JPS61218945A - 安定な螢光希土類元素標識及び要素された生理学的に反応性の種 - Google Patents
安定な螢光希土類元素標識及び要素された生理学的に反応性の種Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、生物医学的研究及び臨床化学に有用な螢光標
識（ｌａｂｅｌ ）及び螢光標識された、生理学的に反
応性の種に関する。これらの標識及び標識された種は、
特に、ヒトの生物学的液体中の特異結合リガンド、例え
ばハプテンを測定するため、特異結合分析１１例えば免
疫分析に有用である。
識（ｌａｂｅｌ ）及び螢光標識された、生理学的に反
応性の種に関する。これらの標識及び標識された種は、
特に、ヒトの生物学的液体中の特異結合リガンド、例え
ばハプテンを測定するため、特異結合分析１１例えば免
疫分析に有用である。
医学及び臨床化学の分野において、低濃度の観察すべき
物質の検出又は分離を容易にする標識を使用して、生理
学的に反応性の種、例えば細胞、蛋白質、酵素、補助因
子、核酸、基質、抗原、抗体等の研究及び測定が多数な
されている。このような用途の一つにおいて、競合結合
原理を利用する特異結合分析に標識された物質を使用し
て、ヒト及び動物における病状の診断及び薬剤又は麻酔
剤の検出がしばしば実施される。
物質の検出又は分離を容易にする標識を使用して、生理
学的に反応性の種、例えば細胞、蛋白質、酵素、補助因
子、核酸、基質、抗原、抗体等の研究及び測定が多数な
されている。このような用途の一つにおいて、競合結合
原理を利用する特異結合分析に標識された物質を使用し
て、ヒト及び動物における病状の診断及び薬剤又は麻酔
剤の検出がしばしば実施される。
標識を使用する場合には、測定される生物学釣橋が一般
に低濃度であるため、感度が極めて重要である。放射性
標識を使用して実施する操作は、一般には、多数の低濃
度の被分析物には十分な感度を有しない。更に、放射性
標識は、短い使用可能期間及び取り扱いの危険という欠
点を有する。
に低濃度であるため、感度が極めて重要である。放射性
標識を使用して実施する操作は、一般には、多数の低濃
度の被分析物には十分な感度を有しない。更に、放射性
標識は、短い使用可能期間及び取り扱いの危険という欠
点を有する。
最も高感度で、多様性のある光学的分析技術の一つであ
る螢光分光分析は、他の標識技術の欠点を克服するため
に、最近ますます普及してきた。
る螢光分光分析は、他の標識技術の欠点を克服するため
に、最近ますます普及してきた。
螢光分光分析においては、螢光種を含む試料を目標螢光
種の励起スペクトル内の公知スペクトル分布の光で照射
する。螢光目標分子の生ずる特異的発光スペクトルの強
度を測定し、試料中の目標分子の数に相関させる。螢光
分光分析は、蛋白質の構造、細菌の細胞壁反応及び酵素
の配座変化の研究並びに特異結合分析における免疫反応
性リガンドの測定に広範に使用される。
種の励起スペクトル内の公知スペクトル分布の光で照射
する。螢光目標分子の生ずる特異的発光スペクトルの強
度を測定し、試料中の目標分子の数に相関させる。螢光
分光分析は、蛋白質の構造、細菌の細胞壁反応及び酵素
の配座変化の研究並びに特異結合分析における免疫反応
性リガンドの測定に広範に使用される。
充填可能なラテックスのポリマー粒子中に希土類元素の
キレートを混入して含む螢光標識は、米国特許第４．２
５９．３１３号及び同第４，２８３，３８２号明細書に
記載されている。これらの標識は、改良された螢光効率
を示し、免疫分析に特に有用である。
キレートを混入して含む螢光標識は、米国特許第４．２
５９．３１３号及び同第４，２８３，３８２号明細書に
記載されている。これらの標識は、改良された螢光効率
を示し、免疫分析に特に有用である。
ポリマー粒子は、これに直接結合する、免疫反応性種に
対するキャリアとして作用する。
対するキャリアとして作用する。
前記の標識は、臨床化学において進歩をもたらすが、水
溶液中で更に安定なものにする必要がある。前記の標識
は、自然に凝集し、溶液から析出しやすい、従って、こ
れらの貯蔵可能時間は、短い。また、これらは、分析の
間に早期に凝集する傾向がある。
溶液中で更に安定なものにする必要がある。前記の標識
は、自然に凝集し、溶液から析出しやすい、従って、こ
れらの貯蔵可能時間は、短い。また、これらは、分析の
間に早期に凝集する傾向がある。
以下倉口
〔問題点を解決するための手段〕
前記の問題点は、不連続相及び水相を有する充填可能な
ラテックスから誘導されたポリマー粒子を含み、該不連
続相が （ａ）疎水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマー
から誘導された繰り返し単位５０〜９６重量％、 （ｂ）非イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量
％、並びに （ｃ）少なくとも１個の可溶化基を含む陰イオン性で、
重合可能なエチレン性不飽和モノマーから誘導された繰
り返し単位２〜２０重量％を含むポリマーから実質的に
成るものである螢光標識を用いることによって、解決さ
れる。
ラテックスから誘導されたポリマー粒子を含み、該不連
続相が （ａ）疎水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマー
から誘導された繰り返し単位５０〜９６重量％、 （ｂ）非イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量
％、並びに （ｃ）少なくとも１個の可溶化基を含む陰イオン性で、
重合可能なエチレン性不飽和モノマーから誘導された繰
り返し単位２〜２０重量％を含むポリマーから実質的に
成るものである螢光標識を用いることによって、解決さ
れる。
本発明は、更に、不連続相及び水相を有する充填可能な
ラテックスから誘導されたポリマー粒子を含み、不連続
相が前記のポリマーから実質的に成るものである生理学
的に反応性の種を含む、螢光標識された、生理学的に反
応性の種（ｓｐｅｃｉｅｓ ）に関する。
ラテックスから誘導されたポリマー粒子を含み、不連続
相が前記のポリマーから実質的に成るものである生理学
的に反応性の種を含む、螢光標識された、生理学的に反
応性の種（ｓｐｅｃｉｅｓ ）に関する。
更に、乾式分析要素は、テエニ前記のポリマーか゛ら実
質的に成る不連続相及び水相を有する充填可能なラテッ
クスから誘導されたポリマー粒子を含む、螢光標識され
た、生理学的に反応性の種を含む。
質的に成る不連続相及び水相を有する充填可能なラテッ
クスから誘導されたポリマー粒子を含む、螢光標識され
た、生理学的に反応性の種を含む。
更に詳しくは、免疫分析において、免疫反応性リガンド
を測定する乾式分析要素は、前記のポリマーから実質的
に成る不連続相及び水相を有する充填可能なラテックス
から誘導されたポリマー粒子を含む螢光標識された、特
異結合リガンドアナローグを含む。
を測定する乾式分析要素は、前記のポリマーから実質的
に成る不連続相及び水相を有する充填可能なラテックス
から誘導されたポリマー粒子を含む螢光標識された、特
異結合リガンドアナローグを含む。
水性液体中の免疫反応性リガンドの測定方法は、Ａ、リ
ガンドに対するレセプターの存在下に、不連続相及び水
相を有する充填可能なラテックスから誘導されたポリマ
ー粒子を含む、螢光標識された免疫反応性リガンドアナ
ローグと液体試料を接触させて、レセプターとリガンド
アナローグとの複合体を形成させ、そして Ｂ、リガンドアナローグを螢光分析により検出すること
を含んでなり、 前記不連続相は前記のポリマーから実質的に成る。
ガンドに対するレセプターの存在下に、不連続相及び水
相を有する充填可能なラテックスから誘導されたポリマ
ー粒子を含む、螢光標識された免疫反応性リガンドアナ
ローグと液体試料を接触させて、レセプターとリガンド
アナローグとの複合体を形成させ、そして Ｂ、リガンドアナローグを螢光分析により検出すること
を含んでなり、 前記不連続相は前記のポリマーから実質的に成る。
更に詳しくは、本発明の螢光標識は、種々の生物医学的
研究及び臨床化学上の測定のため、プローブ又は標識物
質として使用される。これらは、細胞、又は蛋白質、核
酸（例えばＤＮＡ） 、酵素、酵素基質、補助因子、ウ
ィルス、白血球、成長因子、レクチン、抗原、抗体、ハ
プテン、代謝産物、ホルモン、毒素、放射性同位元素及
び他の当業者に公知のものを含めて他の生理学的に反応
性の種を標識するため使用することができる。このよう
な生物学的物質に適当な方法、例えば共有結合又は吸収
によって標識を結合させることができる。
研究及び臨床化学上の測定のため、プローブ又は標識物
質として使用される。これらは、細胞、又は蛋白質、核
酸（例えばＤＮＡ） 、酵素、酵素基質、補助因子、ウ
ィルス、白血球、成長因子、レクチン、抗原、抗体、ハ
プテン、代謝産物、ホルモン、毒素、放射性同位元素及
び他の当業者に公知のものを含めて他の生理学的に反応
性の種を標識するため使用することができる。このよう
な生物学的物質に適当な方法、例えば共有結合又は吸収
によって標識を結合させることができる。
標識は、被分析物（即ち、免疫反応性種）を測定する特
異結合分析に特に有用である。これらの分析法において
は、測定すべき種を標識に結合させ、標識された種を共
通の反応体との反応に関して試験試料からの未標識種と
競合させる。測定すべき被分析物をリガンドと言い、標
識された被分折物をリガンドアナローグと言う。リガン
ド及びリガンドアナローグを特異的に認識し、反応して
これらと複合体を形成する化合物をレセプターと言う。
異結合分析に特に有用である。これらの分析法において
は、測定すべき種を標識に結合させ、標識された種を共
通の反応体との反応に関して試験試料からの未標識種と
競合させる。測定すべき被分析物をリガンドと言い、標
識された被分折物をリガンドアナローグと言う。リガン
ド及びリガンドアナローグを特異的に認識し、反応して
これらと複合体を形成する化合物をレセプターと言う。
この種の分析法の一つを実施する際には、リガンドは、
レセプターに結合するため、リガンドアナローグと競合
する。未知濃度のりガントを、標識リガンドアナローグ
の測定された信号から推測する。複合体形成反応は下記
のように進行する：リガンド＋標識すガンドアナローグ
＋レセプター亡＝ヨリガント−レセプター ＋標識リガントアナローグーレセプタ一本発明の好まし
い実施態様においては、リガンドは抗原又は抗体であり
、標識リガンドアナローグは標識抗原又は抗体であり、
特異結合分析は免疫分析である。下記の記載及び実施例
の記載は、特に、これらの好ましい実施態様に関するも
のであるが、本発明の範囲は、他の任意の特異結合分析
を含む。
レセプターに結合するため、リガンドアナローグと競合
する。未知濃度のりガントを、標識リガンドアナローグ
の測定された信号から推測する。複合体形成反応は下記
のように進行する：リガンド＋標識すガンドアナローグ
＋レセプター亡＝ヨリガント−レセプター ＋標識リガントアナローグーレセプタ一本発明の好まし
い実施態様においては、リガンドは抗原又は抗体であり
、標識リガンドアナローグは標識抗原又は抗体であり、
特異結合分析は免疫分析である。下記の記載及び実施例
の記載は、特に、これらの好ましい実施態様に関するも
のであるが、本発明の範囲は、他の任意の特異結合分析
を含む。
本発明の標識は、希土類キレートを含むラテックスポリ
マー粒子を含む。これらの標識は、“水−安定性” （
本明細書においては、キレートの螢光が水性環境で消滅
しないことを意味する）である。
マー粒子を含む。これらの標識は、“水−安定性” （
本明細書においては、キレートの螢光が水性環境で消滅
しないことを意味する）である。
一般に、螢光性を示す任意の螢光希土類キレートが、本
発明の実施に有用である。特に、キレートは、希土類金
属（即ち、ランタニド金属）、例えばユーロピウム又は
テルビウムを含む。ユーロピウムが最も好ましい。
発明の実施に有用である。特に、キレートは、希土類金
属（即ち、ランタニド金属）、例えばユーロピウム又は
テルビウムを含む。ユーロピウムが最も好ましい。
前記キレートは、更に適当なキレート化剤を含む。特に
有用なキレート化剤は、１，３−ジケトン類（例えばア
セチルアセトネート、ｐ−ベンゾイルアセトネート、ｐ
−ベンゾイルベンゾエート、トリフルオロ−２−フリル
アセチルアセトン等）、フタレート、ナフトニート（例
えばジナフトイルメチド等）、ジピリジン類（例えば２
，２′−ジピリジン−１，１１−ジオキシド、４．４′
−ジメチル−２，２１−ジピリジン等）、チルピリジン
類（例えば２． ２ ｔ、 ６ ’、 ２”−チル
ピリジン等）及びフェナントロリン類（例えば０−フェ
ナントロリンイソチオシアネート等）を含む。他のキレ
ート化剤は当業者に公知である。１．３−ジケトン類が
好ましい。
有用なキレート化剤は、１，３−ジケトン類（例えばア
セチルアセトネート、ｐ−ベンゾイルアセトネート、ｐ
−ベンゾイルベンゾエート、トリフルオロ−２−フリル
アセチルアセトン等）、フタレート、ナフトニート（例
えばジナフトイルメチド等）、ジピリジン類（例えば２
，２′−ジピリジン−１，１１−ジオキシド、４．４′
−ジメチル−２，２１−ジピリジン等）、チルピリジン
類（例えば２． ２ ｔ、 ６ ’、 ２”−チル
ピリジン等）及びフェナントロリン類（例えば０−フェ
ナントロリンイソチオシアネート等）を含む。他のキレ
ート化剤は当業者に公知である。１．３−ジケトン類が
好ましい。
本発明の標識は、充填可能な（ｌｏａｄａｂｌｅ）ラテ
ックスを用いて製造される。本発明に有用なラテックス
の“充填”についての詳細は、前記の米国特許第４，２
５９．３１３号及び同第４ 、２８３ 、３８２号明細
書に記載されている。一般に、水と混和しうる溶剤中の
キレートの溶液の親水性を未凝固で、未溶解の、充填可
能なポリマーラテックス粒子の存在で、キレートが水と
混和しうる溶剤中に実質的に溶解しない点に徐々に増大
することによって、キレートをポリマー粒子中に混入す
る。この方法で、７．５％以下（ポリマーの重量に基づ
いて）のキレートをポリマー粒子中に混入又は吸収させ
ることができる。ポリマー粒子中のキレートの濃度は、
所定の標識の特定の用途に応じである程度変動すること
ができる。本発明の螢光標識の製造を、下記の例１に記
載する。
ックスを用いて製造される。本発明に有用なラテックス
の“充填”についての詳細は、前記の米国特許第４，２
５９．３１３号及び同第４ 、２８３ 、３８２号明細
書に記載されている。一般に、水と混和しうる溶剤中の
キレートの溶液の親水性を未凝固で、未溶解の、充填可
能なポリマーラテックス粒子の存在で、キレートが水と
混和しうる溶剤中に実質的に溶解しない点に徐々に増大
することによって、キレートをポリマー粒子中に混入す
る。この方法で、７．５％以下（ポリマーの重量に基づ
いて）のキレートをポリマー粒子中に混入又は吸収させ
ることができる。ポリマー粒子中のキレートの濃度は、
所定の標識の特定の用途に応じである程度変動すること
ができる。本発明の螢光標識の製造を、下記の例１に記
載する。
本発明に有用な充填可能なポリマーラテックスは、下記
の重合可能なエチレン性不飽和モノマーから製造された
ポリマーの１種以上から実質的に成るポリマー不連続相
（粒子）及び水相を含む。
の重合可能なエチレン性不飽和モノマーから製造された
ポリマーの１種以上から実質的に成るポリマー不連続相
（粒子）及び水相を含む。
これらのラテックスのポリマー粒子は、−ｉに、０．０
１〜２μｍ、好ましくは０．１〜０．５ ｐ ｍの平均
粒径を有する。
１〜２μｍ、好ましくは０．１〜０．５ ｐ ｍの平均
粒径を有する。
ポリマー粒子は、下記の成分から成るコポリマーである
： （ａ）１種以上の疎水性で、重合可能なエチレン性不飽
和モノマーから誘導された繰り返し単位５０〜９６重量
％、好ましくは７５〜９２重量％、（ｂ）１種以上の非
イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノ
マーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量％、好ま
しくは５〜１５重量％、並びに （ｃ）１種以上の、少なくとも１個の可溶化基を含む陰
イオン性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマーから
誘導された繰り返し単位２〜２０重量％、好ましくは３
〜１０重量％。
： （ａ）１種以上の疎水性で、重合可能なエチレン性不飽
和モノマーから誘導された繰り返し単位５０〜９６重量
％、好ましくは７５〜９２重量％、（ｂ）１種以上の非
イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノ
マーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量％、好ま
しくは５〜１５重量％、並びに （ｃ）１種以上の、少なくとも１個の可溶化基を含む陰
イオン性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマーから
誘導された繰り返し単位２〜２０重量％、好ましくは３
〜１０重量％。
前記群（ａ）の有用な疎水性モノマーは、ビニル芳香族
物質、例えば゛置換若しくは非置換スチレン及びビニル
ナフタリン、及びアクリル酸及びメタクリル酸アルキル
エステルを含む、置換又は非置換スチレンが好ましい。
物質、例えば゛置換若しくは非置換スチレン及びビニル
ナフタリン、及びアクリル酸及びメタクリル酸アルキル
エステルを含む、置換又は非置換スチレンが好ましい。
代表的モノマーは、スチレン、α−メチルスチレン、ｐ
−ブロモスチレン、ビニルトルエン、１−ビニルナフタ
リン、アクリル酸メチル、メタクリル酸メチル、メタク
リル酸エチル、アクリル酸ｎ−ブチル、アクリル酸プロ
ピル及び他の、当業者に公知のものを含む。
−ブロモスチレン、ビニルトルエン、１−ビニルナフタ
リン、アクリル酸メチル、メタクリル酸メチル、メタク
リル酸エチル、アクリル酸ｎ−ブチル、アクリル酸プロ
ピル及び他の、当業者に公知のものを含む。
これらのモノマーは、疎水性（水にほとんど不溶性であ
ることを意味する、即ち、水１ａ＋１に３０■未満しか
壇けないことを意味する）である。スチレン及びビニル
トルエンは、特に有用な七ツマ−である。
ることを意味する、即ち、水１ａ＋１に３０■未満しか
壇けないことを意味する）である。スチレン及びビニル
トルエンは、特に有用な七ツマ−である。
前記群（ｂ）のモノマーは、非イオン性であるが、親水
性である。即ち、これらは水溶性又は水分散性（例えば
水１ｍｌに１００■より多量分散する）である。これら
は、一般に、可溶化する、帯電していない基、例えばヒ
ドロキシ基、アミド基（置換若しくは非置換）、環状ア
ミド、スルホンアミド等を１個以上有する。代表的モノ
マーは、アクリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−イソ
プロピルアクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリ
レート、２−ヒドロキシプロピルメタクリレート、２−
アクリルアミド−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロ
パンジオール、Ｎ−メチルメタクリルアミド、Ｎ−ビニ
ルピロリドン及び他の、当業者に公知のものを含む。ア
クリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルア
クリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレ−）及び
２−ヒドロキシエチルメタクリレートが特に有用であり
、アミド基を含むモノマーが最も好ましい。
性である。即ち、これらは水溶性又は水分散性（例えば
水１ｍｌに１００■より多量分散する）である。これら
は、一般に、可溶化する、帯電していない基、例えばヒ
ドロキシ基、アミド基（置換若しくは非置換）、環状ア
ミド、スルホンアミド等を１個以上有する。代表的モノ
マーは、アクリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−イソ
プロピルアクリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリ
レート、２−ヒドロキシプロピルメタクリレート、２−
アクリルアミド−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロ
パンジオール、Ｎ−メチルメタクリルアミド、Ｎ−ビニ
ルピロリドン及び他の、当業者に公知のものを含む。ア
クリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルア
クリルアミド、２−ヒドロキシエチルアクリレ−）及び
２−ヒドロキシエチルメタクリレートが特に有用であり
、アミド基を含むモノマーが最も好ましい。
前記群（ｃ）の有用な陰イオン性モノマーは、１個以上
の負に帯電する基、例えばカルボキシ基、スルホ基、ホ
スホノ基、スルフィノ基等を有するモノマー及び対応す
る塩を含む。モノマーは、１個以上のカルボキシ基を含
むのが好ましい。代表的モノマーは、アクリル酸、メタ
クリル酸、イタコン酸、２−アクリルアミド−２−メチ
ルプロパンスルホン酸、３−メタクリロイルオキシプロ
パン−１−スルホン酸、ビニルスルホン酸及びこれらの
酸のアルカリ金属塩及びアンモニウム塩並びにその他の
、当業者に公知のものを含む。アクリル酸、メタクリル
酸及びイタコン酸が特に有用である。
の負に帯電する基、例えばカルボキシ基、スルホ基、ホ
スホノ基、スルフィノ基等を有するモノマー及び対応す
る塩を含む。モノマーは、１個以上のカルボキシ基を含
むのが好ましい。代表的モノマーは、アクリル酸、メタ
クリル酸、イタコン酸、２−アクリルアミド−２−メチ
ルプロパンスルホン酸、３−メタクリロイルオキシプロ
パン−１−スルホン酸、ビニルスルホン酸及びこれらの
酸のアルカリ金属塩及びアンモニウム塩並びにその他の
、当業者に公知のものを含む。アクリル酸、メタクリル
酸及びイタコン酸が特に有用である。
本発明の実施に有用な代表的ポリマーは、ポリ（スチレ
ンーコーアクリルアミドーコーメタクリル酸）（８５：
１０：５重量比）、ポリ（スチレンーコーメタクリルア
ミドーコーメタクリル酸）（８５：１０：５重量比）、
ポリ（ビニルトルエンーコーＮ−イソプロビルアクリル
アミドーコーイタコン酸）（６５：２０：１５重量比）
、ポリ（アクリル酸ｎ−プチルーコースチレンーコーメ
タクリルアミドーコーメタクリル酸）（４５：４５：２
：８重量比）、ポリ （メタクリル酸メチルーコー２−
ヒドロキシエチルアクリレートーコーアクリル酸）（９
０：５：５重量比）、ポリ（アクリル酸ｎ−プチルーコ
ースチレンーコーアクリルアミドーコーメタクリル酸）
（５４：３８：５：３重量比）、ポリ（アクリル酸ｎ−
ブチル−コースチレンーコーアクリルアミドーコー２＝
アクリルアミド−２−メチルプロパン−１−スルホン酸
ナトリウム） （１５：５０：３０：５重量比）、及
びポリ （アクリル酸ｎ−プチルーコースチレンーコー
メタクリルアミドーコ−２−アクリルアミド−２−メチ
ルプロパン−１−スルホン酸ナトリウム）（２０：４５
：３０：５重量比）を含む。前記の最初のポリマーは、
本発明に使用するのに好ましいポリマーである。
ンーコーアクリルアミドーコーメタクリル酸）（８５：
１０：５重量比）、ポリ（スチレンーコーメタクリルア
ミドーコーメタクリル酸）（８５：１０：５重量比）、
ポリ（ビニルトルエンーコーＮ−イソプロビルアクリル
アミドーコーイタコン酸）（６５：２０：１５重量比）
、ポリ（アクリル酸ｎ−プチルーコースチレンーコーメ
タクリルアミドーコーメタクリル酸）（４５：４５：２
：８重量比）、ポリ （メタクリル酸メチルーコー２−
ヒドロキシエチルアクリレートーコーアクリル酸）（９
０：５：５重量比）、ポリ（アクリル酸ｎ−プチルーコ
ースチレンーコーアクリルアミドーコーメタクリル酸）
（５４：３８：５：３重量比）、ポリ（アクリル酸ｎ−
ブチル−コースチレンーコーアクリルアミドーコー２＝
アクリルアミド−２−メチルプロパン−１−スルホン酸
ナトリウム） （１５：５０：３０：５重量比）、及
びポリ （アクリル酸ｎ−プチルーコースチレンーコー
メタクリルアミドーコ−２−アクリルアミド−２−メチ
ルプロパン−１−スルホン酸ナトリウム）（２０：４５
：３０：５重量比）を含む。前記の最初のポリマーは、
本発明に使用するのに好ましいポリマーである。
螢光標識の製造に使用する、充填可能なポリマーラテッ
クスは、周知の乳化重合技術を用いて製造することがで
きる。一般に、これらは、１種以上の適切な界面活性剤
を含む水性媒体中に分散したモノマーの遊離基開始反応
を使用して製造される。
クスは、周知の乳化重合技術を用いて製造することがで
きる。一般に、これらは、１種以上の適切な界面活性剤
を含む水性媒体中に分散したモノマーの遊離基開始反応
を使用して製造される。
本発明の、標識された、生理学的に反応性の種は、ポリ
マー粒子の表面上への種の吸収を容易にするため適当な
時期（例えば７２時間以内）に螢光標識を生理学的に反
応性の種と混合することによって製造することができる
。また、適当な反応部位を生ずるように種及び粒子の一
方又は両方を化学的に変性することによってポリマー粒
子の表面に種を共有結合させることができる。代表的な
標識種の製造の詳細を下記の例１に示す。
マー粒子の表面上への種の吸収を容易にするため適当な
時期（例えば７２時間以内）に螢光標識を生理学的に反
応性の種と混合することによって製造することができる
。また、適当な反応部位を生ずるように種及び粒子の一
方又は両方を化学的に変性することによってポリマー粒
子の表面に種を共有結合させることができる。代表的な
標識種の製造の詳細を下記の例１に示す。
本発明の螢光標識された特異結合リガンドアナローグは
、特異結合免疫分析、特に、バックグラウンドから区別
するため特殊な検出信号の一時的分離を利用する分析法
に使用することができる。
、特異結合免疫分析、特に、バックグラウンドから区別
するため特殊な検出信号の一時的分離を利用する分析法
に使用することができる。
この免疫分析法においては、水性液体の試験試料を間欠
的に励起し、寿命の長い螢光標識がなお強く発光してい
るが、他の螢光源は崩壊している暗サイクルの間だけ、
情報を受理する。不連続的励起は、レーザーパルス、機
械的チョッピング又は試料を励起ビームの内外に移動さ
せる連続的励起ビーム等を含めて、種々の方法で達成す
ることができる。一般に、螢光免疫分析技術は、文献に
公知である。
的に励起し、寿命の長い螢光標識がなお強く発光してい
るが、他の螢光源は崩壊している暗サイクルの間だけ、
情報を受理する。不連続的励起は、レーザーパルス、機
械的チョッピング又は試料を励起ビームの内外に移動さ
せる連続的励起ビーム等を含めて、種々の方法で達成す
ることができる。一般に、螢光免疫分析技術は、文献に
公知である。
本発明の実施において、標識リガンドアナローグは、試
験試料中の未知リガンドの量を示す。標識リガンドアナ
ローグの結合又は未結合断片を測定することができる。
験試料中の未知リガンドの量を示す。標識リガンドアナ
ローグの結合又は未結合断片を測定することができる。
特異結合分析を実施するため、必要に応じて、公知技術
を使用し、結合したリガンド及び未結合のりガントの物
理的分離を実施することができる。
を使用し、結合したリガンド及び未結合のりガントの物
理的分離を実施することができる。
溶液分析においては、螢光標識された特異結合リガンド
アナローグは、一般に溶液１ｄ１当たり１■以下、好ま
しくは０．０１〜１■の濃度で存在する。測定すべきリ
ガンド（又は被分析物）に対応するレセプターは、一般
に溶液１ｄ１当たり１ｇ以下、好ましくは１０−６〜１
ｇの量で存在する。
アナローグは、一般に溶液１ｄ１当たり１■以下、好ま
しくは０．０１〜１■の濃度で存在する。測定すべきリ
ガンド（又は被分析物）に対応するレセプターは、一般
に溶液１ｄ１当たり１ｇ以下、好ましくは１０−６〜１
ｇの量で存在する。
他の物質、例えば緩衝剤、界面活性剤等を必要に応じて
適当な量で含んでいてよい。
適当な量で含んでいてよい。
本発明のリガンドアナローグ及び方法は、溶液分析及び
乾式分析に適用することができる。リガンドアナローグ
は、そのレセプターと一緒に、乾式又は溶液分析用の診
断試験キットの一部として提供することができる。溶液
分析には、キット成分を、所定量を有する個々の包装中
の凍結乾燥試薬として供給することができる。また、こ
れらを１回以上の分析に十分な大きさのびん又は包装に
入れた溶液として提供することができる。任意成分であ
る他の試薬は、分析を実施するため適当な分析用具又は
容器と一緒にキットとして供給することもできる。リガ
ンドアナローグを含む乾式分析要素（下記）を、診断用
キットの一部として供給することもできる。
乾式分析に適用することができる。リガンドアナローグ
は、そのレセプターと一緒に、乾式又は溶液分析用の診
断試験キットの一部として提供することができる。溶液
分析には、キット成分を、所定量を有する個々の包装中
の凍結乾燥試薬として供給することができる。また、こ
れらを１回以上の分析に十分な大きさのびん又は包装に
入れた溶液として提供することができる。任意成分であ
る他の試薬は、分析を実施するため適当な分析用具又は
容器と一緒にキットとして供給することもできる。リガ
ンドアナローグを含む乾式分析要素（下記）を、診断用
キットの一部として供給することもできる。
一般に、リガンドアナローグ、対応するレセプター及び
リガンド被分析物を含むと思われる試験試料を物理的に
接触させ、適当な容器（例えば試験ｔ、シャーレ、ビー
カー、キュベツト等）中で混合する。生ずる溶液を必要
に応じて、一定時間（例えば０．５〜４時間）３７℃以
下の温度でインキエベーションしてリガンドアナローグ
及び試験試料中のリガンドとレセプターとの複合体の形
成を促進させることができる。次に、結合した（即ち、
複合体を形成した）又は未結合の（即ち、複合体を形成
していない）標識の螢光を測定することによって試料を
評価する。このような評価は、肉眼又は適当な螢光検出
装置及び操作を用いて実施することができる。
リガンド被分析物を含むと思われる試験試料を物理的に
接触させ、適当な容器（例えば試験ｔ、シャーレ、ビー
カー、キュベツト等）中で混合する。生ずる溶液を必要
に応じて、一定時間（例えば０．５〜４時間）３７℃以
下の温度でインキエベーションしてリガンドアナローグ
及び試験試料中のリガンドとレセプターとの複合体の形
成を促進させることができる。次に、結合した（即ち、
複合体を形成した）又は未結合の（即ち、複合体を形成
していない）標識の螢光を測定することによって試料を
評価する。このような評価は、肉眼又は適当な螢光検出
装置及び操作を用いて実施することができる。
本発明方法は、更に、本発明の標識された、生理学的に
反応性の種を含む吸収性担持勧賞、即ち、自立性吸収性
又は吸水性物質の薄いシート、例えば口紙又はストリッ
プからなる乾式分析要素を用いて利用することができる
。このような要素は、適当な方法で固定された、分析前
は、対応するリガンドアナローグから分離されて保持さ
れた、特異結合分析用レセプターを含んでいてもよい。
反応性の種を含む吸収性担持勧賞、即ち、自立性吸収性
又は吸水性物質の薄いシート、例えば口紙又はストリッ
プからなる乾式分析要素を用いて利用することができる
。このような要素は、適当な方法で固定された、分析前
は、対応するリガンドアナローグから分離されて保持さ
れた、特異結合分析用レセプターを含んでいてもよい。
このような要素は、試験ストリップ、診断要素、浸漬ス
ティック、診断剤等として公知である。
ティック、診断剤等として公知である。
乾式分析要素に使用する場合、本発明のリガンドアナロ
ーグを吸収又は含浸によって適当な吸収性担持物質中に
混入するか、又は適当な吸収性物質上に被覆することが
できる。有用な担持物質は不溶性であり・、水又は生理
学的液体、例えば尿又は血清に触れたときにその構造的
一体性を保持する。有用な担持物質は、紙、多孔性粒状
構造体、セルロース、多孔性ポリマーフィルム、木材、
ガラス繊維、織布及び不織布（合成及び非合成）等から
製造することができる。このような要素を製造するため
有用な物質及び操作は、例えば米国特許第３．０９２．
４６５号、同第３，８０２．８４２号、同第３．９１５
，６４７号、同第３．９１７．４５３号、同第３．９３
６，３５７号、同第４，２４８．８２９号、同第４．２
５５．３８４号及び同第４．２７０．９２０号明細書並
びに英国特許第２．０５２．０５７号明細書により周知
である。
ーグを吸収又は含浸によって適当な吸収性担持物質中に
混入するか、又は適当な吸収性物質上に被覆することが
できる。有用な担持物質は不溶性であり・、水又は生理
学的液体、例えば尿又は血清に触れたときにその構造的
一体性を保持する。有用な担持物質は、紙、多孔性粒状
構造体、セルロース、多孔性ポリマーフィルム、木材、
ガラス繊維、織布及び不織布（合成及び非合成）等から
製造することができる。このような要素を製造するため
有用な物質及び操作は、例えば米国特許第３．０９２．
４６５号、同第３，８０２．８４２号、同第３．９１５
，６４７号、同第３．９１７．４５３号、同第３．９３
６，３５７号、同第４，２４８．８２９号、同第４．２
５５．３８４号及び同第４．２７０．９２０号明細書並
びに英国特許第２．０５２．０５７号明細書により周知
である。
本発明の乾式分析要素は、吸収性担持物質として少なく
とも１個の拡散帯域を有するのが好ましい。この帯域は
、自立性（即ち、その一体性を保持するのに十分に硬い
物質から成る）であってよいが、別個の非多孔性支持体
上に担持するのが好ましい、このような支持体は、任意
の適当な寸法安定性の、好ましくは約２００〜約９００
ｎｍの波長の電磁線を透過する透明な（即ち、輻射線透
過性の）物質であってよい。有用な支持体物質は紙、金
属箔、ポリスチレン、ポリエステル〔例えばポリ （エ
チレンテレフタレート）〕、ポリカーボネート、セルロ
ースエステル（例えば酢酸セルロース）等を含む。
とも１個の拡散帯域を有するのが好ましい。この帯域は
、自立性（即ち、その一体性を保持するのに十分に硬い
物質から成る）であってよいが、別個の非多孔性支持体
上に担持するのが好ましい、このような支持体は、任意
の適当な寸法安定性の、好ましくは約２００〜約９００
ｎｍの波長の電磁線を透過する透明な（即ち、輻射線透
過性の）物質であってよい。有用な支持体物質は紙、金
属箔、ポリスチレン、ポリエステル〔例えばポリ （エ
チレンテレフタレート）〕、ポリカーボネート、セルロ
ースエステル（例えば酢酸セルロース）等を含む。
多孔性拡散帯域は、米国特許第４，２９２，２７２号、
同第３．９９２．１５８号、同第４．２５８．００１号
及び同第４．４３０．４３６号明細書並びに日本特公昭
５７ （１９８２）−１０１７６０号公報に記載されて
いるような、任意の適当な繊維状若しくは非繊維状物質
又はその一方若しくは両方の混合物から製造することが
できる。
同第３．９９２．１５８号、同第４．２５８．００１号
及び同第４．４３０．４３６号明細書並びに日本特公昭
５７ （１９８２）−１０１７６０号公報に記載されて
いるような、任意の適当な繊維状若しくは非繊維状物質
又はその一方若しくは両方の混合物から製造することが
できる。
拡散帯域は、等方性に多孔性（即ち、粒子、繊維、ポリ
マーストランド等の間の連続空間又は孔によって作られ
るように、帯域の各方向で多孔度が同一である）である
のが好ましい。
マーストランド等の間の連続空間又は孔によって作られ
るように、帯域の各方向で多孔度が同一である）である
のが好ましい。
要素は、１個以上の試薬帯域、拡散帯域、記録帯域、媒
染帯域、輻射線遮断若しくはフィルタ帯域、下塗帯域、
バリヤ帯域、緩衝剤帯域等を含んでいてよい、帯域は、
一般に、相互に液体接触している。このことは、液体、
試薬及び反応生成物が、隣接帯域の重なる部分の間を通
過しうろことを意味する。帯域は別々に被覆された重な
った層であるのが好ましいが、２以上の帯域が一つの層
内の別個の領域であってもよい。
染帯域、輻射線遮断若しくはフィルタ帯域、下塗帯域、
バリヤ帯域、緩衝剤帯域等を含んでいてよい、帯域は、
一般に、相互に液体接触している。このことは、液体、
試薬及び反応生成物が、隣接帯域の重なる部分の間を通
過しうろことを意味する。帯域は別々に被覆された重な
った層であるのが好ましいが、２以上の帯域が一つの層
内の別個の領域であってもよい。
本発明の螢光標識リガンドアナローグは、要素の任意の
帯域に混入することができる。また、これを、要素にそ
の後に施す試験試料に添加するか又はリガンドアナロー
グを試験試料を含む要素に別個に（その後に又は同時に
）添加することができる。測定すべきリガンドに対応す
るレセプターは、要素の任意の帯域に固定された形で存
在するか、又は要素に試験試料と同時に添加することも
できる。リガンドアナローグ及びレセプターを要素に混
入する場合には、これらを、分析を実施するまで、相互
に隔てて保持しなければならない。
帯域に混入することができる。また、これを、要素にそ
の後に施す試験試料に添加するか又はリガンドアナロー
グを試験試料を含む要素に別個に（その後に又は同時に
）添加することができる。測定すべきリガンドに対応す
るレセプターは、要素の任意の帯域に固定された形で存
在するか、又は要素に試験試料と同時に添加することも
できる。リガンドアナローグ及びレセプターを要素に混
入する場合には、これらを、分析を実施するまで、相互
に隔てて保持しなければならない。
本発明の要素において、リガンドアナローグの被覆量は
広範に変動することができるが、一般にＬ ｇ／ｒｄ以
下、好ましくは１０−” 〜１ ｇ／ｎ？の被覆量で存
在する。レセプターは、２００ ｇ／ｌ以下、好ましく
は４０〜２００ ｇ／ｒｒｒの被覆量で存在することが
できる。種々の他の望ましいが、任意成分の試薬及び添
加剤が要素中に当業者に公知の量で存在することができ
る。このような物質は、反応試薬、界面活性剤、緩衝剤
、結合剤、顔料、活性剤等を含む。
広範に変動することができるが、一般にＬ ｇ／ｒｄ以
下、好ましくは１０−” 〜１ ｇ／ｎ？の被覆量で存
在する。レセプターは、２００ ｇ／ｌ以下、好ましく
は４０〜２００ ｇ／ｒｒｒの被覆量で存在することが
できる。種々の他の望ましいが、任意成分の試薬及び添
加剤が要素中に当業者に公知の量で存在することができ
る。このような物質は、反応試薬、界面活性剤、緩衝剤
、結合剤、顔料、活性剤等を含む。
分析方法に応じて異なる種々の要素を本発明により製造
することができる。要素を、任意の所望の幅の長いテー
プ、シート、スライド又はチップを含めて種々の形態に
構成することができる。
することができる。要素を、任意の所望の幅の長いテー
プ、シート、スライド又はチップを含めて種々の形態に
構成することができる。
本発明の分析は、手動で又は自動的に行うことができる
。一般に、乾式要素を使用する際には、供給ロール、チ
ップパケット又は他の供給源から要素を取り、これを、
試験試料、試薬及びレセプターが要素内で混合されるよ
うに、レセプターの存在で試験すべき液体試料（例えば
１〜１００μｍ）と接触させることによってリガンドを
測定する。このような接触は、任意の適当な方法で、例
えば、要素を試料中に浸漬又は含浸するか、又は適当な
分散手段を用いて一滴の試料のスポットを手又は機械で
要素に付ける。
。一般に、乾式要素を使用する際には、供給ロール、チ
ップパケット又は他の供給源から要素を取り、これを、
試験試料、試薬及びレセプターが要素内で混合されるよ
うに、レセプターの存在で試験すべき液体試料（例えば
１〜１００μｍ）と接触させることによってリガンドを
測定する。このような接触は、任意の適当な方法で、例
えば、要素を試料中に浸漬又は含浸するか、又は適当な
分散手段を用いて一滴の試料のスポットを手又は機械で
要素に付ける。
試料を施した後、試験結果を得るのを促進又は容易にす
るため望ましい任意のコンディショニング処理、例えば
インキュベーション、加熱等に要素をさらす。リガンド
の測定は、結合した（即ち、複合体を形成した）又は未
結合の（即ち、複合体を形成していない）標識リガンド
アナローグの螢光を測定することによって達成される。
るため望ましい任意のコンディショニング処理、例えば
インキュベーション、加熱等に要素をさらす。リガンド
の測定は、結合した（即ち、複合体を形成した）又は未
結合の（即ち、複合体を形成していない）標識リガンド
アナローグの螢光を測定することによって達成される。
叉施■
下記の実施例は、本発明の詳細な説明するためのもので
ある。これらの実施例において、物質は下記のようにし
て得られたものである： ＩＣＩアメリカ社（ＩＣＩ
Ａｍｅｒｉｃａｓ、 Ｉｎｃ。、アメリカ合衆国プラウ
エア州つィルミントン）からＢＲＩＪ ９８界面活性剤
、オリン社（Ｏｌｉｎ Ｃｏｒｐ、、アメリカ合衆国コ
ネクチカフト州スタンフォード）からサーファ’） タ
フ ） （ＳＵＲＦＡＣＴＡＮＴ） １００界面活性剤
、マイルス・リサーチ・プロダクツ社（Ｍｉｌｅｓ Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ、アメリカ合衆国イン
ディアナ用ニルカート）からウシガンマグロブリン、バ
イオラッド・ラボラトリイーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓｓアメリカ合衆国カリフォルニア
州リッチモンド）から１−シすロヘキシル−３−（２−
モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−）ルエン
スルホネートを得、残りのものは、公知技術を用いて製
造したか、又はイーストマン・オーガニック・ケミカル
ス（アメリカ合衆国ニューヨーク州ロチェスター）から
得たものである。
ある。これらの実施例において、物質は下記のようにし
て得られたものである： ＩＣＩアメリカ社（ＩＣＩ
Ａｍｅｒｉｃａｓ、 Ｉｎｃ。、アメリカ合衆国プラウ
エア州つィルミントン）からＢＲＩＪ ９８界面活性剤
、オリン社（Ｏｌｉｎ Ｃｏｒｐ、、アメリカ合衆国コ
ネクチカフト州スタンフォード）からサーファ’） タ
フ ） （ＳＵＲＦＡＣＴＡＮＴ） １００界面活性剤
、マイルス・リサーチ・プロダクツ社（Ｍｉｌｅｓ Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ、アメリカ合衆国イン
ディアナ用ニルカート）からウシガンマグロブリン、バ
イオラッド・ラボラトリイーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓｓアメリカ合衆国カリフォルニア
州リッチモンド）から１−シすロヘキシル−３−（２−
モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−）ルエン
スルホネートを得、残りのものは、公知技術を用いて製
造したか、又はイーストマン・オーガニック・ケミカル
ス（アメリカ合衆国ニューヨーク州ロチェスター）から
得たものである。
Ｊ！ＬＬ： 貴ｌ檄識夏製造
添加フラスコを装着した１Ｎのフラスコ中でサーフアク
タン）ＩＯＧ界面活性剤（１ｇ）及び水（３５０ｍｌ）
を緩和に攪拌しながら９５℃に加熱した。添加フラスコ
中でスチレン（８５ｇ）、アクリルアミド（１０ｇ）、
メタクリル酸（５ｇ）、Ｎａ２Ｓ２０５ （０，１５
ｇ）及びＨ２０（５０１１１）の混合物をサーファクタ
ントＩＯＣ界面活性剤（５０％）Ｉｇを用いて十分に乳
化し、内容物を常に攪拌しながら保持した。Ｋ２ Ｓ２
０ｓ （０，７５ｇ）及びＮａ２ Ｓ２０Ｓ （０
゜１５ｇ）を反応フラスコ中に加え、次いで、直ちに乳
化したモノマー混合物を添加することによって重合を開
始させた。
タン）ＩＯＧ界面活性剤（１ｇ）及び水（３５０ｍｌ）
を緩和に攪拌しながら９５℃に加熱した。添加フラスコ
中でスチレン（８５ｇ）、アクリルアミド（１０ｇ）、
メタクリル酸（５ｇ）、Ｎａ２Ｓ２０５ （０，１５
ｇ）及びＨ２０（５０１１１）の混合物をサーファクタ
ントＩＯＣ界面活性剤（５０％）Ｉｇを用いて十分に乳
化し、内容物を常に攪拌しながら保持した。Ｋ２ Ｓ２
０ｓ （０，７５ｇ）及びＮａ２ Ｓ２０Ｓ （０
゜１５ｇ）を反応フラスコ中に加え、次いで、直ちに乳
化したモノマー混合物を添加することによって重合を開
始させた。
モノマーの添加は１５〜２０分かけて行い、重合を更に
２時間続けた。生ずる充填可能なラテックスを次いで室
温に冷却し、口過した。蒸留水に対して約１００時間透
析した後、ラテックスは８．５％の総固形分含有率、３
．６のｐｉ及び６３．２ ｄｙｎｅ／ｃｍの表面張力を
有することが判った。粒径は全く均一（直径０．０９〜
０．１μｍ）であった。
２時間続けた。生ずる充填可能なラテックスを次いで室
温に冷却し、口過した。蒸留水に対して約１００時間透
析した後、ラテックスは８．５％の総固形分含有率、３
．６のｐｉ及び６３．２ ｄｙｎｅ／ｃｍの表面張力を
有することが判った。粒径は全く均一（直径０．０９〜
０．１μｍ）であった。
溶解ポリマー及び余剰の界面活性剤をラテックスから除
去するため、３００，０００の分子量をカット−オフす
る膜を有する市販の透析装置を用いて透析／限外口過の
操作を実施した。約１００回、操作を行った後、ラテッ
クスを限外口過によって総固形分約８％に濃縮した。ま
た、市販のベックマンの調製用超遠心分離を４０００Ｏ
ｒｐｍで真空下に（５℃）、１時間作動し、上澄液をデ
カントして、遠心分離及び再分散の操作を数回繰り返す
ことによってラテックスを精製することもできる。
去するため、３００，０００の分子量をカット−オフす
る膜を有する市販の透析装置を用いて透析／限外口過の
操作を実施した。約１００回、操作を行った後、ラテッ
クスを限外口過によって総固形分約８％に濃縮した。ま
た、市販のベックマンの調製用超遠心分離を４０００Ｏ
ｒｐｍで真空下に（５℃）、１時間作動し、上澄液をデ
カントして、遠心分離及び再分散の操作を数回繰り返す
ことによってラテックスを精製することもできる。
ポリマー粒子を蒸留水で再分散し、操作を更に３回又は
４回繰り返すことができる。下記の第１表は、分析した
水相ポリマーに対する透析又は限外口過の作用を示す。
４回繰り返すことができる。下記の第１表は、分析した
水相ポリマーに対する透析又は限外口過の作用を示す。
第１表
水相中のメタ
に皿展公旦 水■ヱユヱニ％？見土奴Ｘ烹２０．２（
原） ２．０７ ０．３５１３．１（
透析後＞ ０．０３４ ０＊水相中に溶解し
ている遊離又は重合したメタクリル酸 前記の結果は、精製後には遊離メタクリル酸が水相にほ
とんど残っていないことを示す。
原） ２．０７ ０．３５１３．１（
透析後＞ ０．０３４ ０＊水相中に溶解し
ている遊離又は重合したメタクリル酸 前記の結果は、精製後には遊離メタクリル酸が水相にほ
とんど残っていないことを示す。
ユーロピウム−テノイルトリフルオロアセトネート０．
８６９５ｇ（１０−３モル）及びトリオクチルホスフィ
ンオキシト０．７７３２ｇ （２Ｘ１０−３モル）をア
セトンに溶かし、更にアセトンを用いて総重量を３２８
．５ｇに調節することによって０．５重量％のユーロピ
ウムキレートのアセトン溶液を製造した。
８６９５ｇ（１０−３モル）及びトリオクチルホスフィ
ンオキシト０．７７３２ｇ （２Ｘ１０−３モル）をア
セトンに溶かし、更にアセトンを用いて総重量を３２８
．５ｇに調節することによって０．５重量％のユーロピ
ウムキレートのアセトン溶液を製造した。
得られた溶液５０ｇをアセトン２０ｍ１で希釈した。ポ
リマー５ｇを含む精製ラテックスを水で６５、６ ｇに
希釈し、次いで緩和に攪拌しながらＥｕ＋３キレート溶
液に添加した。その後、アセトンを真空下に６０℃で除
去した。粗い紙を通して口過した後、良好な分散液が得
られた。凝固物は集められなかった。最終分散液の安定
な螢光標識は、８・０重量％であ−た・
以下余白ｕｉ：ｇの ゛の替′ム 例１の操作により、固形分２１．６％を有するポリ （
スチレンーコーメタクリルアミドーコーメタクリル酸）
（８５：１０：５重量比）の安定なラテックスを得た。
リマー５ｇを含む精製ラテックスを水で６５、６ ｇに
希釈し、次いで緩和に攪拌しながらＥｕ＋３キレート溶
液に添加した。その後、アセトンを真空下に６０℃で除
去した。粗い紙を通して口過した後、良好な分散液が得
られた。凝固物は集められなかった。最終分散液の安定
な螢光標識は、８・０重量％であ−た・
以下余白ｕｉ：ｇの ゛の替′ム 例１の操作により、固形分２１．６％を有するポリ （
スチレンーコーメタクリルアミドーコーメタクリル酸）
（８５：１０：５重量比）の安定なラテックスを得た。
ラテックスを固形分１０％に希釈し、４５０００ｒｐｍ
で遠心分離して、水相にメタクリル酸をほとんど含まな
い精製ラテックスを得た。ユーロピウムキレートを例１
に記載した操作を用いてラテックス粒子中に導入して安
定な螢光標識を得た。
で遠心分離して、水相にメタクリル酸をほとんど含まな
い精製ラテックスを得た。ユーロピウムキレートを例１
に記載した操作を用いてラテックス粒子中に導入して安
定な螢光標識を得た。
勇主： 織リガンドアナローグの製゛螢光標識チロ
キシンアナローグの製造は、２工程操作を含む：即ち、
Ｌ−チロキシン−ウシガンマグロブリン接合体を合成し
、次いで、該接合体を例１で製造した螢光ラテックス標
識に結合させる。
キシンアナローグの製造は、２工程操作を含む：即ち、
Ｌ−チロキシン−ウシガンマグロブリン接合体を合成し
、次いで、該接合体を例１で製造した螢光ラテックス標
識に結合させる。
使用する成分のモル比に応じて、ハプテン：蛋白質の比
を例えば１：１．２：１等に変動させて接合体を製造す
ることができる。１：１比を有するハプテン：蛋白質接
合体の説明を以下に記載す、る。
を例えば１：１．２：１等に変動させて接合体を製造す
ることができる。１：１比を有するハプテン：蛋白質接
合体の説明を以下に記載す、る。
Ｌ−チロキシン（Ｔ４）とウシガンマグロブリン（ＢＧ
Ｇ）とのモル比を市販のカリ−（ｃａｒｙ）２１９型分
光光度計での分光光度分析又は沃素分析によって測定し
た。沃素のパーセントは、反応活性化分析によって測定
した。遊離チロキシンに関する液体クロマトグラフィー
分析を市販のりクロソーブ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ）
１１ ＃ＲＰ８型４．６Ｘ２５０ｍｍのカラムで移動相
として２％燐酸及びアセトニトリルを用いて実施した。
Ｇ）とのモル比を市販のカリ−（ｃａｒｙ）２１９型分
光光度計での分光光度分析又は沃素分析によって測定し
た。沃素のパーセントは、反応活性化分析によって測定
した。遊離チロキシンに関する液体クロマトグラフィー
分析を市販のりクロソーブ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ）
１１ ＃ＲＰ８型４．６Ｘ２５０ｍｍのカラムで移動相
として２％燐酸及びアセトニトリルを用いて実施した。
Ａ、Ｔ、−ＢＧＧの直接結合
下記の等式によりアミド結合を形成させることによって
Ｌ−チロキシンを直接ＢＧＧに結合させる： Ｌ−チロキシン−ＣＯＯＨ＋ Ｈ２Ｎ−ＢＧＧ攪拌し
た脱イオン水３００ｍ１中にＢＧＧｌ、０ｇ（６゜７Ｘ
１０−”モル）を溶解させた。溶液のｐＨを００３Ｎ水
酸化ナトリウムで７．５に調節した。
Ｌ−チロキシンを直接ＢＧＧに結合させる： Ｌ−チロキシン−ＣＯＯＨ＋ Ｈ２Ｎ−ＢＧＧ攪拌し
た脱イオン水３００ｍ１中にＢＧＧｌ、０ｇ（６゜７Ｘ
１０−”モル）を溶解させた。溶液のｐＨを００３Ｎ水
酸化ナトリウムで７．５に調節した。
Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍ１中にチロキシン
０．０８ ｇ （１，Ｏｘ １０−’モル）を添加した
。
０．０８ ｇ （１，Ｏｘ １０−’モル）を添加した
。
０、３ Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて全部のチロキ
シンが溶解するまで攪拌混合物のｐＨを上昇させた。１
−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエチル）カル
ボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネーｔ−０，０８
ｇ （１，９ｘ １０−４モル）を攪拌した蛋白質溶液
に添加したのち、チロキシン溶液を満願した。反応混合
物のｐＨを添加の間７．５〜８．０に保持し、室温でｐ
Ｈ７，５で２４時間攪拌し、流れる蒸溜水に対して４８
時間透析した。透析を１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ
）溶液４Ｉｔに対して２４時間続け、次いで、流れる蒸
留水に対して１時間続けた。凍結乾燥した接合体は０．
８５ ｇであった０分光光度分析によりチロキシン：Ｂ
ＧＧのモル比は３と測定された。
シンが溶解するまで攪拌混合物のｐＨを上昇させた。１
−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエチル）カル
ボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネーｔ−０，０８
ｇ （１，９ｘ １０−４モル）を攪拌した蛋白質溶液
に添加したのち、チロキシン溶液を満願した。反応混合
物のｐＨを添加の間７．５〜８．０に保持し、室温でｐ
Ｈ７，５で２４時間攪拌し、流れる蒸溜水に対して４８
時間透析した。透析を１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ
）溶液４Ｉｔに対して２４時間続け、次いで、流れる蒸
留水に対して１時間続けた。凍結乾燥した接合体は０．
８５ ｇであった０分光光度分析によりチロキシン：Ｂ
ＧＧのモル比は３と測定された。
Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド４０ｍ１及び脱イオン水
１２０ｍ１から成る攪拌混合物中に接合体の試料０．４
ｇを溶解させた。溶液をＰＨ７，５の蒸留水４２（８−
アニリノ−１−ナフタリンスルホン酸４゜５ｇを含む）
に対して４８時間透析し、次いで流れる蒸留水に対して
７２時間透析した。透析物を凍結乾燥して、接合体０．
３７ ｇを得た。チロキシン： ＢＧＧ＝１に対して、
沃素の分析計算値は０．３３である。分析実測値は０．
２２である。遊離チロキシン含有率は、液体クロマトグ
ラフィー分析により０．１％未満と測定された。
１２０ｍ１から成る攪拌混合物中に接合体の試料０．４
ｇを溶解させた。溶液をＰＨ７，５の蒸留水４２（８−
アニリノ−１−ナフタリンスルホン酸４゜５ｇを含む）
に対して４８時間透析し、次いで流れる蒸留水に対して
７２時間透析した。透析物を凍結乾燥して、接合体０．
３７ ｇを得た。チロキシン： ＢＧＧ＝１に対して、
沃素の分析計算値は０．３３である。分析実測値は０．
２２である。遊離チロキシン含有率は、液体クロマトグ
ラフィー分析により０．１％未満と測定された。
Ｂ、ＢＧＧへのチロキシンの５）的結合また、下記の等
式によりＢＧＧの炭水化物部分に結合したトリエチレン
テトラミン連鎖延長剤を介してＢＧＧにＴ４を結合させ
た： ＢＧＧ ＋ １０４− −一ゆＢＧＧ−ＣＨ
Ｂ ＣＧ −ＣＨ＋Ｈ２Ｎ （ｃＨ２ＣＨ２Ｎ Ｈ）２
ＣＨ２ＣＨ２Ｎ ＨＢ Ｇ Ｇ −ＣＨ＝ Ｎ （ｃ
Ｈ２ＣＨ２Ｎ Ｈ）２ ＣＨ２ＣＨ２Ｎ Ｈ３Ｐ−Ｎ＝
Ｃ＝Ｎ−Ｒ ＋Ｌ−チロキシンーＣＯＯＨ−−−−一一一一→以下金
白 ＢＧＧ−ＣＨ＝Ｎ （ｃＨ２ＣＨ２Ｎ Ｈ）２ＣＨ２
ＣＨ２ＮＨＣＬ−チロキシン 酢酸ナトリウム緩衝液（０，１モル、ｐＨ８，０）２０
ｍｌ中にＢＧＧｏ、５ｇ（３゜６ Ｘ １０−”モル）
を溶解させた。攪拌溶液にｐｕｓ、ｏの０．０２モル過
沃素酸ナトリウム溶液４０１１を加えた。反応混合物を
室温で３時間攪拌し、次いでエチレングリコール３Ｉｌ
ｌｌを加え、攪拌を４５分続けた。
式によりＢＧＧの炭水化物部分に結合したトリエチレン
テトラミン連鎖延長剤を介してＢＧＧにＴ４を結合させ
た： ＢＧＧ ＋ １０４− −一ゆＢＧＧ−ＣＨ
Ｂ ＣＧ −ＣＨ＋Ｈ２Ｎ （ｃＨ２ＣＨ２Ｎ Ｈ）２
ＣＨ２ＣＨ２Ｎ ＨＢ Ｇ Ｇ −ＣＨ＝ Ｎ （ｃ
Ｈ２ＣＨ２Ｎ Ｈ）２ ＣＨ２ＣＨ２Ｎ Ｈ３Ｐ−Ｎ＝
Ｃ＝Ｎ−Ｒ ＋Ｌ−チロキシンーＣＯＯＨ−−−−一一一一→以下金
白 ＢＧＧ−ＣＨ＝Ｎ （ｃＨ２ＣＨ２Ｎ Ｈ）２ＣＨ２
ＣＨ２ＮＨＣＬ−チロキシン 酢酸ナトリウム緩衝液（０，１モル、ｐＨ８，０）２０
ｍｌ中にＢＧＧｏ、５ｇ（３゜６ Ｘ １０−”モル）
を溶解させた。攪拌溶液にｐｕｓ、ｏの０．０２モル過
沃素酸ナトリウム溶液４０１１を加えた。反応混合物を
室温で３時間攪拌し、次いでエチレングリコール３Ｉｌ
ｌｌを加え、攪拌を４５分続けた。
反応混合物にトリエチレンテトラミン（２ｍｌ）を加え
、攪拌を室温で７２時間続けた。硼水素化ナトリウム（
０，４ｇ）を加え、攪拌を２時間続けた。反応混合物を
流れる蒸留水に対して４８時間透析した。
、攪拌を室温で７２時間続けた。硼水素化ナトリウム（
０，４ｇ）を加え、攪拌を２時間続けた。反応混合物を
流れる蒸留水に対して４８時間透析した。
透析物を１５０ｍ１に希釈し、１−シクロへキシル−３
−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−
１−ルエンスルホネートＯ６０６ｇ（１゜４Ｘ１０−４
モル）を加えた。カルボジイミドを溶解した後、反応混
合物のｐＨを０６３Ｎ水酸化ナトリウム溶液で７゜５に
調節し、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２０
ｍｌに溶かしたチロキシン０゜Ｏｌｇ（１゜２Ｘ１０−
Ｓモル）を満願した（ＤＭＦにチロキシンを溶解させる
のに０．３Ｎ水酸化ナトリウムの添加が必要であった）
。添加の間、反応混合物のｐＨを希塩酸の添加により７
．５に維持した。更に０．０５ ｇのカルボジイミドを
添加し、反応混合物を室温で１８時間攪拌した。反応混
合物を蒸留水４１に対して４８時間、次いで１％ＢＳＡ
溶液に対して７２時間透析した。凍結乾燥した生成物は
、０．３９ ｇであった。チロキシン：ＢＧＧのモル比
２に対して沃素の分析計算値は０．６７であった。分析
実測値は０．５６であった。
−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−
１−ルエンスルホネートＯ６０６ｇ（１゜４Ｘ１０−４
モル）を加えた。カルボジイミドを溶解した後、反応混
合物のｐＨを０６３Ｎ水酸化ナトリウム溶液で７゜５に
調節し、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２０
ｍｌに溶かしたチロキシン０゜Ｏｌｇ（１゜２Ｘ１０−
Ｓモル）を満願した（ＤＭＦにチロキシンを溶解させる
のに０．３Ｎ水酸化ナトリウムの添加が必要であった）
。添加の間、反応混合物のｐＨを希塩酸の添加により７
．５に維持した。更に０．０５ ｇのカルボジイミドを
添加し、反応混合物を室温で１８時間攪拌した。反応混
合物を蒸留水４１に対して４８時間、次いで１％ＢＳＡ
溶液に対して７２時間透析した。凍結乾燥した生成物は
、０．３９ ｇであった。チロキシン：ＢＧＧのモル比
２に対して沃素の分析計算値は０．６７であった。分析
実測値は０．５６であった。
Ｃ９識への１人 の結合
２：ｌ又は１：１のチロキシンｅ ＢＧＧ比を有する、
直接結合した接合体を、蛋白質のアミノ基とラテックス
上のカルボン酸基との間でアミド結合を形成させること
によって例１の標識に結合させた。縮合剤としてカルボ
ジイミドを使用した。
直接結合した接合体を、蛋白質のアミノ基とラテックス
上のカルボン酸基との間でアミド結合を形成させること
によって例１の標識に結合させた。縮合剤としてカルボ
ジイミドを使用した。
接合体ニラテックスのモル比を反応混合物中で下記の第
■表に示したように１７．５〜１４０の間で変動させた
。ラテックスの表面上の未反応のカルボン酸基を、ラテ
ックスと接合体との反応後にエタノールアミンで処理す
ることによって遮断した。
■表に示したように１７．５〜１４０の間で変動させた
。ラテックスの表面上の未反応のカルボン酸基を、ラテ
ックスと接合体との反応後にエタノールアミンで処理す
ることによって遮断した。
ｐＨ７，７に調節した脱イオン水２４ｍ１中に、例１か
らの標識５．３ｍ１（固形分８％、３゜２Ｘ１０−９モ
ル）を添加した。攪拌懸濁液のｐＨを７．７に再び調節
し、１−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエチル
）−カルボジイミドメト−ｐ −１ルエンスルホネート
０゜００８４ｇ （１，９ｘｌＯ−Ｓモル）を添加し、
次いでチロキシン−ＢＧＧｏ、０６８ｇ（４，５Ｘ１０
−７モル）を添加した。反応混合物を１１°Ｃで４８時
間振盪した。エタノールアミン（０，１＋ｗｌ）を加え
、振盪を２４時間続けた。反応混合物を２．５Ｘ２４ｃ
ｍのバイオ−ゲル（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ ）Ａ５Ｍクロマト
グラフィーカラムに入れ、ｐＨ７の水で溶離した。クロ
マトグラフィーを繰り返した。
らの標識５．３ｍ１（固形分８％、３゜２Ｘ１０−９モ
ル）を添加した。攪拌懸濁液のｐＨを７．７に再び調節
し、１−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエチル
）−カルボジイミドメト−ｐ −１ルエンスルホネート
０゜００８４ｇ （１，９ｘｌＯ−Ｓモル）を添加し、
次いでチロキシン−ＢＧＧｏ、０６８ｇ（４，５Ｘ１０
−７モル）を添加した。反応混合物を１１°Ｃで４８時
間振盪した。エタノールアミン（０，１＋ｗｌ）を加え
、振盪を２４時間続けた。反応混合物を２．５Ｘ２４ｃ
ｍのバイオ−ゲル（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ ）Ａ５Ｍクロマト
グラフィーカラムに入れ、ｐＨ７の水で溶離した。クロ
マトグラフィーを繰り返した。
溶離液をファツトマン（Ｗｈａｔｍａｎ ） Ｎｌ １
０紙で２回口過し、市販の限外口過装置（０，０５μｍ
膜）で濃縮した。生成物を濃縮の間、ｐ＋＋７の水２０
０ｍ１で洗浄した（１回５０ｍ１ずつ）。ラテックスの
最終容量は、固形分１．９％を有する９ｍｌであった。
０紙で２回口過し、市販の限外口過装置（０，０５μｍ
膜）で濃縮した。生成物を濃縮の間、ｐ＋＋７の水２０
０ｍ１で洗浄した（１回５０ｍ１ずつ）。ラテックスの
最終容量は、固形分１．９％を有する９ｍｌであった。
下記の第■表に、種々の接合体ニラテックスの比でラテ
ックス粒子に接合体を結合させた結果を示す。
ックス粒子に接合体を結合させた結果を示す。
第■表
２ １４０ ３６ ０．２３０．１０２
７０ ９５ ０．１１０．０２２ ３５
９７ ０．０６０．０４２ １７．５ ６Ｂ
０．０３０．０１１ １４０ ６５ ０．２
３０．０２１ １７．５ ３７ ０．０３０．
０２以下衾白 この免疫試薬をチロキシン−抗体と最適に反応させるに
は、アミノ酸分子で、蛋白質のその部分上にラテックス
標識の表面と接触して存在するのはアミノ酸分子の全部
ではないように、蛋白質上のチロキシン（抗原）を分布
させる。遊離アミノ酸（蛋白質に共有結合していないア
ミノ酸）が免疫化学的反応を妨害しうるので、遊離し一
チロキシンからの接合体の精製を実施した。
７０ ９５ ０．１１０．０２２ ３５
９７ ０．０６０．０４２ １７．５ ６Ｂ
０．０３０．０１１ １４０ ６５ ０．２
３０．０２１ １７．５ ３７ ０．０３０．
０２以下衾白 この免疫試薬をチロキシン−抗体と最適に反応させるに
は、アミノ酸分子で、蛋白質のその部分上にラテックス
標識の表面と接触して存在するのはアミノ酸分子の全部
ではないように、蛋白質上のチロキシン（抗原）を分布
させる。遊離アミノ酸（蛋白質に共有結合していないア
ミノ酸）が免疫化学的反応を妨害しうるので、遊離し一
チロキシンからの接合体の精製を実施した。
ｕｉ： の ２ の 工
、螢光標識の使用を示すため、蛋白質被分析物（
抗原）としてウシガンマグロブリン（ＢＧＧ）を使用し
た。
、螢光標識の使用を示すため、蛋白質被分析物（
抗原）としてウシガンマグロブリン（ＢＧＧ）を使用し
た。
°へのＢＧＧの Ａ
ｐＨ７，７に調節した攪拌脱イオン水４８ｍ１中にウシ
ガンマグロブリン（０，１３６ｇ、９ｘｌＯ−７モル）
を溶かした。攪拌溶液に１−シクロヘキシル−３−（２
−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエ
ンスルホネート（０，０１６８ｇ、３．９Ｘ１０−Ｓモ
ル）、次いで、例１からの標識（固形分８％）１０．６
ｎ＋１を添加した。攪拌懸濁液のｐＨを７．７に再調節
し、混合物を１１℃で２４時間振盪した。
ガンマグロブリン（０，１３６ｇ、９ｘｌＯ−７モル）
を溶かした。攪拌溶液に１−シクロヘキシル−３−（２
−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエ
ンスルホネート（０，０１６８ｇ、３．９Ｘ１０−Ｓモ
ル）、次いで、例１からの標識（固形分８％）１０．６
ｎ＋１を添加した。攪拌懸濁液のｐＨを７．７に再調節
し、混合物を１１℃で２４時間振盪した。
固体のウシ血清アルブミン（０，１２ｇ）を添加し、反
応混合物を１１℃で更に２４時間振盪した。
応混合物を１１℃で更に２４時間振盪した。
次いで、反応混合物を２．５Ｘ２５Ｃ１１のパイオーゲ
ルＡ５Ｍクロマトグラフィーカラムに通し、ｐＨ７の水
を用いてラテックスを溶離した。新しく調製したカラム
を用いて、カラム操作を繰り返した。
ルＡ５Ｍクロマトグラフィーカラムに通し、ｐＨ７の水
を用いてラテックスを溶離した。新しく調製したカラム
を用いて、カラム操作を繰り返した。
溶離液をファツトフッ１１１１口紙で２回口遇し、市販
の限外口過装置（０，０５μｍ膜）で１０ｍ１に濃縮し
た。濃縮の間、ｐＨ７の水２００ｍ１を１回に５０ｍ１
セルに通した。最後の１０ｍ１は、７．２％の固形分を
有することが判った。
の限外口過装置（０，０５μｍ膜）で１０ｍ１に濃縮し
た。濃縮の間、ｐＨ７の水２００ｍ１を１回に５０ｍ１
セルに通した。最後の１０ｍ１は、７．２％の固形分を
有することが判った。
叉素■盪産
抗−ＢＧＧ抗体で被覆したポリス
前記の要素の試料１個に螢光標識ラテックス５μｌのス
ポットを付けた。別の要素試料には、０、２モルグリセ
リン−アセテートｉｔ衝液（ｐＨ７）５μｌのスポット
を付けた。残りの要素試料には、１０−９モルの螢光標
識−ＢＧＧアナローグ及び１０−４〜１０−９モルの濃
度のＢＧＧ （被分析物）のスポットを付けた。これら
の要素試料を１〜３分インキエベーションし、その後、
各試料に０．２モルグリセリンアセテート、Ｏ０１モル
ＮａＣｌ及び１、０％ブリジ（Ｂｒｉｊ ：商標）９８
界面活性剤を含むｐＨ７，ｏの洗浄液を約３０秒施
した。変形した市販のフエランド（Ｆｅｒｒａｎｄ ）
螢光針で遅延ルミネッセンスを用いて、結合した標識の
螢光を測定した。これらのデータから得た用量応答曲線
は、標識だけのスポットを付けた要素試料が最高の螢光
を有し、他の要素においては、測定された螢光がＢＧＧ
被分析物の濃度が増加するとともに減少したことを示し
た。
ポットを付けた。別の要素試料には、０、２モルグリセ
リン−アセテートｉｔ衝液（ｐＨ７）５μｌのスポット
を付けた。残りの要素試料には、１０−９モルの螢光標
識−ＢＧＧアナローグ及び１０−４〜１０−９モルの濃
度のＢＧＧ （被分析物）のスポットを付けた。これら
の要素試料を１〜３分インキエベーションし、その後、
各試料に０．２モルグリセリンアセテート、Ｏ０１モル
ＮａＣｌ及び１、０％ブリジ（Ｂｒｉｊ ：商標）９８
界面活性剤を含むｐＨ７，ｏの洗浄液を約３０秒施
した。変形した市販のフエランド（Ｆｅｒｒａｎｄ ）
螢光針で遅延ルミネッセンスを用いて、結合した標識の
螢光を測定した。これらのデータから得た用量応答曲線
は、標識だけのスポットを付けた要素試料が最高の螢光
を有し、他の要素においては、測定された螢光がＢＧＧ
被分析物の濃度が増加するとともに減少したことを示し
た。
劃」電！定血止校
この例は、米国特許第４，２８３．３８２号明細書く前
記）に記載されているが、本発明の範囲には入らない同
様の標識リガンドと比べることによって本発明の標識リ
ガンドの安定性が改良されていることを示す。この比較
は、下記の方法で実施した。
記）に記載されているが、本発明の範囲には入らない同
様の標識リガンドと比べることによって本発明の標識リ
ガンドの安定性が改良されていることを示す。この比較
は、下記の方法で実施した。
ポリ（スチレンーコーメタクリル酸）（９５：５重量比
）（ラテックス１）及びポリ （スチレンーコーアクリ
ルアミド）（９０：１０重量比）（ラテックス２）を使
用して米国特許第４．２８３，３８２号明細書の教示に
より、螢光標識ＣＥｕ士コキレート）を製造した。例１
で製造した本発明の標識をラテックス１及び２と比較し
た。３種の標識をすべて１０℃で数ケ月貯蔵し、その後
、これらを安定性について評価した。
）（ラテックス１）及びポリ （スチレンーコーアクリ
ルアミド）（９０：１０重量比）（ラテックス２）を使
用して米国特許第４．２８３，３８２号明細書の教示に
より、螢光標識ＣＥｕ士コキレート）を製造した。例１
で製造した本発明の標識をラテックス１及び２と比較し
た。３種の標識をすべて１０℃で数ケ月貯蔵し、その後
、これらを安定性について評価した。
従来技術により製造した２種の標識（ラテックス１及び
２）では、沈澱したラテックスの大きい凝集物が観察さ
れたが、本発明の標識では、凝集物は実質的に観察され
なかった。
２）では、沈澱したラテックスの大きい凝集物が観察さ
れたが、本発明の標識では、凝集物は実質的に観察され
なかった。
希土類元素キレートを混入して含む螢光標識及び標識種
が水溶液中で極めて安定であることが判明した。これら
の物質は貯蔵中又は使用中に早期に凝集しない。これら
は、特異結合分析に特に有用であるが、生理学的に反応
性の種の標識付けが望ましい種々の生物医学的研究に使
用することもできる。これらの標識は、螢光分光法の使
用に伴い、望ましい高感度を示す。本発明の物質の意外
な、著しく改良された性質は、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーの特別な組み合わせにより製造したポリマ
ーを使用したことから、達成されるものである。
が水溶液中で極めて安定であることが判明した。これら
の物質は貯蔵中又は使用中に早期に凝集しない。これら
は、特異結合分析に特に有用であるが、生理学的に反応
性の種の標識付けが望ましい種々の生物医学的研究に使
用することもできる。これらの標識は、螢光分光法の使
用に伴い、望ましい高感度を示す。本発明の物質の意外
な、著しく改良された性質は、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーの特別な組み合わせにより製造したポリマ
ーを使用したことから、達成されるものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、不連続相及び水相を有する充填可能なラテックスか
ら誘導されたポリマー粒子を含み、不連続相が （ａ）疎水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマー
から誘導された繰り返し単位５０〜９６重量％、 （ｂ）非イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量
％、並びに （ｃ）少なくとも１個の可溶化基を含む陰イオン性で、
重合可能なエチレン性不飽和モノマーから誘導された繰
り返し単位２〜２０重量％ を含むポリマーから実質的に成るものである螢光標識。 ２、不連続相及び水相を有する充填可能なラテックスか
ら誘導されたポリマー粒子を含み、不連続相が （ａ）疎水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマー
から誘導された繰り返し単位５０〜９６重量％、 （ｂ）非イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量
％、並びに （ｃ）少なくとも１個の可溶化基を含む陰イオン性で、
重合可能なエチレン性不飽和モノマーから誘導された繰
り返し単位２〜２０重量％ を含むポリマーから実質的に成るものである螢光標識に
結合された生理学的に反応性の種を含む、螢光標識され
た生理学的に反応性の種。 ３、不連続相及び水相を有する充填可能なラテックスか
ら誘導されたポリマー粒子を含み、不連続相が （ａ）疎水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマー
から誘導された繰り返し単位５０〜９６重量％、 （ｂ）非イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量
％、並びに （ｃ）少なくとも１個の可溶化基を含む陰イオン性で、
重合可能なエチレン性不飽和モノマーから誘導された繰
り返し単位２〜２０重量％ を含むポリマーから実質的に成るものである螢光標識に
結合された生理学的に反応性の種を含む、螢光標識され
た生理学的に反応性の種を含む乾式分析要素。 ４、不連続相及び水相を有する充填可能なラテックスか
ら誘導されたポリマー粒子を含み、不連続相が （ａ）疎水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマー
から誘導された繰り返し単位５０〜９６重量％、 （ｂ）非イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量
％、並びに （ｃ）少なくとも１個の可溶化基を含む陰イオン性で、
重合可能なエチレン性不飽和モノマーから誘導された繰
り返し単位２〜２０重量％ を含むポリマーから実質的に成るものである、螢光標識
された、特異結合リガンドアナローグを含む、免疫分析
において免疫反応性リガンドを測定する乾式分析要素。 ５。Ａ、リガンドに対するレセプターの存在下に、不連
続相及び水相を有する充填可能なラテックスから誘導さ
れたポリマー粒子を含む、螢光標識された免疫反応性リ
ガンドアナローグと液体試料とを接触させて、レセプタ
ーとリガンドアナローグとの複合体を形成させ、そして Ｂ、リガンドアナローグを螢光分析により検出すること
を含んで成り、 前記不連続相が （ａ）疎水性で、重合可能なエチレン性不飽和モノマー
から誘導された繰り返し単位５０〜９６重量％、 （ｂ）非イオン性、親水性で、重合可能なエチレン性不
飽和モノマーから誘導された繰り返し単位２〜３０重量
％、並びに （ｃ）少なくとも１個の可溶化基を含む陰イオン性で、
重合可能なエチレン性不飽和モノマーから誘導された繰
り返し単位２〜２０重量％ を含むポリマーから実質的に成るものである、水性液体
中の免疫反応性リガンドの測定方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US713202 | 1985-03-18 | ||
| US06/713,202 US4735907A (en) | 1985-03-18 | 1985-03-18 | Stabilized fluorescent rare earth labels and labeled physiologically reactive species |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61218945A true JPS61218945A (ja) | 1986-09-29 |
Family
ID=24865197
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61058450A Pending JPS61218945A (ja) | 1985-03-18 | 1986-03-18 | 安定な螢光希土類元素標識及び要素された生理学的に反応性の種 |
| JP61258688A Pending JPS62142275A (ja) | 1985-03-18 | 1986-10-31 | 安定な螢光希土類元素標識された生理学的に反応性の種 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61258688A Pending JPS62142275A (ja) | 1985-03-18 | 1986-10-31 | 安定な螢光希土類元素標識された生理学的に反応性の種 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4735907A (ja) |
| EP (1) | EP0195623B1 (ja) |
| JP (2) | JPS61218945A (ja) |
| CA (1) | CA1254131A (ja) |
| DE (1) | DE3685600T2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06322176A (ja) * | 1992-04-07 | 1994-11-22 | Prolabo:Soc | 非常に小さい蛍光発光検出閾値を有する蛍光ラテックス |
| US7470763B2 (en) | 2002-12-19 | 2008-12-30 | Nanocarrier Co., Ltd. | Latex polymer particles containing fluorescent substance or contrast medium and process for producing the same |
Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5279943A (en) * | 1985-08-02 | 1994-01-18 | Compagnie Oris Industrie | Homogeneous process for the detection and/or determination by luminescence of an analyte in a medium in which it may be present |
| NO860139L (no) * | 1986-01-16 | 1987-07-17 | Havbrukskjemi A S | Fremgangsmaate til registrering av opptak hos organismer, mennesker, dyr og planter. |
| DE3613111A1 (de) * | 1986-04-18 | 1987-10-22 | Behringwerke Ag | Dispersionspolymere, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3850981T2 (de) * | 1987-02-27 | 1995-03-30 | Eastman Kodak Co | Wasserunlösliches Teilchen und immunoreaktives Reagens, analytische Elemente und Verfahren zu ihrer Verwendung. |
| US5166077A (en) * | 1987-04-30 | 1992-11-24 | Nitto Denko Corporation | Latex for immobilization of physiologically active substances for immuno nephelometry |
| US5194300A (en) * | 1987-07-15 | 1993-03-16 | Cheung Sau W | Methods of making fluorescent microspheres |
| US5106957A (en) * | 1987-11-06 | 1992-04-21 | Baxter Diagnostics Inc. | Fluorescent poly(arylpyridine) rare earth chelates |
| EP0336420B1 (en) * | 1988-04-08 | 1994-03-16 | Idemitsu Kosan Company Limited | Aromatic polyethers, fluorescent resin compositions containing same, and processes for preparing same |
| US5202423A (en) * | 1988-07-08 | 1993-04-13 | Wallac Oy | Terpyridine derivatives |
| EP0511201A1 (en) * | 1990-01-17 | 1992-11-04 | Wallac Oy | Oligosaccharide derivates linked to lanthanide chelates and to a reactive group |
| GB9003593D0 (en) * | 1990-02-16 | 1990-04-11 | Pa Consulting Services | Improvements in or relating to fluorescence assays |
| EP0466170B1 (en) * | 1990-07-13 | 1997-11-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Detection reagent |
| US5200315A (en) * | 1990-07-25 | 1993-04-06 | Eastman Kodak Company | Particulate biologically active reagent containing polyoxyalkylene side chains, analytical element and methods for use of the reagent |
| FI88654C (fi) * | 1991-03-15 | 1993-06-10 | Datacity Center Oy | Fluorescenshoejningsmetod |
| US6132764A (en) | 1994-08-05 | 2000-10-17 | Targesome, Inc. | Targeted polymerized liposome diagnostic and treatment agents |
| US5620850A (en) | 1994-09-26 | 1997-04-15 | President And Fellows Of Harvard College | Molecular recognition at surfaces derivatized with self-assembled monolayers |
| US5580749A (en) * | 1994-10-21 | 1996-12-03 | Georgia Tech Research Corporation | Internal reference for chemically modified spheres |
| US7014992B1 (en) * | 1996-11-05 | 2006-03-21 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Conductive oligomers attached to electrodes and nucleoside analogs |
| US5981296A (en) * | 1997-02-18 | 1999-11-09 | Dade Behring Inc. | Stabilization of particle reagents |
| FR2762394B1 (fr) * | 1997-04-16 | 1999-05-28 | Bio Merieux | Compose ligand de coordination et utilisation pour fixer un materiel biologique |
| DE69842134D1 (de) | 1997-06-12 | 2011-03-31 | Clinical Micro Sensors Inc | Elektronische verfahren und vorrichtung zum nachweis von analyten |
| US6214628B1 (en) * | 1998-01-14 | 2001-04-10 | Joseph R. Lakowicz | Method of conducting an assay of a sample containing an analyte of interest |
| US7087148B1 (en) | 1998-06-23 | 2006-08-08 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Binding acceleration techniques for the detection of analytes |
| US6184287B1 (en) | 1999-01-26 | 2001-02-06 | Omnova Solutions Inc. | Polymeric latexes prepared in the presence of 2-acrylamido-2-methylpropanesulfonate |
| US7312087B2 (en) * | 2000-01-11 | 2007-12-25 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Devices and methods for biochip multiplexing |
| US20020177135A1 (en) * | 1999-07-27 | 2002-11-28 | Doung Hau H. | Devices and methods for biochip multiplexing |
| US6132958A (en) * | 1999-05-27 | 2000-10-17 | The Rockefeller University | Fluorescent bead for determining the temperature of a cell and methods of use thereof |
| US6703248B1 (en) * | 1999-12-15 | 2004-03-09 | Dade Behring Marburg Gmbh | Particles for diagnostic and therapeutic use |
| US20030133972A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-07-17 | Targesome, Inc. | Targeted multivalent macromolecules |
| US20030129223A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-07-10 | Targesome, Inc. | Targeted multivalent macromolecules |
| US20030082103A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-05-01 | Targesome, Inc. | Targeted therapeutic lipid constructs having cell surface targets |
| EP1412749A4 (en) * | 2001-06-28 | 2006-12-13 | Ia Inc | OPTICAL FIBER SENSOR ARRAY |
| WO2004056895A1 (ja) * | 2002-12-19 | 2004-07-08 | Tokyo University Of Science, Educational Foundation | ラテックス粒子およびその製造方法 |
| US7468413B2 (en) * | 2004-01-30 | 2008-12-23 | Khodia Inc. | Rare earth aggregate formulation using di-block copolmers |
| WO2007003327A1 (en) * | 2005-07-01 | 2007-01-11 | Roche Diagnostics Gmbh | Carboxylated latex particles |
| JP2007146149A (ja) * | 2005-11-02 | 2007-06-14 | Fujifilm Corp | 蛍光性重合体微粒子、蛍光性重合体微粒子の製造方法、蛍光検出キット及び蛍光検出方法 |
| JP2008074892A (ja) * | 2006-09-19 | 2008-04-03 | Fujifilm Corp | 蛍光性重合体微粒子セット、蛍光検出用複合体セット、蛍光性重合体微粒子組成物及び蛍光検出方法 |
| US8153442B2 (en) * | 2009-10-21 | 2012-04-10 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Stabilization of signal generation in particles used in assays |
| EP2593892A1 (en) | 2010-07-16 | 2013-05-22 | Elitech Holding B.V. | Orthogonal nucleic acid affinity pairs |
| JP5465758B2 (ja) | 2011-09-26 | 2014-04-09 | 富士フイルム株式会社 | 蛍光粒子を用いたサイロキシン免疫アッセイ |
| GB201216121D0 (en) * | 2012-09-10 | 2012-10-24 | Novartis Ag | Sample quantification by disc centrifugation |
| US9834808B2 (en) | 2016-01-21 | 2017-12-05 | SeLux Diagnostics, Inc. | Methods for rapid antibiotic susceptibility testing |
| AU2017210215B2 (en) | 2016-01-21 | 2022-09-08 | SeLux Diagnostics, Inc. | Methods for rapid antimicrobial susceptibility testing |
| MX2019007653A (es) | 2016-12-23 | 2020-07-29 | Selux Diagnostics Inc | Métodos para la optimización de ensayos rápidos de susceptibilidad antimicrobiana. |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4264766A (en) * | 1877-09-19 | 1981-04-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Immunological diagnostic reagents |
| US3853987A (en) * | 1971-09-01 | 1974-12-10 | W Dreyer | Immunological reagent and radioimmuno assay |
| GB1506017A (en) * | 1974-03-04 | 1978-04-05 | Int Diagnostic Tech | Fluorometric system and method for the detection of biologically derived substances |
| US4045384A (en) * | 1976-07-23 | 1977-08-30 | The Dow Chemical Company | Method for forming an amide bond between a latex and protein |
| US4283382A (en) * | 1977-12-28 | 1981-08-11 | Eastman Kodak Company | Fluorescent labels comprising rare earth chelates |
| US4259313A (en) * | 1978-10-18 | 1981-03-31 | Eastman Kodak Company | Fluorescent labels |
| US4258001A (en) * | 1978-12-27 | 1981-03-24 | Eastman Kodak Company | Element, structure and method for the analysis or transport of liquids |
| SE428332B (sv) * | 1979-03-08 | 1983-06-20 | Wallac Oy | Forfarande for fluorescensspektroskopisk bestemning av biologiskt aktivt emne, sasom hapten, antikropp eller antigen |
| NL8000173A (nl) * | 1980-01-11 | 1981-08-03 | Akzo Nv | Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen. |
| DE3174918D1 (en) * | 1980-12-23 | 1986-08-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Hydrophilic latex particles, process for their preparation and their use |
| CA1205028A (en) * | 1981-07-01 | 1986-05-27 | Jerald C. Hinshaw | Fluorescent chelates and labeled specific binding reagents prepared therefrom |
| US4401765A (en) * | 1981-09-01 | 1983-08-30 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Covalently bonded high refractive index particle reagents and their use in light scattering immunoassays |
| US4434150A (en) * | 1981-10-19 | 1984-02-28 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Immunological reagents employing polymeric backbone possessing reactive functional groups |
| US4452773A (en) * | 1982-04-05 | 1984-06-05 | Canadian Patents And Development Limited | Magnetic iron-dextran microspheres |
| JPS59122950A (ja) * | 1982-12-28 | 1984-07-16 | Toray Ind Inc | 生物学的に活性な物質の測定法およびそれに使用する標識剤 |
-
1985
- 1985-03-18 US US06/713,202 patent/US4735907A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-08 CA CA000488296A patent/CA1254131A/en not_active Expired
-
1986
- 1986-03-17 DE DE8686301903T patent/DE3685600T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-17 EP EP86301903A patent/EP0195623B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-18 JP JP61058450A patent/JPS61218945A/ja active Pending
- 1986-10-31 JP JP61258688A patent/JPS62142275A/ja active Pending
-
1987
- 1987-10-26 US US07/112,302 patent/US4784912A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06322176A (ja) * | 1992-04-07 | 1994-11-22 | Prolabo:Soc | 非常に小さい蛍光発光検出閾値を有する蛍光ラテックス |
| US7470763B2 (en) | 2002-12-19 | 2008-12-30 | Nanocarrier Co., Ltd. | Latex polymer particles containing fluorescent substance or contrast medium and process for producing the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| EP0195623A2 (en) | 1986-09-24 |
| CA1254131A (en) | 1989-05-16 |
| EP0195623B1 (en) | 1992-06-10 |
| DE3685600D1 (de) | 1992-07-16 |
| JPS62142275A (ja) | 1987-06-25 |
| DE3685600T2 (de) | 1993-01-21 |
| US4735907A (en) | 1988-04-05 |
| EP0195623A3 (en) | 1989-08-09 |
| US4784912A (en) | 1988-11-15 |
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