JPS6037991A - 抗生物質ｓｓ８２２８ｃ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質８８８２２８　Ｃ及びその製造
法に関する。

本発明者らは天然の土壌より数多くの微生物を単離しそ
の生産物について種々研究を行なっていたところ、群馬
糸探名山の土壌から分離した菌株がダラム陽性菌に対し
優れた抗菌力を有する新規な抗生物質８８８２２８０を
生産する仁とを見出し、本発明を完成した。

本発明の抗生物質５Ｓ８２２８Ｃを産生する８８２２８
株の−ｌ学的性状Ｖｉ次のとおりである。

ｌ　形　態 気菌糸の分枝は単純分枝で車軸分枝は認められない。そ
の先端の形態はかき状、ループ状及びオープンスパイラ
ル状をなしている。

との形態は、チロシン寒天培地及びシュクロース硝酸塩
寒天培地で主に観察される。胞子のう、鞭毛胞子、菌核
はいずれも認められない。また、基土菌糸の分断も通常
は認められない。電子顕微鏡観察によると、通常１０個
以上の胞子が連鎖し、胞子の形はだ円形〜円筒形であり
、その大きさＵｏ、６〜０．８Ｘ０．９〜１．２μｍで
、胞子の表面はとけ状ないしは毛状である。

２　各種培地における生育状態 ８８２２８株の各種培地上での生育状態は次表のとおり
である。観察Ｖｉ２７℃、１４日培養後に行った。なお
、色の記載には日本色灯事業（株）発行の「色名小辞典
」を用い、その系統名で表示した２ 以下余白 ３　生理的性質 （１）生育温度範囲（ベネット寒天培地　１４日培養） 生育可能温度　１０〜３３℃ 生育至適温度　２７〜３０℃ （２）ゼラチンの液化　陽性（弱い） （３）スターチの加水分解　陰性 （４）　脱脂乳の縦向　陰性 脱脂乳のペプトン化　陽性（弱い） （５）　メラニン様色素の生成　陰性 トリプトン・イースト培地とべ１トン・イースト鉄寒天
培地では全くメラニン様色素の生成を認めず、チルシン
寒天培地でわずかに赤みのブラウンヲ認めるが、この色
はメラニン様色素ではないと判断し、メラニン様色素生
成を陰性とした。

（６）　硝酸塩の還元　陽性（弱い） （７）　セルロースの分Ｗ４　陰性 ４　炭素源の利用性（プリトノ・ム・ゴツト１）−プ寒
天培地、２７℃、１４ 日培養） （ただし、＋は利用する、−は利用しない）５　細胞壁
組成 細胞壁成分中のジアミノピメリン酸を分析した結果、Ｌ
Ｌ型であった。

以上の菌学的性状を要約すると、８８２２８株はＩＭＦ
培地の中のチロシン寒天培地とシュクｐ−ス硝酸塩寒天
培地で主にかぎ状、ループ状、オープンスパイラル状の
気菌糸を形成し、輪生子は認められず、胞子のう、鞭毛
胞子、菌核はいずれも認められず、基土菌糸の分断も認
められない、−１θ個以上の胞子が連鎖し、胞子の表面
柱とけ状ないしは、毛状であり、形はだ円形〜円筒形で
ある。気菌糸の色はダレイカラージリーズ、裏面の色ハ
無色〜黄みのブラウン−灰みのブラウンで可溶性色素は
黄みのブラウン−赤みのブラウンがわずかに認められる
。いずれの色もｐＨ指示色ではない。メラニン様色素を
生成せず、蛋白分解力は弱く、スターチの氷解性は陰性
である、生育至適温度Ｆｉ、２７〜３０℃で３６℃以上
では生育しない。炭素源としてＤ−グルコース、Ｄ−フ
ラクトース、イノシトール、Ｌ−ラフィノース、ガラク
トースを利用するが、特にイノシトールの利用能が高い
。イノシトールでの生育はＤ−グルコースのそれよりも
旺盛である。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、シュ
クロース、ラフィノース、Ｄ−マンニット、サリシンは
利用しない。また、細胞壁成分中にＬＬ−ジアミノピメ
リン酸が含まれている。以上の菌学的性状より８８２２
８株はストレプトミセス属に属する一菌檀であると判断
シ、ストレプトミセス・ｓｐ　、８８２２８（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙａ＠ｓ　ｓｐ　８８２２８　）と命名し、工
業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第７１８０
号（ＦＥＲＭ　Ｐ　−７１８０）として寄託した。

本発明の抗生物質８８８２２８Ｃの製造は、上記菌株を
栄養源含有培地に接種し、好気的に培養することよりお
こなわれる。抗生物質５Ｓ８２２８ｃ生産株としては上
記菌株はもとより、その人工並びに自然変異株も同様に
使用出来る。

培養に用いられる培地としては、当該菌が利用する栄養
源を含有する培地であれは合成培地、半合成培地、ある
いは天然培地のいずれであってもよい。栄養源のうち、
炭素源としては、例えばグルコース、イノシトール、グ
リセリン、テンプン、糖蜜等が用いられる０さらに菌の
資化性によっては炭化水素、アルコール類、有機酸等も
用い得る。窒素源として社、例えば塩化アンモニウム、
硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ナト
リウム、グルタミン酸ナトリウムなどの無機もしくは有
機窒素化合物及び例えは大豆抽出物、大豆粉、酵母エキ
ス、乾燥酵母、綿実粕、魚粉、オートミール、カサミノ
酸、ペプトン、ソイトン等の天然物が単独または組合せ
て用いられる。その他８８２２８株の発育を助け８８８
２２８Ｃの生産を促進する物質及び培養中発泡の著しい
時にはシリコン油又はアテカノ−ル（商品名）等の一般
的消陶剤等を適宜培地に添加することもできる。

培養法としては一般の抗生物質の生産に用いられる方法
が用いられるが、通常は、液体培地による振盪培養ある
いは深部培養が好ましい。培養は好気的条件下で行なわ
れ、培養に適当な温度は２５〜３０℃であるが、一般に
２７℃付近で培養するのが好ましい。抗生物質５Ｓ８２
２８Ｃは振盪培養、深部培養のいずれの場合もその生産
量は３〜７日間の培養で最高に達する。抗生物質５ｓ８
２２８ＣＶｉ通通常鉢体び培養液中に存在するので、そ
の分離、精製処理は培養物を濾過または遠心分離などに
よって菌体と培養Ｆ液に分けた後、菌体及び培養Ｆ液か
ら通常の分離法、例えは、溶媒抽出法、沈澱法、イオン
交換樹脂法、ゲル濾過法、吸着または分配カラムクロマ
ト法、透析法等の方法を適宜組合せておこなうのが良い
。好ましい分離・精製法の例としては、次の方法が挙け
られる。すなわち、まず培養物を遠心分離に付し、菌体
及び培養Ｆ液を得る。

培養Ｆ液は有機溶媒、例えば酢酸エチルを用いて抽出す
る。菌体はメタノール、アセトンなどの親水性溶媒で抽
出し、この抽出液を減圧濃縮し、蒸留水を加えて溶解さ
せ濃厚水溶液とし、これを培養ｒ液と同様に酢酸エチル
などを用いて抽出し、培養ｐ液の酢酸エチル抽出液と合
せる。こうして得られた抽出液を無水硫酸す）　ＩＪウ
ムで脱水した後減圧濃縮し、＊褐色油状物質を得る、こ
れをシリカゲルカラムクロマトグラフィー、セファデッ
クスＬＨ−２０カラムクロマトグラフイ等により分画・
精製し、活性画分を集め減圧濃縮後、適当な溶媒例えは
インプロヒルエーテルで再結晶すると５Ｓ８２２８Ｃの
無色柱状結晶が得られる。

以上のようにして得られた５Ｓ８２２８Ｃは次のような
理化学的性質及び生物学的性質を有する。

（１）　理化学的性質 ■外観 無色柱状晶（インプロヒルエーテルよす再結晶） ■融点 ２２２〜２２４℃（分解） ■　酸性、中性、塩基性の区別 中性 ■　溶解性 ベンゼン、ジエチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチ
ル、アセトン、エタノール、メタノールに可溶、水、ｎ
−ヘキサンに難溶。

■　元素分析（０４０Ｈ５８ＮＢＯ７として）ＣＨＮ 理論値％　６２．９７　７．６６　１４．６９実験値細
　６２．７８　７．６８　１４．６９■　薄層クロマト
グラフィー 担体ニジリカケルプレートＦ２５４　（メルク社製）■
　アミノ酸分析 ６Ｎ塩酸、１０５℃、２０時間の条件で加水分解した結
果フェニルアラニンとプロリンが１：１の割合で検出さ
れｆｒ、ｅ ■　旋光度 ・〔α）２Ｇ＝　２７℃（Ｃ＝０．５．メタノール）■
　紫外線吸収スペクトル 末端吸収 ［相］　赤外線吸収スペクトル（ｘｎｒ法）第１図 ■　Ｉ　Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ｔｕｚ；重クロロ
ホルム溶液中ＴＭ３　ｆ：基準物質とじ画定）第２図 （＄　１３ｃ　−ＮＭＲスペクトル（１クロロホルム溶
液中ＴＭ８を基準物質として測定） δ（ｐｐｍ）：　１７３．５，１７３．１，１７１．６
，１７１．０゜１７０．７，１７０．３，１３６．９，
１３２．２゜１３０．４，１２９．３，１２９．３，１
２８．３゜１２８．３，１２６．５．６１．７，５９．
７゜５３．３．４９．７，４８．９，４７．１，４６．
７゜４６．４，４６．３，３７．５，３７．３．３７．
２゜３４．２，３１．７，３１．０，２８．９．２７．
１　。

２５．９．２５．１　、２４．９　、２４．９　、２４
．６　。

２２．９　、２２．５　、２０．８　、２０．３［相］
　分子式 ％式％ 抗生物質５Ｓ８２２８Ｃの各種微生物に対する最小発育
阻止濃度（ＭＩＣ）を第１表に示す。

試験菌培養条件：イノキュラムサイズ１０６個／−バク
テリアの場合はミューラー・ヒントン・アガー（ディフ
コ）で３７℃にて１８〜２０時間培養、酵母の場合はザ
ブロー寒天培地で２８℃にて７２時間培養、カビの場合
はサブロー寒天培地で２８℃にて１２０時間培養。

次に実施例を挙けて説明する。

実施例 グルコース１．０％、グリセロール１，０％、オートミ
ール１．０％、脱脂大豆粉２．０％、乾燥酵母１．０％
、カザミノ酸０．５％、炭酸カルシウム０．３２％の組
成を有する液体培地をｐＨ７，０とし、５００ｄ容坂ロ
フラスコに１００−分注して滅菌する。これにストレプ
トミセス・エスピー・５８２２８株（微工研菌寄第７１
８０号）を接種し、２７℃で６日間振盪培養して種培養
液を作成する。溶性テンプン２．０％、グリセロール１
．０％、カザミノ酸０．５％、炭酸カルシウム０．１％
（ｐＨ７，０）の組成を肩する液体培地１６ｔを３０１
容のジャーファーメンタ−に仕込み、これに前記の種培
養液２００−を接種し、培養温度２７℃攪拌数２５Ｏｒ
ｐｍ、通気量１６ｔ／分の条件下で７２時間培養を行な
う。培養終了後培養液を遠心分離し菌体及び培養Ｐ液を
得る。培養Ｆ液を酢酸エチル１６ｔ＠用いて２回抽出し
、酢酸エチル抽出液を得る。一方餉体にはメタノール１
，５ｔ’に加えて抽出した後遠心分離し、抽出液を得る
。この操作を２回行なう。

メタノール抽出液を減圧濃縮し、これに蒸留水を加え溶
解し濃厚水溶液２００−を得る。

この濃厚水溶液２００−をｐＨ８とし、酢酸エチル２０
０１ｎｌｔ用いて２回抽出し、酢酸エチル抽出液金得ゐ
。これを培養ｐ液からの酢酸エチル抽出液と合せ減圧濃
縮し酢酸エチル抽出液約３００ｍ１とする。これ’！ｋ
ｏ、ＩＮ塩酸溶液で洗った後、酢酸エチル抽出液を無水
硫酸ナトリウムで脱水し減圧濃縮すると黄褐色油状物質
約５２が得られる。この油状物質をクロロホルム：メタ
ノール＝１００：１混液に溶解し、同じクロロホルム：
メタノール混液で調製したキーゼルゲル６０（メルク社
製）３　ｃｍ　Ｘ　４０　ｃｒｎのカラムに伺し、同じ
クロロホルム：メタノール混液で展開ＬＳＳ８２２８Ｃ
溶出画分を集め減圧濃縮した。濃縮物を酢酸エチルに溶
解し、水飽和酢酸エチルで調製したキーゼルゲル６０（
メルク社製）　２　ｃｍ　Ｘ３０ｃｒｎのカラムに伺し
、水飽和酢酸エチル次いで水飽和酢酸エチル：エタノー
ル＝１００：５で展開し、５Ｓ８２２８Ｃ溶出画分を集
め減圧濃縮した。次いでこの５Ｓ８２２８Ｃ粗精製物を
りｔｌＩｌホロム：メタノール＝１：ｌ混液に溶解し、
同じクロロホルム：メタノールｈａテ調製したセファデ
ックスＬＨ−２０２ｃｍ×２０ａｎのカラムに付し、同
じクロロホルム：メタノール混液で展開し５ｓ８２２８
Ｃ溶出画分を集め減圧濃縮した。これをイソプロピルエ
ーテルにより再結晶し５８８２２８Ｃの無色柱状結晶１
５０ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はＳ　８８２２８Ｃ（Ｄ　ＫＢｒ　錠剤法テ測定
した赤外線吸収スペクトル、第２図は ８Ｓ８２２８ｃの重りロ四ポルム中で測定した”Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを示す図面である。 以上 出願人　ニスニス製薬株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　下記の理化学的性質を有する抗生物質５Ｓ８２
   ２８Ｃ０ ■外観 無色柱状晶（イソプルピルエーテルよす再結晶） ■融点 ２２２〜２２４℃（分解） ■　酸性、中性、塩基性の区別 中性 ■　溶解性 ベンセン、ジエチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチ
   ル、アセトン、エタノール、メタノールに可溶。水、ｎ
   −ヘキサンに難溶。 ■　元素分析（０４゜Ｈ５１１ＮｌｌＯ）として）ＣＨ
   Ｎ 理論値（至）　６２，９７　７．６６　１４．６９実験
   値％　６２−７８　７．６８　１４．６９■　薄層クロ
   マトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦ２５４（メルク社製）■　
   アミノ酸分析 ６Ｎ−塩酸、１０５℃、２０時間の争件で加水分解した
   結果、フェニルアラニンとプロリンが１＝１の割合で検
   出された。 ■　旋光度 〔α児０＝−２１（Ｃ＝０．５．メタノール）■　紫外
   線吸収スペクトル 末端吸収 ［相］　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第１図 （Ｏ’ｎ−ＮＭｎスペクトル（９０ＭＨｚ　；　Ｎクロ
   ロホルム溶液中ＴＭＳ　ｉ基準物質として測定）第２図 （９１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中
   ＴＭＳ　’ｉ基準物質として測定） δ（ｐｐｍ）：１７３．５，１７３．１，１７１．６，
   １７１．０゜１７０．７，１７０．３，１３６．９．１
   ．３２．２゜１３０．４，１２９．３，１２９．３，１
   ２８．３゜１２８．３，１２６．５．６１．７，５９．
   ７．５３．３．４９．７゜４８．９，４７．１　．４６
   ．７，４６．４．４６．３．３７．５゜３７．３．３７
   ．２．３４．２，３１．７，３１．０，２８．９゜２７
   ．１　．２５．９．２５．１　．２４．９，２４．９．
   ２４．６゜２２．９　、２２．５　、２０．８　、２０
   ．３＠　分子式 ％式％ （２）　ヌトレプトミセス鵜に属する抗生物質５ｓ８２
   ２８Ｃ生産菌を培養し、その培養物から次の理化学的性
   質を壱する新規抗生物質５Ｓ８２２８Ｃを分離、採取す
   ることを特徴とする抗生物質８８８２２８Ｃの製造法。 ■外観 無色柱状晶（イングロビルエーテルよす再結晶） ■融点 ２２２〜２２４℃（分解） ■　酸性、中性、塩基性の区別 中性 ■　溶解性 ベンゼン、ジエチルエーテル、クロロポルム、酢酸エチ
   ル、アセトン、エタノール、メタノールに可溶。水、ｎ
   −ヘキサンに難溶。 ■　元素分析（０４０Ｈ５８Ｎ８０７として）Ｃ’ＨＮ 理論値％　６２．９７　７．６６　１４．６９実験値％
   　６２．７８　７．６８　１４．６９■　薄層クロマト
   グラフィー　（ 担体ニジリカゲルプレートＦ２５ａ　（メルク社製）■
   　アミノ酸分析 ６Ｎ−塩酸、１０５℃、２０時間の栄件で加水分解した
   結果、フェニルアラニンドブロリンが１＝１の割合で検
   出された。 ■　旋光度 〔α〕２０＝−２１（Ｃ＝０．５　、　メｐ）−ル）ρ
   ）紫外線吸収スペクトル 末端吸収 ゆ　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第１図 Ｑ　ＩＨ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨ１；重クロロポ
   ルム溶液中ＴＭＳ　’ｉ基準物質として測定）第２図 ９　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中
   ＴＭＳを基準物質として測定） δ（ｐｐｍ）：１７３．５，１７３．１，１７１．６，
   １７１．０゜１７０．７，１７０．３，１３６．９，１
   ３２．２゜１３０．４，１２９．３，１２９．３，１２
   ８．３゜１２８．３，１２６．５，６１．７，５９．７
   ゜５３．３，４９．７，４８．９，４７．１，４６．７
   ゜４６．４．４６．３，３７．５，３７．３，３７．２
   ゜３４．２　、３１．７　、３１．０　、２８．９　、
   ２７．１　。 ２５．９，２５．１．２４．９，２４．９．２４．６゜
   ２２．９　、２２．５　、２０．８　、２０．３０　分
   子式 ％式％ （３）　Ｓ　Ｓ　８２２８　Ｇ物質生産菌がストレプト
   ミセス・エスピー８８２２８である特許請求の範囲第２
   項記載の製造法。