JPS61180719A - ガングリオシドの取得方法 - Google Patents
ガングリオシドの取得方法Info
- Publication number
- JPS61180719A JPS61180719A JP60019855A JP1985585A JPS61180719A JP S61180719 A JPS61180719 A JP S61180719A JP 60019855 A JP60019855 A JP 60019855A JP 1985585 A JP1985585 A JP 1985585A JP S61180719 A JPS61180719 A JP S61180719A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ganglioside
- gangliosides
- ammonia
- alkali metal
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は特定の有機溶媒を含む媒体に存在するガングリ
オシドを取得する方法に関するものである。ガングリオ
シドは人及び動物の脳に多く含まれている糖脂質の１種
で、その構成成分の一つであるシアル酸の結合数及び結
合位置によって多数の分子種があり、ガングリオシドと
はそれらの総称である。
オシドを取得する方法に関するものである。ガングリオ
シドは人及び動物の脳に多く含まれている糖脂質の１種
で、その構成成分の一つであるシアル酸の結合数及び結
合位置によって多数の分子種があり、ガングリオシドと
はそれらの総称である。
近年、ガングリオシドの生体内での作用の解明が進歩し
ており、医薬品として中枢および末梢神経系の刺激伝達
障害の治療に利用されている。
ており、医薬品として中枢および末梢神経系の刺激伝達
障害の治療に利用されている。
従来技術
これまでガングリオシドの抽出、精製方法について種々
報告がなされている。例えばｓｖｅｎｎｅｒ−ｈｏｌｍ
らの方法（Ｂｉｏａｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、ａｃｔ
飄６１７巻（１９８０）９７〜１０９匂によれば、組織
からクロロホルム、メタノール及び水の混合溶液によっ
て抽出し、７オルチの分配（Ｊ、 Ｆｏｌａｈ、 、ｒ
、 Ｂｉｏｌ。
報告がなされている。例えばｓｖｅｎｎｅｒ−ｈｏｌｍ
らの方法（Ｂｉｏａｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、ａｃｔ
飄６１７巻（１９８０）９７〜１０９匂によれば、組織
からクロロホルム、メタノール及び水の混合溶液によっ
て抽出し、７オルチの分配（Ｊ、 Ｆｏｌａｈ、 、ｒ
、 Ｂｉｏｌ。
ＣｈｅＩｎ、２２６巻（１９５７）４９７−５０９Ｍ）
によってガングリオシドを水性溶液として分離し、消泡
剤を添加しながら蒸発乾固し、粗製のガングリオシドを
得ている。また医薬品に応用する目的で別の抽出法が特
許出願されている。（フィディーア、ソシエタ、ベル、
アチオエ、特開昭５２−３４９１２）この方法では動物
の脳からガングリオシドをテトラヒドロフランにより抽
出し、エーテルと水を加えて分配し、下層の水性溶液を
イオン交換カラムクロマトグラフィーで精製し、水酸化
バリウムで沈澱として分離し、これを塩酸水溶液に溶解
して透析したのち蒸発乾固し、前述の７オルチの分配に
より水性溶液とし凍結乾燥して製品としている。
によってガングリオシドを水性溶液として分離し、消泡
剤を添加しながら蒸発乾固し、粗製のガングリオシドを
得ている。また医薬品に応用する目的で別の抽出法が特
許出願されている。（フィディーア、ソシエタ、ベル、
アチオエ、特開昭５２−３４９１２）この方法では動物
の脳からガングリオシドをテトラヒドロフランにより抽
出し、エーテルと水を加えて分配し、下層の水性溶液を
イオン交換カラムクロマトグラフィーで精製し、水酸化
バリウムで沈澱として分離し、これを塩酸水溶液に溶解
して透析したのち蒸発乾固し、前述の７オルチの分配に
より水性溶液とし凍結乾燥して製品としている。
解決しようとする問題点
このようにガングリオシドを含む大量の水性溶液からガ
ングリオシドを単離する方法は、発泡を抑えながら蒸発
乾固するか、水酸化バリウムにより不溶性塩を生成し塩
酸で塩を脱離し透析したのち凍結乾燥するか、あるいは
イオン交換カラムへ、吸、脱着する方法であり、いづれ
も大量のガングリオシドを調製することを非常に困難に
している。
ングリオシドを単離する方法は、発泡を抑えながら蒸発
乾固するか、水酸化バリウムにより不溶性塩を生成し塩
酸で塩を脱離し透析したのち凍結乾燥するか、あるいは
イオン交換カラムへ、吸、脱着する方法であり、いづれ
も大量のガングリオシドを調製することを非常に困難に
している。
問題解決の手段
本発明者らは大量のガングリオシドを効率的に精製取得
する方法について研究を重ねた結果、動物の脳から抽出
したガングリオシドのメタノール溶液をそのま＼冷却す
るとガングリオシドが析出することを見出し特許出願し
た（特願昭５９−３５３０３）。さらに研究の結果ガン
グリオシドの水溶液あるいは有機溶媒を含んだ水溶液に
多量の低級アルコールを加えて冷却するとガングリオシ
ドが析出することを見出した。そしてざらにいづれの場
合も特にアルカリ金属水酸化物又はアンモニアの存在下
ではガングリオシドの回収が量的にも質的にも著しく改
着されることを見出して本発明を完成した。
する方法について研究を重ねた結果、動物の脳から抽出
したガングリオシドのメタノール溶液をそのま＼冷却す
るとガングリオシドが析出することを見出し特許出願し
た（特願昭５９−３５３０３）。さらに研究の結果ガン
グリオシドの水溶液あるいは有機溶媒を含んだ水溶液に
多量の低級アルコールを加えて冷却するとガングリオシ
ドが析出することを見出した。そしてざらにいづれの場
合も特にアルカリ金属水酸化物又はアンモニアの存在下
ではガングリオシドの回収が量的にも質的にも著しく改
着されることを見出して本発明を完成した。
本発明に言う低級アルコールを含有する溶媒とは、特に
メタノールおよびエタノールを含有する溶媒であり、ｎ
−又は１ｓｏ−プロパツールを含むものであっても良い
。そしてこの溶媒の系には通常は水が存在する。更にこ
の溶媒系には少量のテトラヒドロ７ラン、クロロホルム
あるいはエーテル等が存在していてもよい。例えば前述
したフォルチの分配によって生じた上層あるいはテトラ
ヒドロフラン、エーテルおよび水の分配によって生じた
下層等に低級アルコールを添加したものがこれに当る。
メタノールおよびエタノールを含有する溶媒であり、ｎ
−又は１ｓｏ−プロパツールを含むものであっても良い
。そしてこの溶媒の系には通常は水が存在する。更にこ
の溶媒系には少量のテトラヒドロ７ラン、クロロホルム
あるいはエーテル等が存在していてもよい。例えば前述
したフォルチの分配によって生じた上層あるいはテトラ
ヒドロフラン、エーテルおよび水の分配によって生じた
下層等に低級アルコールを添加したものがこれに当る。
また低級アルコールの含有率は約２０％以上、好ましく
は７０％以上がよく、水溶液あるいは低級アルコールの
含有率の小さい溶液には、メタノール、エタノール、ｎ
−プロパツールあるいは１ｓｏ−プロパツール等の低級
アルコールを単独または混合して追加するのが良い。低
級アルコールの含有率が小さく、含水率が大きいとガン
グリオシドの回収率が低下する。
は７０％以上がよく、水溶液あるいは低級アルコールの
含有率の小さい溶液には、メタノール、エタノール、ｎ
−プロパツールあるいは１ｓｏ−プロパツール等の低級
アルコールを単独または混合して追加するのが良い。低
級アルコールの含有率が小さく、含水率が大きいとガン
グリオシドの回収率が低下する。
添加するアルカリ金属水酸化物としては水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウムおよび水酸化リチウムがあり、その
他アンモニア水でも良い。これらの効果はガングリオシ
ドの回収率を著しく向上させることにある。そしてアル
カリ金属水酸化物あるいはアンモニアの存在する系を一
旦３０〜６０℃の温度に維持することは、粗製ガングリ
オシド中に共存するリン脂質を加水分解して除去するこ
とにより取得されたガングリオシドの純度を高いものと
する効果がある。アルカリ金属水酸化物あるいはアンモ
ニアの使用量は溶媒中に存在するガングリオシドの構成
分子であるシアル酸と当量以上が好ましく、通常はガン
グリオシドと同量ないし１０倍量程度使用される。この
処理方法としてはガングリオシドを含んだ溶液に低級ア
ルコールとアルカリ金属水酸化物あるいはアンモニアを
加え、を炉、取する。低級アルコールの添加はリン脂質
を分解したあとでも良い。
ム、水酸化カリウムおよび水酸化リチウムがあり、その
他アンモニア水でも良い。これらの効果はガングリオシ
ドの回収率を著しく向上させることにある。そしてアル
カリ金属水酸化物あるいはアンモニアの存在する系を一
旦３０〜６０℃の温度に維持することは、粗製ガングリ
オシド中に共存するリン脂質を加水分解して除去するこ
とにより取得されたガングリオシドの純度を高いものと
する効果がある。アルカリ金属水酸化物あるいはアンモ
ニアの使用量は溶媒中に存在するガングリオシドの構成
分子であるシアル酸と当量以上が好ましく、通常はガン
グリオシドと同量ないし１０倍量程度使用される。この
処理方法としてはガングリオシドを含んだ溶液に低級ア
ルコールとアルカリ金属水酸化物あるいはアンモニアを
加え、を炉、取する。低級アルコールの添加はリン脂質
を分解したあとでも良い。
発明の効果
本発明の方法によれば、従来、非常に困難であった強発
泡性のガングリオシド水性溶液の濃縮によるガングリオ
シドの回収が、アルカリ処理と濾過といった簡単な操作
のみとすることができる。
泡性のガングリオシド水性溶液の濃縮によるガングリオ
シドの回収が、アルカリ処理と濾過といった簡単な操作
のみとすることができる。
ガングリオシドの回収率はアルカリ金属水酸化物あるい
はアンモニアが存在しない場合には約５０％程度である
が本発明の方法によれば９０７−９５％に達する。さら
に本発明のもう一つの特徴は夾雑している蛋白質の大部
分がろ液に移行して除去されることである。したがって
前述したフォルチの上層から本発明の方法で得たガング
リオシドは６０〜７０％の純度をもち、若干の硫糖脂質
、中性糖脂質を含み、蛋白質、リン脂質をほとんど含ん
でいない。このガングリオシドをシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーで処理することにより、容易に精製して
医薬用に供しうる。
はアンモニアが存在しない場合には約５０％程度である
が本発明の方法によれば９０７−９５％に達する。さら
に本発明のもう一つの特徴は夾雑している蛋白質の大部
分がろ液に移行して除去されることである。したがって
前述したフォルチの上層から本発明の方法で得たガング
リオシドは６０〜７０％の純度をもち、若干の硫糖脂質
、中性糖脂質を含み、蛋白質、リン脂質をほとんど含ん
でいない。このガングリオシドをシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーで処理することにより、容易に精製して
医薬用に供しうる。
本発明をさらに具体的に説明するために実施例を示す。
実施例 １゜
アセトンで脱脂、脱水した牛脳からメタノールで抽出し
たガングリオシドをクロロホルム、メタノールおよび水
で分配した上層の水性溶液５０ｏ−（シアル酸１．７９
９、ガングリオシド換算５．７３ｇ含有、水約２４０ｆ
ｎ１．を含む）にメタノール７００ｍ／と水酸化ナトリ
ウム２３りを加え、５０℃で１時間撹拌した。反応後０
〜５℃に冷却して析出物を吸引濾過し、冷メタノール１
００−で洗浄した。減圧乾燥して８．２りのガングリオ
シドを得た。シアル酸分析によるとガングリオシドの純
度は６４．３％で回収率は９２％であった。
たガングリオシドをクロロホルム、メタノールおよび水
で分配した上層の水性溶液５０ｏ−（シアル酸１．７９
９、ガングリオシド換算５．７３ｇ含有、水約２４０ｆ
ｎ１．を含む）にメタノール７００ｍ／と水酸化ナトリ
ウム２３りを加え、５０℃で１時間撹拌した。反応後０
〜５℃に冷却して析出物を吸引濾過し、冷メタノール１
００−で洗浄した。減圧乾燥して８．２りのガングリオ
シドを得た。シアル酸分析によるとガングリオシドの純
度は６４．３％で回収率は９２％であった。
このガングリオシドは薄層クロマトグラフィーで展開し
、レゾルシノールで発色させてガングリオシドの各分子
種の組成をしらべたが、原料とした水性溶液中の組成と
変化がなかった。オルシノールで発色させると硫糖脂質
および中性糖脂質の存在が確認された。モリブデン酸、
およびニンヒドリンによる発色はほとんど無かった。同
様に炉液を検査したところ、ニンヒドリンの発色が強く
、レゾルシノールの発色は弱く、他の発色はほとんど無
かった。
、レゾルシノールで発色させてガングリオシドの各分子
種の組成をしらべたが、原料とした水性溶液中の組成と
変化がなかった。オルシノールで発色させると硫糖脂質
および中性糖脂質の存在が確認された。モリブデン酸、
およびニンヒドリンによる発色はほとんど無かった。同
様に炉液を検査したところ、ニンヒドリンの発色が強く
、レゾルシノールの発色は弱く、他の発色はほとんど無
かった。
実施例 ２゜
実施例１と同様に処理したガングリオシドの水性溶液３
１０−（ガングリオシドとして６．９８ ｍｇ／ｍｌ含
む、水約１３５ｄ）に水酸化カリウム１０りをメタノー
ル１００−に溶解して加え、４０℃で１時間撹拌したの
ちメタノール２５０ｆｎｌを加え、次いで氷冷し、析出
物を吸引濾過し冷メタノール５〇−で洗浄し、減圧乾燥
してガングリオシド３．４ｇ回収した。純度５９．５％
回収率９３．６％であった。
１０−（ガングリオシドとして６．９８ ｍｇ／ｍｌ含
む、水約１３５ｄ）に水酸化カリウム１０りをメタノー
ル１００−に溶解して加え、４０℃で１時間撹拌したの
ちメタノール２５０ｆｎｌを加え、次いで氷冷し、析出
物を吸引濾過し冷メタノール５〇−で洗浄し、減圧乾燥
してガングリオシド３．４ｇ回収した。純度５９．５％
回収率９３．６％であった。
実施例 ３゜
実施例１と同様に処理したガングリオシドの水溶液１０
０−（ガングリオシドとして２．５り含む、水５０−）
に水酸化ナトリウムＩＯりを加え４０℃で１時間処理し
たのちエタノール２ ｏ Ｏｍｊｌ［ｒえ次いで０〜５
℃に冷却し析出物を吸’ＪＩ濾過して冷エタノール１０
０−で洗浄し、減圧乾燥してガングリオシド３．８７を
回収した。純度６２．５％回収率９５％であった。
０−（ガングリオシドとして２．５り含む、水５０−）
に水酸化ナトリウムＩＯりを加え４０℃で１時間処理し
たのちエタノール２ ｏ Ｏｍｊｌ［ｒえ次いで０〜５
℃に冷却し析出物を吸’ＪＩ濾過して冷エタノール１０
０−で洗浄し、減圧乾燥してガングリオシド３．８７を
回収した。純度６２．５％回収率９５％であった。
実施例 ４゜
粗ガングリオシド２．０り （シアル酸１８．８％含む
、ガングリオシドとしてｔ、ｚｇ）をメタノール１００
−に加温溶解し、少量の不溶物を濾過して除去した。こ
の溶液に１０％カセイソーダのメタノール溶液１２−を
加え、冷却して析出物を炉取し、冷メタノール２０−で
洗浄した。乾燥して結晶１．６ｇを得た（シアル酸２１
．６％を含む、ガングリオシドとして１．１り）回収率
９２％であった。
、ガングリオシドとしてｔ、ｚｇ）をメタノール１００
−に加温溶解し、少量の不溶物を濾過して除去した。こ
の溶液に１０％カセイソーダのメタノール溶液１２−を
加え、冷却して析出物を炉取し、冷メタノール２０−で
洗浄した。乾燥して結晶１．６ｇを得た（シアル酸２１
．６％を含む、ガングリオシドとして１．１り）回収率
９２％であった。
実施例 ５゜
実施例４と同様のガングリオシドのメタノール溶液を用
いて、カセイソーダのメタノール溶液にかえて、濃アン
モニア水５−を加えて結晶１．７りを得た。（シアル酸
２０．３％を含む、ガングリオシドとして１．１り）回
収率は９２％であった。
いて、カセイソーダのメタノール溶液にかえて、濃アン
モニア水５−を加えて結晶１．７りを得た。（シアル酸
２０．３％を含む、ガングリオシドとして１．１り）回
収率は９２％であった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）低級アルコールを含有する溶媒中に溶解しているガ
ングリオシドを、アルカリ金属水酸化物又はアンモニア
の存在下に析出物として取得する方法。 ２）低級アルコールがメタノール又はエタノールである
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３）アルカリ金属水酸化物又はアンモニアの存在する系
を一旦４０〜６０℃の温度に維持して行なうことを特徴
とする特許請求の範囲第１項又は第２項に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60019855A JPS61180719A (ja) | 1985-02-06 | 1985-02-06 | ガングリオシドの取得方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60019855A JPS61180719A (ja) | 1985-02-06 | 1985-02-06 | ガングリオシドの取得方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61180719A true JPS61180719A (ja) | 1986-08-13 |
| JPH0535155B2 JPH0535155B2 (ja) | 1993-05-25 |
Family
ID=12010844
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60019855A Granted JPS61180719A (ja) | 1985-02-06 | 1985-02-06 | ガングリオシドの取得方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61180719A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5521164A (en) * | 1989-11-17 | 1996-05-28 | Fidia, S.P.A. | Method for the preparation and purification of a mixture of glycosphingolipids free from contamination by non-conventional viruses |
| JPH09291094A (ja) * | 1996-04-26 | 1997-11-11 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ガングリオシド高含有組成物の製造法 |
| WO2005030974A1 (ja) * | 2003-09-26 | 2005-04-07 | Yamasa Corporation | Ｃｍｐ−ｎ−アセチルノイラミン酸の製造法 |
| US7955825B2 (en) | 2002-07-18 | 2011-06-07 | Yamasa Corporation | Process for producing CMP-N-acetylneuraminic acid |
-
1985
- 1985-02-06 JP JP60019855A patent/JPS61180719A/ja active Granted
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5521164A (en) * | 1989-11-17 | 1996-05-28 | Fidia, S.P.A. | Method for the preparation and purification of a mixture of glycosphingolipids free from contamination by non-conventional viruses |
| JPH09291094A (ja) * | 1996-04-26 | 1997-11-11 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ガングリオシド高含有組成物の製造法 |
| US7955825B2 (en) | 2002-07-18 | 2011-06-07 | Yamasa Corporation | Process for producing CMP-N-acetylneuraminic acid |
| WO2005030974A1 (ja) * | 2003-09-26 | 2005-04-07 | Yamasa Corporation | Ｃｍｐ−ｎ−アセチルノイラミン酸の製造法 |
| US8450088B2 (en) | 2003-09-26 | 2013-05-28 | Yamasa Corporation | Process for producing CMP-N-acetylneuraminic acid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0535155B2 (ja) | 1993-05-25 |
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