JPS6115693A

JPS6115693A - 長鎖高度不飽和脂肪酸グリセリドの濃縮方法

Info

Publication number: JPS6115693A
Application number: JP59134446A
Authority: JP
Inventors: Akira Nakano; 中野　章; Yoshiharu Kimura; 義晴木村
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 1984-06-29
Filing date: 1984-06-29
Publication date: 1986-01-23

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、油脂中に含まれている長鎖高度不飽和脂肪酸
グリセリドの新規な濃縮方法に関するものである。

尚１本発明における長鎖高度不飽和脂肪酸（以下ＰＵＦ
Ａと略す）とは、１分子当９２０個以上の炭莱原子を有
し、３個以上の二重結合を有する脂肪酸を意味し、長鎖
高度不飽和脂肪酸グリセリド（以下ＰＵＦＡグリ七リド
と略す）とは、ＰＵＦＡ（（その構成脂肪酸として含む
グリセリドを意味する。

油脂、たとえばイワシ、サバ、サンマ、アジなどの魚類
の油（魚油）、あるいは紅藻、褐藻などの藻類の油脂な
らびに甲殻類や゛海産物動物類の油脂などの構成脂肪酸
中には、ＰＵＦＡが約１〜４０％含まれている。このう
ちエイコサペンタエン酸（炭素数２０で不飽和の二重結
合５個を有する脂肪酸〕やドコサヘキサエン＠（炭素数
２２で不飽和の二重結合４個？１［する脂肪酸）などは
、ω−３系列の不飽和脂肪酸であり１人体内では合成出
来ない必須脂肪酸である。特にエイコサペンクエン酸は
、フロスタ（ランジン（Ｐｒｏｓｚａｇｌａｎｄｉｎ）
との関連において、近年その生理作用が研究され、抗血
栓作用や中性胆道及びコレステロールの低下作用などが
認められており、心筋梗塞や脳血栓及び動脈硬化期・の
成人病の予防及び治療薬として注目されている物ηであ
る。

〔従来の技術〕

これらエイコサベンクエン酸やドコサヘキサエンｒＩｉ
を主体としたＰＵＦＡを濃縮する方法に関しては、（１
）クロマトグラフィーによる方法。

（２）尿素付加物による方法、（３）低温溶剤分別結晶
化法、（４）分子蒸留による方法、（５）液−液分配に
よる方法、（６）二重結合への付加物による方法。

及びそれらを組み合わせた方法が知られている。

しかしながら、これらの方法においてはＰＵＦＡの濃縮
度金高める為に、前処理として油脂を脂肪酸又はそのア
ルカリ金属塩及び低級アルコールエステル等に変換した
あと、＃線処理が行なわれており、高濃度に濃縮する事
は出来ても。

それを食品用に供する事は出来ない。

食品用に供する事が出来るグリセリドの形態で、ＰＵＦ
Ａグリセリドｆ、１１１１１縮する方法としては、極低
温溶剤分別法（％開昭５８−１５５９８号公報）が知ら
れている。しかし、この方法では（１）溶剤を使用する
為、脱溶剤処理等が必要である。（２）極低温（−４０
℃へ一８０℃）で結晶化及び１遇する必要かある。とい
った特殊な条件會必費とし、しかも借られるＰＵＦＡグ
リセリドの収率は１４％（エイコサペンタエン酸含量５
１％）と低い為、その製造コストは非′帛に縄いものと
なる。

〔発明が糸状しようと１−る１ｕｊ題点〕本発明の目的
は、グリセリドの状態で油脂かう、　エイコサペンクエ
ン廠やドコサヘキサエン酸に富むＰＬＩＦＡグリセリド
を収率艮く、効果的に該編する方法上提供ブる事にある
。

〔問題点ｋ　Ｍ決するための手段〕

本発明者らは、油脂の加水が解＃素であるリパーゼのｇ
　＊　ｑ＋異性にｌａ　して検討していくなかで、最も
一般的に知られているブタすい臓リパーゼやアスベルキ
ルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）　）ｌの微生物（ユウ
ジカビ〕より得られるリパーゼ、ムコール（Ｍｕｃｏｒ
ｊ属の慮生物（ケカビ）ニジ得られルリバー七が、ＰＵ
ＦＡクリセリド會ｇむ油脂に対してはわり゛かしか加水
分解酵素７ｊかったり。

工だＰＵＦＡに対する基漬船異性もほとんどないのに比
べ、バクテリアの一釉であるアルスロバクタ・ウレアフ
ァシェンス（Ａｒｔｈｒｏ　ｂａａ℃Ｏｒ会Ｕｒｅａｆ
ａｃｉｅｎｓ）ニジ得られるリパーゼは、ＰＵＦＡとグ
リセリンとのエステル結合にはわずかじか加水分解作用
を発現しないものの他の脂肪酸とグリセリンとのエステ
ル結合に対しては、十分加水分解作用を発現する事、つ
まりＰＵＦＡグリセリドに対して基質特異性を有する牛
を見出し１本発明全完成するに到った。

即ち１本発明０ＰＵＦＡグリセリドの濃縮方法は、油脂
上アルスロバクタ・ウレアファシェンス↓Ｖ得られるリ
パーゼにより加水分解する事を特徴とするものである。

通常、加水分解酵素として用いられるアルスロバクタ・
ウレアファシェンスより得られるリパーゼが、この様に
油脂に含まれるＰＵＦＡグリセリドに対して基質特異性
含有しており、そのエステル結合ｔはとんど加水分解小
米ないという事はこれまで全（知られていない。又、油
脂中のＰＵＦＡグリセリドに対するリパーゼの基質特異
性に関する研究・報告もほとんどなく。

酵母の１槌であるキャンディグ９シリンドラシエ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ　）より得られる
リパーゼに関する特許（特ＣＩｌ昭５８−１６５７９６
号公報〕があるのみである。

本発明者らは、リパーゼの基殆爵異性に関して詳しく検
討したところ、キャンデイダｅシリンドラシエより得ら
れるリパーゼは、ＰＵＦＡグリセリドのうちｌＦ′ｆに
ドコサヘキサエン酸グリセリドに対する；４質特異性に
は優れているものの、エイコサベンクエン酸グリセリド
に対してはそれ程晶貿特異性はない小を知った。一方。

本発明で使用するアルスロバクタ・ウレアファシェンス
より得られるリパーゼはエイコサベンクエン酸グリセリ
ドに対する′ノ＆ノ肖特異性が極めて優れている挙が判
明した。この為、ＰＩＦＡ會含んだ油脂ｔＣ％アルスロ
バクタ・ウレアファシェンスエリ得られるリパーゼ全作
用さ・せて加水分解させる事によりＧ１８以下又は（及
び）二重結合２個以下の脂肪儀□グリセ１１ドは容易に
加水分解されて脂肪１１１’になるのに対し、ＰＵＦＡ
グリセリドは加水分路ｒ受は雉い為、ＰＬＩＦＡグリセ
リドとして濃縮する事が出来る。本発明はかかる知見に
基づくも、のである。

本発明で行なわれるリパーゼによる油脂の加水分解反応
には１通常リパーゼによる油脂の加水分解反応に用いら
れる条件ｔｉ用出来る。

例えばリパーゼの活性を発現させるには十分な量の水が
必要であり、水分量としては油脂に対して１〜２００％
（重量基準、以下同様ン。

望ましくは５０〜１００％程度である。又、必要に応じ
て金属の水酸化物を添加しても良い。

またアルスロバクタ・ウレアファシェンスより得られる
リパーゼの使用量は、その活性や希度望するＰＵＦＡグリ七リドの濃縮Ｉよっても変るか。

通常、油脂１ｙ当９１０〜１０００ユニツト、望ましく
は１００〜５００ユニツト位である。

本発明における特定のリパーゼによる油脂の加水分解の
程度は１反応中の水・油エマルジョンをサンプリンクし
、リパーゼを含んだ水７ｍ１１分離して得られる分解油
の酸価會測定する事により知る事が出来る。得られるＰ
ＵＦ　Ａグリセリドの濃縮度及び収率は１分解油の分解
の程度。

即ち分解油の酸価によって決まる。本発明の目的からは
１分解油の酸価が７０〜１５０になった時点で反応を終
了するのが望ましい。

もし酸価が目標の値に達しない場合は１反応時間や反応
温度でＦＪ１節する事も可能であり、またリパーゼｆｋ
を増加さセたＶ、再度リパーゼ処理する串も出来る。

上記リパーゼ処理分解油中には、目的物であるＰＵＦＡ
グリセリドのほかに脂肪酸を含んでいる為、ＰＵＦＡグ
リセリドを得る為には、脂肪酸を除去する必要がある。

脂肪ａｈ除去する方法としては、通常行なわれているア
ルカリ脱酸による方法。

水蒸気蒸留による方法のほかに、溶剤拍出による方法、
イオン交換（ｇ（脂による方法、低温結晶化による方法
、及び分子蒸留による方法、又はこれら全組み合わセた
方法ヲ遣用する事が出来る。

〔実施例〕

以下実施例及び比較例をもって本発明を具体的に説明す
る。

実施例１魚油（沃素価１７５．油脂構成脂肪酸中のｐｕｙＡａｉ
は、エイコサペンタエン酸１５．８％、ドコサヘキサエ
ン酸１１．２％で、ドコサテトラエン酸及びドコサペン
タエン酸を含んだＰＵＦＡの合計では２９．２％）１０
０１１に、アルスロバクタ・ウレアファシェンスよＵ得
うｔｔたリパーゼ（１万ユニツト７　Ｅｌ　）　ｋ　１
．ｏ　Ｅｌ含む水１００．９ｉ加え、攪拌しながら室温
で約２０時間反応させた。反応は十分平衡に達していた
。

反応終了後、リパーゼを含む水層を遠心分離によって除
き１分解油を得た。得られた分解油の酸価は約１０２で
あった。

この分解油會アルコール抽出−アルカリ脱酸法にて脱脂
肪酸処理を行ない、ＰＵＦＡグリセリド金得た。ＰＵＦ
Ａグリセリドの収率は３０％、ｍ価は０．１であった。

分析値は表１に示したがＰＵＦＡグリセリドの合計（％
）では約１．６　倍、エイコサペンクエン酸では約１．
９倍に濃縮され、その濃度は５０．３％もあった。また
。

溶剤分別法でのエイコサペンタエン酸５１．５％濃縮物
の収率と比較すると１本発明によるものは約２倍も収率
が良かった。

比較例１実施例１で用いた魚油１００ｇにキャンデイダ・シリン
ドラシエより得られたリパーゼ（５万ユニット／！９〕
全０．６７ｇ含む水１００．９に’加え、実施例１と同
一条件で反応、精ｆＭ全行ない、分解油及びＰＵＦＡグ
リセリド會得た。この際１反応は十分平衡に達していた
。得られた分解油の酸価は９６．ＰＵＦＡグリセリドの
収率は３２％で、酸価は０．１であった。分析値は表１
に示したが、ＰＵＦＡグリセリドの合計幅）では約１．
７倍、ドコサヘキサエン酸では約２．５倍とかなり良く
濃縮されるが、エイコサペンクエン酸は１．０倍であり
ほとんど＠縮されなかった。

比較例２実施例１で用いた魚油１００ｇに、ムコール属の微生物
（ケカビ）より得られたリパーゼ（１０万ユニツト／９
）を０．４９含む水１００９ｖｉ−加え、実施例１と同
一条件で反応・梢ｙＡヲ行ない１分解油及びＰＵＦ・Ａ
グリセリドを得た。

この際、反応は十分平衡に達していた。得られた分解油
の酸１ｉＴｊは約６２．ＰＵＦＡグリセリドの収率は５
７％で酸価は０．１であった。分析値は表１に示したが
、ムコール属の微生物よジ得られたリパーゼにはＰＵＦ
　Ａグリセリドに対する基質特異性はほとんどｎＣめら
れなかった。

比較例３実施例１で用いた魚油１００．９にブタのすい臓より得
られたリパーゼ（１０万ユニツト／＃）塗０．６１１　
含む水１００．９を加え、実施例１と同一条件で反応・
精製全行ない２分解油及びＰυＦＡグリセリドを得た。

こΩ際１反応は十分平衡に達していた。得られた分解油
の酸価は約４８゜ＰＵＦＡグリセリドの収率は６６％、
酸価は０．１であった。分析値は表１に示したが、ブタ
すい臓より得られたリパーゼは、ＰＵＦＡ’ｉ含む油力
旨をあまり加水分解出来ず、又、ＰＵＦＡグリセリドに
対する基質特異性もほとんど認められなかった。

比較例４実施例１で用いた魚油１００ｇにアスペルギルス属の１
紋生１勿（コウジカビ＞　、ｉ：　ｖ　ｑａられたリパ
ーゼ（１８万ユニツト／ｙ）を０．２９含む水１００９
を加え、実施例１と同一条件で反応精製を行ない１分解
油及びＰＵＦＡグリセリドを得た。この際１反応は十分
に平衡に達していた。

得られた分解油のＩＩｋ価は２８．ＰＵＦＡグリセリド
の収率は８０％゛戯価は０．１であった。分析値は表１
に示したが、アスペルギルス痛の１版生物より得られた
リパーゼではＰＵＦＡ’ｉ含む油脂はほとんど分解小米
なかった（分ｊ！＃率１４％）。

また、ＰＵＦＡグリセリドに対する基質特異性もほとん
どなかった。

表１　リパーゼ処理で得られるＰＵＦＡグリセリドの分
析値（＊２）　特開昭５８−１５５９８号公報の実施例
より引用〔発明の効果〕叙上の如（１本発明のアルスロバクタ・ウレアファシェ
ンスより得られるリパーゼを用いたＰＵＦＡグリ七リド
の濃縮方法を用いれば、グリセリドの状態で油脂からＰ
ＵＦＡグリセリドを収率良（、効果的に濃縮出来る。ま
た、この場合、その生理活性が特に注目されているエイ
コサペンタエン噌グリセ１）ドを詩に菌濃度Ｖこ濃縮す
ることができイ）。丘だ１本発明におり°るアルスロバ
クタ・ウレアファシェンス、ｃりｆ）ＩＢＦＬるリパー
ゼによる加水分解反応は、はぼ當温付近で行なわれる為
、極低温溶剤分別法に比ベエネルギー消費が少なくてす
みまた、収率も良いので、Ｊ、り安価に［］的物全製造
出来る。

Claims

【特許請求の範囲】

油脂を、アルスロバクタ・ウレアファシエンス（Ａｒｔ
ｈｒｏｂａｃｔｏｒ　ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ）より得
られるリパーゼにより加水分解する事を特徴とする長鎖
高度不飽和脂肪酸グリセリドの濃縮方法。