CN108866134B - 一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，包含以下步骤：（1）预处理；（2）蚕蛹蛋白多肽的制备；（3）蚕蛹蛋白多肽的改性；（4）钙源的制备；（5）螯合反应；（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化。本发明通过磷酸化改性，进一步增加多肽与钙的螯合位点，提高产品的可溶性钙含量及螯合率，且为蚕蛹的加工及综合利用提供了一种新的途径，挖掘出蚕蛹的新功能，拓宽了蚕蛹的应用范围，增加了其附加值。

Description

一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法
技术领域
本发明属于补钙剂领域，具体涉及一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法。
背景技术
钙是人体中最丰富的无机元素，约占体重的1.5～2.2％，其中99%又以磷酸钙的形式存在于骨骼中，构成人体支架。同时，钙离子是细胞信号转导中的第二信使，参与机体的多项生理功能如神经传递，肌肉收缩和凝血等。缺钙会导致骨质疏松、佝偻病、骨质软化等，因此，补钙对人体非常重要，尤其是婴幼儿、老人及孕妇等。常见的补钙形式是离子钙，如碳酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙等，溶解性较差，吸收时需要消耗大量胃酸，吸收率和生物利用率低，并在肠道中容易形成钙沉淀，对胃肠有一定刺激性。螯合钙是氨基酸与钙螯合成具有一个Ca2+在中心的五元环状结构的络合物，分子结构稳定，遇胃酸不分解，并且在肠道内通过特定通道直接被吸收，因此不仅吸收速度快，而且吸收量大，生物利用率高，是新一代补钙制剂，具有广阔的应用前景。
肽螯合钙的制备方法主要通过蛋白多肽和氯化钙（CaCl2）等钙源螯合反应而成，目前对多肽螯合钙的研究和应用还较少，在目前的研究中多肽来源主要集中在大豆及鱼、虾等水产类。研究表明，结合钙的量随着羧基含量的增加而线性增加，并且最可能的钙结合位点是Asp和Glu的羧基。因此，挖掘高Asp和Glu含量的原料，并研究出一种更有效的制备工艺，对螯合钙的合成具有相当重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，可有效提高产品中的钙含量及螯合率。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，包含以下步骤：
（1）预处理：将蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，并进行脱脂除臭，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：10～1：20，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量2～5%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后进行灭酶，并加入活性炭进行脱腥脱色，经离心、膜分离后得到蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：使用磷酸化试剂对步骤（2）所制得的蚕蛹蛋白多肽进行改性，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：配制氯化钙（CaCl2）的水溶液，或将步骤（2）中过滤后得到的滤渣用于酸解制钙，所述的氯化钙（CaCl2）水溶液或所述酸解制钙后的溶液即为钙离子溶液；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子（Ca2+）质量的比例为2：1～10:1，在50～75℃、pH为6～8的条件下螯合反应0.5～1.5h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，对反应液进行醇洗，经离心、干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙。
蚕蛹是传统蚕桑产业的重要产物，也是药食两用的新资源食品，其蛋白质和钙含量丰富，鲜蛹中蛋白质含量约为14～15%，干蛹中约为45～50%，钙含量达80mg每100g。通过对多种原料中氨基酸含量进行测定后，发现蚕蛹中Asp和Glu含量最高，分别可达到10%、14%左右，可提供较多的钙结合位点。因此，使用蚕蛹制备多肽螯合钙能有效提高产物中的钙含量。在实验中还发现，钙结合能力与多肽分子量的大小相关，分子量在1000-3000Da时，螯合率高，形成的螯合物较稳定。本发明以蚕蛹为原料，以可溶性钙含量及螯合率为评价指标，筛选采用酶法及膜分离技术制备高结合率多肽，分子量在1000～3000Da，并通过磷酸化改性进一步增加多肽与钙的螯合位点。同时，利用酸解提取蚕蛹壳中的可溶性钙，实现蚕蛹的全利用。
优选地，步骤（1）中所述的蚕蛹为鲜家蚕蛹或缫丝蚕蛹。经实验发现，鲜家蚕蛹和缫丝蚕蛹蛋白质和钙含量最为丰富。
优选地，步骤（1）所述脱脂除臭的过程中，以正己烷、丙酮为萃取剂，以料液质量比1:3～1:4的比例萃取8～10h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉。通过上述过程脱脂除臭后，可有效去除蚕蛹粉中的气味不愉悦的物质，保证螯合产物的无异味。
优选地，步骤（2）所述的酶解过程中，酶解温度为50～60℃，pH值为8～9，酶解时间为3～5h。
优选地，步骤（2）所述的灭酶过程中，使用95℃的水浴加热灭酶10～15min。
优选地，步骤（2）加入活性炭进行脱腥脱色的过程中，加入酶解产物质量4～6%的活性炭，并在40～45℃水浴的条件下加热40～50min。
优选地，步骤（2）所述的离心过程的条件为在6000r/min的速度下离心15～20min。
优选地，步骤（2）所述的膜分离过程中，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽。
优选地，步骤（3）所述的磷酸化试剂为六偏磷酸钠、三聚磷酸钠、磷酸、多聚磷酸钠或三氯氧磷中的一种。
优选地，步骤（3）所述的改性过程中，先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为20～100g/L，加入磷酸化试剂至磷酸化试剂浓度为2～10g/L，反应温度为40～60℃，pH值为5～10，反应1～2h，反应结束后透析24～48h。磷酸化处理可改善多肽的亲水性，并有效增加钙结合位点，从而提高成品的可溶性钙含量及螯合率。
优选地，步骤（4）所述酸解制钙的过程中，使用马弗炉将所述滤渣在520～550℃的温度下灼烧3～5h，将灰分冷却后，加入3%的盐酸溶液进行酸解，得到钙离子溶液。
优选地，步骤（6）所述的醇洗过程中，向步骤（5）螯合反应后的反应液中加入3～5倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心15～20min。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
1. 本发明采用蚕蛹为原料，干蛹中蛋白含量约为45～50%，且Asp和Glu含量最高，分别可达到10%、14%左右，Asp和Glu的羧基可提供钙结合位点，使用蚕蛹制备多肽螯合钙能有效提高产物中的钙含量；
2. 本发明通过磷酸化改性，进一步增加多肽与钙的螯合位点，提高产品的可溶性钙含量及螯合率；
3. 本发明为蚕蛹的加工及综合利用提供了一种新的途径，挖掘出蚕蛹的新功能，拓宽了蚕蛹的应用范围，增加了其附加值。
附图说明
以下通过附图对本发明作进一步的说明。
图1 本发明所述制备方法的流程图。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
（1）预处理：将鲜家蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，以正己烷为萃取剂，以料液质量比1:3的比例萃取8h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：15，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量2%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃，pH值为8，酶解时间为4h，酶解结束后使用95℃的水浴加热灭酶10min，并加入酶解产物质量5%的活性炭，并在45℃水浴的条件下加热40min进行脱腥脱色，在6000r/min的速度下离心15min，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为50g/L，加入六偏磷酸钠至浓度为5g/L进行改性，反应温度为50℃，pH值为8，反应1h，反应结束后透析48h，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：配制氯化钙（CaCl2）的水溶液，所述的氯化钙（CaCl2）水溶液即为钙离子溶液；；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子（Ca2+）质量的比例为4：1，在75℃、pH为8的条件下螯合反应1h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，向反应液中加入4倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心20min，干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙。
对实施例1所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为9.87%，螯合率为92.35%。
实施例2
（1）预处理：将鲜家蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，以丙酮为萃取剂，以料液质量比1:4的比例萃取10h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：10，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量5%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解温度为60℃，pH值为9，酶解时间为3h，酶解结束后使用95℃的水浴加热灭酶15min，并加入酶解产物质量4%的活性炭，并在40℃水浴的条件下加热50min进行脱腥脱色，在6000r/min的速度下离心20min，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为100g/L，加入三聚磷酸钠至浓度为5g/L进行改性，反应温度为50℃，pH值为8，反应2h，反应结束后透析48h，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：配制氯化钙（CaCl2）的水溶液，所述的氯化钙（CaCl2）水溶液即为钙离子溶液；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子（Ca2+）质量的比例为2：1，在75℃、pH为8的条件下螯合反应1h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，向反应液中加入3倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心15min，干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙。
对实施例2所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为8.45%，螯合率为91.02%。
实施例3
（1）预处理：将缫丝蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，以正己烷为萃取剂，以料液质量比1:3的比例萃取9h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：20，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量3%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解温度为55℃，pH值为8，酶解时间为5h，酶解结束后使用95℃的水浴加热灭酶10min，并加入酶解产物质量6%的活性炭，并在42℃水浴的条件下加热45min进行脱腥脱色，在6000r/min的速度下离心18min，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为30g/L，加入磷酸至浓度为6g/L进行改性，反应温度为40℃，pH值为6，反应1.5h，反应结束后透析48h，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：将步骤（2）中过滤后得到的滤渣用于酸解制钙，使用马弗炉将所述滤渣在520℃的温度下灼烧5h，将灰分冷却后，加入3%的盐酸溶液进行酸解，所述酸解制钙后的溶液即为钙离子溶液；；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子（Ca2+）质量的比例为5:1，在60℃、pH为7的条件下螯合反应0.5h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，向反应液中加入5倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心15min，干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙。
对实施例3所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为7.86%，螯合率为90.31%。
实施例4
（1）预处理：将缫丝蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，以丙酮为萃取剂，以料液质量比1:3的比例萃取10h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：10，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量4%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解温度为60℃，pH值为8，酶解时间为3h，酶解结束后使用95℃的水浴加热灭酶10min，并加入酶解产物质量4%的活性炭，并在45℃水浴的条件下加热50min进行脱腥脱色，在6000r/min的速度下离心15min，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为50g/L，加入三氯氧磷至浓度为5g/L进行改性，反应温度为60℃，pH值为8，反应1h，反应结束后透析48h，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：将步骤（2）中过滤后得到的滤渣用于酸解制钙，使用马弗炉将所述滤渣在550℃的温度下灼烧5h，将灰分冷却后，加入3%的盐酸溶液进行酸解，所述酸解制钙后的溶液即为钙离子溶液；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子（Ca2+）质量的比例为4:1，在75℃、pH为6的条件下螯合反应1.5h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，向反应液中加入4倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心20min，干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙。
对实施例4所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为9.17%，螯合率为92.36%。
实施例5
（1）预处理：将鲜家蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，以丙酮为萃取剂，以料液质量比1:3的比例萃取8h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：15，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量2%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解温度为50℃，pH值为9，酶解时间为3h，酶解结束后使用95℃的水浴加热灭酶15min，并加入酶解产物质量4%的活性炭，并在40℃水浴的条件下加热45min进行脱腥脱色，在6000r/min的速度下离心20min，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为80g/L，加入三聚磷酸钠至浓度为10g/L进行改性，反应温度为60℃，pH值为5，反应1.5h，反应结束后透析30h，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：配制氯化钙（CaCl2）的水溶液，所述的氯化钙（CaCl2）水溶液即为钙离子溶液；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子（Ca2+）质量的比例为6：1，在75℃、pH为7的条件下螯合反应1.5h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，向反应液中加入3倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心15min，干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙。
对实施例5所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为9.25%，螯合率为90.83%。
实施例6
（1）预处理：将鲜家蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，以丙酮为萃取剂，以料液质量比1:3的比例萃取10h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：10，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量3%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解温度为60℃，pH值为8，酶解时间为5h，酶解结束后使用95℃的水浴加热灭酶15min，并加入酶解产物质量5%的活性炭，并在45℃水浴的条件下加热40min进行脱腥脱色，在6000r/min的速度下离心18min，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为20g/L，加入多聚磷酸钠至浓度为2g/L进行改性，反应温度为50℃，pH值为10，反应1h，反应结束后透析24h，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：将步骤（2）中过滤后得到的滤渣用于酸解制钙，使用马弗炉将所述滤渣在550℃的温度下灼烧3h，将灰分冷却后，加入3%的盐酸溶液进行酸解，所述酸解制钙后的溶液即为钙离子溶液；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子（Ca2+）质量的比例为10:1，在50℃、pH为7的条件下螯合反应1.5h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，向反应液中加入3倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心20min，干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙。
对实施例6所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为9.17%，螯合率为92.36%。
对比例1
对比例1与实施例1的区别在于，步骤（2）中不含有使用超滤膜截留进行膜分离的过程。
对对比例1所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为6.75%，螯合率为85.20%。
对比例2
对比例1与实施例1的区别在于，不含步骤（3）蚕蛹蛋白多肽的改性。
对对比例2所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙进行检测，结果显示其可溶性钙含量为4.21%，螯合率为76.03%。
上述实施例1～6及对比例1～2的检测结果如下表-1所示。
表-1
可溶性钙含量/% 螯合率/%
实施例1 9.87 92.35
实施例2 8.45 91.02
实施例3 7.86 90.31
实施例4 9.17 92.36
实施例5 9.25 90.83
实施例6 9.17 92.36
对比例1 6.75 85.20
对比例2 4.21 76.03
从上表-1可见，实施例1～6所制得的蚕蛹蛋白多肽螯合钙的可溶性钙含量和螯合率相比对比例1～2有明显的提高，证明本发明所述的技术方案中，改性对于蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备具有相当重要的作用，且当蚕蛹蛋白多肽的分子量在1000～3000Da的范围内时，形成的螯合物较稳定。
需要指出的是，上述实施例1～6仅是对本发明的进一步说明，而不是限制，本领域技术人员在与本发明技术方案的相当的含义和范围内的任何调整或改变，都应认为是包括在本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
（1）预处理：将蚕蛹筛选去杂质，经低温烘干粉碎后，过60目筛，并进行脱脂除臭，得到蚕蛹粉；
（2）蚕蛹蛋白多肽的制备：向步骤（1）得到的蚕蛹粉中加入水，所述蚕蛹粉和所加入水的质量比为1：10～1：20，过胶体磨，过滤，然后向滤液中加入步骤（1）所述蚕蛹粉质量2～5%的碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后进行灭酶，并加入活性炭进行脱腥脱色，经离心、膜分离后得到蚕蛹蛋白多肽；所述膜分离的过程中，依次使用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000～3000Da蚕蛹蛋白多肽；
（3）蚕蛹蛋白多肽的改性：使用磷酸化试剂对步骤（2）所制得的蚕蛹蛋白多肽进行改性，得到改性蚕蛹蛋白多肽；
（4）钙源的制备：配制氯化钙的水溶液，或将步骤（2）中过滤后得到的滤渣用于酸解制钙，所述的氯化钙水溶液或所述酸解制钙后的溶液即为钙离子溶液；
（5）螯合反应：将步骤（3）制得的改性蚕蛹蛋白多肽和步骤（4）制得的钙离子溶液混合，调节所述改性蚕蛹蛋白多肽与钙离子溶液中的钙离子质量的比例为2：1～10:1，在50～75℃、pH为6～8的条件下螯合反应0.5～1.5h；
（6）蚕蛹蛋白多肽螯合钙的纯化：在步骤（5）所述的螯合反应结束后，对反应液进行醇洗，经离心、干燥后得到蚕蛹蛋白多肽螯合钙；
步骤（2）所述的酶解过程中，酶解温度为50～60℃，pH值为8～9，酶解时间为3～5h，灭酶过程中，使用95℃的水浴加热灭酶10～15min；
步骤（3）所述的改性过程中，先将步骤（2）制得的蚕蛹蛋白多肽调节至浓度为20～100g/L，加入磷酸化试剂至磷酸化试剂浓度为2～10g/L，反应温度为40～60℃，pH值为5～10，反应1～2h，反应结束后透析24～48h；所述的磷酸化试剂为六偏磷酸钠、三聚磷酸钠、磷酸、多聚磷酸钠或三氯氧磷中的一种。
2.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的蚕蛹为鲜家蚕蛹或缫丝蚕蛹。
3.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述脱脂除臭的过程中，以正己烷、丙酮为萃取剂，以料液质量比1:3～1:4的比例萃取8～10h，然后进行减压蒸馏，将蒸馏后剩余的固体取出烘干，得到蚕蛹粉。
4.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤（2）加入活性炭进行脱腥脱色的过程中，加入酶解产物质量4～6%的活性炭，并在40～45℃水浴的条件下加热40～50min，所述的离心过程的条件为在6000r/min的速度下离心15～20min。
5.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述酸解制钙的过程中，使用马弗炉将所述滤渣在520～550℃的温度下灼烧3～5h，将灰分冷却后，加入3%的盐酸溶液进行酸解，得到钙离子溶液。
6.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法，其特征在于，步骤（6）所述的醇洗过程中，向步骤（5）螯合反应后的反应液中加入3～5倍体积的95%酒精，离心过程在6000r/m的速度下离心15～20min。
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