
の安定温度範囲を示すグラフである。
ｔＲ度で反応させたときの反応時間とＣＤＯ生酸量との
関係を示すグラフ、第２図は本酵素の至適ｐＨを示すグ
ラフ、第３図は本酵素の安定ｐＨ範囲を示すグラフ、第
４図は本酵素の至適温度を示すグラフ、第５図は本酵素
の安定温度範囲を示すグラフである。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物を
培地に培養して、主としてγ−サイクロデキストリンを
生産しうるサイクロデキストリン・グリコシルトランス
フェラーゼ（Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ ｇｌｙｃｏｓ
ｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）を得るサイクロデキスト
リン・グリコシルトランスフェラーゼの製造法。 ２、前記バシラス属菌が好アルカリ性である特許請求の
範囲第１項に記載の製造法。 ３、前記好アルカリ性バシラス属菌がバシラスＡＬ６株
である特許請求の範囲第２項に記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11603985A JPS61274680A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | サイクロデキストリングリコシルトランスフエラ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11603985A JPS61274680A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | サイクロデキストリングリコシルトランスフエラ−ゼの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61274680A true JPS61274680A (ja) | 1986-12-04 |
Family
ID=14677211
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11603985A Pending JPS61274680A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | サイクロデキストリングリコシルトランスフエラ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61274680A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989001043A1 (en) * | 1987-07-28 | 1989-02-09 | Genetics Institute, Inc. | Process and enzyme for preparing cyclodextrins, especially alpha-cyclodextrin |
| EP0614971A3 (en) * | 1993-02-09 | 1994-11-02 | Amano Pharma Co Ltd | Novel cyclodextrin glucanotransferase, process for its manufacture and method for obtaining cyclodextrin using this enzyme. |
-
1985
- 1985-05-29 JP JP11603985A patent/JPS61274680A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989001043A1 (en) * | 1987-07-28 | 1989-02-09 | Genetics Institute, Inc. | Process and enzyme for preparing cyclodextrins, especially alpha-cyclodextrin |
| EP0614971A3 (en) * | 1993-02-09 | 1994-11-02 | Amano Pharma Co Ltd | Novel cyclodextrin glucanotransferase, process for its manufacture and method for obtaining cyclodextrin using this enzyme. |
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