JPS60181019A - ガングリオシドの抽出方法 - Google Patents
ガングリオシドの抽出方法Info
- Publication number
- JPS60181019A JPS60181019A JP59035303A JP3530384A JPS60181019A JP S60181019 A JPS60181019 A JP S60181019A JP 59035303 A JP59035303 A JP 59035303A JP 3530384 A JP3530384 A JP 3530384A JP S60181019 A JPS60181019 A JP S60181019A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ganglioside
- methanol
- brain
- dried
- gangliosides
- Prior art date
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はガングリオシドを動物の脳から抽出する方法に
関する。ガングリオシドは動物の全身に存在するが特に
脳に多く含まれている糖脂質の１種で、その構成４分で
あるＮ−アセチルノイラミン酸の結合数および結合配置
によって多数の同族明細書Ｏ？２”Ｌ：ｉ（内容に変更
なし）体があり、ガングリオシドとはそれらの総称であ
る。
関する。ガングリオシドは動物の全身に存在するが特に
脳に多く含まれている糖脂質の１種で、その構成４分で
あるＮ−アセチルノイラミン酸の結合数および結合配置
によって多数の同族明細書Ｏ？２”Ｌ：ｉ（内容に変更
なし）体があり、ガングリオシドとはそれらの総称であ
る。
近年ガングリオシドの生理的作用の解明が著しく進歩し
ており、同時に治療面の応用でもヒトの中枢神経系およ
び末梢神経系の神経刺激伝達障害に有効であることが明
らかになって来た。
ており、同時に治療面の応用でもヒトの中枢神経系およ
び末梢神経系の神経刺激伝達障害に有効であることが明
らかになって来た。
従来ガングリオシドの抽出方法は種々研究されており、
例えばＪ、Ｆｏｌｃｈらの方法ＣＪ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈ
ｅｍ、。
例えばＪ、Ｆｏｌｃｈらの方法ＣＪ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈ
ｅｍ、。
２２６巻４９７頁〜（１９５７）Ｌこの改良法としての
Ｌ−５ｖｅｎｎｅｒｈｏｌ＋ｎらのクロロホルム−メタ
ノール混合液による方法［Ｂｉｏｃｂｉｍ、 Ｂｉｏｐ
ｈＡ、 Ａｃｔａ ６１７巻９７頁〜（１９８０）〕、
あるいはＧ １．”ｅ ｔ ｔ ａｍａ ｎ ｔ ｉら
のテトラヒドロキシフランによる方法（：Ｂ １ｏｃｈ
ｉｍ。
Ｌ−５ｖｅｎｎｅｒｈｏｌ＋ｎらのクロロホルム−メタ
ノール混合液による方法［Ｂｉｏｃｂｉｍ、 Ｂｉｏｐ
ｈＡ、 Ａｃｔａ ６１７巻９７頁〜（１９８０）〕、
あるいはＧ １．”ｅ ｔ ｔ ａｍａ ｎ ｔ ｉら
のテトラヒドロキシフランによる方法（：Ｂ １ｏｃｈ
ｉｍ。
Ｂｉｏｐｈｓ、 Ａｃｔａ ２９６巻１６０頁〜（１９
７３））などが代表的な方法である。しかしこれらの方
法はいずれも高価な、あるいは毒性の高い有機溶媒をし
かも大量に使用しており、かつ抽出後のガングリオシド
の回収にもかなりの手間を必要とし、例えばり、 Ｓｖ
ｅｎｎｅｒｈｏｌｍの方法では脳５００２を処理するに
２回抽出操作を行ない、有機溶媒の使用量の合計はクロ
ロホルム５．４ｔとメタノール８．２ｔの大量であり、
かつ、水を加えて所謂Ｆｏｌｃｈの分配［：、Ｉ’、
ＦｏｌｃｈらＪ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅ＋ｎ、、 ２２
６巻４９７頁〜（１９５７）〕を行ない、極めて大量の
上澄成約１０７にトルエンや各種アルコール（例えばブ
タノールやインブタノール）を加えて発泡を防ぎながら
減圧下濃縮乾泪する方法である。しかし発泡を防ぐこと
は容易でなく、極めて長時間を要し、この間に物質の分
解（シアル酸の切断９もきたしかねない。
７３））などが代表的な方法である。しかしこれらの方
法はいずれも高価な、あるいは毒性の高い有機溶媒をし
かも大量に使用しており、かつ抽出後のガングリオシド
の回収にもかなりの手間を必要とし、例えばり、 Ｓｖ
ｅｎｎｅｒｈｏｌｍの方法では脳５００２を処理するに
２回抽出操作を行ない、有機溶媒の使用量の合計はクロ
ロホルム５．４ｔとメタノール８．２ｔの大量であり、
かつ、水を加えて所謂Ｆｏｌｃｈの分配［：、Ｉ’、
ＦｏｌｃｈらＪ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅ＋ｎ、、 ２２
６巻４９７頁〜（１９５７）〕を行ない、極めて大量の
上澄成約１０７にトルエンや各種アルコール（例えばブ
タノールやインブタノール）を加えて発泡を防ぎながら
減圧下濃縮乾泪する方法である。しかし発泡を防ぐこと
は容易でなく、極めて長時間を要し、この間に物質の分
解（シアル酸の切断９もきたしかねない。
これに対し本発明によれば実施例に記述するように脳５
００２処理１−るに必要な有機溶媒は僅かにメタノール
１６５ｔとクロロホルム７０ｍ１にすキス、Ｆｏｌｃｂ
の分配上澄液は８５ｒｎｌとなり、前法と比較するとお
よそクロロホルムは１／８００ 、メタノールは１１５
濃縮乾濁すべき分配上澄液は実に１／Ｉ ＤＯ以下の少
量である。
００２処理１−るに必要な有機溶媒は僅かにメタノール
１６５ｔとクロロホルム７０ｍ１にすキス、Ｆｏｌｃｂ
の分配上澄液は８５ｒｎｌとなり、前法と比較するとお
よそクロロホルムは１／８００ 、メタノールは１１５
濃縮乾濁すべき分配上澄液は実に１／Ｉ ＤＯ以下の少
量である。
本発明者等は上述の如く、従来法の欠点を改善するため
に鋭意研究の結果、低水分条件下ではガングリオシドの
メタノールに対する溶解性は温度依存性が著しく高いこ
とを見い出した。即ち、至適の高温では極めて容易に組
織よりガングリオシドが抽出される。抽出の際は加温下
で攪拌、謔過し、Ｐ液を冷却すると、ガングリオシドが
容易に析出するので戸数するのみで回収出来ることにな
る。具体的には原料の動物の脳は凍結乾燥したもの、あ
るいはアセトンで脱脂脱水したものを用い、メタノール
を乾燥脳１部に５〜２０部使用し、２０〜６０℃で好ま
しくは６０〜５０°Ｃで２〜４時間攪拌するとガングリ
オシドの抽出率（Ｎ−了セチルノイラミン酸の定量値か
ら算出、以下同様）は９０〜１００％に達する、一方抽
出時の水分の存在は抽出率を太き（左右し、乾燥脳中の
水分が２０％以上であるか、あるいは抽出に使用するメ
タノールに含有される水分が５％以上になると著しく抽
出が困難になる。
に鋭意研究の結果、低水分条件下ではガングリオシドの
メタノールに対する溶解性は温度依存性が著しく高いこ
とを見い出した。即ち、至適の高温では極めて容易に組
織よりガングリオシドが抽出される。抽出の際は加温下
で攪拌、謔過し、Ｐ液を冷却すると、ガングリオシドが
容易に析出するので戸数するのみで回収出来ることにな
る。具体的には原料の動物の脳は凍結乾燥したもの、あ
るいはアセトンで脱脂脱水したものを用い、メタノール
を乾燥脳１部に５〜２０部使用し、２０〜６０℃で好ま
しくは６０〜５０°Ｃで２〜４時間攪拌するとガングリ
オシドの抽出率（Ｎ−了セチルノイラミン酸の定量値か
ら算出、以下同様）は９０〜１００％に達する、一方抽
出時の水分の存在は抽出率を太き（左右し、乾燥脳中の
水分が２０％以上であるか、あるいは抽出に使用するメ
タノールに含有される水分が５％以上になると著しく抽
出が困難になる。
他方抽出液からガングリオシドを析出させるには、ゆる
やかに攪拌しなから０−１０℃まで冷却するとガングリ
オシドの約９０％が析出する。
やかに攪拌しなから０−１０℃まで冷却するとガングリ
オシドの約９０％が析出する。
析出したガングリオシドはクロロホルム−メタノール−
水系の所謂Ｆｏ Ｉ ｃ ｌ＋の分配を行ない濃縮乾−
Ｊ−ｆると少量のリン脂質や蛋白質を含む粗製ガングリ
オシドが得られる。更にこれを分画し精製するにはイオ
ン交換樹脂またはシリカゲルカラムクロマトグラフによ
ってなされる。。
水系の所謂Ｆｏ Ｉ ｃ ｌ＋の分配を行ない濃縮乾−
Ｊ−ｆると少量のリン脂質や蛋白質を含む粗製ガングリ
オシドが得られる。更にこれを分画し精製するにはイオ
ン交換樹脂またはシリカゲルカラムクロマトグラフによ
ってなされる。。
文献ＣＫ ５ａｚｕｋｉ Ｊ、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、、
１２巻 ６２９頁〜（１９６５）］によれば１１００
％メタノ−ではガングリオシドの抽出は低下すると述べ
ている。しか′しこれは未乾燥脳または乾燥不充分な脳
、即ち水分の過度の存在下あるいは抽出温度が低温の場
合に当てはまることで、本発明のように抽出条件を整え
ると高収率でガングリオシドを抽出、回収することが出
来る。
１２巻 ６２９頁〜（１９６５）］によれば１１００
％メタノ−ではガングリオシドの抽出は低下すると述べ
ている。しか′しこれは未乾燥脳または乾燥不充分な脳
、即ち水分の過度の存在下あるいは抽出温度が低温の場
合に当てはまることで、本発明のように抽出条件を整え
ると高収率でガングリオシドを抽出、回収することが出
来る。
本発明の実施には、動物は牛、豚、馬、羊、鯨などのは
乳類、ニワトリ、アヒル、七面鳥などの鳥Ｍ、マグロ、
サケ、マス、イワシなどの魚類等が原料となり得、その
全脳を摘出して凍結乾燥あるいはアセトンによる脱脂脱
水処１したものからガングリオシドを８０％以上の収率
で抽出、回収することが出来る。
乳類、ニワトリ、アヒル、七面鳥などの鳥Ｍ、マグロ、
サケ、マス、イワシなどの魚類等が原料となり得、その
全脳を摘出して凍結乾燥あるいはアセトンによる脱脂脱
水処１したものからガングリオシドを８０％以上の収率
で抽出、回収することが出来る。
−ル各１ｔを加え、所定温度で２時間撹拌後濾過して炉
液中の凶−丁セチルノイラミン酸をレゾルシン比色法で
定量し抽出率をめた。結果を第１図に示した。
液中の凶−丁セチルノイラミン酸をレゾルシン比色法で
定量し抽出率をめた。結果を第１図に示した。
拌したのち参考例−１と同様にして抽出率をめた。結果
を第２図に示す。
を第２図に示す。
参考１ダ１−６、冷却温度と回収率
参考例−１における抽出温度４０℃のＦ液を１００ｍｅ
宛に分割し、それぞれ所定温度の水槽中で６時間ゆるや
かに背押しながら冷却したのち、析出結晶’ａ’ Ｐ
取、Ｎ−アセチルノイラミン（浚の回収率をめた。結果
を第５図に示す。
宛に分割し、それぞれ所定温度の水槽中で６時間ゆるや
かに背押しながら冷却したのち、析出結晶’ａ’ Ｐ
取、Ｎ−アセチルノイラミン（浚の回収率をめた。結果
を第５図に示す。
実施例
牛の全層５ｏｏｙを約１ ｏｎ厚さにスライスし、凍結
乾燥して、水分６３％、Ｎ−アセチルノイラミン酸０２
４７％を含有する粉末１０５７を得る。その粉末を無水
メタノール１ｔに加え６５℃±２℃加温下攪拌する。６
時間後、ｐ過、残渣を０．５７のメタノールで洗哨する
。Ｆ液と洗液を合わせゆるやかに攪拌しなから０℃に冷
却する。２時間後析出した白色結晶を戸数し、冷メタノ
ール０１ｔで洗滌したのちクロロホルム７０ｒｎ１．、
メタノール５０ｍｅおよび水２０−を加えて攪拌溶解し
て静置すると二層に分離する。分液して下層にメタノー
ル２０ｍ１および水２０ｍ１を加え再び攪拌静置して分
液する。上層を合わせて８５−を減圧下濃縮乾咽すると
Ｎ−アセチルノイラミン酸を１２４％含有する粗製ガン
グリオシドを１．８７得る。Ｎ−アセチルノイラミン酸
の回収率８６１％、濃縮率５０２倍である。
乾燥して、水分６３％、Ｎ−アセチルノイラミン酸０２
４７％を含有する粉末１０５７を得る。その粉末を無水
メタノール１ｔに加え６５℃±２℃加温下攪拌する。６
時間後、ｐ過、残渣を０．５７のメタノールで洗哨する
。Ｆ液と洗液を合わせゆるやかに攪拌しなから０℃に冷
却する。２時間後析出した白色結晶を戸数し、冷メタノ
ール０１ｔで洗滌したのちクロロホルム７０ｒｎ１．、
メタノール５０ｍｅおよび水２０−を加えて攪拌溶解し
て静置すると二層に分離する。分液して下層にメタノー
ル２０ｍ１および水２０ｍ１を加え再び攪拌静置して分
液する。上層を合わせて８５−を減圧下濃縮乾咽すると
Ｎ−アセチルノイラミン酸を１２４％含有する粗製ガン
グリオシドを１．８７得る。Ｎ−アセチルノイラミン酸
の回収率８６１％、濃縮率５０２倍である。
第１図は参考例−１の抽出温度と抽出率の関係を第２図
は参考例−２のメタノール中の水分と抽出率の関係を第
６図は参考例−６の冷却温度と回収率の関係を各々表わ
したものである。 特許出願人 三井東圧化学株式会社 第１図 第２図 メタノール中０水分（Ｃ） 第６図 −１００１０２０ 冷却温度（Ｑ 手 絖 補 正 書（方式） 昭和５９年６月ａ日 特許庁長官 殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第３５３０３号２、
発明の名称 ガングリオシドの抽出方法６補正をする者 事件との関係 特許出願人 ・住 所 東京都千代田区霞が関三丁目２番５号名 称
三井東圧化学株式会社 ５補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄（その第２頁〜４頁） ６、補正の内容 明細書の浄１（内容に変更なし）
は参考例−２のメタノール中の水分と抽出率の関係を第
６図は参考例−６の冷却温度と回収率の関係を各々表わ
したものである。 特許出願人 三井東圧化学株式会社 第１図 第２図 メタノール中０水分（Ｃ） 第６図 −１００１０２０ 冷却温度（Ｑ 手 絖 補 正 書（方式） 昭和５９年６月ａ日 特許庁長官 殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第３５３０３号２、
発明の名称 ガングリオシドの抽出方法６補正をする者 事件との関係 特許出願人 ・住 所 東京都千代田区霞が関三丁目２番５号名 称
三井東圧化学株式会社 ５補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄（その第２頁〜４頁） ６、補正の内容 明細書の浄１（内容に変更なし）
Claims (3)
- （１）乾燥した動物の脳をメタノールによって抽出し、
該抽出液を冷却してガングリオシドを析出させることを
特徴とするガングリオシドの抽出方法。 - （２）メタノールの水分含有率が５％以下であることを
特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （３）抽出の温度が２０℃以上６０℃以下である特許請
求の範囲第１項記載の方法。 （４ン抽出液の冷却温度が１０℃以下である特許請求の
範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59035303A JPS60181019A (ja) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | ガングリオシドの抽出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59035303A JPS60181019A (ja) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | ガングリオシドの抽出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60181019A true JPS60181019A (ja) | 1985-09-14 |
| JPH045679B2 JPH045679B2 (ja) | 1992-02-03 |
Family
ID=12438010
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59035303A Granted JPS60181019A (ja) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | ガングリオシドの抽出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60181019A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991007417A1 (en) * | 1989-11-17 | 1991-05-30 | Fidia S.P.A. | Method for the preparation and purification of a mixture of glycosphingolipids free from contamination by non-conventional viruses |
| JPH09291094A (ja) * | 1996-04-26 | 1997-11-11 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ガングリオシド高含有組成物の製造法 |
| CN105111253A (zh) * | 2015-09-18 | 2015-12-02 | 重庆寰瑞生物技术有限公司 | 一种提取分离神经节苷脂的方法 |
| CN109320566A (zh) * | 2018-08-14 | 2019-02-12 | 四川兴杰象药业有限公司 | 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法 |
| CN109705176A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-05-03 | 苏州纳微科技股份有限公司 | 一种猪神经节苷脂的分离纯化方法 |
-
1984
- 1984-02-28 JP JP59035303A patent/JPS60181019A/ja active Granted
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991007417A1 (en) * | 1989-11-17 | 1991-05-30 | Fidia S.P.A. | Method for the preparation and purification of a mixture of glycosphingolipids free from contamination by non-conventional viruses |
| AU649635B2 (en) * | 1989-11-17 | 1994-06-02 | Fidia S.P.A. | Method for the preparation and purification of a mixture of glycosphingolipids free from contamination by non-conventional viruses |
| US5521164A (en) * | 1989-11-17 | 1996-05-28 | Fidia, S.P.A. | Method for the preparation and purification of a mixture of glycosphingolipids free from contamination by non-conventional viruses |
| JPH09291094A (ja) * | 1996-04-26 | 1997-11-11 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ガングリオシド高含有組成物の製造法 |
| CN105111253A (zh) * | 2015-09-18 | 2015-12-02 | 重庆寰瑞生物技术有限公司 | 一种提取分离神经节苷脂的方法 |
| CN109320566A (zh) * | 2018-08-14 | 2019-02-12 | 四川兴杰象药业有限公司 | 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法 |
| CN109320566B (zh) * | 2018-08-14 | 2022-03-15 | 四川兴杰象药业有限公司 | 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法 |
| CN109705176A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-05-03 | 苏州纳微科技股份有限公司 | 一种猪神经节苷脂的分离纯化方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH045679B2 (ja) | 1992-02-03 |
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