JPS6016233B2 - グリセロ−ルキナ−ゼの製造法 - Google Patents
グリセロ−ルキナ−ゼの製造法Info
- Publication number
- JPS6016233B2 JPS6016233B2 JP2455780A JP2455780A JPS6016233B2 JP S6016233 B2 JPS6016233 B2 JP S6016233B2 JP 2455780 A JP2455780 A JP 2455780A JP 2455780 A JP2455780 A JP 2455780A JP S6016233 B2 JPS6016233 B2 JP S6016233B2
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- JP
- Japan
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- glycerol
- enzyme
- producing
- activity
- culture
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、グリセロールキナーゼを効率良く製造する方
法に関する。
法に関する。
従来、グリセロールキナーゼ〔ＥＣ３．７．１．３０〕
（以下ＧＫと略する）はプロピオニバクテリウム属、ア
セトバクタ−属、アヱロバクター属、キャンジダ属に属
する微生物から生産されるものが知られている。
（以下ＧＫと略する）はプロピオニバクテリウム属、ア
セトバクタ−属、アヱロバクター属、キャンジダ属に属
する微生物から生産されるものが知られている。
ＧＫはリボプロテイン・リパーゼ及びグリセロール−３
−リン酸脱水素酵素あるいはグリセロールー３ーリン酸
オキシダーゼと組み合せることにより、血清中のトリグ
リセラィドの定量に利用出来ることが知られており、安
定性の優れたＧＫを安価に工業的に製造する方法を提供
することが強く望まれている。
−リン酸脱水素酵素あるいはグリセロールー３ーリン酸
オキシダーゼと組み合せることにより、血清中のトリグ
リセラィドの定量に利用出来ることが知られており、安
定性の優れたＧＫを安価に工業的に製造する方法を提供
することが強く望まれている。
本発明者等はかかる要望に応えるべく工業的に安価にＧ
Ｋを製造する方法について鋭意研究を重ねた結果、セル
ロモナス属およびコリネバクテリウム属に属する微生物
を培養したときに、菌体中に安定性の優れたＧＫが著量
に生産されることを見出し、本発明を完成するに到った
。
Ｋを製造する方法について鋭意研究を重ねた結果、セル
ロモナス属およびコリネバクテリウム属に属する微生物
を培養したときに、菌体中に安定性の優れたＧＫが著量
に生産されることを見出し、本発明を完成するに到った
。
すなわち本発明はセルロモナス属またはコリネバクテリ
ウム属に属し、グリセロールキナーゼ生産能を有する微
生物を栄養培地に培養し、該培養物からグリセロールキ
ナーゼを採取することを特徴とするグリセロールキナー
ゼの製造法である。本発明において使用可能な菌株は、
例えばセルロモナス・フ ラ ビゲナ（Ｃｅｌｌｕｌｏ
ｍｏｎａｓｏａｖｉｇｅ船）ＩＦＯ １２６８０、コリ
ネバクテリウム・ゼロシス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ×ｅｒｏｓｉｓ）ＩＦ○ １２６８４などが拳げ
られるが、これらの菌の他、セルロモナス属、コリネバ
クテリウム属の細菌に属し、ＧＫを生産する菌は、すべ
て本発明方法において使用することが出来る。
ウム属に属し、グリセロールキナーゼ生産能を有する微
生物を栄養培地に培養し、該培養物からグリセロールキ
ナーゼを採取することを特徴とするグリセロールキナー
ゼの製造法である。本発明において使用可能な菌株は、
例えばセルロモナス・フ ラ ビゲナ（Ｃｅｌｌｕｌｏ
ｍｏｎａｓｏａｖｉｇｅ船）ＩＦＯ １２６８０、コリ
ネバクテリウム・ゼロシス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ×ｅｒｏｓｉｓ）ＩＦ○ １２６８４などが拳げ
られるが、これらの菌の他、セルロモナス属、コリネバ
クテリウム属の細菌に属し、ＧＫを生産する菌は、すべ
て本発明方法において使用することが出来る。
本発明では、セルロモナス属、コリネバクテリウム属に
属しＧＫ生産能を有する細菌類を、栄養塔地で培養する
ことにより、ＯＫが菌体中に生産蓄積される。
属しＧＫ生産能を有する細菌類を、栄養塔地で培養する
ことにより、ＯＫが菌体中に生産蓄積される。
得られたＧＫは常法に従い抽出・精製することによって
酵素際品を得ることが出来る。更に具体的に説明すると
、前記各属のＧＫ生産館を有する細菌を栄養培地、例え
ば適当な糖質、窒素源、無機塩類を含む培地又はＧＫ生
産能を高めるためにグリセロールおよび有機促進物質を
含む栄養塔地で培養し、ＧＫを菌体中に蓄積せしめるの
である。ここで糖質にはグルコース、シュクロースなど
の単糖類、二糖類あるし、は廃糖蜜、デンプン加水分解
物などの糖類が使用出来る。窒素源としては、酵母エキ
ス、ベプトン、肉エキス、コーンスチープリカー、カゼ
イン加水分解物、脱脂大豆、アンモニウム塩などが使用
される。無機塩類としては、ナトリウム、カリウム、マ
ンガン、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、鉄などの金
属塩類や硫酸、リン酸、塩酸、硝酸などの塩類が使用で
きる。有機促進物質としては酵母エキスやべプトン、肉
エキス、コーンスチープリカーなどが良い。更に本発明
においては酵素の譲導物質としてグリセロールおよびグ
リセロールを含有する物質を上記栄養培地に添加すれば
より大量のＧＫを生成せしめることが出釆る。これらの
添加物の添加は培養当初からでも培養途中に行ってもよ
い。添加量としてはグリセロールとして１０〜５０夕／
その割合で添加すれば良い結果が得られる。培養温度は
通常２８〜３５ｑ０の範囲が好ましく、培養時のｐＨは
６．０〜８．５が適当である。
酵素際品を得ることが出来る。更に具体的に説明すると
、前記各属のＧＫ生産館を有する細菌を栄養培地、例え
ば適当な糖質、窒素源、無機塩類を含む培地又はＧＫ生
産能を高めるためにグリセロールおよび有機促進物質を
含む栄養塔地で培養し、ＧＫを菌体中に蓄積せしめるの
である。ここで糖質にはグルコース、シュクロースなど
の単糖類、二糖類あるし、は廃糖蜜、デンプン加水分解
物などの糖類が使用出来る。窒素源としては、酵母エキ
ス、ベプトン、肉エキス、コーンスチープリカー、カゼ
イン加水分解物、脱脂大豆、アンモニウム塩などが使用
される。無機塩類としては、ナトリウム、カリウム、マ
ンガン、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、鉄などの金
属塩類や硫酸、リン酸、塩酸、硝酸などの塩類が使用で
きる。有機促進物質としては酵母エキスやべプトン、肉
エキス、コーンスチープリカーなどが良い。更に本発明
においては酵素の譲導物質としてグリセロールおよびグ
リセロールを含有する物質を上記栄養培地に添加すれば
より大量のＧＫを生成せしめることが出釆る。これらの
添加物の添加は培養当初からでも培養途中に行ってもよ
い。添加量としてはグリセロールとして１０〜５０夕／
その割合で添加すれば良い結果が得られる。培養温度は
通常２８〜３５ｑ０の範囲が好ましく、培養時のｐＨは
６．０〜８．５が適当である。
かくして１５〜３加持間培養すれば菌体中にＧＫが著量
に生成する。かくして得られたＧＫを含む菌体を猿過ま
たは遠０分離によって分別し、適当な緩衝液に懸濁後、
磨砕、超音波処理、機械的圧縮または自己消化などの常
法に従い破砕して酵素を抽出する。その抽出液から不溶
物を櫨過または遠心分離によって分別した後、猿液また
は上清から硫酸アンモニウム、Ｅ硝などによる塩折ある
いはアセトン、アルコール等を用いる溶媒沈澱などの常
法に従い酵素標品を得る。さらに高度に精製された酵素
標品を得るには、イオン交換を応用した吸着溶出法およ
びゲル櫨過法などを用いればよい。ＧＫの酵素活性はグ
リセロールとＡＴＰを基質として反応して場合、生成す
るグリセロールー３ーリン酸をＮＡＤとグリセロールー
３ーリン酸脱水素酵素の共存下、ＮＡＤＨの生成量とし
て３４仇ｍの吸光度の増加を分光光度計で測定すること
によって算出する。
に生成する。かくして得られたＧＫを含む菌体を猿過ま
たは遠０分離によって分別し、適当な緩衝液に懸濁後、
磨砕、超音波処理、機械的圧縮または自己消化などの常
法に従い破砕して酵素を抽出する。その抽出液から不溶
物を櫨過または遠心分離によって分別した後、猿液また
は上清から硫酸アンモニウム、Ｅ硝などによる塩折ある
いはアセトン、アルコール等を用いる溶媒沈澱などの常
法に従い酵素標品を得る。さらに高度に精製された酵素
標品を得るには、イオン交換を応用した吸着溶出法およ
びゲル櫨過法などを用いればよい。ＧＫの酵素活性はグ
リセロールとＡＴＰを基質として反応して場合、生成す
るグリセロールー３ーリン酸をＮＡＤとグリセロールー
３ーリン酸脱水素酵素の共存下、ＮＡＤＨの生成量とし
て３４仇ｍの吸光度の増加を分光光度計で測定すること
によって算出する。
具体的にはグリセロール１０ｙモル、ＡＴＰ５〃モル、
ＮＡＤＩ．４ムモル、ＭｇＣ１２１２ムモル、グリセロ
ール」３ーリン酸脱水素酵素ｌａ単位、グリシン−ヒド
ラジン緩衝液（ｐＨ９．８）６００山モルを含む反応縞
液３．２８の【に酵素液０．０５叫（２０ｍＭ舷−リン
酸緩衝液で希釈）を混合し、２８０で反応開始から４分
間３４仇ｍの波長における紫外部吸収の増加を測定し、
その直線部分から１分間当りの吸光度の増加を算出した
。
ＮＡＤＩ．４ムモル、ＭｇＣ１２１２ムモル、グリセロ
ール」３ーリン酸脱水素酵素ｌａ単位、グリシン−ヒド
ラジン緩衝液（ｐＨ９．８）６００山モルを含む反応縞
液３．２８の【に酵素液０．０５叫（２０ｍＭ舷−リン
酸緩衝液で希釈）を混合し、２８０で反応開始から４分
間３４仇ｍの波長における紫外部吸収の増加を測定し、
その直線部分から１分間当りの吸光度の増加を算出した
。
すなわち対照として上記纏成でグリセロールの代りに水
を用いて同様の操作を行い、試験後の３４仇ｍの吸光度
の増加を対照のそれを差し引いた。ＮＡＤＨの３４仇ｍ
における分子吸光係数として（ご＝６．２２×１び）を
用い、差し引いた吸光度値から生成するＮＡＤＨ量を求
め、これをもとにして試料中の酵素力価を算出した。酵
素力価の表示は上記条件下で１分間に１ムモルのＮＡＤ
Ｈを生成せしめる酵素量を１単位として行う。本発明に
よって得られるＧＫの理化学的性質をセルロモナス・フ
ラビゲナＩＦＯ １２総凪匡源のもの（後記の実施例１
で得られた比活性２の単位／双９の精製酵素）を代表例
として示す。
を用いて同様の操作を行い、試験後の３４仇ｍの吸光度
の増加を対照のそれを差し引いた。ＮＡＤＨの３４仇ｍ
における分子吸光係数として（ご＝６．２２×１び）を
用い、差し引いた吸光度値から生成するＮＡＤＨ量を求
め、これをもとにして試料中の酵素力価を算出した。酵
素力価の表示は上記条件下で１分間に１ムモルのＮＡＤ
Ｈを生成せしめる酵素量を１単位として行う。本発明に
よって得られるＧＫの理化学的性質をセルロモナス・フ
ラビゲナＩＦＯ １２総凪匡源のもの（後記の実施例１
で得られた比活性２の単位／双９の精製酵素）を代表例
として示す。
‘１｝作用
本酵素はＡＴＰの共存下にグリセロールをリン酸化し、
グリセロール−３−リン酸とＡＤＰを生成する反応を触
媒する。
グリセロール−３−リン酸とＡＤＰを生成する反応を触
媒する。
｛２１ 基質特異性
本酵素はグリセロール以外にも、ジヒドロキシアセトン
、Ｄ，Ｌーグリセロアルデヒドにも作用しうるが、他の
ポリオール及びアルコール類には作用しなかった（第１
表参照）。
、Ｄ，Ｌーグリセロアルデヒドにも作用しうるが、他の
ポリオール及びアルコール類には作用しなかった（第１
表参照）。
第１表ＧＫの基質特異性
なお相対活性は下記反応系で測定した。
反応全液量１．６泌、反応温度２８０
（活性はＮＡＤＨの減少速度（ＡＤＰの生成速度）を測
定した）またグリセロールまたはＡＴＰに対するＫｍ値
は夫々４．４×１０‐５Ｍまたは４．３×１０−４であ
った。
定した）またグリセロールまたはＡＴＰに対するＫｍ値
は夫々４．４×１０‐５Ｍまたは４．３×１０−４であ
った。
【３｝ 至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲本酵素の至適ｐＨ
は９．８付近にある。
は９．８付近にある。
本酵素の安定ｐＨ域は２５００、２印寺間処理でＰＨ５
．０〜１０．０の範囲にあり、極めて広範囲のｐＨ城で
安定である。更に最も安定なｐＨは７．５付近で、該ｐ
Ｈでは、４０ｑｏ、１時間処理でも１００％の活性が残
存する。【４｝ 作用適温の範囲 本酵素の作用最適温度は前記の活性測定条件下において
、５０ｏＣ付近にある。
．０〜１０．０の範囲にあり、極めて広範囲のｐＨ城で
安定である。更に最も安定なｐＨは７．５付近で、該ｐ
Ｈでは、４０ｑｏ、１時間処理でも１００％の活性が残
存する。【４｝ 作用適温の範囲 本酵素の作用最適温度は前記の活性測定条件下において
、５０ｏＣ付近にある。
（５）ｐＨ、温度などによる失宿条件
本酵素はｐＨ７．５ １５分間の処理の場合、４０００
まで安定で、４５００でも９６％の活性が残存するが、
７０００の処理では完全に失活する。
まで安定で、４５００でも９６％の活性が残存するが、
７０００の処理では完全に失活する。
（６ー 種々薬剤の影響
本酵素活性は第２表に示す如く、Ａｇ＋イオン、Ｈ蟹十
イオンによって顕著に阻害される。
イオンによって顕著に阻害される。
またパラクロロマーキユリベンゾエート（ＰＣＭＢ）の
ようなチオール基阻害剤によっても活性が顕著に阻害さ
れる。
ようなチオール基阻害剤によっても活性が顕著に阻害さ
れる。
エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ｏ−フェナ
ンスロリンのような金属キレート剤では全く影響を受け
なかつた。第２表 ＧＫ活性Ｋ及ぼす谷種薬剤の影響（
０．１Ｍ酢酸緩衝液くｐＨ６．０）中 ３００Ｃ、１時
間処理：ＧＫ４０単位／雌）Ａｃ： ＣＨ３ＣＯＯ ‘７ー 分子量および等雷点 セフアデックスＧ−２００のゲル櫨過法により、本酵素
の分子量は約２００，０００と算出された。
ンスロリンのような金属キレート剤では全く影響を受け
なかつた。第２表 ＧＫ活性Ｋ及ぼす谷種薬剤の影響（
０．１Ｍ酢酸緩衝液くｐＨ６．０）中 ３００Ｃ、１時
間処理：ＧＫ４０単位／雌）Ａｃ： ＣＨ３ＣＯＯ ‘７ー 分子量および等雷点 セフアデックスＧ−２００のゲル櫨過法により、本酵素
の分子量は約２００，０００と算出された。
またキャリアーアンフオラィトを用いた焦点電気泳動法
で測定した本酵素の等露点は４．２であった。本発明に
より得られるＧＫは従釆のＧＫに比して、熱あるいはｐ
Ｈに対して安定である。
で測定した本酵素の等露点は４．２であった。本発明に
より得られるＧＫは従釆のＧＫに比して、熱あるいはｐ
Ｈに対して安定である。
次に本発明を実施例により説明する。
実施例において％は重量％を示す。実施例 １
グリセロール２．０％、ポリベプトン２．０％、酵母エ
キス０．２％、リン酸２カリウム０．７％、塩化ナトリ
ウム０．２％、硫酸マグネシウム（７泣○）０．０２％
、消泡剤アデカノールＬＯ−１２６（旭電化製）０．０
４％からなる培地（ｐＨ７．４）２０夕を３０〆客のジ
ャーフアメンターに仕込み、１２び０で３０分間蒸気滅
菌した。
キス０．２％、リン酸２カリウム０．７％、塩化ナトリ
ウム０．２％、硫酸マグネシウム（７泣○）０．０２％
、消泡剤アデカノールＬＯ−１２６（旭電化製）０．０
４％からなる培地（ｐＨ７．４）２０夕を３０〆客のジ
ャーフアメンターに仕込み、１２び０で３０分間蒸気滅
菌した。
他方、同組成塔地を用い２ク客肩付フラスコで３０ｏｏ
、２餌時間セルロモナス・フラビゲナＩＦＯ１２粥の辰
鰹培養しておいた培養物２００泌を前記培地に無菌的に
楯菌し、３０ｏｏで２０時間通気（２０〆／分）縄梓（
１８仇ｐｍ）培養した。培養液１８〆を連続遠心分離機
にて処理して菌体を集め、この菌体を０．０９Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７．５）にて４Ｚに懸濁した。この懸濁液
をダィノミルにかけ菌体を磨砕した。磨砕後、磨砕液を
０．０８Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）で８〆とし、不
溶物を蓮藻土を猿過助剤として櫨別した。得られた櫨液
にまず総％飽和になる様に硫酸アンモニウムを加え、不
熔物を遠心分離で沈澱として除去した後、その上清に更
に終末６５％飽和になる様に更に硫酸アンモニウムを加
え、ＧＫを沈澱として回収した。この沈澱としての活性
回収率は９０％で、比活性は約６倍に上昇していた。得
られた沈澱を４その０．０９Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
５）に溶解し、水酸化ナトリウム溶液でｐＨを７．５に
調整後、５０％飽和になる様に硫酸アンモニウムを加え
、再度ＣＫを遠０分離にて塩折物として回収した。得ら
れた沈澱物を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）の４
００の‘に溶解し、溶解液中の硫酸アンモニウム濃度が
６％飽和になる様に硫酸アンモニウムを添加溶解して、
水酸化ナトリウム溶液で日を７．５に調整した。該酵素
液を、予め６％飽和硫酸アンモニウムを含む０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．５）で平衡化しておいたフヱニル
セフアロースＧＬ−砥（ファルマシア製、スウェーデン
）を充填したカラム（１００の【容量のカラム）に通じ
、ＧＫを吸着させた。更に担体の平衡化に使用した緩衝
液で洗い流した後、１０％にエチレングリコールを溶解
した同緩衝液と３０％にエチレングリコールを溶解した
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）とで濃度勾配とっ
くり、、徐々に硫酸アンモニウム濃度を下げると共にエ
チレングリコール濃度を上げながらＧＫを溶出させた。
溶出されたＯＫの活性区分を集め、硫酸アンモニウムの
７０％飽和で前記と同様に塩折を行った。沈澱するＧＫ
を遠心分離で集め、少量の０．０８Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）に溶解後、予め０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）で平衡化しておいたセフアデツクスＧ−２５
（フアルマシア製、スウェーデン）カラムで分子筋脱塩
を行い、得られる脱塩液を凍結乾燥した。かくして比活
性２０単位／双９のＧＫ約１．１夕が得られた。粗抽出
液からの活性回収率は４．５％であり、比活性の上昇は
２０の織こ達した。実施例 ２ 使用菌株にコリネバクテリウム、セロシス日０１２６８
４を用い、実施例１と同様に培養、抽出、精製を行い、
比活性１８単位／の９の精製ＧＫ約０．５夕を得た。
、２餌時間セルロモナス・フラビゲナＩＦＯ１２粥の辰
鰹培養しておいた培養物２００泌を前記培地に無菌的に
楯菌し、３０ｏｏで２０時間通気（２０〆／分）縄梓（
１８仇ｐｍ）培養した。培養液１８〆を連続遠心分離機
にて処理して菌体を集め、この菌体を０．０９Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７．５）にて４Ｚに懸濁した。この懸濁液
をダィノミルにかけ菌体を磨砕した。磨砕後、磨砕液を
０．０８Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）で８〆とし、不
溶物を蓮藻土を猿過助剤として櫨別した。得られた櫨液
にまず総％飽和になる様に硫酸アンモニウムを加え、不
熔物を遠心分離で沈澱として除去した後、その上清に更
に終末６５％飽和になる様に更に硫酸アンモニウムを加
え、ＧＫを沈澱として回収した。この沈澱としての活性
回収率は９０％で、比活性は約６倍に上昇していた。得
られた沈澱を４その０．０９Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
５）に溶解し、水酸化ナトリウム溶液でｐＨを７．５に
調整後、５０％飽和になる様に硫酸アンモニウムを加え
、再度ＣＫを遠０分離にて塩折物として回収した。得ら
れた沈澱物を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）の４
００の‘に溶解し、溶解液中の硫酸アンモニウム濃度が
６％飽和になる様に硫酸アンモニウムを添加溶解して、
水酸化ナトリウム溶液で日を７．５に調整した。該酵素
液を、予め６％飽和硫酸アンモニウムを含む０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．５）で平衡化しておいたフヱニル
セフアロースＧＬ−砥（ファルマシア製、スウェーデン
）を充填したカラム（１００の【容量のカラム）に通じ
、ＧＫを吸着させた。更に担体の平衡化に使用した緩衝
液で洗い流した後、１０％にエチレングリコールを溶解
した同緩衝液と３０％にエチレングリコールを溶解した
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）とで濃度勾配とっ
くり、、徐々に硫酸アンモニウム濃度を下げると共にエ
チレングリコール濃度を上げながらＧＫを溶出させた。
溶出されたＯＫの活性区分を集め、硫酸アンモニウムの
７０％飽和で前記と同様に塩折を行った。沈澱するＧＫ
を遠心分離で集め、少量の０．０８Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）に溶解後、予め０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）で平衡化しておいたセフアデツクスＧ−２５
（フアルマシア製、スウェーデン）カラムで分子筋脱塩
を行い、得られる脱塩液を凍結乾燥した。かくして比活
性２０単位／双９のＧＫ約１．１夕が得られた。粗抽出
液からの活性回収率は４．５％であり、比活性の上昇は
２０の織こ達した。実施例 ２ 使用菌株にコリネバクテリウム、セロシス日０１２６８
４を用い、実施例１と同様に培養、抽出、精製を行い、
比活性１８単位／の９の精製ＧＫ約０．５夕を得た。
Claims (1)
- １ セルロモナス属またはコリネバクテリウム属に属し
、グリセロールキナーゼ生産能を有する微生物を栄養培
地に培養し、該培養物からグリセロールキナーゼを採取
することを特徴とするグリセロールキナーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2455780A JPS6016233B2 (ja) | 1980-02-27 | 1980-02-27 | グリセロ−ルキナ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2455780A JPS6016233B2 (ja) | 1980-02-27 | 1980-02-27 | グリセロ−ルキナ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56121484A JPS56121484A (en) | 1981-09-24 |
| JPS6016233B2 true JPS6016233B2 (ja) | 1985-04-24 |
Family
ID=12141454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2455780A Expired JPS6016233B2 (ja) | 1980-02-27 | 1980-02-27 | グリセロ−ルキナ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6016233B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63129492A (ja) * | 1986-11-19 | 1988-06-01 | Toshiba Mach Co Ltd | メモリカ−ドおよびメモリカ−ド異常検出装置 |
| JPH0344752A (ja) * | 1989-07-12 | 1991-02-26 | Hitachi Ltd | Ｒａｍカードデータ保護方式 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60326467D1 (de) * | 2002-09-10 | 2009-04-16 | Toyo Boseki | Neue glycerinkinase, deren gen sowie verfahren zur herstellung der glycerinkinase unter verwendung des gens |
-
1980
- 1980-02-27 JP JP2455780A patent/JPS6016233B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63129492A (ja) * | 1986-11-19 | 1988-06-01 | Toshiba Mach Co Ltd | メモリカ−ドおよびメモリカ−ド異常検出装置 |
| JPH0344752A (ja) * | 1989-07-12 | 1991-02-26 | Hitachi Ltd | Ｒａｍカードデータ保護方式 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS56121484A (en) | 1981-09-24 |
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