JPS6117598A - 高純度非晶性遊離酸型β‐ニコチンアミド‐アデニン‐ジヌクレオチドの製造方法 - Google Patents
高純度非晶性遊離酸型β‐ニコチンアミド‐アデニン‐ジヌクレオチドの製造方法Info
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- JPS6117598A JPS6117598A JP13606985A JP13606985A JPS6117598A JP S6117598 A JPS6117598 A JP S6117598A JP 13606985 A JP13606985 A JP 13606985A JP 13606985 A JP13606985 A JP 13606985A JP S6117598 A JPS6117598 A JP S6117598A
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は遊離酸型のβ−ニコチンアミド−アデニン−ジ
ヌクレオチド４水塩結晶を経由する高純度非晶性遊ｊｌ
ｊＩ酸型β−ニコチンアミド−アデニン−ジヌクレオチ
ドの製造方法に関する。
ヌクレオチド４水塩結晶を経由する高純度非晶性遊ｊｌ
ｊＩ酸型β−ニコチンアミド−アデニン−ジヌクレオチ
ドの製造方法に関する。
β−ニコチンアミド−アデニン−ジヌクレオチド（以下
ＮＡＤと略記する）は多くの酸化還元酵素の補酵素とし
てすべての生体組織中に存在し生体内のエネルギー代謝
、生合成等に極めて重要な役割を有する。従って近年生
化学生理学等の研究上の試薬としてのみならず酵素活性
及び基質濃度の測定時の酵素分析における測定因子とし
て臨床診断に不可欠の薬品として需要が増大してきたう
（発明が解決しようとする問題点） 本発明の目的は高純度な遊離酸型ＮＡＤの簡便で高収率
の製法を提供することにある。
ＮＡＤと略記する）は多くの酸化還元酵素の補酵素とし
てすべての生体組織中に存在し生体内のエネルギー代謝
、生合成等に極めて重要な役割を有する。従って近年生
化学生理学等の研究上の試薬としてのみならず酵素活性
及び基質濃度の測定時の酵素分析における測定因子とし
て臨床診断に不可欠の薬品として需要が増大してきたう
（発明が解決しようとする問題点） 本発明の目的は高純度な遊離酸型ＮＡＤの簡便で高収率
の製法を提供することにある。
（％’ｔＪの城す従来ＮＡＤは酵母抽出液あるいは職生
物培養液からイオン交換樹脂利用など種々の分別法によ
って分別ａ製した溶液を有機溶媒による沈澱、乾燥、凍
結乾燥などの方法で固体形にすることにより製造されて
いた。これらの方法で得られたＮＡＤは非晶性であり、
吸湿性が強く空気中で潮解する。これらの非晶性ＮＡＤ
は未だ微量の不純物を含有する場合が多く、また不安定
で保存、輸送中での熱分解による純度低下は避けられな
い。ＮＡＤ中に含まれるこの熱分解フラグメント及びそ
のｉｌｈ 微ｔの不純物の中には酵素の拮抗的阻害物が
存在する事が知られている。従ってこのような低純度の
Ｎ Ａ Ｉ） 全使用し酵素分析を行うと誤差の多い結
果しか得られないことはよく知られている。例えばダル
ツイール（Ｄａｒｚｉｅｌ ）よりｉｏｌ。
物培養液からイオン交換樹脂利用など種々の分別法によ
って分別ａ製した溶液を有機溶媒による沈澱、乾燥、凍
結乾燥などの方法で固体形にすることにより製造されて
いた。これらの方法で得られたＮＡＤは非晶性であり、
吸湿性が強く空気中で潮解する。これらの非晶性ＮＡＤ
は未だ微量の不純物を含有する場合が多く、また不安定
で保存、輸送中での熱分解による純度低下は避けられな
い。ＮＡＤ中に含まれるこの熱分解フラグメント及びそ
のｉｌｈ 微ｔの不純物の中には酵素の拮抗的阻害物が
存在する事が知られている。従ってこのような低純度の
Ｎ Ａ Ｉ） 全使用し酵素分析を行うと誤差の多い結
果しか得られないことはよく知られている。例えばダル
ツイール（Ｄａｒｚｉｅｌ ）よりｉｏｌ。
Ｃｂｅｍ、 ２８８巻 １５８８負ゝ１９６８年。
４離酸型のＮＡＤの結晶化に関してはウィナ−Ａ、 Ｄ
、 Ｗｉｎｅｒ、 Ｊ、 ＢｉｏＬ Ｃｈｅｍ、 ２ｒ
８９巻ＰＣ３５９８員 １９６４年が報告されている
が多量の溶媒を使用する方法であり、しかも−Ｉ Ｔ）
”Ｃという低温を要している。この方法の標準的パラ
メータは不明確であり再現性がない。また開示されてい
る結晶は８水塩であり、環境湿度の変化により非晶形に
なると記載されており安定性が悪い。更に溶媒使用によ
る精製品には分離できない少量の溶媒が残存する欠点が
ある。また実施時に溶媒などの経費がかかり過ぎ工業的
製法として実際的重要性はない。一方ＮＡＤリチウム塩
など金属塩の結晶が知られているが遊離ＮＡＤを要する
場合は金属塩をカチオン交換樹脂で再処理せねばならず
工程をＤの結晶の安価な工業的な製造法を種々研究した
結果、酵素純度９０チ以上の非晶性ＮＡＤの２０〜６０
％濃度の水溶液を０〜２０℃に冷却することによってＮ
ＡＤ４水場を晶出させることにより前記従来技術の欠点
を解消し、高純度で安定性のよいＮＡＤ結晶を得ること
に成功し本発明を完成した０本発明のＮＡＤ結晶は従来
知らｎていない新規なものである。
、 Ｗｉｎｅｒ、 Ｊ、 ＢｉｏＬ Ｃｈｅｍ、 ２ｒ
８９巻ＰＣ３５９８員 １９６４年が報告されている
が多量の溶媒を使用する方法であり、しかも−Ｉ Ｔ）
”Ｃという低温を要している。この方法の標準的パラ
メータは不明確であり再現性がない。また開示されてい
る結晶は８水塩であり、環境湿度の変化により非晶形に
なると記載されており安定性が悪い。更に溶媒使用によ
る精製品には分離できない少量の溶媒が残存する欠点が
ある。また実施時に溶媒などの経費がかかり過ぎ工業的
製法として実際的重要性はない。一方ＮＡＤリチウム塩
など金属塩の結晶が知られているが遊離ＮＡＤを要する
場合は金属塩をカチオン交換樹脂で再処理せねばならず
工程をＤの結晶の安価な工業的な製造法を種々研究した
結果、酵素純度９０チ以上の非晶性ＮＡＤの２０〜６０
％濃度の水溶液を０〜２０℃に冷却することによってＮ
ＡＤ４水場を晶出させることにより前記従来技術の欠点
を解消し、高純度で安定性のよいＮＡＤ結晶を得ること
に成功し本発明を完成した０本発明のＮＡＤ結晶は従来
知らｎていない新規なものである。
本発明を更に詳しく説明する。本発明のＮ Ａ Ｊ）結
晶の原料としての非晶性ＮＡＤは水溶液から有機＃媒に
より沈澱させて乾燥したもの凍結乾燥したものなど一般
に仰られる方法で、；１整されたものが使用される０非
晶性ＮＡＤ水溶液の最終的ＭＭには酢酸塩型、炭＃塩型
、リン酸塩型、塩酸塩型。
晶の原料としての非晶性ＮＡＤは水溶液から有機＃媒に
より沈澱させて乾燥したもの凍結乾燥したものなど一般
に仰られる方法で、；１整されたものが使用される０非
晶性ＮＡＤ水溶液の最終的ＭＭには酢酸塩型、炭＃塩型
、リン酸塩型、塩酸塩型。
または０１（型（遊離塩基型）に再生したポーラス弱塩
基性アニオン交換樹脂で処理する方法があるがその他ど
のような方法を用いてもよいＯそれらの中の一例は、非
晶性ＮＡＤを水に溶解し酢ｅＲ塩型に再生したノ１イボ
ーラス型弱塩基性アニオン交換樹脂に通塔する方法であ
る。使用するノ１イボーラス型弱塩基性アニオン交換樹
脂としてはダイヤイオンＷＡ３０（三菱化成工業社Ｍ）
、アンツク−ライトＩｆ（Ａ−９８（ロームアントノ１
−ス社製）。
基性アニオン交換樹脂で処理する方法があるがその他ど
のような方法を用いてもよいＯそれらの中の一例は、非
晶性ＮＡＤを水に溶解し酢ｅＲ塩型に再生したノ１イボ
ーラス型弱塩基性アニオン交換樹脂に通塔する方法であ
る。使用するノ１イボーラス型弱塩基性アニオン交換樹
脂としてはダイヤイオンＷＡ３０（三菱化成工業社Ｍ）
、アンツク−ライトＩｆ（Ａ−９８（ロームアントノ１
−ス社製）。
ダウエックスＨＷＡ−１（ダウケミカル社製）、デーオ
ライドＡ−ｆ３６８Ｐｌ（（ダイヤそンドシャムロック
ケミカル社製）などがある。ＮＡＤもこの樹脂に吸着さ
れるので、便所使用量は不純物を吸着除去するための必
費最少限で良いＯこの方法で梢製したＮＡＤ水溶液から
得た本発明のＮＡＤ結晶。
ライドＡ−ｆ３６８Ｐｌ（（ダイヤそンドシャムロック
ケミカル社製）などがある。ＮＡＤもこの樹脂に吸着さ
れるので、便所使用量は不純物を吸着除去するための必
費最少限で良いＯこの方法で梢製したＮＡＤ水溶液から
得た本発明のＮＡＤ結晶。
は結晶析出のための種として特に優れている０ＮＡＤ水
溶液は２０〜６０％（％）好ましくは４０〜５０チの濃
度にすることが本発明の結晶析出のために必要である□
従ってｎ製前または後にこの範囲に濃度を調整子る。こ
の濃度範囲のＮＡＤ水溶液を０〜２０℃好ましくは２〜
８℃に冷却し、静置すると１〜２日間で、静かに攪拌し
て結晶の成長を促すと数時間で結晶の晶出が完了する。
溶液は２０〜６０％（％）好ましくは４０〜５０チの濃
度にすることが本発明の結晶析出のために必要である□
従ってｎ製前または後にこの範囲に濃度を調整子る。こ
の濃度範囲のＮＡＤ水溶液を０〜２０℃好ましくは２〜
８℃に冷却し、静置すると１〜２日間で、静かに攪拌し
て結晶の成長を促すと数時間で結晶の晶出が完了する。
結晶の晶出に際しては別に與造した納品を種として加え
ることが有効である。１Ｍ晶の種を添加する場合は前記
ハイポーラス樹脂などの樹脂によ°る最終内積Ｍを行わ
ないＮＡＤでも酵素純度９０チ以上好ましくは９８チ以
上であればその２０〜６０チ水溶液から０〜２０℃にお
いて本発明のＮＡＤ結晶が晶出する。生成した結晶は一
般的な結晶分離手段によって分離される。結晶収率は約
９０チまたはそれ以上に達する０本発明のＮＡＤ結晶の
分析例は次のとおりである。
ることが有効である。１Ｍ晶の種を添加する場合は前記
ハイポーラス樹脂などの樹脂によ°る最終内積Ｍを行わ
ないＮＡＤでも酵素純度９０チ以上好ましくは９８チ以
上であればその２０〜６０チ水溶液から０〜２０℃にお
いて本発明のＮＡＤ結晶が晶出する。生成した結晶は一
般的な結晶分離手段によって分離される。結晶収率は約
９０チまたはそれ以上に達する０本発明のＮＡＤ結晶の
分析例は次のとおりである。
ＮＡＤ−４ＨｔＯＣ！ｔＨｔｙＯｔ＊ＮｙＰｔ・４ルＯ
（分子ｔ ７８５．４３）として 元素分析１直 ＣＨＮＰ 測定ｉ１ｔ 、８４．５７ ４．７８ １８．２８ ８
．４０計算値 ３４．２９ ４．８０ １８．８８ ８
．４２力−ルフイツシヤー水分 ９．４％ 水分理論値 ９．８％ 結晶系二三斜晶系 空間群二Ｐｉまたはｐｌ 格子定数 ： ａ ＝ ８．８６１Ａｂ ＝： １１
．１８１Ａ ｃ ＝ ８．６８ＯＡ α ＝９０．８２ β＝ｌＯＢ、４０゜ ｒ ＝ １０９．７１’ Ｖ＝７？９．ＯＡ 密 度 ： 実測値 １０＝１．５５０計算１直 、
ａ＝１．５６７ （Ｚ＝１として計算ン このようにして得られた遊離酸型のＮＡＤの結晶は従来
の非晶性ＮＡＤの有する欠点分有せず、４結晶水を有す
る結晶で、安定で、吸湿性がなく流動性で、貯蔵安定性
に優れており、においがなく外観が綺麗で商品価値が高
い。本発明のＮＡＤ結晶は強制的に脱水しても結晶骨格
を失わず水分付与により容易に元の結晶に戻る。゛ゲ定
性については例えば８７℃で２４日間保っても酵素的純
度の低下は全く起らなかったが同じ条件下で非晶性ＮＡ
Ｄは約ｌθ％の純度低下がちや経時的に純度が低下する
・本発明のＮＡＤ結晶は酵素的分析でβ−ＮＡＤに対し
て１００チの含ｔを有し、ＬＤＨインヒビターなどの阻
害物質の含有は認められない。液体クロマトグラフィー
分析によると市販のβ−ＮＡＤ標品は不純物殊にα−Ｎ
ＡＤ、ＡＤＰ−リポースがｉｔ含まれるが本発明ＮＡＤ
結晶にはこれら不純物は検出されない。従来の標準的な
市販品に対応するものとして、イオン交換樹脂で処理し
た非晶−ＩＮＡＤ水溶液からメタノールで沈澱させ、精
製したＮＡＤと本発明ＮＡＤ結晶の高速液体クロマトグ
ラフィーのチャートを第２，３図に示すが従来品にはＡ
ＭＰ、ＡＤＰ ！ｊポースが検出されるのに対し本発
明ＮＡＤ結晶には検出されない。
（分子ｔ ７８５．４３）として 元素分析１直 ＣＨＮＰ 測定ｉ１ｔ 、８４．５７ ４．７８ １８．２８ ８
．４０計算値 ３４．２９ ４．８０ １８．８８ ８
．４２力−ルフイツシヤー水分 ９．４％ 水分理論値 ９．８％ 結晶系二三斜晶系 空間群二Ｐｉまたはｐｌ 格子定数 ： ａ ＝ ８．８６１Ａｂ ＝： １１
．１８１Ａ ｃ ＝ ８．６８ＯＡ α ＝９０．８２ β＝ｌＯＢ、４０゜ ｒ ＝ １０９．７１’ Ｖ＝７？９．ＯＡ 密 度 ： 実測値 １０＝１．５５０計算１直 、
ａ＝１．５６７ （Ｚ＝１として計算ン このようにして得られた遊離酸型のＮＡＤの結晶は従来
の非晶性ＮＡＤの有する欠点分有せず、４結晶水を有す
る結晶で、安定で、吸湿性がなく流動性で、貯蔵安定性
に優れており、においがなく外観が綺麗で商品価値が高
い。本発明のＮＡＤ結晶は強制的に脱水しても結晶骨格
を失わず水分付与により容易に元の結晶に戻る。゛ゲ定
性については例えば８７℃で２４日間保っても酵素的純
度の低下は全く起らなかったが同じ条件下で非晶性ＮＡ
Ｄは約ｌθ％の純度低下がちや経時的に純度が低下する
・本発明のＮＡＤ結晶は酵素的分析でβ−ＮＡＤに対し
て１００チの含ｔを有し、ＬＤＨインヒビターなどの阻
害物質の含有は認められない。液体クロマトグラフィー
分析によると市販のβ−ＮＡＤ標品は不純物殊にα−Ｎ
ＡＤ、ＡＤＰ−リポースがｉｔ含まれるが本発明ＮＡＤ
結晶にはこれら不純物は検出されない。従来の標準的な
市販品に対応するものとして、イオン交換樹脂で処理し
た非晶−ＩＮＡＤ水溶液からメタノールで沈澱させ、精
製したＮＡＤと本発明ＮＡＤ結晶の高速液体クロマトグ
ラフィーのチャートを第２，３図に示すが従来品にはＡ
ＭＰ、ＡＤＰ ！ｊポースが検出されるのに対し本発
明ＮＡＤ結晶には検出されない。
本発明ＮＡＤ結晶は、純粋であって使用に際して誤差を
生ずる原因を含まない。安定であって従来品のように低
温での保存・輸送の必要は全くない。従来品の場合のよ
うに多量の溶媒添加を繰返す精製仕上げを要せず溶媒を
使わず水溶液から結晶が得られるという工業生産上の有
利性がある。
生ずる原因を含まない。安定であって従来品のように低
温での保存・輸送の必要は全くない。従来品の場合のよ
うに多量の溶媒添加を繰返す精製仕上げを要せず溶媒を
使わず水溶液から結晶が得られるという工業生産上の有
利性がある。
などの点で優れている。
一方、高純度の非晶性（無定形）ＮＡＤを必要とする場
合１本発明のＮＡＤ結晶を一旦水に溶解して、凍結乾燥
するかメタノールなどアルコールにより沈澱させること
により容易に取得することができる。
合１本発明のＮＡＤ結晶を一旦水に溶解して、凍結乾燥
するかメタノールなどアルコールにより沈澱させること
により容易に取得することができる。
すなわち本発明ＮＡＤ結晶を温湯に溶解し１０〜５０％
の溶液を調製し、熱分解を避けるため直ちに室温（約１
８〜２５℃）に冷却し９次いで凍結乾燥するか、または
アルコール中に攪拌下注加して析出したものを分離する
ことによって高純度の非晶性ＮＡＤを得ることができる
。この方法は本発明結晶を経由しない方法に比較して簡
単な操作釦よって高純度品が得られる点で優れているこ
とは前記本発明ＮＡＤ結晶およびその製造方法の記載よ
り明らかである。
の溶液を調製し、熱分解を避けるため直ちに室温（約１
８〜２５℃）に冷却し９次いで凍結乾燥するか、または
アルコール中に攪拌下注加して析出したものを分離する
ことによって高純度の非晶性ＮＡＤを得ることができる
。この方法は本発明結晶を経由しない方法に比較して簡
単な操作釦よって高純度品が得られる点で優れているこ
とは前記本発明ＮＡＤ結晶およびその製造方法の記載よ
り明らかである。
（実施例）
以下実施例をあげて本発明を説明する□参考例１
微生物菌体からのＮＡＤ抽出液をイオン交換樹脂により
前段の精製を行い、得られたＮＡＤ水溶液に９倍量のメ
タ／−ルを添加して沈澱させたＮＡＤを泗過し、少量の
メタノールで洗滌後減圧乾燥することにより非晶性の精
製ＮＡＤ粉末金得た。
前段の精製を行い、得られたＮＡＤ水溶液に９倍量のメ
タ／−ルを添加して沈澱させたＮＡＤを泗過し、少量の
メタノールで洗滌後減圧乾燥することにより非晶性の精
製ＮＡＤ粉末金得た。
このものの酵素純度は９２チであった。この非晶性ＮＡ
Ｄ １００ ｆを水２００ゴ中に溶解した液を酢峻塩型
に再生したハイポーラス型弱塩基性アニオン交換樹脂（
ダイヤイオンＷＡ ８０） ２０ｄｉ充填した内径１．
５副の樹脂塔に空間速度１で下降通塔し、引続き脱イオ
ン水ｆ、４〇−通塔し流出液のＮＡＤ含有７ラクシヨン
２２０ｍを回収した。
Ｄ １００ ｆを水２００ゴ中に溶解した液を酢峻塩型
に再生したハイポーラス型弱塩基性アニオン交換樹脂（
ダイヤイオンＷＡ ８０） ２０ｄｉ充填した内径１．
５副の樹脂塔に空間速度１で下降通塔し、引続き脱イオ
ン水ｆ、４〇−通塔し流出液のＮＡＤ含有７ラクシヨン
２２０ｍを回収した。
これを５℃に冷却し１６時間靜置市ると容器底に結晶が
析出しはじめる。この結晶を核として引続き５℃で５時
間枠拌すると結晶ができる。これを吸引濾過し少量の冷
却した水で洗滌し真空中で乾燥しＮ Ａ Ｄ ４．水塩
９０９を得た。分析の結果本結晶ドライペースでの酵素
＠度は１００％であった。
析出しはじめる。この結晶を核として引続き５℃で５時
間枠拌すると結晶ができる。これを吸引濾過し少量の冷
却した水で洗滌し真空中で乾燥しＮ Ａ Ｄ ４．水塩
９０９を得た。分析の結果本結晶ドライペースでの酵素
＠度は１００％であった。
参考例２
参考例１と同様にして精製したＮＡＤ溶液を凍結乾燥し
て調製した非晶性のＮＡＤ （酵素純度９１チ）を５０
０ｔを水１ｚに溶解した溶液を用い。
て調製した非晶性のＮＡＤ （酵素純度９１チ）を５０
０ｔを水１ｚに溶解した溶液を用い。
樹脂としてアンバーライ） Ｉ ＲＡ −９８’ｅ使用
したほかは参考例１と同様な処理により４５５２の。
したほかは参考例１と同様な処理により４５５２の。
酵素純度１００％のＮＡＤ４水塩結晶を得た。
参考例８
参考例１の場合と同様に調製した非晶性ＮＡＤ粉末（酵
素純度９Ｂ、５％）１００ｔｆ：水２０〇−に溶解し、
参考例ＩＫよって得たＮＡＤ結晶５■を結晶の棹として
添加し５℃で６時間攪拌し結晶を晶出させた。これを分
離乾燥し９１．５ｆの酵素純度９９，８％のＮＡＤ結晶
を得た。
素純度９Ｂ、５％）１００ｔｆ：水２０〇−に溶解し、
参考例ＩＫよって得たＮＡＤ結晶５■を結晶の棹として
添加し５℃で６時間攪拌し結晶を晶出させた。これを分
離乾燥し９１．５ｆの酵素純度９９，８％のＮＡＤ結晶
を得た。
実施例１
純度９２チの粗ＮＡＤ ８９ ｔを用いこれを５０係濃
度水溶液とし以下参考例８と同様にしてＮＡＤ結晶８５
ｔを得た。このものの組成は水分９．４％ＮＡＤ９０．
５％であった。この結晶８５？を４６℃の蒸溜水１００
−に溶解し溶解後直ちに廃却し２０℃まで液温を下げた
。
度水溶液とし以下参考例８と同様にしてＮＡＤ結晶８５
ｔを得た。このものの組成は水分９．４％ＮＡＤ９０．
５％であった。この結晶８５？を４６℃の蒸溜水１００
−に溶解し溶解後直ちに廃却し２０℃まで液温を下げた
。
次いで孔径０．２２μのミリポアフィルタ−（ミリボア
コーポレーション社製）で濾過後凍結乾燥することによ
って、高純度非晶性ＮＡＤ８２ｆを取得した。このもの
の組成はＮＡＤ９？％水分２゜８％ドライペース酵素純
度は９９．８％であったり実施例２ 実施例１のＮＡＤ結晶２６ ｆ’Ｆｒ：４６℃の蒸溜水
２００−に溶解し溶解後直ちに冷却し液温を２０℃にし
た□孔径０．２２μのミリポアフィルタ−で濾過後の溶
液を、メタノール１．８ｔに攪拌しながら加えるとＮＡ
Ｄが析出する。このものをデカンタ−により捕集し少量
のメタノールで洗滌後減圧乾燥することによって高純度
の非晶性ＮＡＤ２８ｆを得た。このものはＮＡＤ９５．
Ｏｑｂ水８．０１を含有し、このＮＡＤのドライベース
酵素純度は９７．９俤であった。
コーポレーション社製）で濾過後凍結乾燥することによ
って、高純度非晶性ＮＡＤ８２ｆを取得した。このもの
の組成はＮＡＤ９？％水分２゜８％ドライペース酵素純
度は９９．８％であったり実施例２ 実施例１のＮＡＤ結晶２６ ｆ’Ｆｒ：４６℃の蒸溜水
２００−に溶解し溶解後直ちに冷却し液温を２０℃にし
た□孔径０．２２μのミリポアフィルタ−で濾過後の溶
液を、メタノール１．８ｔに攪拌しながら加えるとＮＡ
Ｄが析出する。このものをデカンタ−により捕集し少量
のメタノールで洗滌後減圧乾燥することによって高純度
の非晶性ＮＡＤ２８ｆを得た。このものはＮＡＤ９５．
Ｏｑｂ水８．０１を含有し、このＮＡＤのドライベース
酵素純度は９７．９俤であった。
（効果）
本発明は従来微量含有されることの多い不純物を貧まな
い高純度で品質安定性の高い、しかも簡単な工程によっ
て溶媒を使用せずに製造できる遊離酸型ＮＡＤ４水塩結
晶を経由するので従来のように繁雑で副材料を多く必要
とする工程を経ることなくしかも高純度の非晶性ＮＡＤ
を製造することができた。
い高純度で品質安定性の高い、しかも簡単な工程によっ
て溶媒を使用せずに製造できる遊離酸型ＮＡＤ４水塩結
晶を経由するので従来のように繁雑で副材料を多く必要
とする工程を経ることなくしかも高純度の非晶性ＮＡＤ
を製造することができた。
第１図は本発明に使用の遊離酸型、ＮＡＤ４水塩結晶の
写真である〇 第２図はＮＡＤ結晶を経由せずメタノール添加沈澱法に
より硝製仕上乾燥した非晶性精製ＮＡＤ粉末の高速液体
クロマトグラフチャートである。 ＡはＡＭＰの、ＢはＡＤＰ−リボースのピークを示す。 第８図は本発明に使・ルのＮＡＤ結晶の高速液体クロマ
トグラフチャートである。 第２図第８図の高速液体クロマトグラフの条件は次のと
おりである。 カラＡ ： ＃ −Ｂｏｎｄａｐａｋ ＮＨｔ ４ｍ＋
ＩＤｘ ８０ｔ：ｍ溶媒： ０．ＬＭ ＮＨ，Ｈ２Ｐ
Ｏ，（ＰＨ８，５）流速：２．Ｏｍｅ／ｉｎ・ チャート速度：１．０譚Δｎ
写真である〇 第２図はＮＡＤ結晶を経由せずメタノール添加沈澱法に
より硝製仕上乾燥した非晶性精製ＮＡＤ粉末の高速液体
クロマトグラフチャートである。 ＡはＡＭＰの、ＢはＡＤＰ−リボースのピークを示す。 第８図は本発明に使・ルのＮＡＤ結晶の高速液体クロマ
トグラフチャートである。 第２図第８図の高速液体クロマトグラフの条件は次のと
おりである。 カラＡ ： ＃ −Ｂｏｎｄａｐａｋ ＮＨｔ ４ｍ＋
ＩＤｘ ８０ｔ：ｍ溶媒： ０．ＬＭ ＮＨ，Ｈ２Ｐ
Ｏ，（ＰＨ８，５）流速：２．Ｏｍｅ／ｉｎ・ チャート速度：１．０譚Δｎ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、非晶性β−ニコチンアミド−アデニン−ジヌクレオ
チド水溶液を （１）酢酸塩型ハイポーラス弱塩基性アニオン交換樹脂
により不純物を除去精製する。 （２）濃度を２０〜６０％にする。 （３）後記の結晶を結晶核として添加する。 （４）０〜２０℃に冷却する。 の４工程のうち（１）（２）（３）（４）、（１）（２
）（４）又は（２）（３）（４）の組合せにより遊離酸
型β−ニコチンアミド−アデニン−ジヌクレオチド４水
塩の結晶を晶出させ分取し、この結晶を一旦水に溶解後
、凍結乾燥するかあるいはアルコールにより沈澱させた
ものを分離乾燥する高純度非晶性遊離酸型β−ニコチン
アミド−アデニン−ジヌクレオチドの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13606985A JPS6117598A (ja) | 1985-06-24 | 1985-06-24 | 高純度非晶性遊離酸型β‐ニコチンアミド‐アデニン‐ジヌクレオチドの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13606985A JPS6117598A (ja) | 1985-06-24 | 1985-06-24 | 高純度非晶性遊離酸型β‐ニコチンアミド‐アデニン‐ジヌクレオチドの製造方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55143012A Division JPS5767597A (en) | 1980-10-12 | 1980-10-15 | Preparation of beta-nicotinamide-adenine-dinucleotide crystal |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6117598A true JPS6117598A (ja) | 1986-01-25 |
Family
ID=15166489
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13606985A Pending JPS6117598A (ja) | 1985-06-24 | 1985-06-24 | 高純度非晶性遊離酸型β‐ニコチンアミド‐アデニン‐ジヌクレオチドの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6117598A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0324395U (ja) * | 1989-07-19 | 1991-03-13 | ||
| CN109836469A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-06-04 | 开封康诺药业有限公司 | 一种辅酶i的脱色工艺 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5767597A (en) * | 1980-10-15 | 1982-04-24 | Kohjin Co Ltd | Preparation of beta-nicotinamide-adenine-dinucleotide crystal |
-
1985
- 1985-06-24 JP JP13606985A patent/JPS6117598A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5767597A (en) * | 1980-10-15 | 1982-04-24 | Kohjin Co Ltd | Preparation of beta-nicotinamide-adenine-dinucleotide crystal |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0324395U (ja) * | 1989-07-19 | 1991-03-13 | ||
| CN109836469A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-06-04 | 开封康诺药业有限公司 | 一种辅酶i的脱色工艺 |
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