JPS6040412B2 - 消化管ホルモンの製造方法 - Google Patents
消化管ホルモンの製造方法Info
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- JPS6040412B2 JPS6040412B2 JP52012974A JP1297477A JPS6040412B2 JP S6040412 B2 JPS6040412 B2 JP S6040412B2 JP 52012974 A JP52012974 A JP 52012974A JP 1297477 A JP1297477 A JP 1297477A JP S6040412 B2 JPS6040412 B2 JP S6040412B2
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- Japan
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- small intestine
- gastrointestinal hormones
- sodium chloride
- furnace
- water
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/645—Secretins
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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- C07K14/575—Hormones
- C07K14/595—Gastrins; Cholecystokinins [CCK]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、０甫乳動物の小腸より消化ホルモンを収率よ
く製造する方法に関する。
く製造する方法に関する。
消化管ホルモンの製造方法としては、エタノール、希塩
酸などを用いて小腸から直接に抽出する方法が古くから
知られているが、この方法は消化管ホルモンの抽出効率
が非常に悪く工業的製造方法とは言えない。
酸などを用いて小腸から直接に抽出する方法が古くから
知られているが、この方法は消化管ホルモンの抽出効率
が非常に悪く工業的製造方法とは言えない。
そこで、改良法として、４・腸をミンチした後、熱希酢
酸抽出する方法（日本特許第５３５０６８号）、および
小腸を沸騰水中で加熱した後ミンチし、室温下希酢酸抽
出する方法（米国特許第３０１３９４４号）が報告され
ている。しかし、これらの方法も、前者においては、ミ
ンチの際およびその後に小腸中に含まれる酵素により消
化管ホルモンが分解されて失活するためと考えられるが
、精製後の収量はまだかなり低い。また、後者において
は、沸騰水中で加熱するので酵素は失活するが、消化管
ホルモンが水に易溶のため、沸騰水中への損失が著しい
。例えば、小腸を沸騰水中で５〜１０分間加熱すると、
小腸中に含まれる全セクレチンの約３０〜４０％、全コ
レシストキニン・パンクレオザィミンの約２０〜３０％
が沸騰水中へ失なわれる。したがって、従来方法におい
ては、いずれも製造工程の初期の段階ですでにかなりの
量の消化管ホルモンが失なわれる。そこで、本発明の目
的は、小腸の処理方法を改良する事により、収率よく消
化管ホルモンを製造する事にある。
酸抽出する方法（日本特許第５３５０６８号）、および
小腸を沸騰水中で加熱した後ミンチし、室温下希酢酸抽
出する方法（米国特許第３０１３９４４号）が報告され
ている。しかし、これらの方法も、前者においては、ミ
ンチの際およびその後に小腸中に含まれる酵素により消
化管ホルモンが分解されて失活するためと考えられるが
、精製後の収量はまだかなり低い。また、後者において
は、沸騰水中で加熱するので酵素は失活するが、消化管
ホルモンが水に易溶のため、沸騰水中への損失が著しい
。例えば、小腸を沸騰水中で５〜１０分間加熱すると、
小腸中に含まれる全セクレチンの約３０〜４０％、全コ
レシストキニン・パンクレオザィミンの約２０〜３０％
が沸騰水中へ失なわれる。したがって、従来方法におい
ては、いずれも製造工程の初期の段階ですでにかなりの
量の消化管ホルモンが失なわれる。そこで、本発明の目
的は、小腸の処理方法を改良する事により、収率よく消
化管ホルモンを製造する事にある。
本発明は、情乳動物の小腸を塩水溶液中で加熱した後、
消化管ホルモンを分離精製する、消化管ホルモンの製造
方法である。捕乳動物の小腸としては、入手の容易性お
よび消化管ホルモンの含量の点から、ブタ、ウシの十二
指腸を含む小腸上部が好ましい。
消化管ホルモンを分離精製する、消化管ホルモンの製造
方法である。捕乳動物の小腸としては、入手の容易性お
よび消化管ホルモンの含量の点から、ブタ、ウシの十二
指腸を含む小腸上部が好ましい。
塩水溶液に用いる塩としては、無機酸または有機酸のア
ルカリ金属塩あるいはアルカリ士類金属塩を使用する事
ができる。
ルカリ金属塩あるいはアルカリ士類金属塩を使用する事
ができる。
例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、酢酸カルシウ
ム、塩化カルシウム、酢酸マグネシムなどが用いられる
が、特に塩化ナトリウムが好ましい。
ム、塩化カルシウム、酢酸マグネシムなどが用いられる
が、特に塩化ナトリウムが好ましい。
また、好ましい塩濃度は０．５〜５．０％程度である。
４・陽の加熱条件は、小腸中に含まれる酵素が失活する
条件に設定する。
４・陽の加熱条件は、小腸中に含まれる酵素が失活する
条件に設定する。
約９０〜１００ｏｏであれば、５〜１０分の加熱で充分
である。小腸を塩水溶液中で加熱処理した後は、直ちに
これから消化管ホルモンを分離精製しても良いし、作業
上の必要性により凍結保存した後に分離精製を行っても
良い。
である。小腸を塩水溶液中で加熱処理した後は、直ちに
これから消化管ホルモンを分離精製しても良いし、作業
上の必要性により凍結保存した後に分離精製を行っても
良い。
凍結処理による消化管ホルモンの収量低下はほとんど認
められない。消化管ホルモンの分離精製には、従来知ら
れている手段を用いる事ができる。
められない。消化管ホルモンの分離精製には、従来知ら
れている手段を用いる事ができる。
例えば、エタノール、メタノール、ィソプロパノール、
希酸塩、希酢酸などによる抽出、カルボカシメチルセル
ローズ、ＴＥＡＴセルローズ、ＱＡＥセフアデツクスな
どの樹脂による精製、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウ
ムなどによる塩析、アセトンなどによる有機溶媒分画、
ゲル炉過、アルギン酸吸着などを通且組合せて分離精製
する事ができる。本発明方法によると、消化管ホルモン
の酵素による分解を防止できる事と、塩化ナトリウム水
溶液中への消化管ホルモンの損失が水に比べて少ない事
より、結果的に消化管ホルモンを収率よく製造する事が
できる。
希酸塩、希酢酸などによる抽出、カルボカシメチルセル
ローズ、ＴＥＡＴセルローズ、ＱＡＥセフアデツクスな
どの樹脂による精製、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウ
ムなどによる塩析、アセトンなどによる有機溶媒分画、
ゲル炉過、アルギン酸吸着などを通且組合せて分離精製
する事ができる。本発明方法によると、消化管ホルモン
の酵素による分解を防止できる事と、塩化ナトリウム水
溶液中への消化管ホルモンの損失が水に比べて少ない事
より、結果的に消化管ホルモンを収率よく製造する事が
できる。
次に実施例を示し、本発明を更に詳しく説明する。
実施例 １
屠殺直後の新鮮な豚上部小腸（幽門下２ｍ）１０ｋｇ（
約１００匹分相当）を予め沸騰させた０．９％塩化ナト
リウム水溶液４０そ中に入れ、５分間煮沸した。
約１００匹分相当）を予め沸騰させた０．９％塩化ナト
リウム水溶液４０そ中に入れ、５分間煮沸した。
金属性の絹かごにて小腸を炉取し、更に充分に脂肪を除
くため熱水をかけて洗浄した。得られた煮沸小腸をミン
チした後、予め９０〜９５００に加熱した０．１規定酢
酸４０〆中に入れ、同温度でＩＱ分間鷹拝して消化管ホ
ルモンの抽出を行った。次いで、室温まで放冷した後、
４℃にて一夜放置した。セラィト４００夕を加え、炉紙
にて固形物を炉去した。固形物を０．１規定酢酸３そで
洗浄し、炉液とあわせた。得られた微黄色澄明溶液に、
予め活性化したカルボキシメチルセルローズ１．２ｋ９
（乾燥重量４００夕）を添加し、室温にて３び分間燈梓
後４℃で一夜放置した。カルボキシメチルセルローズを
炉取し、冷水３のこて水洗後、カルボキシメチルセルロ
ースを０．１規定塩酸５夕に懸濁し、室温にて３０分間
燈拝して吸着物を溶離させた。吸引炉過によりカルボキ
シメチルセルローズを回収して０．１規定塩酸１そで洗
浄した。洗浄液と炉液をあわせ、これに塩化ナトリウム
１．８ｋ９を加え、室温にて２時間櫨拝した後、４℃で
一夜放置した。析出物を炉取し、これを２その蒸留水に
溶解して不溶物を炉去した。炉液に塩化ナトリウム６０
０夕を加えて熔解し、４℃で一夜放置した。析出物を炉
取し、得られた微黄色ケークを水に溶解して凍結乾燥し
た。得られた粗消化管ホルモンのセクレチン活性（Ｃｒ
ｉｃｋ、ＨａｒｐｅｒａｎｄＲａｐｅｒ皿ｉｔ）〔ジャ
ーナル・オブ・フイジオロジー（Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．
）１１碇筈 ３６９頁（１９５世王）参照〕およびコレ
シストキニン・パンクレオザィミン活性（ＩｖｙＤ増血
ｉｔ）〔ジャーナル・オプ・フイジオロジ−（Ｊ．Ｐｈ
ｙｓｉｏｌ．）９５巻 ３５頁（１９３０年）参照〕を
測定した。更に、上記方法では小腸を０．９％塩化ナト
リウム水客液中で１０分間加熱したが、この塩の種類、
塩濃度、加熱時間を変え、他は上記方法と同様にして消
化管ホルモンを製造した。
くため熱水をかけて洗浄した。得られた煮沸小腸をミン
チした後、予め９０〜９５００に加熱した０．１規定酢
酸４０〆中に入れ、同温度でＩＱ分間鷹拝して消化管ホ
ルモンの抽出を行った。次いで、室温まで放冷した後、
４℃にて一夜放置した。セラィト４００夕を加え、炉紙
にて固形物を炉去した。固形物を０．１規定酢酸３そで
洗浄し、炉液とあわせた。得られた微黄色澄明溶液に、
予め活性化したカルボキシメチルセルローズ１．２ｋ９
（乾燥重量４００夕）を添加し、室温にて３び分間燈梓
後４℃で一夜放置した。カルボキシメチルセルローズを
炉取し、冷水３のこて水洗後、カルボキシメチルセルロ
ースを０．１規定塩酸５夕に懸濁し、室温にて３０分間
燈拝して吸着物を溶離させた。吸引炉過によりカルボキ
シメチルセルローズを回収して０．１規定塩酸１そで洗
浄した。洗浄液と炉液をあわせ、これに塩化ナトリウム
１．８ｋ９を加え、室温にて２時間櫨拝した後、４℃で
一夜放置した。析出物を炉取し、これを２その蒸留水に
溶解して不溶物を炉去した。炉液に塩化ナトリウム６０
０夕を加えて熔解し、４℃で一夜放置した。析出物を炉
取し、得られた微黄色ケークを水に溶解して凍結乾燥し
た。得られた粗消化管ホルモンのセクレチン活性（Ｃｒ
ｉｃｋ、ＨａｒｐｅｒａｎｄＲａｐｅｒ皿ｉｔ）〔ジャ
ーナル・オブ・フイジオロジー（Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．
）１１碇筈 ３６９頁（１９５世王）参照〕およびコレ
シストキニン・パンクレオザィミン活性（ＩｖｙＤ増血
ｉｔ）〔ジャーナル・オプ・フイジオロジ−（Ｊ．Ｐｈ
ｙｓｉｏｌ．）９５巻 ３５頁（１９３０年）参照〕を
測定した。更に、上記方法では小腸を０．９％塩化ナト
リウム水客液中で１０分間加熱したが、この塩の種類、
塩濃度、加熱時間を変え、他は上記方法と同様にして消
化管ホルモンを製造した。
また、対照として、小腸を沸騰水中で加熱した後ミンチ
し、上記方法の熱酢酸抽出以下の操作を行なう方法（対
照１）、および小腸を直ちにミンチし、上記方法の熱健
作酸抽出以下の操作を行なう方法（対照２）を選んだ。
し、上記方法の熱酢酸抽出以下の操作を行なう方法（対
照１）、および小腸を直ちにミンチし、上記方法の熱健
作酸抽出以下の操作を行なう方法（対照２）を選んだ。
結果を次の表１に示す。表 Ｉ
表１に示すように、本発明方法によれば、対照に比べて
、セクレチンおよびコレシストキニン１パンクレオザイ
ミンの活性収量が大きく、また、セクレチン比活性の高
いものが得られる。
、セクレチンおよびコレシストキニン１パンクレオザイ
ミンの活性収量が大きく、また、セクレチン比活性の高
いものが得られる。
実施例 ２
屠殺直後の新鮮な豚上部小腸（幽門下２ｍ）１０Ｘ９（
約１００匹分相当）を予め沸騰させた０．９％塩化ナト
リウム水溶液４０そ中に入れ、５分間煮沸した。
約１００匹分相当）を予め沸騰させた０．９％塩化ナト
リウム水溶液４０そ中に入れ、５分間煮沸した。
金属性の絹かごにて小腸を炉取し、更に充分に脂肪を除
くため熱水をかけて洗浄した。得られた煮沸小腸をミン
チした後、予め９０〜９５３０に加熱した０．１規定酢
酸４０そ中に入れ、同温度で１０分間燭拝して消化管ホ
ルモンの抽出を行った。次いで、室温まで放冷した後、
４℃にて一夜放置した。セライト４００夕を加え、炉紙
にて固形物を炉去した。固形分を０．１規定酢酸３そで
洗浄し、炉液とあわせた。得られた微黄色澄明溶液に、
予め活性化したカルボキシメチルセルローズ１．２ｋ９
（乾燥重量４００夕）を添加し、室温にて３粉ご間損梓
後４℃で一夜放置した。カルボキシメチルセルローズを
炉取し、冷水３夕にて水洗後、カルボキシメチルセルロ
ーズを０．１規定塩酸５そに懸濁し、室温にて３０分間
壇拝して吸着物を溶離させた。吸引炉週によりカルボキ
シメチルセルローズを回収して０．１規定塩酸１そで洗
浄した。洗浄液と炉液をあわせ、これに塩化ナトリウム
１．８ｋ９を加え、室温にて２時間塊拝した後、４℃で
一夜放置した。析出物を炉取し、これを２その蒸留水に
溶解して不熔物を炉去した。炉液に塩化ナトリウム６０
０夕を加えて容解し、４℃で一夜放置した。析出物を炉
取し、得られた微黄色を１３０の‘の蒸留水に溶解し、
１規定水酸化ナトリウムにてＰＨ３．０に調整した。次
いでィソブロパノール２夕を添加し、３０〜３５００で
２時間櫨拝し、セクレチンを抽出した。セラィト２０夕
を加え、不溶物を吸引炉過にて炉取し、この不熔物をメ
タノール２そ中に懸濁して室温にて２時間燈洋抽出した
。メタノール層は、吸引炉過して不溶物を除いた後、さ
きのィソプロパノール層にあわせ、溶温５００のこて減
圧濃縮乾固した。残澄を蒸留水３００羽に溶かし、１規
定水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整した。析出した
不溶物を炉紙炉過で除いた後、２規定塩酸にてｐＨ３．
０に調整した。全量３３０の‘に塩化ナトリウム１００
夕を加えて溶解し、塩折した。一夜４℃に放置後、析出
物を吸引炉過にて炉取し、５０叫の蒸留水に溶かし凍結
乾燥した。得られたセクレチンの活性は実施例１に記載
の方法で測定した。更に、上記方法では小腸を０．９％
塩化ナトリウム水溶液中で１雌ご間加熱したが、この塩
の種類、塩濃度、加熱時間を変え、他は上記方法と同機
にして消化管ホルモンを製造した。
くため熱水をかけて洗浄した。得られた煮沸小腸をミン
チした後、予め９０〜９５３０に加熱した０．１規定酢
酸４０そ中に入れ、同温度で１０分間燭拝して消化管ホ
ルモンの抽出を行った。次いで、室温まで放冷した後、
４℃にて一夜放置した。セライト４００夕を加え、炉紙
にて固形物を炉去した。固形分を０．１規定酢酸３そで
洗浄し、炉液とあわせた。得られた微黄色澄明溶液に、
予め活性化したカルボキシメチルセルローズ１．２ｋ９
（乾燥重量４００夕）を添加し、室温にて３粉ご間損梓
後４℃で一夜放置した。カルボキシメチルセルローズを
炉取し、冷水３夕にて水洗後、カルボキシメチルセルロ
ーズを０．１規定塩酸５そに懸濁し、室温にて３０分間
壇拝して吸着物を溶離させた。吸引炉週によりカルボキ
シメチルセルローズを回収して０．１規定塩酸１そで洗
浄した。洗浄液と炉液をあわせ、これに塩化ナトリウム
１．８ｋ９を加え、室温にて２時間塊拝した後、４℃で
一夜放置した。析出物を炉取し、これを２その蒸留水に
溶解して不熔物を炉去した。炉液に塩化ナトリウム６０
０夕を加えて容解し、４℃で一夜放置した。析出物を炉
取し、得られた微黄色を１３０の‘の蒸留水に溶解し、
１規定水酸化ナトリウムにてＰＨ３．０に調整した。次
いでィソブロパノール２夕を添加し、３０〜３５００で
２時間櫨拝し、セクレチンを抽出した。セラィト２０夕
を加え、不溶物を吸引炉過にて炉取し、この不熔物をメ
タノール２そ中に懸濁して室温にて２時間燈洋抽出した
。メタノール層は、吸引炉過して不溶物を除いた後、さ
きのィソプロパノール層にあわせ、溶温５００のこて減
圧濃縮乾固した。残澄を蒸留水３００羽に溶かし、１規
定水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整した。析出した
不溶物を炉紙炉過で除いた後、２規定塩酸にてｐＨ３．
０に調整した。全量３３０の‘に塩化ナトリウム１００
夕を加えて溶解し、塩折した。一夜４℃に放置後、析出
物を吸引炉過にて炉取し、５０叫の蒸留水に溶かし凍結
乾燥した。得られたセクレチンの活性は実施例１に記載
の方法で測定した。更に、上記方法では小腸を０．９％
塩化ナトリウム水溶液中で１雌ご間加熱したが、この塩
の種類、塩濃度、加熱時間を変え、他は上記方法と同機
にして消化管ホルモンを製造した。
また、対照として、小腸を沸騰水中で加熱した後ミンチ
し、上記万法の熱酢酸抽出以下の操作を行なう方法（対
照１）、および小腸を直ちにミンチし、上記方法の熱酢
酸抽出以下の操作を行なう方法（対照２）を選んだ。
し、上記万法の熱酢酸抽出以下の操作を行なう方法（対
照１）、および小腸を直ちにミンチし、上記方法の熱酢
酸抽出以下の操作を行なう方法（対照２）を選んだ。
結果を次の表２に示す。
表 ２
表２に示すように、本発明方法によれば、対照方法に比
べて、セクレチンの活性収量が大きく、また、比活‘性
の高いものが得られる。
べて、セクレチンの活性収量が大きく、また、比活‘性
の高いものが得られる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 哺乳動物の小腸を塩水溶液中で加熱した後、消化管
ホルモンを分離精製する事を特徴とする、消化管ホルモ
ンの製造方法。 ２ 塩水溶液が塩化ナトリウム水溶液である特許請求の
範囲第１項記載の消化管ホルモンの製造方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52012974A JPS6040412B2 (ja) | 1977-02-10 | 1977-02-10 | 消化管ホルモンの製造方法 |
| MX786821U MX5314E (es) | 1977-02-10 | 1978-02-03 | Procedimiento mejorado para la obtencion de secretina y colecistoquinin-pancreozimina |
| US05/875,556 US4150117A (en) | 1977-02-10 | 1978-02-06 | Process for the preparation of gastrointestinal hormone |
| FR7803331A FR2380297A1 (fr) | 1977-02-10 | 1978-02-07 | Procede de preparation d'hormones gastro-intestinales |
| DE19782805283 DE2805283A1 (de) | 1977-02-10 | 1978-02-08 | Verfahren zur herstellung eines gastrointestinalen hormons |
| CA296,545A CA1098825A (en) | 1977-02-10 | 1978-02-09 | Process for the preparation of gastrointestinal hormone |
| GB5161/78A GB1594375A (en) | 1977-02-10 | 1978-02-09 | Process for the preparation of a gastrointestinal hormone |
| SE7801535A SE443088B (sv) | 1977-02-10 | 1978-02-09 | Forfarande for framstellning av sekretin genom extraktion av tunntarm |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52012974A JPS6040412B2 (ja) | 1977-02-10 | 1977-02-10 | 消化管ホルモンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5399311A JPS5399311A (en) | 1978-08-30 |
| JPS6040412B2 true JPS6040412B2 (ja) | 1985-09-11 |
Family
ID=11820191
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52012974A Expired JPS6040412B2 (ja) | 1977-02-10 | 1977-02-10 | 消化管ホルモンの製造方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4150117A (ja) |
| JP (1) | JPS6040412B2 (ja) |
| CA (1) | CA1098825A (ja) |
| DE (1) | DE2805283A1 (ja) |
| FR (1) | FR2380297A1 (ja) |
| GB (1) | GB1594375A (ja) |
| MX (1) | MX5314E (ja) |
| SE (1) | SE443088B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63192420U (ja) * | 1987-05-29 | 1988-12-12 | ||
| JPH02125905U (ja) * | 1989-03-24 | 1990-10-17 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5815946A (ja) * | 1981-07-21 | 1983-01-29 | Eisai Co Ltd | 新規ヘプタデカペプタイド |
| JPS5890313A (ja) * | 1981-11-20 | 1983-05-30 | Nippon Steel Corp | 鋼板の冷却装置 |
| JPS5955834A (ja) * | 1982-09-27 | 1984-03-31 | Eisai Co Ltd | 消化管ホルモンの抽出方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2099708A (en) * | 1933-03-29 | 1937-11-23 | Parke Davis & Co | Therapeutic product and method of making same |
| US3013944A (en) * | 1959-12-07 | 1961-12-19 | Jorpes Johan Erik | Process for the production of gastrointestinal hormones and hormone concentrate |
| US3847891A (en) * | 1973-04-18 | 1974-11-12 | Eisai Co Ltd | Separation of secretin and cholecystokinin-pancreozymin from mixture thereof |
| JPS535068A (en) * | 1976-07-06 | 1978-01-18 | Nitto Boseki Co Ltd | Dry process denitration of waste gas |
-
1977
- 1977-02-10 JP JP52012974A patent/JPS6040412B2/ja not_active Expired
-
1978
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Cited By (2)
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