ES2324093T3 - Dimeros de insulina puenteados de manera covalente. - Google Patents

Abstract

Dímeros de análogos de insulina, caracterizados por la Fórmula I, ** ver fórmula** en donde X independientemente entre sí es un grupo alquilo(C1-C10), ramificado o no ramificado, un grupo arilo sustituido una o varias veces, un grupo alquilo(C 1-C 10), un grupo O-arilo sustituido una o varias veces o no sustituido, un aminoácido o un derivado suyo, o un grupo de la fórmula NRR''; R, R es H, NH2, un radical alquilo(C1-C10) ramificado o no ramificado o un grupo arilo sustituido una o varias veces o no sustituido; n es 0,1, 2, .....16.

Description

Dímeros de insulina puenteados de manera covalente.

La invención se refiere a nuevos análogos de la insulina, así como a un medicamento que contiene estos análogos de la insulina, a un procedimiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento de diabetes, así como a un procedimiento para la preparación de los análogos de la insulina.

La proteohormona insulina se forma en las células \beta de los islotes de Langerhans. A su efecto fisiológico más importante pertenece la disminución del nivel de azúcar en sangre. La carencia de insulina conduce al complejo cuadro patológico de la diabetes mellitus (tipo 1), el cual se caracteriza por un metabolismo de la glucosa discre-
pante.

Para el tratamiento de la diabetes mellitus se emplean insulina y análogos de la insulina en preparados farmacéuticos. En la forma terapéutica más común, la terapia sustitutiva, se administra insulina por vía subcutánea. Como efecto secundario más frecuente aparece en este caso hipoglucemia (deficiencia de azúcar). A pesar del continuo desarrollo de preparados farmacéuticos de insulina para la terapia de la diabetes se buscan permanentemente nuevos análogos de insulina, que sean ampliamente prometedores en lo referente a su eficacia en combinación con la reducción de efectos secundarios. Así, por ejemplo, por intercambio de los aminoácidos prolina^{B28} y lisina^{B29} se desarrolló una insulina "lispro" de efecto rápido (documento EP 0 383 472 B1). Por acilación de ácido graso en el grupo amino \varepsilon de la lisina^{B29} se desarrolló igualmente un derivado de insulina de efecto prolongado (J. Markussen, S. Havelund, P. Kurtzhals, A.A. Andersen, J. Halstrom, E. Hasselager, U.D. Larsen, U. Ribel, L. Schäffer, K. Vad, I. Jonassen, Diabetologia 1996, 39, págs. 281-288). Por esta clase de modificaciones de la estructura nativa de la insulina humana ciertamente se puede influir sobre el transcurso en el tiempo del efecto de la insulina, sin embargo aún no se han solucionado los problemas esenciales: no existe aún ningún análogo de insulina administrable terapéuticamente, el cual, aún tan solo por una especificidad tisular parcial, especialmente una hepatoselectividad, permita una terapia más precisa en correspondencia con las condiciones fisiológicas. Igualmente, tampoco se conoce un análogo de insulina que como consecuencia de una mayor fuerza de acción pueda ser empleado en menores cantidades que la insulina humana o insulina animal de estructura nativa.

En todas las insulinas que se emplean para el tratamiento de diabetes se trata siempre de moléculas de insulina monómeras con una masa molecular alrededor de 6000. Todos los análogos y derivados de insulina, monómeros, se han acreditado como agonistas totales o parciales de la insulina (S. Gammeltoft, Physiol Rev. 1984, 64, pág. 1321) y presentan una estrecha correlación entre unión al receptor y desencadenamiento de la señal biológica. Sólo en algunos casos, como por ejemplo en dímeros de insulina enlazados covalentemente, se observó una discrepancia entre unión al receptor y actividad biológica (A. Schüttler, D. Brandenburg, Hoppe Seyler's Z. Physiol. Chem. 1982, 363, págs. 317-330, M. Weiland, C. Brandenburg, D. Brandenburg, H.G. Joost, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, págs. 1154-1158). Además, los dímeros de insulina se han acreditado para la diferenciación de los receptores de insulina en diferentes tejidos (M. Breiner, M. Weiland, W. Becker, D. Müller-Wieland, R. Streicher, M. Fabry, H.G. Joost, Molecular Pharmacology 1993, 44, págs. 271-276). Por consiguiente, son de importancia fundamental para el diagnóstico en casos patológicos.

En todos los dímeros descritos hasta ahora se trata del enlazamiento covalente de dos insulinas en su longitud nativa. En principio, los dímeros de insulina son de especial interés para la terapia, puesto que en experimentos con animales muestran una relativa hepatoselectividad (demostrada para el B1,B1'-suberoyl-dímero de insulina con estructura nativa de insulina, F. Shojaee-Moradie, N.C. Jackson, M. Boroujerdi, D. Brandenburg, P.H. Sönksen, R.H. Jones, Diabetologia 1995, 38, págs. 1007-1013) y, por consiguiente, permiten una mayor disminución fisiológica del nivel de azúcar en sangre que todas las insulinas empleadas hasta el momento en la terapia de diabetes. El B1,B1'-suberoyl-dímero de insulina, allí empleado, tiene sin embargo una bioactividad in vitro esencialmente más baja como unión al receptor (28,8% frente a 157 - 199%, M.A. Tatnell, R.H. Jones, K.P. Willey, A. Schüttler, D. Brandenburg, Biochem. J. 1983, 216, págs. 687-694). La relación de bioactividad a unión a receptor con 0,15 - 0,18 es por lo tanto muy baja. No tenemos conocimiento alguno acerca de una aplicación o, respectivamente, un desarrollo ulterior de estos descubrimientos orientados a una terapia de diabetes.

Deppe et al. (Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology 350, 1994, págs. 213-217) describen la relación y actividad en el caso de insulinas dimerizadas, especialmente en lo referente a la actividad parcialmente agonista en el caso de un enlazamiento al aminoácido lisina en posición B29. En la solicitud de patente internacional WO95/05187 se describen como insulinas principios activos farmacéuticos, hepatoselectivos, los cuales se unen covalentemente con un grupo molecular tal como, por ejemplo, un grupo tiroxilo.

Ahora, los autores han concebido y sintetizado dímeros de insulina de nuevo tipo que en virtud de sus propiedades son muy prometedores en lo referente a una solución de los problemas anteriormente citados y a una terapia para diabetes mejorada, y los cuales en lo sucesivo se denominarán también como análogos de insulina. En este caso, frente a la terapia actual con insulinas monómeras, la particularidad de nuestra aportación es que se utilizan dímeros de análogos de insulina constituidos por dos monómeros de insulina iguales o diferentes, que están enlazados entre sí covalentemente a través de un puente, donde los monómeros de insulina se seleccionan de un grupo que contiene insulina humana e insulinas animales y derivados de las insulinas anteriormente citadas, y donde al menos uno de los dos monómeros de la insulina de un análogo de insulina representa un derivado; y sales de ellos fisiológicamente aceptables. Se utilizan especialmente aquellos análogos de insulina, en los que los términos de C de las cadenas B se han acortado y modificado en la posición B26. El enlace a través de un puente de los monómeros de insulina puede tener lugar por medio de sustancias adecuadas para el enlazamiento de proteínas. Tales sustancias y procedimientos para el enlazamiento de proteínas se conocen desde hace tiempo. Los nuevos dímeros de los análogos de insulina poseen especialmente un puente localizado preferentemente entre los N-terminales de los grupos amino de las cadenas B de los dos monómeros de la insulina, y el cual, de modo particularmente preferido, está formado por un radical bifuncional de ácido carboxílico, lineal o ramificado, de la fórmula (CRR')_{n}(CO-)_{2}, en donde n, R, R' se define como se explica más adelante para la Fórmula I. Ejemplos de insulinas animales son las insulinas de cerdos, monos, bovinos y pollos. Derivados de insulina son derivados de las citadas insulinas, los cuales se diferencian por sustitución y/o deleción de al menos un radical aminoácido que se presenta de forma natural, y/o por adición de al menos un radical aminoácido y/o radical orgánico de la respectiva insulina, por lo demás igual, que se presenta de forma natural. Un ejemplo de un derivado de insulina monómero es la insulina humana Gly(A21), Arg (B31), Arg (B32), un ejemplo de un análogo de insulina dímero conforme a la invención es la insulina dímera B1,B1-sub-[D-Ala^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida. Los dímeros de análogos de insulina se pueden describir especialmente con la fórmula
general I:

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(Esquema pasa a página siguiente)

1

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en donde

X

independientemente entre sí es un grupo alquilo(C_{1}-C_{10}) ramificado o no ramificado, un grupo arilo sustituido una o varias veces, un grupo alquilo(C_{1}-C_{10}), un grupo O-arilo sustituido una o varias veces o no sustituido, un aminoácido o un derivado suyo, o un grupo de la fórmula NRR';

R, R'

es H, NH_{2}, un radical alquilo(C_{1}-C_{10}) ramificado o no ramificado o un grupo arilo sustituido una o varias veces o no sustituido;

n

es 0, 1, 2, .....16.

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Otro objeto de la invención son los dímeros de análogos de insulina de la Fórmula I, como se ha descrito anteriormente, en donde X es un derivado de aminoácido en el cual el grupo de ácido carboxílico está amidado.

Otro objeto más de la invención son los dímeros de análogos de insulina de la Fórmula I, como se ha descrito anteriormente, en donde X es el aminoácido sarcosina.

Otro objeto más de la invención son los dímeros de análogos de insulina de la Fórmula I, como se ha descrito anteriormente, en donde los radicales X en las dos cadenas B son diferentes entre sí.

Otro objeto más de la invención son los dímeros de análogos de insulina de la Fórmula I, como se ha descrito anteriormente, en donde X es un grupo amino.

Otros objetivos de la invención son un medicamento y un equipo para diagnosis que contiene estos dímeros de análogos de insulina, un procedimiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento de diabetes, así como un procedimiento para la preparación de los dímeros de análogos de insulina.

Los dímeros de análogos de insulina se preparan de manera conocida por enlazamiento de dos moléculas monómeras, en parte eventualmente protegidas, con el ácido dicarboxílico preactivado (A. Schüttler, D. Brandenburg, Hoppe Seyler's Z. Physiol. Chem. 1982, 363, págs. 317-330). Los análogos monómeros se pueden obtener mediante semisíntesis catalizada por enzimas o por métodos de tecnología genética (véanse ejemplos de la invención).

Otro objeto más de la invención es por lo tanto un procedimiento para la preparación de los dímeros de análogos de insulina, como se han descrito anteriormente, en donde

(a)

los análogos de insulina monómeros se obtienen mediante semisíntesis catalizada por enzimas o mediante métodos de tecnología genética,

(b)

los análogos de insulina monómeros de la etapa (a) opcionalmente se protegen en parte con grupos protectores;

(c)

los análogos de insulina monómeros, protegidos, de la etapa (b) y/o los análogos de insulina monómeros de la etapa (a) se hacen reaccionar con un ácido dicarboxílico preactivado, y

(d)

los dímeros de los análogos de insulina obtenidos en la etapa (c) se aíslan de la mezcla de reacción.

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Comparados con la insulina humana y con los análogos de insulina monómeros, los dímeros conformes a la invención se caracterizan por una afinidad particularmente elevada hacia los receptores de insulina y por una superpotencia in vitro, ésta última hasta veinte veces mayor que el efecto de la insulina.

En contraposición con los dímeros de insulina covalentes, conocidos hasta el momento, los dímeros de nuevo tipo presentan bioactividades muy elevadas. La relación entre bioactividad y unión al receptor es al menos 2, en parte incluso 4 a 5. Por consiguiente, en esencia, son biológicamente más efectivos. Si se comparan estos cocientes con los de los B1,B1'-suberoyl-dímeros, descritos en la bibliografía, resulta un factor de al menos 11 (0,18 : 2), y máximo de 28.

Las ventajas conseguidas con los dímeros de insulina conformes a la invención consisten sobre todo en que

1.

frente a la insulina y a todos los análogos empleados terapéuticamente hasta el momento, cabe contar con una relativa hepatoselectividad y, por consiguiente, con una forma de actuar más fisiológica (lugar de actuación primario el hígado y no la periferia),

2.

frente a los dímeros de insulina conocidos hasta el momento se presenta por primera vez una efectividad biológica esencialmente mejorada,

\newpage

3.

la actividad biológica esencialmente incrementada en comparación con la insulina y análogos monómeros se puede demostrar de manera muy ventajosa en su administración, puesto que se podría conseguir un efecto equivalente con cantidades claramente menores de principio activo.

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Ejemplos de la invención Abreviaturas

Actemra

acetato (CH_{3}COO^{-})

Eq.

equivalente

Alox

óxido de aluminio (Al_{2}O_{3})

AS

aminoácido

CZE

electroforesis en zonas capilares

DIPEA

N,N-diisopropiletilamina

DMF

dimetilformamida

DMSO

dimetilsulfóxido

DOI

desoctapeptidinsulina

Fmoc

9-fluorenilmetoxicarbonilo

HOBt

1-hidroxibenzotriazol

HPLC

cromatografía líquida de alta resolución

MALDI

desorción/ionización por láser asistida por matriz

MPLC

cromatografía líquida de media presión

Msc

metilsulfoniletoxicarbonilo

PM

peso molecular

NaOH

hidróxido de sodio

NMM

N-metilmorflina

RP

fase inversa

ONSu

N-Oxisuccinimida-éster

Sar

sarcosina

Sub

suberoyl

BTU

tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio

TEA

Trietilamina

TFA

ácido trifluoroacético

TOF

tiempo de vuelo

TPCK

tosil-L-fenilalanil-clorometilcetona

Tris

Tris-(hidroximetil)-aminometano

\newpage

Ejemplo de invención 1

Síntesis del dímero de insulina B1,B1'-sub-[Sar^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida Síntesis del tetrapéptido Gly-Phe-Phe-Sar-NH_{2}

La síntesis del péptido tuvo lugar en una resina de 4-(2',4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)-fenoxi utilizando la táctica de los grupos protectores Fmoc. Los ésteres de aminoácido-Fmoc utilizados para el acoplamiento se formaron según el método TBTU/HOBt y se emplearon en un exceso 3-molar, referido a la carga normal de la resina. La síntesis peptídica tuvo lugar según el siguiente protocolo de síntesis:

2

La separación del péptido de la resina se efectuó de modo acedolítico por adición de 10 ml de solución de separación a base de 95% de TFA, 4% de H_{2}O y 1% de trietilsilano como captor de cationes. Después de 2 h de agitación a la temperatura ambiente, la resina se separó por filtración y se lavó a fondo con diclorometano. El filtrado se secó a sequedad.

La ulterior purificación del péptido tuvo lugar mediante cromatografía en columna RP-MPLC con un gradiente lineal de 2-propanol (0-40% de 2-propanol en respectivamente 400 ml de tampón de inicio y afluencia TFA al 0,07%). Como fase estacionaria se utilizó 20-C_{18}. El caudal era 180-200 ml/h (rendimiento 82,6%).

Semisíntesis de [Sar^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida

La insulina con el término-C acortado de la cadena B se sintetizó por acoplamiento enzimático del tetrapéptido a N^{\alpha A1}-Msc-des-(B23-B30)-insulina. Para ello, primeramente se tuvo que degradar enzimáticamente la insulina nativa a DOI, la cual a continuación fue provista parcialmente con un grupo protector.

Síntesis de des-(B23-B30)-insulina

300 mg (51,66 \mumol) de insulina se recogen en 60 ml de tampón de reacción (Tris 0,05 M, CaCl_{2} 1 mmol). Después de ajustar el valor del pH en 9,5 con Tris sólido se inició la degradación proteolítica por adición de tripsina tratada con 16 mg TPCK. Se incuba aproximadamente durante 6 h a 37ºC al baño María, controlándose la reacción mediante RP-HPLC. La reacción se interrumpe por adición de 4 ml de ácido acético glacial y el tanda de reacción se concentra en el evaporador rotativo. La elaboración se efectúa primeramente a través de un gel de filtración Sephadex G-25f y, a continuación, de un gel de filtración Sephadex G-50f. El producto se liofiliza (rendimiento 73,3%).

PM: 4865.

Síntesis de N^{\alpha A1}-(Msc)-des-(B23-B30)-insulina

300 mg (61,66 \mumol) de des-(B23-B30)-insulina se disuelven bajo la adición de 225 \mul de TEA en 22,5 ml de DMSO. Bajo ligera agitación se añade una solución de 18 mg (67,86 \mumol) de Msc-ONSu en 5 ml de DMSO. Después de un tiempo de reacción de 20 min. se interrumpe la reacción por adición de 750 \mul de ácido acético glacial y durante 16 h a 4ºC la solución de reacción se dializa frente a agua desmineralizada. El material retenido se liofiliza. Para la purificación ulterior se lleva a cabo una cromatografía de cambio iónico en SP-Sefarosa (pH 3; 350 ml de tampón de inicio, 350 ml de tampón de afluencia de NaCl 0,09 M) y desalificación a través de Sephadex G-25f. El producto se liofiliza (rendimiento 30,8%).

PM: 5015,16.

Acoplamiento con tripsina de Gly-Phe-Phe-Sar-NH_{2} a N^{\alpha A1}-(Msc)-des-(B23-B30)-insulina

132,75 mg (300 \mumol) de Gly-Phe-Phe-Sar-NH_{2} y 150,45 mg (30 \mumol) de N^{\alpha A1}-Msc-des-(B23-B30)-insulina se disuelven o, respectivamente, suspenden en 2 ml de DMF (agitados sobre Alox), 2 ml de 1,4-butanodiol y 400 \mul de solución 0,05 M de Ca(CH_{3}COO)_{2}. El pH aparente se ajusta con NMM a pH 6,7-7,0. A continuación, se añaden a la solución de reacción 23 mg de tripsina tratada con TPCK, disuelta en 100 \mul de solución 0,05 M de Ca(CH_{3}COO)_{2}. Durante el tiempo de reacción se observa el transcurso de la reacción mediante RP-HPLC y se controla el valor del pH y, eventualmente, se vuelve a ajustar con NMM. En 4,5 h se puede alcanzar una transformación de casi 90%. La reacción se interrumpe por adición de 4,5 ml de ácido acético al 30%. El enzima, el péptido, y demás sustancias de bajo peso molecular se separan mediante cromatografía en gel Sephadex G-50f. El péptido que no ha reaccionado se purifica a continuación a través de RP-MPLC y se recupera. La ulterior purificación del derivado de insulina tiene lugar a través de RP-HPLC preparativa a través de una columna Nucleosil 100-10C_{8} (2,0 cm de diámetro, 25,0 cm de longitud con una columna previa de 5,0 cm (rendimiento 48,6%).

PM: 5290,2.

Síntesis del dímero de insulina B1,B1'-sub-[Sar^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida

100 mg (18,9 \mumol) de N^{\alpha A1}-Msc-[Sar^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida se disuelven bajo la adición de 5,5 equivalentes de HOBt en 400 \mul DMSO, 8,7 \mul de DMF y 9,5 \mul de NMM. Al cabo de 30 min. se añaden 0,6 equivalentes de éster bis-ONSu del ácido succínico en forma sólida y se agita durante 8-30 h. Toda la tanda de reacción se recoge bajo la adición de 300 \mul de ácido acético glacial en 1,5 ml de ácido acético al 10% y se cromatografía a través de Sephadex G-50f. La fracción con el dímero se liofiliza. Para la separación de los grupos Msc se disuelven 100 mg de la proteína protegida con Msc en 5 ml de una mezcla dioxano/agua (2/1, v/v) y se enfría a 0ºC. Se le añaden 514 \mul de NaOH 2 N y se agita durante120 s a 0ºC. La reacción se interrumpe mediante la adición de 2,2 ml de ácido acético glacial. La tanda de reacción se cromatografía en gel a través de Sephadex G-25f y se liofiliza (rendimiento 11,9%).

La caracterización de los productos intermedios y del producto final tuvo lugar mediante RP-HPLC, CZE ácida, así como por espectrometría de masas MALDI-TOF (Tabla 1).

TABLA 1 Rendimientos, purezas según RP-HPLC, así como CZE y masas en la síntesis del dímero de insulina B1,B1-sub-[Sar^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida

3

Ejemplo de invención 2

Síntesis del dímero de insulina B1,B1'-sub-[D-Ala^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida

La síntesis de este dímero de insulina acortado tuvo lugar análogamente a la síntesis descrita en el Ejemplo 1 con la excepción de que se utilizó el tetrapéptido sintético Gly-Phe-Phe-D-Ala-NH_{2}. En la Tabla 2 se reproducen los respectivos rendimientos, purezas y masas.

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TABLA 2 Rendimientos, purezas según RP-HPLC, así como CZE y masas en la síntesis del dímero de insulina B1,B1'-sub-[D-Ala^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida

4

Ejemplo de invención 3

Síntesis del dímero de insulina B1,B1'-sub-[Glu^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida

La síntesis de este dímero de insulina acortado tuvo lugar análogamente a la síntesis descrita en el Ejemplo de invención 1 con la excepción de que se utilizó el tetrapéptido sintético Gly-Phe-Phe-Glu-NH_{2}. La Tabla 3 muestra los respectivos rendimientos, purezas y masas.

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TABLA 3 Rendimientos, purezas según RP-HPLC, así como CZE y masas en la síntesis del dímero de insulina B1, B1'-sub-[Glu^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida

5

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Ejemplo de invención 4

Propiedades biológicas referentes a los ejemplos de invención 1-3

Las propiedades biológicas de los dímeros B1,B1'-sub-[Sar, D-Ala o Glu^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida, descritos en los ejemplos de invención 1-3, se obtuvieron por un lado con ayuda de la unión al receptor y, por otro lado, de las bioactividades in vitro.

La determinación de la unión al receptor tuvo lugar mediante estudios de desplazamiento en linfocitos IM-9. La actividad biológica relativa se determinó en adipocitos 3T3-L1 cultivados, en forma del transporte de glucosa. En la Tabla 4 se reproducen las afinidades de unión, así como las actividades biológicas relativas de los dímeros de insulina sintetizados.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 4 Unión relativa al receptor (determinada en linfocitos IM-9), así como actividades biológicas relativas (determinadas en adipocitos 3T3-L1,cultivados) de todos los dímeros de insulina, en comparación con la insulina nativa

6

Bibliografía

1. J. Markussen, S. Havelund, P. Kurtzhals, A.A. Andersen, J. Halstrom, E. Hasselager, U.D. Larsen, U. Ribel, L. Schäffer, K. Vad, I. Jonassen, Diabetologia 1996, 39, págs. 281-288.

2. Patente europea EP 0 383 472 B1.

3. S. Gammeltoft, Physiol Rev. 1984, 64, págs.1321.

4. A. Schüttler, D. Brandenburg, Hoppe Seyler's Z. Physiol. Chem. 1982, 363, págs. 317-330.

5. M. Weiland, C. Brandenburg, D. Brandenburg, H.G. Joost, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, págs. 1154-1158.

6. M. Breiner, M. Weiland, W. Becker, D. Müller-Wieland, R. Streicher, M. Fabry, H.G. Joost, Molecular Pharmacology 1993, 44, págs. 271-276.

7. F. Shojaee-Moradie, N.C. Jackson, M. Boroujerdi, D. Brandenburg, P.H. Sönksen, R.H. Jones, Diabetologia 1995, 38, págs. 1007-1013.

8. M.A. Tatnell, R.H. Jones, K.P. Willey, A. Schüttler, D. Brandenburg, Biochem. J. 1983, 216, págs. 687-694.

Claims (13)

1. Dímeros de análogos de insulina, caracterizados por la Fórmula I,

7

en donde

X independientemente entre sí es un grupo alquilo(C_{1}-C_{10}), ramificado o no ramificado, un grupo arilo sustituido una o varias veces, un grupo alquilo(C_{1}-C_{10}), un grupo O-arilo sustituido una o varias veces o no sustituido, un aminoácido o un derivado suyo, o un grupo de la fórmula NRR';

R, R es H, NH_{2}, un radical alquilo(C_{1}-C_{10}) ramificado o no ramificado o un grupo arilo sustituido una o varias veces o no sustituido;

n es 0,1, 2, .....16.

2. Dímeros conforme a la reivindicación 1, en donde X es un aminoácido, en el cual el grupo ácido carboxílico está amidado.

3. Dímeros conforme a la reivindicación 2, en donde X es el aminoácido sarcosina.

4. Dímeros conforme a una o varias de las reivindicaciones 1 o 2, en donde los radicales X en las dos cadenas B son diferentes entre sí.

5. Dímeros conforme a una o varias de las reivindicaciones 1 o 2, en donde X es un grupo amino.

6. Dímero de insulina B1,B1'-sub-[Sar^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida.

7. Dímero de insulina B1,B1'-sub-[D-Ala^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida.

8. Dímero de insulina B1,B1'-sub-[Glu^{B26}]-des-(B27-B30)-insulin-B26-amida.

9. Preparados farmacéuticos, caracterizados porque contienen un dímero según una o varias de las reivindicaciones 1-8 y aditivos seleccionados del grupo que contiene sales de cinc, fenol, m-cresol, glicerina y sustancias tampón.

10. Un procedimiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento de diabetes, el cual contiene un dímero según una o varias de las reivindicaciones1-8.

11. Dímeros según una o varias de las reivindicaciones 1-8 para su utilización como medicamento.

12. Equipo para diagnosis que contiene uno o varios dímeros según una o varias de las reivindicaciones 1-8.

13. Procedimiento para la preparación de los dímeros conforme a una o varias de las reivindicaciones 1 a 8, en el que

(a)

los análogos de insulina monómeros se obtienen mediante semisíntesis catalizada por enzimas o mediante métodos de tecnología genética,

(b)

los análogos de insulina monómeros de la etapa (a) opcionalmente se protegen en parte con grupos protectores;

(c)

los análogos de insulina monómeros, protegidos, de la etapa (b) y/o los análogos de insulina monómeros de la etapa (a) se hacen reaccionar con un ácido dicarboxílico preactivado, y

(d)

los dímeros de análogos de insulina obtenidos en la etapa (c) se aíslan de la mezcla de reacción.