JPS5814439B2 - 新規化合物フレノリシンｂおよびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、特に抗生物質として有用な新規化合物フレノ
リシンＢおよびその製造法に関するものである。

本発明の式 で示されるフレノリシンＢは、次に示すような埋化学的
性質を有する新規な化合物である。

（１） 元素分析 炭素、水素、酸素から成り、窒素、イオウ、ハロゲンを
含まない。

本化合物の元素分析値は下に示すとおりである。

Ｃ：６５．９６％ Ｈ：４．８７％ ０：２９．１７％ （２）分子量 本化合物の質量分析から得られる分子量 （Ｍ＋、ｍ／ ｅ ）は３２８．０９４である。

（３）分子式 元素分析値および質量分析値より、本化合物に対し分子
式Ｃ１８Ｈｌ６０６が与えられる。

（４）融点 １５７〜１５９℃ １６３゜Ｃで完全に融解（５）紫外
線吸収スペクトル 第１図に示すとおりである。

すなわち、メタノール溶液中では吸収極大が２６０ｎｍ （Ｅ１％２７３）、２７０ｎｍ（２７５）、４２５ｎｍ
（１５０）にあり、アルカリ性メタノール溶液中では吸
収極大が２７３ｎｍ、５３４１ｍに変化し、この変化は
液性を中和することによりもとにもどる。

酸性メタノール溶液中では吸収はあまり変化しない。

（６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図に示す
とおりで、ポリマーの水酸基の分子間水素結合（３４０
０ｃｍ ’） 、メチル基およびメチレン基（２９４
０ｃｍ−１）、五員環ラクトンのカルボニル基（１７７
０ｃｍ’）、１・４−キノンのカルボニル基および二重
結合（１６５０、１６３５ｃｍ’）に由来する吸収の存
在が示されている。

（力 物質の色、結晶形 橙色柱状晶を有する。

本化合物フレノリシンＢの生物学的性質について述べる
と次のとおりである。

（１）抗菌性 本化合物の寒天希釈法による抗カビ抗酵母スペクトル（
最小発育阻止濃度を示す）は、表１に示すとおりである
。

表２にはデオキシフレノリシンの抗カビ抗酵母スペクト
ルを示した。

明らかにフレノリシンＢの方が優れている。

また寒天希釈法および培養液希釈法によるマイコプラズ
マに対する抗菌スペクトル（最小発育阻止濃度を示す）
は表３に示すとおりである。

表１ 化合物フレノリシンＢの杭カビ抗 酵母スペクトル （最小発育阻止濃度 ｍｃｇ／ｍｌ） カンジダ・アルビカンス ０．７８サツカ
ロミセス・セレプジエ ０，７８ミクロスボーラ
・ジプシウム 〈０．１ペニシリウム・クリンゲ
ナム ６．２５トリコフイートン・インタージ
〈ｏ．１ギテール トリコフイートン・メンタグロ １２．５フイーテ
ス ピリクラリア・オリーゼ 〈０．１アスペルギ
ルス・フミガタス ６．２５アスペルギルス・
ニガー 〉１００表２ 抗生物質デオキシフレノリシンの 抗カビ抗酵母スペクトル （最小発育阻止濃度 ｍｃｇ／ｍｌ） カンジダ・アルビカンス ２５サツカロミセ
ス・セレブジエ ２５ミクロスポーラ・ジプシウ
ム １２．５ペニシリウム・クリンゲナム
５０トリコフイートン・インタージ １２．５ギ
テール トリコフイートン・メンタグロ ２５フイーテス ピリクラリア・オリーゼ ０．７８アスペル
ギルス・フミガタス ２５アスペルギルス・ニガ
ー 〉１００表３ 化合物フレノリシンＢの抗マイコ グラズマスペクトル （最小発育阻止濃度 ｍｃｇ／ｍｌ） 寒天希釈培養液希 法 釈法 〜イコプラズマ・ギャリ ３．１３２５セプテイカム
Ｋｐ−１３ マイコプラズマ・ギャリ ３、１３１２．５セプテイ
カムＳ−６ マイコプラズマ・ギャリ ３．１３ １２．５セプ
テイカム３３３Ｐ 寒天希釈 培養液希 法 釈法 マイコプラズマ・ニユー ３．１３ １２．
５モニア アコレプラズマ・レイデ ６．２５ ２５ルウイ
ー囚ＰＧ８ アコレプラズマ・レイデ ５０ １００ルウイー
（Ｂ） Ｂ ｎ １ 表１および表３より明らかなように、本化合物は真菌に
よっておこる感染症およびマイコプラズマによっておこ
る感染症の予防、治療に有効と思われる。

上記化合物フレノリシンＢは、赤外線吸収スペクトルに
おいて、カラファンジン（ Ｊ．Ａ．２１、４５４、１
９６８）と同様に１７７０ｃｍ−１付近に五員環ラクト
ンのカルボニル基に由来する強い吸収を有している。

また１７７０ｃＩｒＬ−１に相当する吸収がなく、かわ
りに１７１５ｃｍ’ にカルボン酸に由来する強い吸収
を有するデオキシフレノリシン（米国特許第３４５２０
５１、１９６９）のチャートにも類似し、かつ分子式は
デオキシフレノリシンよりも水素が２個少ない。

以上述べたことから、本化合物フレノリシンＢはデオキ
シフレノリシンにラクトン環が生成した新規な化合物と
判定される。

本発明の化合物フレノリシンＢを生産するために使用さ
れる菌株としては、一例として本発明者らによって長野
県茅野市の山林の土壌から新たに分離されたストレプト
ミセス・エスビー・ＡＭ−３８６７株が挙げられる。

て 本菌株の菌学的性状を示すと次のとおりである。

（Ｉ） 形態学的性質 栄養菌糸は合成培地および天然寒天培地と又もによく発
達し、不規則に分岐するが、通常は隔壁を有しない。

気菌糸はグルコース・アスパラギン寒天培地、スターチ
無機塩寒天培地、オートミル寒天培地等で豊富に、また
栄養寒天培地、グルコース・ペプトン寒天培地、グリセ
ロール・リンゴ酸カルシウム寒天培地等で中程度に着生
し、ほとんどがビロード状を呈する。

グルコース・硝酸塩寒天培地、イースト・麦芽寒天培地
等では貧弱にしか着生しない。

その色調は褐白色ないし淡橙色を呈する。

顕微鏡下での観察では、気菌糸の主軸は不規則に分岐す
る。

胞子柄は直線状を呈し、１０個以上の胞子の連鎖が認め
られる。

胞子の大きさは０．５〜０．６μ×０．７〜１．０μで
、ほゞ楕円形である。

胞子の表面は平滑である。菌核、胞子嚢および遊走子は
見出されない。

（６）各種培地上での性状（表４） イー・ビー・シャーリングら（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ
． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ ， １ ６巻、３１３頁、
１９６６年）の方法にしたがい、それに公知の培地およ
び実験方法を併せて使用した。

色調は標準色表として、カラー・ハーモニー・マニュア
ル四版（コンテナー・コーポレーション・オブ・アメリ
カ・シカゴ，１９５８年）を用いて決定し、色票名とゝ
もに括弧内に、そのコードを併せて記した。

以下は特記しない限り、２７℃、２週間目の各培地上に
おける観察である。

（ホ）生埋的諸性質 （１） メラニン色素の形成 （イ）チロシン寒天 陰性 （口）ペプトン・イースト鉄寒天 陰性 ｅ−９ グルコース・ペプトン・ゼラチン培地・穿刺
（２１〜２３℃） 陰性 （ニ） トリプトン・イースト液 陰性 （２）チロシナーゼ反応 陰性 （３）硝酸塩の還元 陰性 （４）ゼラチンの液化 疑陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（５） ス
ターチの加水分解 陽性 （６）脱脂乳の凝固（３７℃） 陰性 （７）脱脂乳のペプトン化（３７℃） 陽性（８）セル
ロースの分解 陰性 （９）生育温度範囲 ２０〜３５℃ （１０） 炭素源の利用性 （プリドハム・ゴドリーブ寒天培地） よく利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ
−キシロース、Ｌ−ラムノースや瓦利用する：Ｌ−アラ
ビノース、シュークロース、ラフイノース 利用しない：１−イノシトール、Ｄ−マンニット ■ 細胞壁組成 ディアミノピメリン酸はＬＬ一型であり、グリシンを有
するが、アラビノース、ガラクトースは認められない。

以上、本菌の菌学的性状を要約すると次のとおりになる
。

細胞壁組成はＬＬ−ディアミノピメリン酸グリシンを有
する。

また形態的には、直線状の胞子柄を形成し、胞子の表面
は平滑である。

培養上の諸性質としては、栄養菌糸は有色ないし黄褐色
で、ｐＨの変化によって変化せず、気菌糸の色調は褐白
色ないし淡橙色を呈する。

可溶性色素としては、一部の培地で淡橙色ないし黄褐色
の色素を生産し、メラニン色素は生産しない。

これらの結果から、本菌株はストレプトミセス属に属す
る菌種であり、しかも、プリドハムとトレスナーの分類
（バージーズ・マニュアル・オブ・デターミネーテイブ
・バクテリオロジー第８版、１９７４年、７４８〜８２
９頁）によるレッド・シリーズに属する菌種と考えられ
る。

なお、本菌株はストレプトミセス・エスピー・ＡＭ −
３ ８ ６ ７ （ Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｓｐ ， ＡＭ −３ ８ ６ ７）として、工業技術
院微生物工業技術研究所に寄託されている（微工研菌寄
第４３５９号）。

本発明における使用菌としては、上記したストレプトミ
セス・エスビー・ＡＭ−３８６７および本菌株を変異処
理した変異株だけでなく、ストレプトミセス属に属し、
化合物フレノリシンＢを生産する菌であればすべて用い
ることができる。

本発明において培地に使用される炭素源、窒素源は、使
用菌株の利用可能なものならいずれの種類でもよい。

すなわち、炭素源としては、たとえばグルコース、マル
トース、ガラクトース、澱粉、デキストリン、グリセリ
ン、タラ肝油などが使用される。

窒素源としては、大豆粉、ペプトン、酵母エキス、酵母
などが使用される。

その他、リン酸塩、マグネシウム、カリウム、カルシウ
ム、ナトリウム、鉄、マンガンなどの塩類が必要に応じ
て使用される。

発酵は振盪培養または通気攪拌深部培養の好気的条件で
行なわれる。

培養温度は典通２０〜３５℃である。

培養期間は通常１００〜１５０時間程度であって、フレ
ノリシンＢが最高力価に達する時間を見計って、 てきとうｔｏｕ養を終了する。

この培養物中には、フレノリシンＢと少量のデオキシフ
レノリシンが生成蓄積されるが、両者はベンゼンを展開
溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフイーで容易
に分けることができる。

なお、前記微生物を培養してデオキシフレノリシンを生
成蓄積させ、これを採取する方法については、別に特許
出願した。

培養終了後は培養物よりフレノリシンＢを採取する。

たとえば、培養物を菌体と濾液に分別し、濾液から酢酸
エチル、酢酸ブチル，ベンゼンなどの水と分離し、フレ
ノリシンＢを溶解せしめる有機溶媒で抽出した後、脂溶
性物質の精製において通常用いられる公知の方法により
フレノリシンＢを回収する。

たとえば、抽出液を濃縮した後、シリカゲルカラムクロ
マトグラフイーによりフレノリシンＢを単離する。

次に本発明の実施例を示すが、これは単なる一例を示す
ものであって、本発明を限定するものではない。

実施例 グルコース１％、でんぷん２％、酵母エキス０．５％、
ペプトン０．５％、炭酸カルシウム０．４％を含有する
培地１ ０ ０ｍｌ（ ｐＨ７．０ ）を５００ｍｌ容
坂口フラスコに分注し、１２０℃１５分間滅菌した。

これにストレグトミセス・エスビー・ＡＭ−３ ８ ６
７株（微工研菌寄第４３５９号）を接種し、２７℃で
４８時間、毎分１１０回転で往復振盪培養を行なった。

この培養物２００ｍｌをタラ肝油（理研ビタミン社製、
リタックＲ−１０）３％、ペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．３％、リン酸１カリウム０．１％、リン酸２カリ
ウム０．１％、硫酸マグネシウム・７水塩０．１％から
成る培地２０ｌ（ｐＨ７．０）を含む３０Ｊ容ジャーフ
ァーメンターに移植し、２７℃、毎分２５０回転で、毎
分８ｌの無菌空気を送り、６８時間通気攪拌培養を行な
った後、培養物を遠心分離機にかげ、フレノリシンＢを
含有する培養濾液１７ｌを得た。

この培養濾液を３Ｎ塩酸水でｐＨ２とし、酢酸ブチル５
ｌを加えて抽出し、次いで酢酸ブチル層に１％炭酸水素
ナトリウム溶液２ｌを加え転溶した。

さらに、この１％炭酸水素ナトリウム溶液に３Ｎ塩酸水
を加えてｐＨ ２とし、酢酸エチル３ｌで抽出した。

この酢酸エチル層を減圧濃縮し、赤褐色油状物とした後
、シリカゲルカラム（メルク社キーゼルゲル６０．４０
０ｇ）にのせ、クロロホルム：酢酸エチル（５０：１）
で展開した。

黄色に着色した溶出液の一部をとり、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフイー（メルク社、キーゼルゲルＧＦ２ ５
４ 、（１ ３ｍｍ．展開溶媒ベンゼン：アセトン＝１
０：１）を行ない、黄色でＲｆ値０．４２を示す物質を
含む分画を集め、減圧濃縮乾固し、赤褐色粉末を得た。

この粉末を再びシリカゲルカラム（メルク社、キーゼル
ゲル６０．５０ｇ）にのせ、ベンゼンで展開した。

黄色に着色した溶出液の一部をとり、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフイー（メルク社、キーゼルゲルＧＦ２５４
、Ｏ−３ｍｍ、展開溶媒ベンゼン：アセトン−１０：
１）を行ない、黄色でＲｆ値０．５５を示す物質を含む
分画を集め、減圧濃縮乾固し、黄褐色粉末を得た。

この粉末をシクロヘキサン、酢酸エチル混合溶液から再
結晶して、フレノリシンＢの橙色柱状晶２００ｍｇを得
た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明化合物フレノリシンＢの紫外線吸収スペ
クトル、第２図は同赤外線吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １式 で示される新規化合物フレノリシンＢ。 ２ ストレプトミセス属に属し、式 で示される新規化合物フレノリシンＢを生産する能力を
   有する微生物を培地に好気的に培養して該化合物を生成
   蓄積させ、これを採取することを特徴とする新規化合物
   フレノリシンＢの製造法。