JPS6038112B2 - 卵白リゾチ−ムの溶出方法 - Google Patents
卵白リゾチ−ムの溶出方法Info
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- JPS6038112B2 JPS6038112B2 JP57091879A JP9187982A JPS6038112B2 JP S6038112 B2 JPS6038112 B2 JP S6038112B2 JP 57091879 A JP57091879 A JP 57091879A JP 9187982 A JP9187982 A JP 9187982A JP S6038112 B2 JPS6038112 B2 JP S6038112B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
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- Y10S435/815—Enzyme separation or purification by sorption
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、卵白リゾチームを吸着せる弱酸性腸イオン交
キ剣樹脂からその卵白ＩＪゾチームを溶出させる方法に
関する。
キ剣樹脂からその卵白ＩＪゾチームを溶出させる方法に
関する。
従来より、卵白からリゾチームを抽出する方法の一つと
して、弱酸性陽イオン交換樹脂、例えばアンバーライト
、デユオライト、ダイヤイオンなどにリゾチームを吸着
させたのちその樹脂からリゾチームを溶出させるという
方法が知られている。
して、弱酸性陽イオン交換樹脂、例えばアンバーライト
、デユオライト、ダイヤイオンなどにリゾチームを吸着
させたのちその樹脂からリゾチームを溶出させるという
方法が知られている。
この際樹脂からリゾチームを溶出させるのに通常行なわ
れている方法は、例えば特公昭４１一７８２８号公報に
開示されているような、リゾチーム吸着樹脂を一旦カラ
ムにつめてからＰＨが６．５〜７．５程度の中性付近の
例えば食塩、リン酸第二アンモニウムなどの塩溶液を用
いて溶出させるという方法である。このような塩溶液の
中には、単に塩を水に溶解した丈のもの以外に、塩とそ
の塩を構成する片方のイオン（陽イオンもしくは陰イオ
ン）を有する酸あるいはアルカリが添加されているもの
等のいわゆる緩衝液も含まれている。しかし、いずれに
しても、上記したような港出方法に準じてバッチ法で樹
脂からリゾチームを溶出させるのに同様にｐＨが中性付
近の塩溶液を使用してみると、たとえ溶母操作を数回繰
り返してその各溶出液から塩折等でリゾチームを回収す
るようにしてみても、溶出液中のＩＪゾチームの濃度が
薄まってしまっているためか渚出回数が増えて溶出に手
間かかる割には樹脂からのＩＪゾチームの回収率、即ち
収率、を高め難いという問題がある。この問題の解決が
従来から求められていながら未だになされていないのが
現状である。本発明の目的は、弱酸性陽イオン交換樹脂
に吸着させた卵白リゾチームを収率よく効果的に溶出さ
せる方法を提供することである。
れている方法は、例えば特公昭４１一７８２８号公報に
開示されているような、リゾチーム吸着樹脂を一旦カラ
ムにつめてからＰＨが６．５〜７．５程度の中性付近の
例えば食塩、リン酸第二アンモニウムなどの塩溶液を用
いて溶出させるという方法である。このような塩溶液の
中には、単に塩を水に溶解した丈のもの以外に、塩とそ
の塩を構成する片方のイオン（陽イオンもしくは陰イオ
ン）を有する酸あるいはアルカリが添加されているもの
等のいわゆる緩衝液も含まれている。しかし、いずれに
しても、上記したような港出方法に準じてバッチ法で樹
脂からリゾチームを溶出させるのに同様にｐＨが中性付
近の塩溶液を使用してみると、たとえ溶母操作を数回繰
り返してその各溶出液から塩折等でリゾチームを回収す
るようにしてみても、溶出液中のＩＪゾチームの濃度が
薄まってしまっているためか渚出回数が増えて溶出に手
間かかる割には樹脂からのＩＪゾチームの回収率、即ち
収率、を高め難いという問題がある。この問題の解決が
従来から求められていながら未だになされていないのが
現状である。本発明の目的は、弱酸性陽イオン交換樹脂
に吸着させた卵白リゾチームを収率よく効果的に溶出さ
せる方法を提供することである。
本発明者は鋭意研究を重ねた結果、塩溶液中に吸着リゾ
チームを溶出させるのに際してその塩溶液中にアルカリ
剤を添加することにより卵白リゾチームを効果的に溶出
させることができることを見し、出した。
チームを溶出させるのに際してその塩溶液中にアルカリ
剤を添加することにより卵白リゾチームを効果的に溶出
させることができることを見し、出した。
本発明はこのような知見に基づいて完成されたものであ
って、卵白リゾチームを吸着せる弱酸性陽イオン交換樹
脂からその卵白ＩＪゾチームを溶出させるに際して、卵
白リゾチーム吸着弱酸性陽イオン交換樹脂を含む塩溶液
にこの溶液のｐＨ力ｉ溶出工程中６．５〜８．０に保た
れるようにアルカリ剤を添加することを特徴とする、卵
白リゾチームの溶出方法を提供するものである。
って、卵白リゾチームを吸着せる弱酸性陽イオン交換樹
脂からその卵白ＩＪゾチームを溶出させるに際して、卵
白リゾチーム吸着弱酸性陽イオン交換樹脂を含む塩溶液
にこの溶液のｐＨ力ｉ溶出工程中６．５〜８．０に保た
れるようにアルカリ剤を添加することを特徴とする、卵
白リゾチームの溶出方法を提供するものである。
以下、本発明を詳しく群明する。
本発明の方法において、卵白リゾチームを弱酸性陽イオ
ン交換樹脂に吸着させる工程は従来のこの種の吸着工程
と何ら異なることなく実施すればよい。
ン交換樹脂に吸着させる工程は従来のこの種の吸着工程
と何ら異なることなく実施すればよい。
例えば、駿添加によりｐＨを中性付近（ｐＨ６．５〜ｐ
Ｈ７、功立）にし、かつ充分ホモジナィズした卵白液に
その液量の約２割〜３割容量の弱酸性陽イオン交換樹脂
を添加し、ゆっくりと数時間（約１〜８時間）燭拝して
卵白中のりゾチームを上記陽イオン交換樹脂に吸着させ
、次いで通常充分に水洗してリゾチーム吸着樹脂を得る
。ここにおいて用いる弱酸性陽イオン交換樹脂としては
市販されている、例えば下記のようなものが挙げられる
。ロームアンドハースト社製の、アンバーライトＩＲＣ
−５０、アンノ＜−ライトＩＲＣ−８４、アン／ゞーラ
イトＣＧ−５０、ダイヤモンド・シヤム。
Ｈ７、功立）にし、かつ充分ホモジナィズした卵白液に
その液量の約２割〜３割容量の弱酸性陽イオン交換樹脂
を添加し、ゆっくりと数時間（約１〜８時間）燭拝して
卵白中のりゾチームを上記陽イオン交換樹脂に吸着させ
、次いで通常充分に水洗してリゾチーム吸着樹脂を得る
。ここにおいて用いる弱酸性陽イオン交換樹脂としては
市販されている、例えば下記のようなものが挙げられる
。ロームアンドハースト社製の、アンバーライトＩＲＣ
−５０、アンノ＜−ライトＩＲＣ−８４、アン／ゞーラ
イトＣＧ−５０、ダイヤモンド・シヤム。
ツクケミカル社製の、デュオラィトＣＳ−１０１、デュ
オラィトＣＣ−３、デユオライトＥＳ−８０、ダウケミ
カル社製のダウェツクスＣＣＲ−２、バイエル社製の、
しバチツトＣＮＰ、しバチツトＣＮＰ−８０、三菱化成
工業■製の、ダイヤイオンＷＫ−１０、ダイヤイオンＷ
Ｋ−２０、ダイヤイオンＷＫ−１１等。尚、実際の使用
に際して、これら賜イオン交換樹脂は、卵白液に添加す
る前にカセィソーダその他のアルカリ剤で処理して約１
．２〜１．４ミリ当量／泌（樹脂）の腸イオン（日を除
いたＮａ，Ｋ，ＮＨ４等の腸イオン）置換形として用い
ると、ｐＨを中性付近に調整した卵白液に添加した際に
卵白液のｐＨの変化がほとんどないので管理上都合がよ
い。以上おようにして得られたりゾチーム吸着樹脂から
そのリゾチームを漆出させる。
オラィトＣＣ−３、デユオライトＥＳ−８０、ダウケミ
カル社製のダウェツクスＣＣＲ−２、バイエル社製の、
しバチツトＣＮＰ、しバチツトＣＮＰ−８０、三菱化成
工業■製の、ダイヤイオンＷＫ−１０、ダイヤイオンＷ
Ｋ−２０、ダイヤイオンＷＫ−１１等。尚、実際の使用
に際して、これら賜イオン交換樹脂は、卵白液に添加す
る前にカセィソーダその他のアルカリ剤で処理して約１
．２〜１．４ミリ当量／泌（樹脂）の腸イオン（日を除
いたＮａ，Ｋ，ＮＨ４等の腸イオン）置換形として用い
ると、ｐＨを中性付近に調整した卵白液に添加した際に
卵白液のｐＨの変化がほとんどないので管理上都合がよ
い。以上おようにして得られたりゾチーム吸着樹脂から
そのリゾチームを漆出させる。
その熔出に用いる塩溶液は従来から用いられていたもの
と特に異ならない。
と特に異ならない。
例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩等
の水溶液、より具体的には塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化アンモニウム、硫酸ナトリウム等の水溶液でｐ
Ｈが中性付近のものが挙げられる。これら塩溶液は、リ
ゾチームを吸着した樹脂からリゾチ−ムを港出させるた
めに用いるものなので溶出し易いように通常０．３Ｍ程
度以上の濃度で用いる。吸着樹ぞ脂からのりゾチームの
溶出はこのような濃度の塩溶液中で行なわれるのである
が、この操作は容量比で塩溶液１０碇部‘こ対して吸着
樹脂１０〜１０の歌程度の割合の下で行うのが作業し易
さの上からも好ましい。本発明では、卵白リゾチ−ム吸
着弱酸性陽イオン交換樹脂からリゾチームを溶出させる
に際して、その樹脂を含む前記塩溶液にこの溶液のｐＨ
が溶出工程中６．５〜８．０に保たれるようにアルカリ
剤を添加するところに大きな特徴がある。
の水溶液、より具体的には塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化アンモニウム、硫酸ナトリウム等の水溶液でｐ
Ｈが中性付近のものが挙げられる。これら塩溶液は、リ
ゾチームを吸着した樹脂からリゾチ−ムを港出させるた
めに用いるものなので溶出し易いように通常０．３Ｍ程
度以上の濃度で用いる。吸着樹ぞ脂からのりゾチームの
溶出はこのような濃度の塩溶液中で行なわれるのである
が、この操作は容量比で塩溶液１０碇部‘こ対して吸着
樹脂１０〜１０の歌程度の割合の下で行うのが作業し易
さの上からも好ましい。本発明では、卵白リゾチ−ム吸
着弱酸性陽イオン交換樹脂からリゾチームを溶出させる
に際して、その樹脂を含む前記塩溶液にこの溶液のｐＨ
が溶出工程中６．５〜８．０に保たれるようにアルカリ
剤を添加するところに大きな特徴がある。
添加するアルカリ剤は、少量の水に溶かした場合にｐＨ
ｉｌ以上の強アルカリ性を示すもの、例えばカセイソー
ダ、カセィカリ等であり、これらを添０加するときは０
．１Ｎ〜が程度の濃度の水溶液として用いるのが好まし
い。
ｉｌ以上の強アルカリ性を示すもの、例えばカセイソー
ダ、カセィカリ等であり、これらを添０加するときは０
．１Ｎ〜が程度の濃度の水溶液として用いるのが好まし
い。
余り薄いと添加後の液量が多くなり、また余り濃いと添
加の際リゾチームの変性を招き易くなるからである。ア
ルカリ剤の添加の程度は、塩溶液のｐＨが溶出工程中６
．５〜８．０に保たれる程度である。
加の際リゾチームの変性を招き易くなるからである。ア
ルカリ剤の添加の程度は、塩溶液のｐＨが溶出工程中６
．５〜８．０に保たれる程度である。
添加の程度が余り少なくてｐＨが６．５未満となると吸
着樹脂からリゾチームが溶出し驚くなり、また逆に添加
の程度が多すぎてｐＨが８．０を越えるとアルカリ剤の
注入量が多くなり局部的にリゾチームの変性を招き易い
からである。アルカリ剤の添加の量的程度は、リゾチー
ムの樹脂への吸着状態にもより一概には定め難いが、ご
く一般的な場合を例にとって示せば、リゾチーム吸着樹
脂１そに対して、ＩＮ溶液の場合であれば約０．５〜７
の上／分、好ましくは約３〜４のと／分程度、０．則溶
液の場合であれば約１〜１４私／分、、好ましくは約６
〜８泌／分程度、、また州溶液の場合であれば約０．３
〜４の土／分、好ましくは２〜３の【／分程度の各添加
速度で添加すればよい。
着樹脂からリゾチームが溶出し驚くなり、また逆に添加
の程度が多すぎてｐＨが８．０を越えるとアルカリ剤の
注入量が多くなり局部的にリゾチームの変性を招き易い
からである。アルカリ剤の添加の量的程度は、リゾチー
ムの樹脂への吸着状態にもより一概には定め難いが、ご
く一般的な場合を例にとって示せば、リゾチーム吸着樹
脂１そに対して、ＩＮ溶液の場合であれば約０．５〜７
の上／分、好ましくは約３〜４のと／分程度、０．則溶
液の場合であれば約１〜１４私／分、、好ましくは約６
〜８泌／分程度、、また州溶液の場合であれば約０．３
〜４の土／分、好ましくは２〜３の【／分程度の各添加
速度で添加すればよい。
また、添加燈梓の時間は約５〜３０分間位でよい。更に
、アルカリ剤の添加に際しては、塩溶液のｐＨの局部的
急変を避け、液全体が均一なｐＨを保ち易くするために
、例えば３仇．ｐ．ｍの糟幹下で行なうことが望ましい
。
、アルカリ剤の添加に際しては、塩溶液のｐＨの局部的
急変を避け、液全体が均一なｐＨを保ち易くするために
、例えば３仇．ｐ．ｍの糟幹下で行なうことが望ましい
。
また、アルカリ剤の添加および液の鷹梓は、液のｐＨの
状態が前記した条件を保つ限り断続しても差しつかえな
いが、条件の一定化をはかる意味で断続しない方が好ま
しい。上記のように吸着樹脂からリゾチームを溶出せし
める際に塩溶液中にこの溶液のｐＨが溶出工程中６．５
〜８．０に保たれるようにアルカリ剤を添加することに
より、下記の試験例の結果より明らかな如く吸着リゾチ
ームを収率よく効果的に溶出させることができる。その
原因は、多分、吸着リゾチームと塩との置換（イオン交
換）に伴う塩溶液のｐＨの低下をアルカリ剤添加によっ
て防止することが延し、てはリゾチームの溶出を促すよ
うになるからではないかと考えられる。次に、このよう
な本発明の溶出方法がリゾチームの溶出に、延し、ては
卵白からのＩＪゾチームの抽出収率向上にいかに効果的
な方法であるかを、実際に溶出させたのち回収した下記
の試験例の結果でもつて明らかにする。
状態が前記した条件を保つ限り断続しても差しつかえな
いが、条件の一定化をはかる意味で断続しない方が好ま
しい。上記のように吸着樹脂からリゾチームを溶出せし
める際に塩溶液中にこの溶液のｐＨが溶出工程中６．５
〜８．０に保たれるようにアルカリ剤を添加することに
より、下記の試験例の結果より明らかな如く吸着リゾチ
ームを収率よく効果的に溶出させることができる。その
原因は、多分、吸着リゾチームと塩との置換（イオン交
換）に伴う塩溶液のｐＨの低下をアルカリ剤添加によっ
て防止することが延し、てはリゾチームの溶出を促すよ
うになるからではないかと考えられる。次に、このよう
な本発明の溶出方法がリゾチームの溶出に、延し、ては
卵白からのＩＪゾチームの抽出収率向上にいかに効果的
な方法であるかを、実際に溶出させたのち回収した下記
の試験例の結果でもつて明らかにする。
試験例 １Ａ リゾチーム吸着樹脂の調製
塩酸の添加でｐＨを６．５にし、かつ充分にホモジナィ
ズした卵白液ｌｏｏ０の【に対して、予めアルカリ処理
して１．３ミリ当量のＮａ−形とした陽イオン交換樹脂
（ダィウェックスＣＣＲ−２）２００叫を添加し、ゆっ
くりと鷹拝しつつ３００分間保持した。
ズした卵白液ｌｏｏ０の【に対して、予めアルカリ処理
して１．３ミリ当量のＮａ−形とした陽イオン交換樹脂
（ダィウェックスＣＣＲ−２）２００叫を添加し、ゆっ
くりと鷹拝しつつ３００分間保持した。
次いで卵白液を頃斜、炉過により除去したのち清水８０
０奴で３回洗浄してリゾチーム吸着樹脂を得た。Ｂ リ
ゾチームの溶出 上記のようにして得られたりゾチーム吸着樹脂約２００
の‘に、３％の食塩水８００泌を添加し、３仇．ｐ．ｍ
．の速度で蝿拝しつつＩＮＮａＯＨ溶液を約０．６叫／
分の割合で１０分間添加して塩溶液のｐＨを約７．０に
維持しつつリゾチームを液中に溶出させた。
０奴で３回洗浄してリゾチーム吸着樹脂を得た。Ｂ リ
ゾチームの溶出 上記のようにして得られたりゾチーム吸着樹脂約２００
の‘に、３％の食塩水８００泌を添加し、３仇．ｐ．ｍ
．の速度で蝿拝しつつＩＮＮａＯＨ溶液を約０．６叫／
分の割合で１０分間添加して塩溶液のｐＨを約７．０に
維持しつつリゾチームを液中に溶出させた。
Ｃ 溶出リゾチームの回収
次いで、上記の樹脂含有溶液を８０メッシュの炉布で炉
過し、得られた炉液を０．州Ｎａｏ地溶液の添加により
ｐＨ９．５とし、ここに食塩を添加して食塩濃度５％と
して塩折法でリゾチームを回収した。
過し、得られた炉液を０．州Ｎａｏ地溶液の添加により
ｐＨ９．５とし、ここに食塩を添加して食塩濃度５％と
して塩折法でリゾチームを回収した。
回収リゾチームはケーキの状態で９．偽であった。これ
を常法に準じて力価分析したところリゾチームの純結晶
３．１ｇに相当するものであった。尚、対照として上記
のＡに準じて調製したりゾチーム吸着樹脂約２００肌に
、食塩３％を含む０．９Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（
ｐＨ７．０）８００の‘を添加し、３仇．ｐ．ｍ．の速
度で額拝しつつ１０分間保持してリゾチームを液中に漆
出させ、この樹脂含有溶液を８０メッシュの炉布で炉適
し、得られた炉液から上記Ｃの回収方法と同じ条件下で
リゾチームを回収した。
を常法に準じて力価分析したところリゾチームの純結晶
３．１ｇに相当するものであった。尚、対照として上記
のＡに準じて調製したりゾチーム吸着樹脂約２００肌に
、食塩３％を含む０．９Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（
ｐＨ７．０）８００の‘を添加し、３仇．ｐ．ｍ．の速
度で額拝しつつ１０分間保持してリゾチームを液中に漆
出させ、この樹脂含有溶液を８０メッシュの炉布で炉適
し、得られた炉液から上記Ｃの回収方法と同じ条件下で
リゾチームを回収した。
この場合、炉過済樹脂について同じ溶出操作および回収
操作を更に３回繰り返してみたところ回収リゾチームは
以下の通りであった。上記の試験例１の結果より、吸着
樹脂からの塩溶液によるリゾチームの溶出に際しては、
従来のように予め中性付近のｐＨの塩溶液を用いる方法
より、塩溶液を用いかつアルカリ剤を添加するという本
発明の溶出方法によるならばリゾチームを一層収率よく
溶出させうろことが理解される。試験例 ２この試験例
は、吸着樹脂からリゾチームを効果的に熔出させるには
本発明の溶出方法に従って溶離剤として塩溶液を用いか
つ溶出に際してはアルカリ剤を添加し、更にその上この
アルカリ剤の添加を塩溶液のｐＨが溶出工程中６．５〜
８．０に保たれるように行なうことを実証するものであ
る。
操作を更に３回繰り返してみたところ回収リゾチームは
以下の通りであった。上記の試験例１の結果より、吸着
樹脂からの塩溶液によるリゾチームの溶出に際しては、
従来のように予め中性付近のｐＨの塩溶液を用いる方法
より、塩溶液を用いかつアルカリ剤を添加するという本
発明の溶出方法によるならばリゾチームを一層収率よく
溶出させうろことが理解される。試験例 ２この試験例
は、吸着樹脂からリゾチームを効果的に熔出させるには
本発明の溶出方法に従って溶離剤として塩溶液を用いか
つ溶出に際してはアルカリ剤を添加し、更にその上この
アルカリ剤の添加を塩溶液のｐＨが溶出工程中６．５〜
８．０に保たれるように行なうことを実証するものであ
る。
Ａ リゾチーム吸着樹脂の調製
塩酸の添加でｐＨを６．５にし、かつ充分にホモジナィ
ズした卵白液ｌｏｏ０の【に対して、予めアルカリ処理
して１．３ミリ当量のＮａ−形とした腸イオン交換樹脂
（ダウェックスＣＣＲ−２）２００の‘を添加し、ゆっ
くりと鷹拝しつつ３００分間保持した。
ズした卵白液ｌｏｏ０の【に対して、予めアルカリ処理
して１．３ミリ当量のＮａ−形とした腸イオン交換樹脂
（ダウェックスＣＣＲ−２）２００の‘を添加し、ゆっ
くりと鷹拝しつつ３００分間保持した。
次いで卵白液を頃斜、炉過により除去したのち清水８０
０地で３回洗浄してリゾチーム吸着樹脂を得た。Ｂ リ
ゾチームの溶出 （実験１一本発明法） 上記のようにして得られたりゾチーム吸着樹脂約２００
の‘に、１０％の食塩水３００の【を添加し、３比．ｐ
．ｍ．の速度で燈拝しつつＩＮＮａＯＨ溶液を約３の【
／分の割合で１０分間添加して塩溶液のｐＨを約７．０
に維持しつつリゾチ」ムを液中に溶出させた。
０地で３回洗浄してリゾチーム吸着樹脂を得た。Ｂ リ
ゾチームの溶出 （実験１一本発明法） 上記のようにして得られたりゾチーム吸着樹脂約２００
の‘に、１０％の食塩水３００の【を添加し、３比．ｐ
．ｍ．の速度で燈拝しつつＩＮＮａＯＨ溶液を約３の【
／分の割合で１０分間添加して塩溶液のｐＨを約７．０
に維持しつつリゾチ」ムを液中に溶出させた。
（実験２一本発明法）
上記のようにして得られたりゾチーム吸着樹脂約２００
の‘に、１０％の食塩水３００Ｍを添加し、３仇．ｐ．
ｍ．の速度で縄梓しつつＩＮＮａＯＨ溶液を約５の【／
分の割合で１０分間添加して塩溶液のｐを約８．０に維
持しつつリゾチームを液中に溶出させた。
の‘に、１０％の食塩水３００Ｍを添加し、３仇．ｐ．
ｍ．の速度で縄梓しつつＩＮＮａＯＨ溶液を約５の【／
分の割合で１０分間添加して塩溶液のｐを約８．０に維
持しつつリゾチームを液中に溶出させた。
（実験３一対照法）
この実験は、溶雛剤としてアルカリ性溶液のみを用いた
例である。
例である。
上記Ａの方法に従って得られたりゾチーム吸着樹脂約２
００の‘に、予めＩＮＮａＯＨ溶液０．２３の‘を添加
してｐＨを１０．０にしておいた純水３００の‘を添加
し、３仇．ｐ．ｍ．の速度で１０分間擬伴して該純水中
にリゾチームを溶出させた。
００の‘に、予めＩＮＮａＯＨ溶液０．２３の‘を添加
してｐＨを１０．０にしておいた純水３００の‘を添加
し、３仇．ｐ．ｍ．の速度で１０分間擬伴して該純水中
にリゾチームを溶出させた。
溶出１０分後の混合物のｐＨは７．３であった。（実験
４−対照法） この実験は、溶離剤として高濃度中性塩溶液のみを用い
た例である。
４−対照法） この実験は、溶離剤として高濃度中性塩溶液のみを用い
た例である。
上記Ａの方法に従って得られたりゾチーム吸着樹脂約２
００の‘に、１０％の食塩水３００の‘を添加し、３仇
．ｐ．ｍ．の速度で１０分間縄拝して該食塩水中にリゾ
チームを溶出させた。
００の‘に、１０％の食塩水３００の‘を添加し、３仇
．ｐ．ｍ．の速度で１０分間縄拝して該食塩水中にリゾ
チームを溶出させた。
溶出１０分後の混合物のｐＨは．５．０であった。（実
験５‐対照法） この実験５および後述の実験６は、溶雛剤としてアルカ
リ性の高濃度中性塩溶液を用いた例である。
験５‐対照法） この実験５および後述の実験６は、溶雛剤としてアルカ
リ性の高濃度中性塩溶液を用いた例である。
上記Ａの方法に従って得られたりゾチーム吸着樹脂約２
００の‘に、予めＩＮＮａＯＨ溶液０．１３羽を添加し
てｐＨを１０．０にしておいた１０％の食塩水３００叫
を添加し、３仇．ｐ．ｍ．の速度で１０分間櫨拝して塩
溶液中にリゾチームを溶出させた。
００の‘に、予めＩＮＮａＯＨ溶液０．１３羽を添加し
てｐＨを１０．０にしておいた１０％の食塩水３００叫
を添加し、３仇．ｐ．ｍ．の速度で１０分間櫨拝して塩
溶液中にリゾチームを溶出させた。
溶出１雌ふ後の混合物のＰＨは５．０であった。（実験
６−対照法）上記Ａの方法に従って得られたりゾチーム
吸着樹脂約２００のとに、予めＩＮＮａＯＨ溶液０．０
１泌を添加してｐＨを８．０にしておいた１０％の食塩
水３００の‘を添加し、３仇．ｐ．ｍ．の速度で１び分
間濃伴して塩溶液中にリゾチームを溶出させた。
６−対照法）上記Ａの方法に従って得られたりゾチーム
吸着樹脂約２００のとに、予めＩＮＮａＯＨ溶液０．０
１泌を添加してｐＨを８．０にしておいた１０％の食塩
水３００の‘を添加し、３仇．ｐ．ｍ．の速度で１び分
間濃伴して塩溶液中にリゾチームを溶出させた。
溶出１０分後の混合物の斑は５．０であった。Ｃ 溶出
リゾチームの回収 次いで、上記の各樹脂含有溶液を８０メッシュの炉布で
炉過し、得られた炉液を０．卵ＮａＯＨ溶液の添加によ
りｐＨ９．５とし、ここに食塩を添加して食塩濃度５％
として塩析法でリゾチームを回収した。
リゾチームの回収 次いで、上記の各樹脂含有溶液を８０メッシュの炉布で
炉過し、得られた炉液を０．卵ＮａＯＨ溶液の添加によ
りｐＨ９．５とし、ここに食塩を添加して食塩濃度５％
として塩析法でリゾチームを回収した。
上記の各実験で回収したケーキ状態のリゾチームの重量
を測定し、常法に準じて力価分析をしたところ結果は下
記の通りであった。
を測定し、常法に準じて力価分析をしたところ結果は下
記の通りであった。
リゾチームは卵白液１０００の‘当りほんの３〜処程度
しか存在しておらず、それ故卵白からリゾチームを少し
でも高い抽出率で得るためには卵白リゾチームを吸着せ
る樹脂からリゾチ−ムを出来るだけより効果的に港出さ
せうる方法を確立させることが必要とされる。
しか存在しておらず、それ故卵白からリゾチームを少し
でも高い抽出率で得るためには卵白リゾチームを吸着せ
る樹脂からリゾチ−ムを出来るだけより効果的に港出さ
せうる方法を確立させることが必要とされる。
上記の試験例２の結果は、本発明の方法によれば対照法
と異なって樹脂に吸着せるリゾチームがほぼ完全に回収
され、よって上記の産業上の要請が達成されうろことが
理解される。このように本発明の方法によれば卵白リゾ
チ−ムの一段と高い抽出率が保障されるだけでなく、連
続抽出法より溶雛剤の使用量も少なくてすみ、それ故装
置のスケールダウンおよび価格の低減が期待できる。
と異なって樹脂に吸着せるリゾチームがほぼ完全に回収
され、よって上記の産業上の要請が達成されうろことが
理解される。このように本発明の方法によれば卵白リゾ
チ−ムの一段と高い抽出率が保障されるだけでなく、連
続抽出法より溶雛剤の使用量も少なくてすみ、それ故装
置のスケールダウンおよび価格の低減が期待できる。
よって本発明は産業上極めて有用性があるといえる。以
下、本発明を実施例でもつて更に詳しく説明する。
下、本発明を実施例でもつて更に詳しく説明する。
実施例 １
上記の試験例１において、Ｎａ−形のダウェックスＣＣ
Ｒ−２樹脂に代えて予めアルカリ処理して１．２ミリ当
量のＫ−形としたアンバーライト舵Ｃ−５枕封８旨を同
量用いた他は同様にしてリゾチーム吸着樹脂を調製し、
以下は上記試験例１のＢおよびＣのリゾチーム溶出およ
び回収操作に準じてケーキ状態のリゾチーム８．９ｇを
を回収した。
Ｒ−２樹脂に代えて予めアルカリ処理して１．２ミリ当
量のＫ−形としたアンバーライト舵Ｃ−５枕封８旨を同
量用いた他は同様にしてリゾチーム吸着樹脂を調製し、
以下は上記試験例１のＢおよびＣのリゾチーム溶出およ
び回収操作に準じてケーキ状態のリゾチーム８．９ｇを
を回収した。
尚、力価分析によればこれはリゾチーム純結晶２．滋に
相当するものであった。なお、前記溶出時の塩溶液のｐ
Ｈは約７．５に維持した。実施例 ２ 上記の試験例１において、リゾチームの溶出に際して塩
溶液として３％の食塩水に代えて３％の塩化カリウム水
溶液を用い、更にＩＮＮａ○伍溶液に代えてＩＮＫＯＨ
溶液を用いた他は同様にリゾチ−ムを熔出させ、以下上
記試験例１のＣの回収操作に準じてケーキ状態のリゾチ
ーム８．７ｇを回収した。
相当するものであった。なお、前記溶出時の塩溶液のｐ
Ｈは約７．５に維持した。実施例 ２ 上記の試験例１において、リゾチームの溶出に際して塩
溶液として３％の食塩水に代えて３％の塩化カリウム水
溶液を用い、更にＩＮＮａ○伍溶液に代えてＩＮＫＯＨ
溶液を用いた他は同様にリゾチ−ムを熔出させ、以下上
記試験例１のＣの回収操作に準じてケーキ状態のリゾチ
ーム８．７ｇを回収した。
このものは力価分析の結果、２．蟹の純結晶物に相当す
るものであった。なお、リゾチーム溶出時の塩溶液のｐ
Ｈは約６．７に維持した。実施例 ３ 上記の試験例のリゾチームの溶出操作において、吸着樹
脂含有塩溶液を４仇．ｐ．ｍ．の速度で燈拝しつつＩＮ
ＮａＯＨ溶液を約０．８叫分の割合で１■ご間添加して
リゾチームを液中に溶出させた他はすべて試験例１に準
じてリゾチームを回収した。
るものであった。なお、リゾチーム溶出時の塩溶液のｐ
Ｈは約６．７に維持した。実施例 ３ 上記の試験例のリゾチームの溶出操作において、吸着樹
脂含有塩溶液を４仇．ｐ．ｍ．の速度で燈拝しつつＩＮ
ＮａＯＨ溶液を約０．８叫分の割合で１■ご間添加して
リゾチームを液中に溶出させた他はすべて試験例１に準
じてリゾチームを回収した。
回収リゾチームはケーキの状態で９．雌であった。この
ものは力価分析の結果３．雌の純結晶物に相当するもの
であった。なお、リゾチーム溶出時の塩溶液のｐＨは約
７．３に維持した。実施例 ４ 上記の試験例１において、Ｎａ−形ダウェックスＣＣＲ
−２樹脂に代えて予めアルカリ処理して１．２ミリ当量
のＫ−形としたダイヤイオンＷＫ−１坤鰭脂を同量用い
た他は同様にしてリゾチーム吸着樹脂を調製し、以下は
上記試験例１のＢおよびＣのリゾチーム綾出および回収
操作に準じてケーキ状態のリゾチーム９．次を回収した
。
ものは力価分析の結果３．雌の純結晶物に相当するもの
であった。なお、リゾチーム溶出時の塩溶液のｐＨは約
７．３に維持した。実施例 ４ 上記の試験例１において、Ｎａ−形ダウェックスＣＣＲ
−２樹脂に代えて予めアルカリ処理して１．２ミリ当量
のＫ−形としたダイヤイオンＷＫ−１坤鰭脂を同量用い
た他は同様にしてリゾチーム吸着樹脂を調製し、以下は
上記試験例１のＢおよびＣのリゾチーム綾出および回収
操作に準じてケーキ状態のリゾチーム９．次を回収した
。
Claims (1)
- １ 卵白リゾチームを吸着せる弱酸性陽イオン交換樹脂
からその卵白リゾチームを溶出させるに際して、卵白リ
ゾチーム吸着弱酸性陽イオン交換樹脂を含む塩溶液にこ
の溶液のｐＨが溶出工程中６．５〜８．０に保たれるよ
うにアルカリ剤を添加することを特徴とする、卵白リゾ
チームの溶出方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57091879A JPS6038112B2 (ja) | 1982-05-29 | 1982-05-29 | 卵白リゾチ−ムの溶出方法 |
| AU90739/82A AU554659B2 (en) | 1982-05-29 | 1982-11-19 | Egg white lysozyme elution |
| US06/443,956 US4518695A (en) | 1982-05-29 | 1982-11-23 | Process for eluting egg white lysozyme |
| ZA828807A ZA828807B (en) | 1982-05-29 | 1982-11-30 | Process for eluting egg white lysozyme |
| NL8204669A NL8204669A (nl) | 1982-05-29 | 1982-12-01 | Werkwijze voor het elueren van lysozyme van het wit van eieren. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57091879A JPS6038112B2 (ja) | 1982-05-29 | 1982-05-29 | 卵白リゾチ−ムの溶出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58209981A JPS58209981A (ja) | 1983-12-07 |
| JPS6038112B2 true JPS6038112B2 (ja) | 1985-08-30 |
Family
ID=14038839
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57091879A Expired JPS6038112B2 (ja) | 1982-05-29 | 1982-05-29 | 卵白リゾチ−ムの溶出方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4518695A (ja) |
| JP (1) | JPS6038112B2 (ja) |
| AU (1) | AU554659B2 (ja) |
| NL (1) | NL8204669A (ja) |
| ZA (1) | ZA828807B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2794201B2 (ja) * | 1989-07-31 | 1998-09-03 | 味の素株式会社 | 固定化リパーゼ酵素剤 |
| EP2334413A4 (en) * | 2008-09-02 | 2013-09-18 | Natrix Separations Inc | CHROMATOGRAPHIC MEMBRANES, DEVICES THEREFOR AND METHOD FOR THEIR USE |
| WO2011058439A1 (en) * | 2009-11-13 | 2011-05-19 | Natrix Separations, Inc. | Hydrophobic interaction chromatography membranes, and methods of use thereof |
| CA2836460C (en) | 2011-05-17 | 2021-09-21 | Natrix Separations Inc. | Methods of using a fluid treatment device |
| CN108220273B (zh) * | 2018-02-12 | 2019-01-29 | 浙江艾格生物科技股份有限公司 | 一种抗菌肽混合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2579455A (en) * | 1947-05-09 | 1951-12-25 | Alderton Gordon | Crystallization of lysozyme from egg white |
| GB1110466A (en) * | 1966-02-28 | 1968-04-18 | Prodotti Antibiotici Spa | Process for the production of lysozyme |
| JPS53107479A (en) * | 1977-02-28 | 1978-09-19 | Green Cross Corp:The | Preparation of human lysozyme |
-
1982
- 1982-05-29 JP JP57091879A patent/JPS6038112B2/ja not_active Expired
- 1982-11-19 AU AU90739/82A patent/AU554659B2/en not_active Ceased
- 1982-11-23 US US06/443,956 patent/US4518695A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-11-30 ZA ZA828807A patent/ZA828807B/xx unknown
- 1982-12-01 NL NL8204669A patent/NL8204669A/nl not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA828807B (en) | 1983-09-28 |
| NL8204669A (nl) | 1983-12-16 |
| JPS58209981A (ja) | 1983-12-07 |
| AU554659B2 (en) | 1986-08-28 |
| AU9073982A (en) | 1983-12-01 |
| US4518695A (en) | 1985-05-21 |
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