JPS61202695A - L−フエニルアラニンの製造法 - Google Patents
L−フエニルアラニンの製造法Info
- Publication number
- JPS61202695A JPS61202695A JP4278485A JP4278485A JPS61202695A JP S61202695 A JPS61202695 A JP S61202695A JP 4278485 A JP4278485 A JP 4278485A JP 4278485 A JP4278485 A JP 4278485A JP S61202695 A JPS61202695 A JP S61202695A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- phenylalanine
- ammonia
- phenylpyruvic
- fumaric acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は微生物の働きを利用してフマル酸またハマレイ
ン酸、フェニルピルビン酸およびアンモニアからL−フ
ェニルアラニンを製造する方法に関する。
ン酸、フェニルピルビン酸およびアンモニアからL−フ
ェニルアラニンを製造する方法に関する。
(本発明の課題)
L−フェニルアラニンは必須アミノ酸の一つとして栄養
上或いは疾病の予防、治療上重要な物質であり、また最
近低カロリーの甘味剤として注目されているアス・ぐル
テームの原料でもある。
上或いは疾病の予防、治療上重要な物質であり、また最
近低カロリーの甘味剤として注目されているアス・ぐル
テームの原料でもある。
その製造法については従来より種々の方法が知られてい
るが、いずれの方法も工業的な製造法として必ずしも充
分満足すべきものとは言い難く、より安価に製造し得る
方法が開発されることが望まれている。
るが、いずれの方法も工業的な製造法として必ずしも充
分満足すべきものとは言い難く、より安価に製造し得る
方法が開発されることが望まれている。
本発明者らは微生物の働きを利用してフマル酸まだはマ
レイン酸、フェニルピルビン酸およびアンモニアからL
−7エニルアラニンを製造スヘく、当該能力を有する微
生物の検索について種々実験を重ねた結果、本発明を完
成するに至った。
レイン酸、フェニルピルビン酸およびアンモニアからL
−7エニルアラニンを製造スヘく、当該能力を有する微
生物の検索について種々実験を重ねた結果、本発明を完
成するに至った。
(本発明の構成)
本発明はエシェリヒア属、セラチア属、エンチロバクp
−属、エルピニア属、クレブシェラ属まだはシトロバク
タ−属に属し、且フマル酸またはマレイン酸、フェニル
ピルビン酸およびアンモニアからL−フェニルアラニ/
を合成する能力を有する微生物菌体もしくはその培養物
またはそれらからの抽出物の存在下にフマル酸またはマ
レイン酸、フェニルピルビン酸およびアンモニアカラ応
させ、生成したL−フェニルアラニンを単離することを
特徴とするL−フェニルアラニンの製造法を提供せんと
するものである。
−属、エルピニア属、クレブシェラ属まだはシトロバク
タ−属に属し、且フマル酸またはマレイン酸、フェニル
ピルビン酸およびアンモニアからL−フェニルアラニ/
を合成する能力を有する微生物菌体もしくはその培養物
またはそれらからの抽出物の存在下にフマル酸またはマ
レイン酸、フェニルピルビン酸およびアンモニアカラ応
させ、生成したL−フェニルアラニンを単離することを
特徴とするL−フェニルアラニンの製造法を提供せんと
するものである。
以下に本発明の方法について更に詳しく説明する。
本発明の方法に於いて使用される微生物としては、エシ
ェリヒア属、セラチア属、エンチロバクター属、エルピ
ニア属、クレブシェラ属またはシトロバクタ−属に属し
、且フマル酸またはマレイン酸、フェニルピルビン酸お
よびアンモニアカラL−フェニルアラニンを合成する能
力を有する微生物であれば原則として何でも良いが、そ
の代表的なものを例示すれば、例えば、次のようなもの
が挙げられる。
ェリヒア属、セラチア属、エンチロバクター属、エルピ
ニア属、クレブシェラ属またはシトロバクタ−属に属し
、且フマル酸またはマレイン酸、フェニルピルビン酸お
よびアンモニアカラL−フェニルアラニンを合成する能
力を有する微生物であれば原則として何でも良いが、そ
の代表的なものを例示すれば、例えば、次のようなもの
が挙げられる。
エシェリヒア・コリ(Eacherichia col
t ) IAM] 264 、 IAM 1268 、
セラチア・マルセッセンス(5erratia mar
cescens ) IAM 12142 +エンテロ
バクター・クロアカニ(Enterobactercl
oacae ) IAM 1615 、エルヴイニア・
ヘルヴイコラ(Erwinia herbicola
) IAM 1562 +クレブシェラ・ニューモニア
エ(Klebsiella pneumoniae
)IAM1063.シトロバクタ−・フロインディ(C
1trobacter freundii ) IID
976等。
t ) IAM] 264 、 IAM 1268 、
セラチア・マルセッセンス(5erratia mar
cescens ) IAM 12142 +エンテロ
バクター・クロアカニ(Enterobactercl
oacae ) IAM 1615 、エルヴイニア・
ヘルヴイコラ(Erwinia herbicola
) IAM 1562 +クレブシェラ・ニューモニア
エ(Klebsiella pneumoniae
)IAM1063.シトロバクタ−・フロインディ(C
1trobacter freundii ) IID
976等。
上記の微生物はいずれも公知のものであり、その培養法
については格別の要件はない。即ち、本発明に係る微生
物を培養するに際しては炭素源。
については格別の要件はない。即ち、本発明に係る微生
物を培養するに際しては炭素源。
窒素源、有機栄養源、無機塩類などを含む通常の栄養培
地が使用できる。培養条件は菌の種類にもよるが、通常
は−を5.0〜9.0に調整し、30〜40℃で好気的
に18〜72時間培養すればよい。
地が使用できる。培養条件は菌の種類にもよるが、通常
は−を5.0〜9.0に調整し、30〜40℃で好気的
に18〜72時間培養すればよい。
反応に際しては上記の如くして得られる培養液のほかに
該培養液から採取した菌体・該菌体の処理物をも用いる
ことができ、ここに菌体の処理物としては例えば洗浄菌
体・乾燥菌体・菌体磨砕物・菌体の自己消化物・菌体の
超音波処理物・菌体抽出物またはこれらをそれ自体公知
の固定化方法により固定化したものがあげられる。
該培養液から採取した菌体・該菌体の処理物をも用いる
ことができ、ここに菌体の処理物としては例えば洗浄菌
体・乾燥菌体・菌体磨砕物・菌体の自己消化物・菌体の
超音波処理物・菌体抽出物またはこれらをそれ自体公知
の固定化方法により固定化したものがあげられる。
フマル酸t タidマレイン酸、フェニルピルビン酸と
アンモニアは種々の形で反応系に供給することができ、
例えば、フマル酸アンモニウム塩(まタハマレイン酸ア
ンモニウム塩)、フェニルピルビン酸アンモニウム塩と
して供給してもよく、更ニハフマル酸またはマレイ/酸
、フェニルピルビン酸もしくはその塩と無機アンモニウ
ム塩として供給してもよい。
アンモニアは種々の形で反応系に供給することができ、
例えば、フマル酸アンモニウム塩(まタハマレイン酸ア
ンモニウム塩)、フェニルピルビン酸アンモニウム塩と
して供給してもよく、更ニハフマル酸またはマレイ/酸
、フェニルピルビン酸もしくはその塩と無機アンモニウ
ム塩として供給してもよい。
フマル酸塩またはマレイ/酸塩、フェニルピルビン酸塩
としては例えばナトリウム塩、カリウム塩などを用いる
ことができ、無機アンモニウム塩としては例えば塩酸塩
、硫酸塩、リン酸塩などを好適に用いることができる。
としては例えばナトリウム塩、カリウム塩などを用いる
ことができ、無機アンモニウム塩としては例えば塩酸塩
、硫酸塩、リン酸塩などを好適に用いることができる。
フマメル酸またはマレイン酸もしくはその塩と無機アン
モニウム塩を用いる場合には、これらの2成分のモル比
は1:1.5〜1:2となるのが適当であす、フマル酸
とフェニルピルビン酸のモル比は1.5:1〜2:1と
なるのが適当である。
モニウム塩を用いる場合には、これらの2成分のモル比
は1:1.5〜1:2となるのが適当であす、フマル酸
とフェニルピルビン酸のモル比は1.5:1〜2:1と
なるのが適当である。
反応は約5〜50℃の広い温度範囲で実施することがで
きるが安定性を考慮すると20〜45℃で実施すること
が望ましい。−は6〜10となるよう実施することが望
ましい。また上記反応に際してはマグネシウム、カルシ
ウム、マンガン等の2価金属イオンをその濃度が0.1
〜10ミリモル程度となるよう添加することが反応に関
与する酵素の安定性を高めることができる。又、ピリド
キサール−5−リン酸をその濃度が1〜100マイクロ
モル程度となるよう添加することも好ましい。
きるが安定性を考慮すると20〜45℃で実施すること
が望ましい。−は6〜10となるよう実施することが望
ましい。また上記反応に際してはマグネシウム、カルシ
ウム、マンガン等の2価金属イオンをその濃度が0.1
〜10ミリモル程度となるよう添加することが反応に関
与する酵素の安定性を高めることができる。又、ピリド
キサール−5−リン酸をその濃度が1〜100マイクロ
モル程度となるよう添加することも好ましい。
反応は微生物菌体を用いる場合には培養後集菌した微生
物菌体を前記した様な基質溶液にけん濁しかく拌するこ
とによってL−フェニルアラニンが生成する。
物菌体を前記した様な基質溶液にけん濁しかく拌するこ
とによってL−フェニルアラニンが生成する。
また固定化微生物を用いる場合の反応はバッチ法のみな
らずカラム法によって連続的に反応を行なわせることも
できる。例えば、固定化菌体をカラムに充てんし、この
カラムに基質溶液を適当な速度にて流すことによってL
−フェニルアラニンを含む流出液が得られる。またパッ
チ式で行なう場合は、基質溶液に固定化微生物をけん濁
させ、かく拌することによって、L−フェニルアラニン
が生成する。この場合、反応終了液から固定化微生物を
口過または遠心分離することにより取得でき反復使用が
可能である。
らずカラム法によって連続的に反応を行なわせることも
できる。例えば、固定化菌体をカラムに充てんし、この
カラムに基質溶液を適当な速度にて流すことによってL
−フェニルアラニンを含む流出液が得られる。またパッ
チ式で行なう場合は、基質溶液に固定化微生物をけん濁
させ、かく拌することによって、L−フェニルアラニン
が生成する。この場合、反応終了液から固定化微生物を
口過または遠心分離することにより取得でき反復使用が
可能である。
上記反応の反応率は微生物の量、基質の濃度および流速
、温度2反応時間その他により影響されるが、カラム法
では固定化微生物の量に従い基質溶液の通液速度を、パ
ッチ法ではその反応時間を調整することにより反応率を
100%にまで到達させる条件を見出すことも可能であ
る。
、温度2反応時間その他により影響されるが、カラム法
では固定化微生物の量に従い基質溶液の通液速度を、パ
ッチ法ではその反応時間を調整することにより反応率を
100%にまで到達させる条件を見出すことも可能であ
る。
かくして反応液中に生成したL−フェニルアラニンは慣
用に従いイオン交換樹脂法やその他の公知の方法と組合
わせて容易に分離精製できる。
用に従いイオン交換樹脂法やその他の公知の方法と組合
わせて容易に分離精製できる。
以下に本発明の方法について代表的な例を示し更に具体
的に説明するが、これらは単なる例示であり、これらの
みに限定されないことは言うまでもない。
的に説明するが、これらは単なる例示であり、これらの
みに限定されないことは言うまでもない。
〔実施例1〕
グルコース0.5チ、ポリペプトン1%、リン酸2ナト
リウム0.58%、リン酸1カリウム0.3%。
リウム0.58%、リン酸1カリウム0.3%。
塩化ナトリウム0.5%、塩化アンモニウム0.11硫
酸マグネシウム0.1%及びフマル酸アンモニウム2.
6%を含有する液体培地21を51ツヤ−ファーメンタ
−に入れ、115℃で20分間加熱滅菌した。この51
ツヤ−ファーメンタ−にあらかじめブイヨン培地中で3
0℃で12時間振とう培養したエシェリヒア・コリIA
M1268.セラチア・マルセッセンスIAM1214
2.シトロバクタ−・70インデイlID976の各々
を5%接種し、35℃で通気攪拌培養を行った。
酸マグネシウム0.1%及びフマル酸アンモニウム2.
6%を含有する液体培地21を51ツヤ−ファーメンタ
−に入れ、115℃で20分間加熱滅菌した。この51
ツヤ−ファーメンタ−にあらかじめブイヨン培地中で3
0℃で12時間振とう培養したエシェリヒア・コリIA
M1268.セラチア・マルセッセンスIAM1214
2.シトロバクタ−・70インデイlID976の各々
を5%接種し、35℃で通気攪拌培養を行った。
接種後10時間経った時点で7エニルビルビン酸ナトリ
ウム塩およびフマル酸アンモニウム塩をそれぞれ培養液
中に1.14%、2.6%になるように添加し培養液の
−を8.0に保ちながら更に10時間培養を行なった。
ウム塩およびフマル酸アンモニウム塩をそれぞれ培養液
中に1.14%、2.6%になるように添加し培養液の
−を8.0に保ちながら更に10時間培養を行なった。
反応終了後の培養液中のL−フェニルアラニン量は以下
の通りであった。
の通りであった。
〔実施例2〕
〔実施例1〕に示した培地100 mlの入った500
11Ll容振とうフラスコにて培養したエシェリヒア・
コリIAM 1264 、 IAM 1268 、セラ
チア・マルセッセンスIAM12142.エンテロバク
タ−・クロアカニIAM1615.エルヴイニア・ヘル
ヴイコ7IAM1562.クレブシェラ・ニューモニア
zIAM1063.シトロバクタ−・フロインディII
D 976を夫々培養後遠心分離によυ集菌した。
11Ll容振とうフラスコにて培養したエシェリヒア・
コリIAM 1264 、 IAM 1268 、セラ
チア・マルセッセンスIAM12142.エンテロバク
タ−・クロアカニIAM1615.エルヴイニア・ヘル
ヴイコ7IAM1562.クレブシェラ・ニューモニア
zIAM1063.シトロバクタ−・フロインディII
D 976を夫々培養後遠心分離によυ集菌した。
これらの湿菌体各IIをそれぞれフェニルピルビン酸ナ
トリウム塩0.11.lフマル酸アンモニウム塩0.1
9g、ピリドキサール−5−リン酸0、11n9および
硫酸マグネシウム1fn9を含む1oゴのリン酸ノ々ツ
ファ−(pH8,0)の入った100m容三角フラスコ
にけん濁後35℃に保った。
トリウム塩0.11.lフマル酸アンモニウム塩0.1
9g、ピリドキサール−5−リン酸0、11n9および
硫酸マグネシウム1fn9を含む1oゴのリン酸ノ々ツ
ファ−(pH8,0)の入った100m容三角フラスコ
にけん濁後35℃に保った。
反応開始後1時間のL−7エニルアラニン蓄積量は以下
の表の通シであった。
の表の通シであった。
〔実施例3〕
〔実施例2〕で得られたそれぞれの湿菌体1!iを10
m/のリン酸バッファー(pH8,0)にけん濁後、超
音波処理によシ菌体を破砕して粗酵素液とした。
m/のリン酸バッファー(pH8,0)にけん濁後、超
音波処理によシ菌体を破砕して粗酵素液とした。
この10rnlの粗酵素液を7エニルピルピン酸ナトリ
ウム塩0.11g、7マル酸アンモニウム塩0.19,
9.ピリドキサール−5−リン酸0.1 m9および硫
酸マグネ7ウム11ngを含む10m1のリン酸バッフ
ァー(ptI 8. O)の入った1 00 ml容三
角フラスコに移して35℃に保った。
ウム塩0.11g、7マル酸アンモニウム塩0.19,
9.ピリドキサール−5−リン酸0.1 m9および硫
酸マグネ7ウム11ngを含む10m1のリン酸バッフ
ァー(ptI 8. O)の入った1 00 ml容三
角フラスコに移して35℃に保った。
反応開始30分後、1時間後のL−フェニルアラニン蓄
積量は以下の表の通りであった。
積量は以下の表の通りであった。
〔実施例4〕
〔実施例1〕と同様の方法にて培養したエシェリヒア・
コIJIAM1268を培養液から遠心分離により集菌
した。
コIJIAM1268を培養液から遠心分離により集菌
した。
この湿菌体8gを生理食塩水8 mlにけん濁して45
℃に保ち、これに45m1の水に溶解させた1、1gの
に一力うギーナンの水溶液と混合した後、15℃まで冷
却して固定化菌体とした。
℃に保ち、これに45m1の水に溶解させた1、1gの
に一力うギーナンの水溶液と混合した後、15℃まで冷
却して固定化菌体とした。
これを3瓢角の大きさに切断したもの50gを直径3副
、長さく高さ)15cynの(円筒型)カラムに充てん
しフェニルピルビン酸ナトリウム塩5.5g、フマル酸
アンモニウム塩9.79.ビリドキテールー5−リン酸
5ダおよび硫酸マグネシウム50 m9を含む500m
1(1’)水溶液(pH8,0)を25m1/hrの流
速にて導通した。
、長さく高さ)15cynの(円筒型)カラムに充てん
しフェニルピルビン酸ナトリウム塩5.5g、フマル酸
アンモニウム塩9.79.ビリドキテールー5−リン酸
5ダおよび硫酸マグネシウム50 m9を含む500m
1(1’)水溶液(pH8,0)を25m1/hrの流
速にて導通した。
流出液を合し、イオン交換樹脂法、濃縮法を経て4.3
gのL−フェニルアラニンの結晶を得た。
gのL−フェニルアラニンの結晶を得た。
〔実施例5〕
〔実施例1〕に示した培地及びフマル酸アンモニウム2
.6チの代シにマレイン酸アンモニウム2.6チを含む
〔実施例1〕のそれぞれの液体培地100 mlの入っ
た5 00 at容振とうフラスコにて培養したエシェ
リヒア・コリIAM1268を培養後遠心分離により集
菌した〇 それぞれの湿菌体IIIをフェニルピルビン酸ナトリウ
ム塩0.11.F、マレイン酸アンモニウム塩0.19
g、ピリドキサール−5−リン酸0.1 mgおよび硫
酸マグネシウム1 m9を含む101nlのリン酸バッ
ファー(PH8,0)ノ入った100m7!容三角フラ
スコにけん濁後、35℃に保った。
.6チの代シにマレイン酸アンモニウム2.6チを含む
〔実施例1〕のそれぞれの液体培地100 mlの入っ
た5 00 at容振とうフラスコにて培養したエシェ
リヒア・コリIAM1268を培養後遠心分離により集
菌した〇 それぞれの湿菌体IIIをフェニルピルビン酸ナトリウ
ム塩0.11.F、マレイン酸アンモニウム塩0.19
g、ピリドキサール−5−リン酸0.1 mgおよび硫
酸マグネシウム1 m9を含む101nlのリン酸バッ
ファー(PH8,0)ノ入った100m7!容三角フラ
スコにけん濁後、35℃に保った。
反応開始後1時間のL−フェニルアラニン蓄積量はそれ
ぞれ8.929/l 、 8.849/lであった。
ぞれ8.929/l 、 8.849/lであった。
Claims (1)
- エシェリヒア属、セラチア属、エンチロバクター属、エ
ルビニア属、クレブシェラ属またはシトロバクター属に
属し、且フマル酸またはマレイン酸、フェニルピルビン
酸およびアンモニアからL−フェニルアラニンを合成す
る能力を有する微生物菌体もしくはその培養物またはそ
れらからの抽出物の存在下にフマル酸またはマレイン酸
、フェニルピルビン酸およびアンモニアを反応させ、生
成したL−フェニルアラニンを単離することを特徴とす
るL−フェニルアラニンの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4278485A JPS61202695A (ja) | 1985-03-06 | 1985-03-06 | L−フエニルアラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4278485A JPS61202695A (ja) | 1985-03-06 | 1985-03-06 | L−フエニルアラニンの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS61202695A true JPS61202695A (ja) | 1986-09-08 |
Family
ID=12645593
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP4278485A Pending JPS61202695A (ja) | 1985-03-06 | 1985-03-06 | L−フエニルアラニンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS61202695A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2609712A1 (fr) * | 1987-01-16 | 1988-07-22 | Inst Nat Rech Chimique | Precurseurs et milieux les contenant pour la fabrication de l-aminoacides |
-
1985
- 1985-03-06 JP JP4278485A patent/JPS61202695A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2609712A1 (fr) * | 1987-01-16 | 1988-07-22 | Inst Nat Rech Chimique | Precurseurs et milieux les contenant pour la fabrication de l-aminoacides |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tsugawa et al. | Production of l-Glutamic Acid from dl-Hydantoin-5-propionic Acid by Microoganisms: Part I. Screening of l-Glutamic Acid-Producing Microorganisms and Some Optimal Conditions for Production of l-Glutamic Acid | |
JPS61202695A (ja) | L−フエニルアラニンの製造法 | |
US3787288A (en) | Method for preparing alpha-aminobenzylpenicillin | |
KR950005925B1 (ko) | D-(-)-타르타르산의 제조법 | |
EP0102529B1 (en) | Process for preparation of aspartylphenylalanine alkyl esters | |
JPH03277292A (ja) | 光学活性な2―ヒドロキシカルボン酸の製造法 | |
JP3709007B2 (ja) | フマル酸の製造法 | |
WO1996031616A1 (fr) | Procede de production d'acide l-2-aminoadipique | |
JPH027635B2 (ja) | ||
JPS6057833B2 (ja) | L−トリプトフアンの製造方法 | |
JPS59113887A (ja) | L−アスパラギン酸の製法 | |
JPH0347084A (ja) | L―アラニンの製造法 | |
JPH0438398B2 (ja) | ||
JPS6128398A (ja) | L−バリンの製造法 | |
JPH0362397B2 (ja) | ||
JPH027636B2 (ja) | ||
JPS623792A (ja) | L−アミノ酸の製造方法 | |
JPH0464674B2 (ja) | ||
JPH0789948B2 (ja) | 2▲’▼−デオキシシチジンの製造方法 | |
JPH037590A (ja) | L―アラニンの製造法 | |
JPH01108992A (ja) | L−イソロイシンの製造法 | |
JPH052314B2 (ja) | ||
JPH0622789A (ja) | 光学活性なd−アミノ酸の製造法 | |
JPS581918B2 (ja) | 3− フクソカンチオメチルセフアロスポリンノセイホウ | |
JPH0533039B2 (ja) |