JPS6112696A - ガングリオシドの濃縮方法 - Google Patents
ガングリオシドの濃縮方法Info
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- JPS6112696A JPS6112696A JP13326884A JP13326884A JPS6112696A JP S6112696 A JPS6112696 A JP S6112696A JP 13326884 A JP13326884 A JP 13326884A JP 13326884 A JP13326884 A JP 13326884A JP S6112696 A JPS6112696 A JP S6112696A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ガングリオシドを濃縮しかつ精製する方法に
関するものである。′ ガングリオシドは人及び動物の神経系組織、特に、脳に
多く含まれている糖脂質の１種で、その構成成分の一つ
であるシアル酸の結合数及び結合位置によって多数の分
子種があり、ガングリオシドとはそれらの総称である。
関するものである。′ ガングリオシドは人及び動物の神経系組織、特に、脳に
多く含まれている糖脂質の１種で、その構成成分の一つ
であるシアル酸の結合数及び結合位置によって多数の分
子種があり、ガングリオシドとはそれらの総称である。
近年、ガングリオシドの生体内での作用の解明がｉ歩し
ており、また医薬品として中枢神経系および末梢神経系
の神経刺激伝達障害の治療に°利用されている。
ており、また医薬品として中枢神経系および末梢神経系
の神経刺激伝達障害の治療に°利用されている。
従来技術
従来からガングリオシドの抽出・精製方法は種種研究さ
れている。例えば、Ｓ ｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍらの方法
（Ｂｉｏｃ旧ｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ ６１７
巻（１９８０）９７−１０９頁）によれば、組織からク
ロロホルム、メタノール及び水の混合溶液によって抽出
し、フォルテの分配（Ｊ、 Ｆｏｌｃｈ、 Ｊ、 Ｂｉ
ｏｌ； Ｃｈｅｍ、 。
れている。例えば、Ｓ ｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍらの方法
（Ｂｉｏｃ旧ｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ ６１７
巻（１９８０）９７−１０９頁）によれば、組織からク
ロロホルム、メタノール及び水の混合溶液によって抽出
し、フォルテの分配（Ｊ、 Ｆｏｌｃｈ、 Ｊ、 Ｂｉ
ｏｌ； Ｃｈｅｍ、 。
２２６巻（１９５７）４９７−５０９）によってガング
リオシドを水性溶液として分離し、消泡剤を添加しなが
ら蒸発乾固し、再度、クロロホルム、メタソール及び水
の混合溶液に溶解し、不溶物を除去して蒸発乾固し、更
に、これを水に溶解し透析して蒸発乾固することにより
ガングリオシドを精製している。また、医薬品に応用す
る目的で別の抽出法が特許出願されている。（フィディ
ーア、ソシエタ、ベル、アチオニ、特開昭５２−３４９
．ｘ２）この方法では、動物の脳組織からガングリオシ
ドをテトラヒドロフランにより抽出し、イオン交換カラ
ムクロマトグラフィーで精製し、水酸化バリウムで沈澱
として分離し、これを塩酸水溶液に溶解して透析したの
ち蒸発乾固し、フォルテの分配により水性溶液として再
度透析し凍結乾燥して製品としている。
リオシドを水性溶液として分離し、消泡剤を添加しなが
ら蒸発乾固し、再度、クロロホルム、メタソール及び水
の混合溶液に溶解し、不溶物を除去して蒸発乾固し、更
に、これを水に溶解し透析して蒸発乾固することにより
ガングリオシドを精製している。また、医薬品に応用す
る目的で別の抽出法が特許出願されている。（フィディ
ーア、ソシエタ、ベル、アチオニ、特開昭５２−３４９
．ｘ２）この方法では、動物の脳組織からガングリオシ
ドをテトラヒドロフランにより抽出し、イオン交換カラ
ムクロマトグラフィーで精製し、水酸化バリウムで沈澱
として分離し、これを塩酸水溶液に溶解して透析したの
ち蒸発乾固し、フォルテの分配により水性溶液として再
度透析し凍結乾燥して製品としている。
更だ、このガングリオシドを各ガングリオシド分子種に
分離・精製するためにはＮａｇａｉらの方法（Ｂｉｏｃ
ｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ、 ５２８巻（
１９７８）２５７−２６７）が広く用いられている。す
なわち、陰イオン交換樹脂によるイオン交換カラムクロ
マトグラフィーでシアル酸の結合数により分画し、それ
ぞれの画分を蒸発乾固し、蒸溜水に溶解し透析を行い脱
塩する。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで
精製して単一分子種としている。
分離・精製するためにはＮａｇａｉらの方法（Ｂｉｏｃ
ｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ、 ５２８巻（
１９７８）２５７−２６７）が広く用いられている。す
なわち、陰イオン交換樹脂によるイオン交換カラムクロ
マトグラフィーでシアル酸の結合数により分画し、それ
ぞれの画分を蒸発乾固し、蒸溜水に溶解し透析を行い脱
塩する。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで
精製して単一分子種としている。
解決しようとする問題点
この様に非常に煩雑な方法によって抽出・精製されてい
るガングリオシドを、治療薬として利用するために大量
に調製することは、特に、ガングリオシドを含んだ大量
の水性溶液を、発泡を抑えながら蒸発乾固すること、あ
るいはイオン交換カラムより溶出するために用いられた
塩類を除去するために透析することに、多大の時間と費
用を要し、困難であった。
るガングリオシドを、治療薬として利用するために大量
に調製することは、特に、ガングリオシドを含んだ大量
の水性溶液を、発泡を抑えながら蒸発乾固すること、あ
るいはイオン交換カラムより溶出するために用いられた
塩類を除去するために透析することに、多大の時間と費
用を要し、困難であった。
問題解決の手段
本発明者らは、大量のガングリオシドを効率的に濃縮、
精製する方法について鋭意研究を重ねた結果、溶液中の
ガングリオシドが適当な条件下で活性炭に接触すること
により高い割合で活性炭に吸着されることを見い出して
、本発明を完成した。
精製する方法について鋭意研究を重ねた結果、溶液中の
ガングリオシドが適当な条件下で活性炭に接触すること
により高い割合で活性炭に吸着されることを見い出して
、本発明を完成した。
即ち、ガングリオシド又は単一のガングリオシド分子種
を溶解または懸濁した水、メタノール、エタノール、テ
トラヒドロフランおよびクロロホルムあるいはこれらの
２種以上の混合溶液が原料として用いられる。また、こ
の溶液は塩類を含んでいてもかま抄ない。例えば、前述
したフォルテの分配によって生じたガングリオシドの水
性溶液（水、メタノールの混合液に少量のクロロホルム
を含む）、あるいはＮａｇａｉらの方法でイオン交換カ
ラムクロマトゲランイーで分画したそれぞれのガングリ
オシド分子種の両分（メタノール溶液で酢酸アンモニウ
ムを含む）などが用いられる。特に、水性の溶液におい
て有用である。使用する活性炭は特に制限は無く１通常
の脱色炭、粒状活性炭が利用できる。クロマトグラフ用
粒状活性炭は特に好都合である。これらの活性炭はその
まま使用してもよいが、常法により酸、アルカリ洗滌し
て活性化してもよい。アンモニア水で洗滌し次いで水、
メタノールで洗滌して使用することが好ましい。活性炭
の使用量は溶解しているガングリオシドに対して１０倍
ないし１００倍量（重量／重量）が好ましく、ガングリ
オシド溶液中に加えて、１時間ないし２４時間攪拌する
ことによりガングリ・オシドの吸着が達成される。活性
炭への吸着は９０％以上、はぼ１００％に達する。ガン
グリオシドを吸着した活性炭は水洗することにより、ガ
ングリオシドを失うことなく共存する塩類を除去できる
。
を溶解または懸濁した水、メタノール、エタノール、テ
トラヒドロフランおよびクロロホルムあるいはこれらの
２種以上の混合溶液が原料として用いられる。また、こ
の溶液は塩類を含んでいてもかま抄ない。例えば、前述
したフォルテの分配によって生じたガングリオシドの水
性溶液（水、メタノールの混合液に少量のクロロホルム
を含む）、あるいはＮａｇａｉらの方法でイオン交換カ
ラムクロマトゲランイーで分画したそれぞれのガングリ
オシド分子種の両分（メタノール溶液で酢酸アンモニウ
ムを含む）などが用いられる。特に、水性の溶液におい
て有用である。使用する活性炭は特に制限は無く１通常
の脱色炭、粒状活性炭が利用できる。クロマトグラフ用
粒状活性炭は特に好都合である。これらの活性炭はその
まま使用してもよいが、常法により酸、アルカリ洗滌し
て活性化してもよい。アンモニア水で洗滌し次いで水、
メタノールで洗滌して使用することが好ましい。活性炭
の使用量は溶解しているガングリオシドに対して１０倍
ないし１００倍量（重量／重量）が好ましく、ガングリ
オシド溶液中に加えて、１時間ないし２４時間攪拌する
ことによりガングリ・オシドの吸着が達成される。活性
炭への吸着は９０％以上、はぼ１００％に達する。ガン
グリオシドを吸着した活性炭は水洗することにより、ガ
ングリオシドを失うことなく共存する塩類を除去できる
。
活性炭からガングリオシドを溶離するために、メタノー
ル、エタノール、テトラヒドロフランおよびクロロホル
ムなどの°溶媒でも可能だが充分ではない。しかし、塩
基性の溶液により容易に殆んどが溶離する。例えば、ア
ンモニア水、トリエチルアミン、ピリジン類、ジメチル
アニリン等の塩基を含んだメタノール、エタノール、テ
トラヒドロフランおよびクロロホルムあるいはこれらの
２種以上の混合溶液が好適に用いられる。溶出の効果と
溶離液からのガングリオシドの回収を考慮するとこれら
の溶液のうちでも特にメタノール、クロロホルムの混合
溶液にアンモニア、アンモニア水又はトリエチルアミン
を含んだ系が好都合である。
ル、エタノール、テトラヒドロフランおよびクロロホル
ムなどの°溶媒でも可能だが充分ではない。しかし、塩
基性の溶液により容易に殆んどが溶離する。例えば、ア
ンモニア水、トリエチルアミン、ピリジン類、ジメチル
アニリン等の塩基を含んだメタノール、エタノール、テ
トラヒドロフランおよびクロロホルムあるいはこれらの
２種以上の混合溶液が好適に用いられる。溶出の効果と
溶離液からのガングリオシドの回収を考慮するとこれら
の溶液のうちでも特にメタノール、クロロホルムの混合
溶液にアンモニア、アンモニア水又はトリエチルアミン
を含んだ系が好都合である。
ガングリオシドを吸着した活性炭は、その５倍ないし１
０倍（重量／重量）の溶液に１０分ないし６時間接触さ
せることにより、９５％以上のガングリオシトを溶離さ
せ回収することが出来る。
０倍（重量／重量）の溶液に１０分ないし６時間接触さ
せることにより、９５％以上のガングリオシトを溶離さ
せ回収することが出来る。
発明の効果
本発明の方法により、非常に困難であった発泡性のガン
グリオシド水溶液（例えば、フォルテの分配による水溶
性溶液）の濃縮あるいは塩類を含んだガングリオシド水
溶液の透析による脱塩は活性炭による吸着、溶離の操作
によって簡単な有機溶媒の蒸発乾固に変えることが出来
た。更に、この処理によりガングリオシドにきょう雑し
ている蛋白質を除去することも出来る。本発明の方法を
用いると、まず組織から大量のガングリオシドを抽出し
、フォルテの分配に続けてその水性溶液から活性炭へ吸
着させ、クロロホルム、メタノール、アンモニア混合溶
液により溶出し、同溶液の蒸発乾固、更に必要あればイ
オン交換カラムクロマトグラフィーによる精製及び塩類
を含む場合には再度、活性炭吸着と溶出を行ない、溶出
液の蒸発乾固の操作によりガングリオシドの濃縮物を得
ることができる。本発明をさらに具体的に説明するため
に実施例を示す。
グリオシド水溶液（例えば、フォルテの分配による水溶
性溶液）の濃縮あるいは塩類を含んだガングリオシド水
溶液の透析による脱塩は活性炭による吸着、溶離の操作
によって簡単な有機溶媒の蒸発乾固に変えることが出来
た。更に、この処理によりガングリオシドにきょう雑し
ている蛋白質を除去することも出来る。本発明の方法を
用いると、まず組織から大量のガングリオシドを抽出し
、フォルテの分配に続けてその水性溶液から活性炭へ吸
着させ、クロロホルム、メタノール、アンモニア混合溶
液により溶出し、同溶液の蒸発乾固、更に必要あればイ
オン交換カラムクロマトグラフィーによる精製及び塩類
を含む場合には再度、活性炭吸着と溶出を行ない、溶出
液の蒸発乾固の操作によりガングリオシドの濃縮物を得
ることができる。本発明をさらに具体的に説明するため
に実施例を示す。
零；ボ日岨珠
実施例１
アセトンで脱脂、脱水した牛脳からメタノールで抽出し
たガングリオシドをクロロホルム、メタノール、水で分
配した上層の水性溶液１００−（シアル酸、２０７．６
１Ｒ９：ガングリオシドとして６６４．．３■含有）に
クロマトグラフ用活性炭（希塩酸、クロロ、ホルム、メ
タノール、濃アンモニア水混合液で処理後メタノール、
水で洗浄、９５℃で乾燥）１０ｇを加えて攪拌した。溶
液中のシアル酸量は、３０分後に４９８■（２４％）、
２時間後に１４５■（７％）となり、１夜放置しても１
３．０■であった。
たガングリオシドをクロロホルム、メタノール、水で分
配した上層の水性溶液１００−（シアル酸、２０７．６
１Ｒ９：ガングリオシドとして６６４．．３■含有）に
クロマトグラフ用活性炭（希塩酸、クロロ、ホルム、メ
タノール、濃アンモニア水混合液で処理後メタノール、
水で洗浄、９５℃で乾燥）１０ｇを加えて攪拌した。溶
液中のシアル酸量は、３０分後に４９８■（２４％）、
２時間後に１４５■（７％）となり、１夜放置しても１
３．０■であった。
吸引済遇して活性炭を水、メタノール（１：１．ｖ／ｖ
）の混合溶液で洗浄したのち、クロロホルム、メタノー
ル、濃アンモニア水（６： ４ ： １ 、 Ｖ／Ｖ／
Ｖ ）の混合溶液５０−に加えて攪拌した。５時間後に
は溶液中如シアル酸１９５．２〜（９４％）が溶出した
。濾過後、同じ組成の溶媒１〇−受洗浄し、炉収率８８
．５％であった。共存した蛋白質については、原料の水
性溶液中に１５．３ｑ（２，３％対ガングリオシド）で
あったものが、粗結晶中には９．０〜（１，５％）にな
りガングリオシドが精製されていた。
）の混合溶液で洗浄したのち、クロロホルム、メタノー
ル、濃アンモニア水（６： ４ ： １ 、 Ｖ／Ｖ／
Ｖ ）の混合溶液５０−に加えて攪拌した。５時間後に
は溶液中如シアル酸１９５．２〜（９４％）が溶出した
。濾過後、同じ組成の溶媒１〇−受洗浄し、炉収率８８
．５％であった。共存した蛋白質については、原料の水
性溶液中に１５．３ｑ（２，３％対ガングリオシド）で
あったものが、粗結晶中には９．０〜（１，５％）にな
りガングリオシドが精製されていた。
実施例２
実施例１と同じ方法で得たガングリオシドの水性溶液１
（１，，０、ｎｌをイオン交換樹脂（ＤＥＡＥ−セフ
ァセル、アセテート型、ファルマシアｆｆ）５゜−に流
してガングリオシドを吸着させた。メタノール２００ｒ
ｎ！、テ洗浄したのち１モルの酢酸アンモニウム、メタ
ノール溶液で溶出し、ガングリオシドを含む両分１００
−を得た。これを１／２に濃縮し、同量の水で希釈し、
クロマトグラフ用活性炭１０ｇを加えて１夜攪拌し吸着
後、活性炭を濾過、蒸溜水で充分洗浄した。この活性炭
をクロロホルム、メタノール、濃アンモニア水（６：
４ ： １． 。
（１，，０、ｎｌをイオン交換樹脂（ＤＥＡＥ−セフ
ァセル、アセテート型、ファルマシアｆｆ）５゜−に流
してガングリオシドを吸着させた。メタノール２００ｒ
ｎ！、テ洗浄したのち１モルの酢酸アンモニウム、メタ
ノール溶液で溶出し、ガングリオシドを含む両分１００
−を得た。これを１／２に濃縮し、同量の水で希釈し、
クロマトグラフ用活性炭１０ｇを加えて１夜攪拌し吸着
後、活性炭を濾過、蒸溜水で充分洗浄した。この活性炭
をクロロホルム、メタノール、濃アンモニア水（６：
４ ： １． 。
Ｖ／ｖ／ｖ）の混合液５〇−中で２時間攪拌し、濾過、
洗滌し、溶出液を蒸発乾固して塩類を含まないガングリ
オシド６０６．７岬得た。
洗滌し、溶出液を蒸発乾固して塩類を含まないガングリ
オシド６０６．７岬得た。
Claims (3)
- （１）ガングリオシドを含む溶液を活性炭に接触せしめ
てガングリオシドを吸着させ、次いで塩基性の溶液でガ
ングリオシドを溶出することを特徴とするガングリオシ
ドの濃縮方法。 - （２）ガングリオシドを含む溶液が、水、メタノール、
エタノール、テトラヒドロフラン、又はクロロホルムを
含む溶液である第一項の方法。 - （３）塩基性の溶液が、メタノール、クロロホルム、ア
ンモニア、アンモニア水、メタノール、クロロホルム又
はトリエチルアミンを含む溶液である第一項の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13326884A JPS6112696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | ガングリオシドの濃縮方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13326884A JPS6112696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | ガングリオシドの濃縮方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6112696A true JPS6112696A (ja) | 1986-01-21 |
| JPH0469160B2 JPH0469160B2 (ja) | 1992-11-05 |
Family
ID=15100646
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13326884A Granted JPS6112696A (ja) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | ガングリオシドの濃縮方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6112696A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001009151A1 (en) * | 1999-07-30 | 2001-02-08 | Trb Pharma Indústria Química E Farmacêutica Ltda. | Process for preparing a charcoal-gm1 complex |
| JP2006272542A (ja) * | 2005-03-01 | 2006-10-12 | Kyokuto Sanki Co Ltd | 糊付機用スリッター |
-
1984
- 1984-06-29 JP JP13326884A patent/JPS6112696A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001009151A1 (en) * | 1999-07-30 | 2001-02-08 | Trb Pharma Indústria Química E Farmacêutica Ltda. | Process for preparing a charcoal-gm1 complex |
| US6602991B1 (en) | 1999-07-30 | 2003-08-05 | Trb Pharma Industria Quimica E Farmaceutica Ltda | Process for preparing a charcoal-GM1 complex |
| JP2006272542A (ja) * | 2005-03-01 | 2006-10-12 | Kyokuto Sanki Co Ltd | 糊付機用スリッター |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0469160B2 (ja) | 1992-11-05 |
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