JPS6042334A - 糖尿病治療用薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 糖尿病は重要な症候として血糖レベルの上昇を示す代謝
障害である。これは膵臓ホルモンであるインシュリンが
光分量で放出されないことにより惹起される。天然ホル
モンの置換は今日では大抵、屠殺動物の腺から単離され
る動物インシュリンによりまたは豚インシュリンから半
合成的にまたは遺伝子工学的方法により入手しうるヒト
インシュリンにより置き代えられている。

遺伝子工学的方法を用いる場合、従来２種の基本的に異
なる方法が用いられていた。すなわちＡ鎖およびＢ鎖を
別々に合成しそしてそれらを後から化学的に再び組み合
わさせるもので、インシュリンの天然の前駆物質である
プレプロインシュリンの合成と同様である。プロインシ
ュリン分子においてはＡ鎖およびＢ鎖は結合片であるＯ
　−ａプチドにより結合している。その重要な機能は現
江の概念によれは２個の鎖を相対的に相互に空間的にＩ
Ｉ！ｉｌ　＞ｉ＝して正しいたたみ込み（ｆｏｌｄｉｎ
ｇ）が行われうるようにすることである。たたみ込みが
行われた後、３個のジスルフイツド僑を結合させそれに
よりインシュリンの天然の三次元構造が安だ化される。

Ｃ−はプチドの除去はトリプシン活性およびカルポキン
ベプチクーセＢ活性を有する酪素により遂行される。解
裂位置はＬｙｓ−Ａｒｇ胆列（Ａ鎖のＮ−末端の１ｊｉ
Ｊ）　＊たはＡｒｇ−Ａｒｇ　（Ｂ　ｇのＣ−末端）に
より予め与えられる。遊離インシュリンのみが完全な生
物学的活性を有する。何故ならＣ−ペプチドの存在下に
おいては分子平面での生物学的認知領域のおそらく一部
分が連数されているＩＪ・うである。

インシュリンの特別の化学的性質ゆえに治療は大抵非経
口的に遂行される。すなわちこのホルモンは１２すえば
まだ作用を及ぼし得ないうらに冑腸管通過（（靜して完
全に分解されるからである。し〃・しンよρ・ら本質的
に種々の比較的非特異的な蛋白分解１，５ン糸による分
解反応はまた注射部位Ｊ６よびｔ１７７環に１６いても
起る。それにより惹起されるほんＯ約７分間という短い
生体内半減、Ｉｔ、１１は生理学的に動的半画の意力上
において全くＭ要である。しかしながら治厭はそれによ
り非常に困勇ＩＦとなる。（ｉｉＪ故］工１：）糖尿病
患者は典型的には１０・１回、大抵共時直１ｉｉｌに注
射しなげればｌよ；９７よいからであΦ。

従ってインシュリンに持続性作用を伺与する試みがすで
に早期から１工されている。その際これまでに最も成功
したのはデポ助ハリの添加によりインシュリンを離俗性
状態に変換する方法であった。これにはなかんずく２価
亜鉛イオンがあげられ、その存在下にインツユリンは中
性媒体中で結晶状または無定形で存在しうる。塩基性蛋
白質１刊えば硫酸プロタミンずたはヒトグロビンの添加
は、インシュリンが等電点ｐニー５．４を有する酸性分
子なので同じ効果がある。塩基性蛋白質とインシュリン
は中性範囲において結晶性または無定形の塩様の離解性
複合体として存在する。

これら徐放性製剤からのインシュリンの緩徐な放出は、
想像さするように、希釈すなわち個々の結晶または無足
形沈殿を４８成している成分を拡散することによるか、
または塩基性蛋白質とのインシュリン複合物の場合はデ
ボ担体の蛋白分解的崩解により行われる。

最近なおヒトのプロインシュリンが単独テかまたは慣用
のデボｂ書加７１１ｊと組み合せて遅延作用成分として
論睦された（　ＤＥ−Ａ−３２？＋２０３６憔照凡その
考えは、Ｃ−ペプチドの蛋白分解的除去が生体内で遅延
して遂行され、そしてそれゆえに生物学的にそれ自体あ
まり活性でないプロインシュリン（蛋白量基準でインシ
ュリン活性の約騒）から完全に活性なホルモンが放出さ
れるということである。その順列においてヒトのそれと
同一である（明らかに数種ある）かまたは非常に類似し
たプロインシュリンのみが人間での使用に受容されうる
。一般に知られているように、豚または牛プロインシュ
リンは免疫原である。しかしなからプロインシュリンの
正確な作用機序は現在のところまだ明らかでない。特殊
なインシュリンが放出されるという証明は全（ない。反
対に、生体内における削屑は大抵は不活性な断片の生成
を伴って多数の方法で遂行される。従ってプロインシュ
リンの治療上の利用味一般的である場合はむしろ受容体
レベルにおいて見出され得た。

今や糖尿病治療は食事時の利用可能性における相異、皮
下組織の特性における相異、それと並んでまた詳組な食
事習慣、身体の活性およびその他多数のような個々の影
響因子により特徴すけもれる。従って個々の要求に適合
された異なる作用特性を有する一連のインシュリン製剤
を入手しうろことは血糖を良好に調整するためには絶対
に必須要件である。至適でない調整Ｋ　１１連し７て高
血糖症または低血糖症のような直接的な主観的および客
観的効果と並んで特に糖尿病性の遅れた損傷についての
論題が論議された。これＫはなかんずく巨大脈管病およ
び細管異常、腎臓病症、神経病および網膜症が挙げられ
る。

患者の要求に最適に適合する製剤として純粋な遅延性イ
ンシュリンと並んでなかんずくいわゆる中間インシュリ
ンが証明された。これらは、遅延作用性および即効性な
らびに短時間作用性成分からなる混合物である。かかる
混合物は一般に比較的狭く限定された混合比においての
み長時間にわたって安定である複雑な多層系である。従
って例えば豚の２−亜鉛−インシュリン結晶の）跡濁液
は溶フｖｆされた豚インシュリンとは自由に混合できな
い。混合され溶解されたインシュリンは直ちにかまたは
時間の経過中に結晶の安定化に必要な比較的高い亜鉛含
量ゆえに沈殿してくる。かかる混合物は溶解されたイン
シュリンとして牛インシュリン（しかしながらこれによ
り種の純度、医学的に所望される性質が失われるンまた
は溶解された豚インシュリンとンエニルアラニン（Ｂｌ
）−ｇインシュリンとの混合物が使用される場合は狭い
限界内で女だである（　Ｄｇ−ａ−２４１８２１８号お
よび同２．４ｂ９５１５号明細書参照ン。遅延成分とし
てプロタミンおよびインシュリンの結晶がインファン比
（１ｓｏｐｈａｎｅｒａｔｉｏ　）で使用される場合、
溶解されたインシュリンとの混合可能性に関して好都合
なのはプロタミン−インシュリン製ハリである。これら
製剤を用いてＮＰＨに代妖的な作用プロフィルが調製さ
れうる。異種のしかしながら比較的受容しうる蛋白質と
して硫酸プロタミンの存在が際加削として代表的である
と思われる。

本発明の目的は個々の糖尿病、ω者の個々の要求に適合
された作用特性を有する安定な桑畑を提供することにあ
る。

この目的は今や本発明によりそのＢ鎖Ｃ−末端が塩基特
性を有する有機基を担持するインシュリン訪専犀ｈ　”
よび天然インシュリンまたはそのアスーＰｈｅＢ６１　
、）Ａ似坏からなる作用″１勿質組み１５せにより解決
された。

Ｂ鎖のＣ−末端にＱ　Ａｒｇ−ＯＨまたはＡｒｇ−Ａｒ
ｇ−ＯＨを担ツ・〕”するインシュリン訴得体は既／ｌ
ｃ記載されている。刈Ｉ）れているようにこれら篩・稽
・体は生体内におけるインシュリンへのプロインシュリ
ンの酵木的メ換に餅して天然の中間生成物として住Ｊ戎
しセしてまた膵ＩＩ議抽出９勿中にも少量に検出され５
る。前Ｎｔ　した基は通常トリプシンおよび／またはカ
ルポキ／ベブナダーセＢまたは類似特異性を有する（ｊ
ｉ素により分解されて天然のイ／・７ユリンρ）放出さ
れる。

他のこλｔらＣ−末端が塩基性に修飾されたインシュリ
ン誘導体、それらの製法２６よびぞｉＬらの使用はド・
ｆソ特許出Ｍｐ　号の目的である。

本発明は５作用？／ｌ質の組み合せとしてａ）等電点５
．８〜８．５を４１する式Ｉ（式中Ｒ１はＨまたはＨ−
Ｐｉｔθであり、Ｒ５０は中性の遺伝的にコード化され
うるＬ−アミノ酸の残基でありそしてＢ５１はその（イ
（成に［，１−５個のα−アミノ酸が関与しそしてその
肩付により存在する末端カルボキシ官能基が遊離か、エ
ステル官能基としてか、アミド官能基としてか、ラクト
ンとしてかまたは０１（２０Ｈに蔵元された形で存在し
うる、５０個までの炭素原子を１する生理学的に受答し
うる塩基特性を４４する有機塩である）を有するインシ
ュリン誘４体、および１））、　Ｒ’がＨまたはＨ−ｐ
ｈθであり、Ｒ３０がＡ１へＴｈｒまたはＳｅｒを表わ
しそしてＲ３１がＯＨである式１のインシュリン、また
はそれらの生理学的に受容しうる塩、ならびに 場合によりプロインシュリンおよび場合によりＣ−ペプ
チド を含有することを特徴とする。生理学的に受容しうる担
体および作用物質組み台せからなる桑畑に関する。

前１己ａ）にあげられた式Ｉのインシュリン誘導体にお
いて、Ｒ３１が式−Ｘ、−Ｓを有する基を表わし、ここ
でｎは０．１．２または６でありＸは天然に存在する中
性または塩基性Ｌ−アミノ酸（好ましくは塩基性Ｌ−ア
ミノ酸特にＡｒｇ、　Ｌｙｓ、　ＨｌｓまたはＯｒｎ　
）および／またはそれらに対応するＤ−アミノ酸の同一
または異なる残基を表わしそしてＳはＯＨであるかまた
は生理学的に受容しうるカルボキシ保ぬ基であってこれ
はｎが０である場合はＩＷ性に荷電したかまたはプロト
ン化しうる塩基性基を担持し、またはｎが０である場合
はかかる基を担持できそして式中Ｃ−末端−Ｘ−Ｓはま
た相当するアルコールに還元されたアミノ酸の残基な表
わすか、またはｎが２または３である場合はホモセリン
ラクトン残基を表わしうる化合物が好ましい。

Ｂ１位にフェニルアラニンを担持する式Ｉのインシュリ
ン誘導体が特に好ましい。さらにＢ３０位にＡｌａ、　
ＴｈｒまたはＳｅｒを有する化合物が好ましい。そのＡ
ｉおよびＣＢ２〜２９）鎖は牛インシュリンまたは豚イ
ンシュリン、しかし特にヒトインシュリンの順列を有す
るのが好都合である。

アミノ敵残基Ｘおよび相当する銹４４体の残基は相互に
独立してＤ−またはＬ−配置で存在しうる。しかしなか
らすべての残基はＬ−配置であるのが好ましい。

遺伝的にコード化されうるのは下記Ｌ−アミノ酸ずなわ
ちＧｌｙ、　Ａｌａ％Ｓｅｒ、　Ｔｈｒ％Ｖａｌ、　Ｌ
ｅｕ％ｌ１ｅＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｏｙｓ
、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｌｓ　、Ｔｙｒ、　Ｐｈ
ｅ％Ｔｒｐ％Ｐｒｏ　（中性アミノ酸には下線が引いで
ある）である。

中性の天然に存在するアミノ酸としては特にＧｌｙ％Ａ
ｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、　Ｖａｌ、　Ｌｅｕ、工１ｅ、
　Ａｓｎ、　Ｇｌｎ。

Ｃｙｅ、Ｍｅｔ、　Ｔｙｒ、　Ｐｈｅ、　Ｐｒｏまたは
Ｈ４Ｆが包含されるものと理解される。塩基性の天然に
存在するアミノばとしては特にＡｒｇ、　Ｌｙｅ、Ｈｙ
ｌ、Ｏｒｎ、　ＯｉｔまたはＨ１θが包含されるものと
理解される。

本発明によるインシュリン誘導体におけるＢ鎖のＣ−末
端で場合により遊離カルボキシ官能基を保験する基とし
てはなかんずくエステルおよびアミド基、好ましくは（
ａ　１−ｃ　６　）アルコキシ。

（Ｃ５−０６）シクロアルキルオキシ、　ＮＲ２、ジ（
ｃｌ（６）アルキルアミノ、（ＣＩ−０６）アルキルア
ミノ、または塩基性基例えばアミノ−（０２−０６）ア
ルコキシ、（Ｃ２−Ｃ４）アルキルアミノ−（ｃ　２−
ｃ　６　）アルコキシ、ジ（ＯｊＳＯ４）アルキルアミ
ノ−（Ｃ２−Ｃ６）アルコキシ、トリ（ｏｌ−Ｃ４）ア
ルキルアンモニオ−（Ｃ２−ｃ、Ｈ）アルコキシ、アミ
ノ−（Ｃ２−Ｃ６）アルキルアミノ、（ｃ　１−ｃ　４
　）アルキルアミノ−（Ｃ２（６）アルキルアミノ、〔
ジ（Ｃ１−０４）アルキルアミノ〕−（Ｃ２〜ａ６）ア
ルキルアミノまたは〔トリ（ｃｌ−Ｃ４）アルキルアン
モニオ）　−（（”２−０６）アルキルアミ−ＮＲ２ま
たは−ＮＨ−（ＯＨ２）１）−背Ｒ４（ここでこれら式
中ｐは２〜６でありそしてＲは同一または異なりて水素
または（ｃ　１−ｃ　４　）アルキルを表わす）が理解
される。

式１を不する本発明によろ一辻のインシュリンｒｔｓ導
体から例えば下記化ｆｉ物があげられうるが１本発明は
それらに限定されるものではない。

ヒトインシュリン−Ａｒｇ門１−ＯＨ 豚インシュリン−ＡｒｇＢ３’−ＯＨ 牛インシュリン−Ａｒｇ”３ｌ−ＯＨ ヒトインシュリン−ＡｒｇＢ３１−Ａｒｇ”　２−０■
１豚インシュリン−１ｌｇＢ５１−１ｌｇＢ５２−ＯＨ
牛インシュリン−ＡｒｇＢ３’−ＡｒｇＢ５２−ＯＩ−
Ｉデス−Ｐｈｅ　Ｂ１−豚インシュリン−Ａｒｇ　”　
５１−Ｏｋ■デス−Ｐｈｅ　Ｂ＋−ヒトインシュリン−
ＡｒｇＢ３１−□ＨデスーＰｈｅ”　−豚インシュリフ
　−ＡｒｇＢ３１−ＡｒｇＢ３２−ＯＨデス−Ｐｈｅ”
−ヒトインシュリン−１１ｇＢ５１−ＡｒｇＢ３２−Ｏ
Ｈ豚インシュリン−Ａｒｇ”　’　−０ＣＨ３ヒトイン
シュリン−Ａｒｇ”’　−００Ｈ５牛インシュリン−Ａ
ｒｇＢ３１−ＯＣＨ４ＣＨ４ジインシュリンｇＢ　３１
−Ａｒｇ　Ｂ”　−００Ｈ３ヒトインシュリン−１１ｇ
Ｂ５１−ＡｒｇＢ３２−ＯＣＨ３７”ス−ＴｈｒＢ５Ｇ
　−ヒトインシュリン−ｖａｌＢ３０−ＡｒｇＢ３２−
αΣ３デスーＴｈｒＢ３０−ヒト′インシュリｙ−ｖａ
ＩＢｌ−１１ｇＢ５１−□ＨデスーＴｈｒＢ６０−ヒト
インシュリン−Ｖａｌ”’−ＡｌａＢ３１−Ａｒｇ”５
２−ＯＨヒトインシュリン−Ｌｙｓ　Ｂ５１−ＯＨヒト
インシュリン−Ｄ　−１１ｇＢ５１−ＯＨヒトインシュ
リン−ｐ　＋　１１ｇＢ５１−ＡｒｇＢ５２−Ｑｌ（ヒ
トインシュリン−Ａｒｇ”−Ｄ−Ａｒｇ”−ＯＨヒトイ
アシュリン−ＬｙＳＢ！Ａ−ＡｒｇＢ５２−□Ｈヒトイ
ンシュリンーＡｒｇＢ５１−１．ｙＢＢＳ２−０）（ヒ
トインシュリン−アルギニツール町１ヒトインシュリン
−ＶａｌＢ３Ｌ−ＡｒｇＢ５２−ＯＨヒトインシュリン
−ＶａｌＢ３１−ＡｒｇＢ３２−Ａｒｇ”５１０Ｈヒト
インシュリン−Ａｒｇ”３１−ＡｒｇｉｎｉｎＯＩＢ５
２ヒトインシュリアーＬｙＢＢ５１−ＡｒｇＢＳ２−Ａ
１−ｇＢ５５−０）Ｈヒトインシュリン−Ａｒ　ｇ　Ｂ
３１−ＮＨ２ヒトインシュリン−ＡｒｇＢ　５１−Ａｒ
ＩＩ！：Ｂ５２−ｎＢ２ヒトインシュリフ　−０ｒｎＢ
３１”ＯＨヒトインシュリフ　−ＬｅｕＢ３１．−Ｃ１
ｔ”２−ＯＨヒトインシュリン−（Ｂ３０）−００Ｈ２
（：Ｂ２−ＮＢ２ヒトインシュリン−（Ｂ３０）−ＮＨ
−ＯＨ２ＵＨ２−ＮＨ２ヒトインシュリン−Ａｒｇ”３
ｌ−０−ＯＨ２−ＯＨ２−ＮＢ２ヒトインシュリン−Ａ
ｒｇ”−ＮＨ−ＯＨ２−ＯＨ２−Ｎ（ＯＨ３）２ヒトイ
ンシュリン−（Ｂ３０）−０−ＯＨ２−ＣＨ２−Ｎ（Ｏ
Ｈ５）　５■ ヒトインシュリン−（Ｂ５０　）−ＮＨ−ＣＩ−Ｉ２−
Ｃｆ（２−Ｎ（ＯＨ）５■ ヒトインシュリン−ＬｅｕＢ３１−０−ＯＨ２−ＯＨ２
−ＯＨ２−Ｎ（０２Ｈ５）５ヒトインシュリン−Ｔｒｐ
Ｂ５１−Ｔｒｐ”３２−ＴｒｐＢ５３−ＮＨ（ＣＩ（２
）６−Ｎ（ｎ０４Ｈ９）３式Ｉを有するインシュリンｕ
　６体は （式中、Ｒ１はＰｈｅまたは結合でありセしてＳｌはプ
ロトンソルボリシス的にかまたはβ−離脱により除去で
きるアミン保護基τ′Ｕえは第６プチルオ千ジカルボニ
ル（Ｂｏａ）％第３アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）
またはメチルスルホニルエチルオキシカルボニル（Ｍθ
Ｃ）基を表わす）を有するデス−オクタペプチド（Ｂ２
３〜６０）−イン７ュリンを弐ｍ Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−’［ｙ（８２）−Ｔｈｒ
（８２）−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（Ｂ３）−Ｒ”−Ｒ６１（Ｉ
ｌｔｌ（式中Ｒ５０およびＢ１１は前記定義のとおりで
あり、８２は水素、ＢＺＩまたはＢｕｔでありモしてＢ
３はウレタン保砂基例えばＢｏａ　、　１１！ＯＱまた
は２を衣わし、その際基Ｈ１およびＲ６１に場合により
存在する遊離の０ＯＯＨ−１ＯＨ−、５Ｈ−１ω−ｋＪ
Ｈ２−、グアニジノおよび／またはイミダゾール基は必
要な場合にはそれ自体既知の方法で保穫された状態で存
在する〕を有するペプチドと軒口合させ。

そして場合により存在うる保護基をそれ自体既知方法で
除去するか、 ｂ）式■（式中Ｒ１は■（またはｆｌ−Ｐｈｅでありそ
してＣ−末端Ｈ６Ｌ］−Ｒ３１は一緒になってＯＨを衣
わず）をイ１リ−るアスーＢ６０−インシュリンをトリ
プシンまたはトリプシン力“４似エンドベブチクーセの
存在下に弐■ Ｈ−Ｒ６υ−Ｒ５１取） （式中Ｒ３ＬＩおよびＲ３１は前記定義のとおりであり
そしてその中に存在する遊６１ｉ、のＣ○ＯＨ−、０Ｈ
−１ＳＨ−、ω−ＮＨ２−、グフ′ニジノおよび／また
はイミタゾ官能分は必安／工らばそれ自体既知方法で保
画さ牙じ〔存在するンを市する化合物と反応させセして
υＳＫＳ白場より存在する保顕基をそれ自体既知方法で
１矛去するか、また偶、 ｃ）Ｒ３’ｇ中ＫＬ−配置アミノ鍍残基を有するインシ
ュリン畷得体を潤製するためにプロインシュリン、プロ
インシュリン類似体またはプレプロインシュリン類似体
またはこれら化合物の中間体を化学的および／または１
）・素的に解裂させる ことにより６１．ｊ製される。

方法ｂ）において出発化合物として使用されるデスーＢ
３０−インシュリンは例えばＩＰ−Ａ−４６９７９号ま
たは［Ｈｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒ’ｓ　Ｚ、、Ｐｈｙｅ
ｉｏｌ、Ｏｈｅｍ、Ｊ第６５９巻第７９９頁（１９７８
年）の８１２戦により知られている。方法ｂ）で使用さ
れる式■の出発物質はそれ自体既知方法でペプチド化学
の方法に従い調製される。■について使用しうる保護基
はＭ。

Ｂｏｄａｎｚｋｙ氏他により１−Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙ
ｎｔｈｅｓｉｓＪ　第２版（１９７６年）中に詳細に記
載されている。

遺伝子工学的方法により方法Ｃ）の出発物質としてのヒ
トまたは霊長類プロインシュリンを入手しうる。そのも
のからＡｒｇ（Ｂ３１）およびジーＡｒｇ（Ｒ６１〜３
２）　ｍ４体はトリプシンまたはトリプシン類似＃素を
用いる簡単な消化により入手しうる。

しかしまたそれと並んで新規なインシュリン誘導体を生
ずる比較的簡単なプラスミドを構成することもできる。

例数ならこれらは天然のＲ３１またはＲ３２Ｋ存在する
アルギニンの代りに他の中性または塩基性アミノ酸をコ
ード化するからである。

組換えＤＮＡ技術を用いるプロインシュリンの調製ハブ
ロインシュリンのアミノ酸順列をコード化するＤＮＡ順
列の形成を必要とし、このことは単ば、構成またはこれ
ら両者の組み合せにより達成されうる。次にプロインシ
ュリン−ＤＮＡを読み取り相（ｒθａｄｉｎｇ　ｐｈａ
ｓθン中で適当なりローニングｊ６よび発現（ｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎ）担体中に挿入する。担体は適当な微生物
の形質転換に役立てられ、そしてその際得られる形質転
換された微生物を次にプロインシュリン含有ベクターを
さらにコピーさせそしてプロインシュリン誘導体または
プロインシュリン前駆物質またはプレプロインシュリン
誘導体からプロインシュリンを発現させるに至る発酵条
件にかける。

発現生成物がプロインシュリン前駆物質である場合、か
かる生成物は一般に、プロインシュリンまたはプロイン
シュリン８６体が挿入された遺伝子順列により通常表示
される蛋白質の断片にその末端アミン基で結せしている
プロインシュリンアミノ酸順列を含有する。プロインシ
ュリンアミノ酸順列は例えばメチオニンである特異的に
解裂されうる位置を介して蛋白質断片に結合している。

得られるプロインシュリンアミノ酸順列は例えばＤｇ−
Ａ−６２３２０＋６号に記載されるような融合された遺
伝子生成物から解裂されそしてプロインシュリンは鯖Ｊ
Ａｆ＆単トされる。

この方法で得られるプロインシュリンまたはプロインシ
ュリン＠与体のｎ７素的解裂は［Ｅ、ｘｃθｒｐｔ’ｉ
ａ上（ｅｄｉｃａ工ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎｇ
ｒｅｓｓ　５ｅｒｉｅｓＪ　ｐｌ　２３１号第２９２頁
以下またはドイツ特許出願第Ｐ３２０９１８４号間層１
１６記載の方法と同様にして遂行される。

従ってＨｄ載された半合成的方法を用い、既知アルギニ
ン（Ｒ３０）およびシアルキニン（Ｒ３１〜３２）誘導
体ならびにノｊｌ伝子工学的方法により入手できそして
Ｒ３１に天然の１・−アミノ酸を担持する誘導体に加え
、特徴として１個または数個の塩基性基および／または
遊離カルボキシル基の非存在を示し従って分子の正味荷
電が天然のインシュリンに対してかまたはデスーＰｈθ
Ｂ１−インシュリンに対して少くとも陽性荷電１個増大
している一連の新規なインシュリン誘２ｔｉ体が入手で
きる。

これには例えばＲ３１位に天然のアミノ酸し−リジン、
Ｌ−ヒスチジンまたはＬ−アルキニンの代りにそのＤ−
鏡像異性体または側鎖中に塩基性基（例えばオルニチン
、ヒドロキシリジン）をＭする通常のＤ−またはＬ−ア
ミノ酸類似体を１する誘導体が包含される。アミノ酸の
代りにＲ３１位の位置に例えばコリンエステル基が存在
でき、それにより正味２個の陽電荷が得られる。Ｒ３１
位でのアミノ酸またはアミノ酸類似体は遊離のカルポギ
シル末端を南しうるかまたは簡単なアルコール（例えば
メタノール、エタノール）でエステル化するかまたは簡
単な窒素塩基（例えばアンモニア、モノ−またはジ−メ
チルアミン）でアミド化されうる。それと並んで例えば
コリンでもエステル化されうる。Ｒ３１位には例えば中
性または他の天然の塩基性アミノ酸または前記アミノ酸
誘導体の１種が続いてあげられうる。同様の方法でその
カルボキシル基は＝　ｋｍであるかまたはエステル化ま
たはアミド化されうる。ここでもまた例えばコリンエス
テル基または他の中性または塩基性アミノ酸またはアミ
ノ酸類似体が絖いてあげられうる。

これらインシュリン誘導体すべては分子表面に存在する
付加的な陽性荷電が分子の等重点をして中性範囲に移動
せしめられる点で共通している。誘４体に応じて５．８
〜８．５特に６．２〜８．２なる等電点が等電焦束にお
いて測屍される。従って誘導体は、その等電点従って最
大不溶性範囲がｐＨ５，４にあり、一方中性範囲で通常
溶解されて存在する天然のイン７ュリンまたはプロイン
シュリンよりも中性範囲において溶解し難い。

従ってこれら式Ｉのインシュリン誘導体は亜鉛または鉱
酸プロタミンのようなデボ助剤を用いること７よく作用
開始しうる完全に新規な遅延作用性成分である。デボ作
用は固有の蛋白化学的糸件から生ずる物理的Ｗ、埋、す
なわち等電点での難溶性に帰せられる。生理学的条件下
での再ｆ８１＋４は、仮足されるように、誘導体に応じ
てトリプシン性またはトリプシンλｑ似性活性および／
またはカルボキシペプチダーセＢまたを１カルポキシペ
ブチターゼＢ類似活性および／またはエステラーゼ活性
によって伺加的な塩基性基を除去することにより達成さ
れる筈である。除去されるそれぞれの基はアミノ酸、メ
ールニテンまたはコリンのような純粋な生理学的代謝産
物であるかまたは生理学的に受答されかつ容易（（代謝
されうる物質である。

Ｊｌ＆　（ンシュリンーＡｒｇＢ５１−０■Ｉおよび相
当するレアルギニン訪導体は０ｈａｎｃθ氏による「Ｐ
２ｘｃ　ｅｒｐｔａＭｅ４１ｃａ　工ｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ＧｅｒｉｅｓＪ第２３１
号第２９２〜２９３頁記載の研究によれば天然の豚イン
シュリンの６２％ずたは６６％の活性しか示さない。

今や嵩（べきことに、（プロインシュリンと異なり）訪
寺体の生物学的活性が天然インシュリンのそれとおよそ
同じ−ちさであることが見出された。これらはまた、異
型Ｃ−ペプチドの一’ｔａｌ１分をなお含有する文献記
載の中間体と異なり対応するインシュリン自体より免疫
原性が強（ない。おそらく前記のＣｈａｎｃｅ氏の低ず
ぎる値はそのペプチドが純イ卆に提供されなかったかま
たは測定に系統的ｎ１１差があったことが原因であろう
。

前記誘々）体を単独かまたは純粋な遅延インシュリンと
して混せ吻でかまたは既知デボ担体と１１ｉｆｌみ汀せ
て使用する他に、今や速かに入手しうるインシュリン例
えは溶解された成分との安犀な混合物を多数の方法で調
製することが可能である。従って非常に機料に調整され
た作用プロフィルが得られうる。

％にあげられるのは徐放性成分として作用する１種また
はそれ以上の誘導体と溶解された好ましくは同じ種類の
天然インンユリ／との中性混合物である。しかしまたそ
れと並んでプロインシュリンおよび／またはＣ−ペプチ
ドもそれぞれ単独でかまたはインシュリンと組み合せて
溶解された成分として用いられうる。これらの製剤に特
徴的なのはそれらがあらゆる混合比において安定である
ことである。このことは現在治療において汎用される中
間的に作用するインシュリン製剤の調製にとっての前提
条件である。

本発明による薬剤はまた数種の異なる式１のインシュリ
ン誘導体および／または数種の異なる式■のインシュリ
ンを含有しうる。その上例えば溶解された形態またはＮ
ＰＥ結晶の形態または仙の慣用の遅延形態における誘導
体およびインシュリンおよび／またはプロインシュリン
および／またはデス−Ｐｈｅ”１−インシュリンおよび
／またはＣ−はブチドの混合物のような他の治療上興味
ある組み合・鉦も使用できる。この方法でなかんず（分
化された基本的プロフィルを有する極めて長時間作用性
の製剤が調製されうる。ヒトインシュリンにおいてはこ
れはまさに望ましい。何故なら従来の経験によれば、そ
の作用期間は亜鉛結晶の形態においてもまたＮＰＨ結晶
の形態においても例えば頑似の牛インシュリン製剤でそ
うであるように真に超遅延プロフィルを有しないからで
ある。

インシュリンおよび／またはプロインシュリンおよび／
またはデスーＰｈｅＢ１−インシュリンおよび／または
Ｃ−ペプチドおよび式Ｉのインシュリン誘導体はまたア
ルカリ塩またはアンモニウム塩の形態でも使用されうる
。

天然インシュリンおよび／またはプロインシュリンおよ
び／またはデス−Ｐｈｅ”−インシュリンおよび／また
はＣ−ペプチドおよびインシュリン誘導体の間の混合比
は（これらペプチドの４’４Ｎに基いてンインシュリン
０〜９９％およびプロインシュリン０〜９９％およヒｆ
　スーｐｈｅＢ１−インシュリン０〜９９％およびｃ−
ぺ−ｙチド。

〜９９％およびインシュリン誘導体１〜１００％の範囲
で変動しうる。

本発明による使用形態はまた例えばインシュリン防導体
およびインシュリンまたはインシュリンの等電点以下の
ｐＨを有するプロインシュリンの酸溶液である。

好ましい薬剤はｐＨ２，５〜８，５を有しそしてその際
溶液または懸濁液として存在する。

代表的には前記の使用形態は、適当な等銀剤例えはグリ
セリンまたは食５塩および微生物汚染に対する適当な薬
剤例えばフェノール、ｍ−クレゾールまたはｐ−ヒドロ
キシ安息香酸エステルを適当な配合量で付加的に含イラ
する水性媒体中に溶解または懸濁される。これら生理学
的Ｉｃ受受答うる担体はｐＨ５，’０〜８．５で緩衝゛
′１勿質例えば酢酸ナトリウム、クエン酸すトリウム、
燐酸ナトリウムまたはトリス（ヒドロキシメテル）アミ
ノメタンをさらに含有しうる。溶解およびｐＨ値の１／
！１整には稀り波代表的には塩該、または希アルカリ代
表的には水酸化ナトリウムか使用されうる。

インシュリン部分および／またはプロインシュリン部分
および／またはデスーｐｈθＢ１−イレシュリン部分お
よび／またはＣ−ペプチド部分および式Ｉのインシュリ
ン誘導体部分は相互に、独立してそれぞれ溶解された形
態、無定形および／または結晶形態で存在しうる。イン
シュリン部分および／またはプロインシュリン部分およ
び／またはデスーＰｈｅ−インシュリン部分および／ま
たは０−ペプチド部分および式１のインシュリン誘導体
部分のそれぞれ任意の一部分が結晶形態で存在でき、イ
ンシュリン部分および／またはプロインシュリン部分お
よび／またはデスーＰｈｅ−インシュリン部分および／
またはＣ−ペプチド部分および式■のインシュリン誘導
体部分のそれぞれ他の任意の一部分が無定形で存在でき
、ならびにインシュリン部分および／またはプロインシ
ュリン部分および／またはデスーＰｈｅ−インシュリン
部分および／またはａ−ｄブチド部分および式１のイン
シュリン誘導体部分のそれぞれの残分が溶解された形態
で存在し５る。

製剤は例えば硫酸プロタミン、グロビンまたは亜鉛（０
〜１００μｊ’／１００工Ｕ）のような遅延作用を有す
る適当量の助剤（デボ助剤）を含有しうる。

この遅延作用成分は全作用物質部分またはその一部分と
組み合せて使用されうる。数種の異なる遅延作用性助剤
も含有されうる。

本発明による製剤に、種々の物質との接触に際して熱ま
たは機械的負荷における蛋白質の沈殿を阻止する適当量
の適当な安定剤を添加することが往々にして好ましい。

かかる安定剤は例えばｇｐ−＊、−１８６０９号、ＤＥ
−Ａ−３２４０１７７号またはｗｏ−８６１００２８８
号により知られている。

下記の例により本発明をさらに説明するが本発明はそれ
らに限定されるものでは１【い。

例　１ 本例は４０工Ｕ／ｒｎＱ　を有する中性処方剤中におゆ
る豚プロインシュリンからトリプシン消化により調製さ
れたノｊよインシュリン−ＡｒｇＢ　５１−ＡｒｇＢ５
２−ＯＨ，および溶解された豚インシュリン（４０工Ｕ
／＋ｎυ２０％または４０％とのその混和性を示す。

下記すミわち グリセリン　１６００町 フエノール　６０■ ｍ−りＶシー／Ｉ／１　ｓ、ｏｑ を水を用いて合計量１０緘に溶解させる。

ＩＮＨＯＡまたはｌＮＮａＯＨの添加によりｐＨをＺ３
にＨ”Ｊ釜する。類似かまたは同じ熱体中の豚インシュ
リン４０工Ｕ７ｆｎｆｌの溶液を混合してその容量割合
を２０饅または４０係となす。ＨＰＬＯを用（・て調製
直後および４℃において６か月貯蔵彼に総含量プようび
に上澄み液中における含量をそれぞれ測定する。

２０楚　４０１υ贋４０工Ｕ江氾　Ｚ５工０沖ｎ７．８
Ｉｖ制４０％　４（Ｊ　ＩＵ／ＩＩＩＱ　４０　ＩＯ／
ｂ＋氾　１６２工ＬＩＡ［！　’１５．６エＵ／滅豚イ
ンシュリン−ＡｒｇＢ５１−ＡｒｇＢ５２−□Ｈは豚イ
ンシュリンからＨＰＬＯにより分ル１ｔされる。上澄み
液には誘４　Ｋは伺う検出されない。ず１．ｃわち不溶
性部分は俗解していない。逆に沈殿θＣＣ後後伺もイン
シュリンか検出されない。すなわちインシュリンは沈殿
していない。

例　２ 本例は４０ＩυＡを有する中性処方剤中の溶解された豚
プロインシュリン２５％（活性）と混合された、豚−プ
ロインシュリンからトリプシン消化により調製された豚
インシュリン−ＡｒｇＢ３’−ＯＨおよびそのデボ作用
を示す。

下ムピすなわち 豚インシュリン−Ａｒｇ”　１−　１　ｔＪ、９ｍノ０
Ｈ（２７，５１０７〜ン ）Ｍプロインシュリン（３，３３０，３７９１０ΔＶ 酢酸ナトリヮλ　１４．ｏｑ ｐ−とドロヤシ安息古酸　１［Ｊ、［Ｊクメチルエステ
ル 食塩　８０．０キ を水を用いて合削且１ｏ雌にン昆合する。

１Ｎ　）［Ｃｎ　７たハ１Ｎ　ＮａＯＨ（７）　ＭＭ加
によりｐＨ７，０に調整する。

かかる懸濁液はテポ比較製ハＩＪ　（Ｏｐｔｉｓｕｌｉ
ｎ■デボａＳ）と類似したデボ作用を犬において示す。

例　３ 本例は４０工υ膚を有する中性処方剤中の、豚インシュ
リンからエドマン（、Ｅｌｉｄｍａｎｎ）崩解により調
製されたデスーＰｈｅＢ１−豚インシュリン２５％と混
合した。　ＮＰＨ結晶の形態の、豚プロインシニリンか
らトリプシン消化によりｎ製された豚インシュリン−Ａ
ｒｇＢ３　’−ＡｒｇＢ３２−ＯＨおよびその遅延作用
を示す。

下り己すなわち 硫１衰プロタミン　１．叶１ ｌＡｉ伎：じ投索ナトリウムニ水イ１勿　２１．０９フ
エノール　６．０υ１ ｍ−クレゾール　１６、Ｏｍｙ グリセリン　１６０．０岬 を水を用いて合計量１０　ｍＱに混合する。

１１４Ｈｃ［またはｌＮＮａＯＨの添加によりｐＥ（７
，３に調脱する。

かかるｍｌ、満液は犬においてデポ様作用経過を示す。

例　４ 本例は４０工Ｕ膚を石する中性処方剤中の、ヒトインシ
ュリン４０チおよびヒトー〇−ペプチド２０％と混合し
た。豚インシュリンから半合成により調製されたヒトイ
ンシュリン−（Ｂ６０ン一コリンエステルおよびその中
程度の長さの作用特性を示す。

下記すなわち ヒトインシュリン（２８工υ、７ｔｎｙ　）　７．２　
’ｍｆヒトーＣ−ペプチド　６．６９ 燐酸二水素ナトリウムニ水化物　２１．０１’％１ｍ−
クレゾール　２７．０〜 グリセリン　１６０．０！ＩＰ を水を用いて合計量１０雌に混合する。

ＩＮＨｄまたはｌＮＮａＯＨの酢加により、ｐＨを１３
に詞整する。

かかる懸濁液は犬において組み合せ製剤（例えばヘキス
ト社製品Ｋｏｍｂ−Ｈ−工ｎｓｕ’ｌｉｎ■）に匹敵ス
ル作用プロフィルを示す。

例　５ 本例は４０工υ鷹を有する調製物中における亜鉛−ヒト
インシュリン結晶５０裂と混合した、豚インシュリンか
らの半合成により調製されたヒトインシュリン−Ａｒｇ
Ｂ３１−Ｌ７１ｉ１”２−００Ｈ４およびその遅延作用
を示す。

下記すなわち ヒトインシュリｙ−Ａｒｇ”−７，４’ｆＬｙｓＢ５２
−０１ＪＨ５（２７，ＯＩυＡｖ）ヒトインシュリン（
２８，υ工Ｕ／■）　Ｚ４〜無水塩化亜鉛　０．２３ｙ
ｆ 酢酸す°トリウム　１４．０キ 食塩　８０．０キ を水を用いて合計量１０ｍ１中に混合する。

ＩＮＨＯｌまたはｌＮＮａＯＨの添加により、ｐＨ７，
０に調量する。

かかる製剤は家兎において顕著な徐放作用を示す（０，
４１Ｕ／Ｊｔ９　）。

例　６ 本例は４０工ＴＪ／ｋｄ１を有する製剤中における結晶
ＮＰＨ−ヒトインシュリン４０％と混合した。大腸菌に
おいて発現された霊長類プレプロインシュリンからのト
リプシン消化により絹製されるヒトインシュリン−Ａｒ
ｇＢ３１−ＡｒｇＢ３２−ＯＲ５０％と混曾したヒトイ
ンシュリン−Ａｒｇ”　’−ＯＨおよびその徐放作用を
示す。

下記すなわち ヒトインシュリン（２８工０　／岬）　５．７　ｔ’！
ｊｌ硫酸プロタミン　０．５■ 燐酸二水素ナトリウムニ水化物　２１．０′Ｉｖｍ−ク
レゾール　１５゜ＱＦＩ フェノール　６．０譜 グリセリン　７６υ、Ｑキ ｒｋ水な用いて合Ｈ１址１０ｍ１に混合する。

ｌＮＮａＯＨまたはＩＮＨ（ｊＪ２の砂加ＱこよりｐＨ
７，３に調整する。

力・かる幾淵液は頽く遅延された長期持続性の作用を家
兎において示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）作用物質の組み合せとして ａ）等電点５．８〜８．５を翁する式１（式中Ｒ１はＨ
   またはＨ−Ｐｈｅであり　Ｒ３０は中性の遺伝的にコー
   ド化されうるＬ−アミノαの残基であり、セしてＲＡＩ
   はその梠成に０〜６個のα−アミノ叡が関与しそしてそ
   の場合により存在する末端カルボキシ官能基が遊に１か
   、エステル官能基としてか、アミド官能基としてか、ラ
   クトンとしてかまたはｃｕ２ｏＨに還元された状態で存
   在しうる、５０個までの炭素原子を・１−ｉする生理学
   的に受容しうる塩基特性を廂する有４安基であるンを有
   するインシュリン誘導体、および ｂ）　Ｒ１がＨまたはＨ−Ｐｈｅであり、Ｂ３０がＡｌ
   ａｌＴｈｒまたはＳθｒを表わしそしてＢ５１がＯＨで
   ある式■のインシュリン、またはその生理学的に受容し
   うる塩、ならびに 場合によりプロインシュリンおよび場合によりＣ−ペプ
   チド ン含イ］することを特徴とする、生理学的に受容しうる
   担体および作用物質の組み合せから１、ｃる薬剤。 ２）前記ａ）にあげられた式ｌのインシュリン誘導体に
   おいて、Ｒ３１が式−Ｘ、−Ｓをイアする基を表わし、
   ここでｎはＬｌ’、１．２または６であり、Ｘは天然に
   存在する中性または塩基性Ｌ−アミノ酸および／または
   それらに対応するＤ−アミノ敏の同一または相異なる残
   基を表わしそして８はＯＨであるかまたは生理学的に受
   容しうるカルボキシ保訟基であってこれはｎが０である
   場合は陽性に荷電したかまたはプロトン化しうる塩基性
   基を担持し、またはｎが０である場合はかかる基を担持
   できそして式中Ｃ−末端−Ｘ−Ｅｌはまた相当するアル
   コールに還元されたアミノ酸の残基な表わすか、または
   ｎが２または６である場合はホモセリンラクトン残基を
   表わしうろことを特徴とする特許 ６）式Ｉのインシュリン誘４体およびインシュリンにお
   いてＲ１がＨ−Ｐｈｅであることを％黴とする前記勃Ｗ
   ，請求の範囲第１または２項記載の薬剤。 ４ン　前記ａ）の式Ｉを有ずる・ｆンシュリン訪導体に
   おいてＲ６　０がＡｌａ，　ＴｈｒまたはＳθｒである
   ことを％徴とずる前記物ｎ′Ｆ　請求のｊｆｉｉｌ囲第
   １〜６項のいずれか一つに記載の桑パリ。 ５ン　前記ａ）の式１を翁ずるインシュリン誘導体にお
   いてアミノ蔽残基ＸがＬ一配装にあることを特徴とする
   前記特許請求の範囲第１〜４項のいずれか一つに’ｆｊ
   ｌ２載の薬剤。 ６）前記ａ）の式■を４１丁るインシュリン誘導体にお
   いてＳがＯＨ，　（Ｃ１””’６）アルコキシ，（Ｃ３
   −０６）シクロアノレキルオキシ、ＮＨ２　、：）（０
   １−０６ンアルキルアミノ，（Ｃｉ−０６）アルキノレ
   アミノ、アミノ−（０２〜ａ６）アルコキシ、（Ｃ２−
   Ｃ４）アルキノレアミノ−（Ｃ２−０６ンアノレコ、キ
   シ％ジ’（　ＣＩ−０　４　）アルキルアミノ−（０２
   −０６）アルコキシ、トリ（　ｃ　１　、、ｃ　４　）
   アルキルアンモニオ−（０２｛６）　７　／ｌ／コキシ
   ，アミノー（Ｒ２−Ｃ６）アルキルアミノ、（０４＼４
   ）アルキルアミノ−（Ｒ２−Ｃ６）アルキルアミノ，〔
   ジ（０１−｛４）アルキルアミノ口一＜Ｒ２−Ｃ６）ア
   ルキルアミノまたは〔１・リ＜ａｌ−Ｒ４＞アルキルア
   ンモニオＪ　−　（ｃ；＝０６）アルキルアミノである
   ことを特徴とする前記特許請求の範囲第１〜５項のいず
   れか一つに記載の薬剤。 ７）前記ａ）の式Ｉを有ずるインシュリン誘導体におい
   てＸがＬｙｅ％Ａｒｇ，　Ｈｉｓ，　Ｏｉｔ，　Ｏｒｎ
   またはＨｙｌのような天然に存在する塩基性アミノ酸の
   残基またはそのＤ一形を意味することを特徴とする前記
   特許請求の範囲第１〜６項のいずれか一つに記載の薬剤
   。 ８）インシュリン−Ｂ３　１−Ａｒｇ−ＯＨまたはイン
   シュリン−Ｂ３１−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＯＨを含有するこ
   とを特徴とする前記特許請求の範囲第１〜７項のいずれ
   か一つに記載の薬剤。 ９ン　数種の具なる式１のインシュリン誘導体および／
   または数種の異なる式１のインシュリンを含有ずること
   を％虚とする前記特許請求の範囲第１〜８項のいずれか
   一つに記載の薬プ１リ。 １０）フ０インシュリンまたはプロインシュリン類似体
   およひ／またはヒトＣ−ペプチドを含有することを特徴
   とする前６ー片許請求の範囲第１〜９項のいずれか一つ
   に記載の薬剤。 １１）天然イン７ュリンおよび／またはプロインシュリ
   ンおよび／またはデスーｐｈθーインシュリンおよび／
   またはＣ−ペプチドおよびインシュリン誘４体の間の混
   合比率が（これらペプチドの総量に基いて）インシュリ
   ン０〜９９％およびプロインシュリン０〜９９％および
   デス−Ｐｈａ”ｌ　＝インシュリン０〜９９チおよびＣ
   −ペプチドＤ〜９９％および式■のインシュリン誘導体
   １〜１００％の間で変動するととを％歎とする前記特許
   請求の範囲８１〜１０項のいずれか一つに記載の薬剤。 １２）　ｐＨ２，５〜８．５を有しそして溶液または懸
   濁液として存在しそして慣用量の適当な等張剤ならびに
   適当量の適当な防腐剤を含有することを特徴とする特許 のいずれか一つに記載の薬剤。 １３）　ｐＨ値が５．０〜８．５にある場合は適当量の
   適当な緩衝物質を付加的に含有することを特徴とする前
   記特許請求の範囲第１〜１２項のいずれか一つに記載の
   薬剤。 １４）種々の物質と接触した場合に熱または機械的負荷
   に際して蛋白質の沈殿を阻止する適当な安定剤の適当量
   をその製剤が含有することを特徴とする前記特許請求の
   範囲第１〜１３項のいずれか一つに記載の薬剤。 １５）１００単位当り０〜１００μｇでありうる適当量
   の亜鉛を含有することを特徴とする前記特許請求の範囲
   第１〜１４項のいずれか一つに記載の薬剤。 １６）インシュリンおよび／またはプロインシュリンお
   よび／またはデスーＰｈａＢｉーインシュリンおよび／
   または０−ペプチドおよび式■のインシュリン誘導体が
   アルカリ塩またはアンモニウム塩の形態で使用されるこ
   とを特徴とする前記特許請求の範囲第１〜１５項のいず
   れか一つに記載の薬剤。 １７）インシュリン部分および／またはプロインシュリ
   ン部分および／またはデス−ＰｈａＢｌ　−インシュリ
   ン部分および／またはＣ−ペプチド部分および式ｌのイ
   ンシュリン誘導体の部分が相互に独立してそれぞれ溶解
   されたか、無定形かセして／または結晶形態で存在しう
   ろことを特徴とする前記特許請求の範囲第１〜１６項の
   いずれか一つに記載の薬剤。 １８）インシュリン部分および／またはプロインシュリ
   ン部分および／またはデスーｐｈθーインシュリン部分
   および／またはＣ−ペプチド部分および式１のインシュ
   リン誘導体部分のそれぞれ任意の一部分が結晶形態であ
   り，インシュリン部分および／またはプロインシュリン
   部分ｊ分および／またはデス−Ｐｈミー４フ２１９フ部
   分および／またはＣ−ペプチド部分および式Ｉのインシ
   ュリン誘導体部分のそれぞれ他のｔＩ：怠の一部分が無
   定形でありならびにインシュリン部分および／またはプ
   ロインシュリン部分および／またはデスーＰｈｅーイン
   シュ・リン部分および／またはＣ−ペプチド部分および
   式Ｉのインシュリン誘４体部分のそれぞれ残分がｍ　８
   １された形態で存在することを特徴とする前記特許Ｊ青
   水の範囲第１〜１７項のいずれか一つに記載の薬剤。 １９）製剤が適当量の遅延作用なイｊする既知助剤の１
   種を含有することを％徴とする前記特許請求の範囲第１
   〜１８項のいずれか一つに記載の薬剤。 ２０）遅延作用成分が作用物質全部分またはその一部分
   と組み合せて用いられることを特徴とする前記特許請求
   の範囲第１９項記載の薬剤。 ２１）インシュリンおよび／またはプロインシュリンお
   よび／またはデスーｐｈθーインシュリンおよび／また
   は０−ペプチドおよび式Ｉのインシュリン誘導体を数種
   の異なる遅延作用性助剤と組み合せて含有することを特
   徴とする前記特許請求の範囲第１９または２０項に記載
   の薬剤。 ２２）作用物質の組合せを適当な投薬形態となすことを
   特徴とする前記特許請求の範囲第１〜２１項のいずれか
   一つに記載の薬剤の製法。 ２６）糖尿病の旧僚における前ｍ己脣許趙ぷの範囲第１
   〜２１項のい丁れか一つにＢｒ２戟の薬剤の使用。