JPS60158117A - 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規なプラスミノーゲン・アクチペーターお
よびその製法ならびにこれを有効成分として含有する血
栓溶解剤に関する。さらに詳しくは、人の正常組織由来
細胞の組織培養液よシ採取した二本鎖プラスミノーゲン
・アクチベーターおよびこれを分離精製して得る方法な
らびＫこれを有効成分として含有する血栓溶解剤として
の医薬用途に関する。

プラスミノーゲン・アクチベーターとしては今日、尿ま
たは培養腎細胞から分１ＩＩｎｓされたウロキナーゼ、
およびストレプトコッキより採取されるストレプトキナ
ーゼが血栓溶解剤として実用に供されている。

しかし、これらはフィブリンに対する親和性の点で劣る
ので、治療に際し必要な効果を得るには大量に投与する
場合が多く、内出血等の副作用が発現することが知られ
ている。すなわち、これらによって循環血液中で生成さ
れるプラスミンは、血中のプラスミンインヒビタ−と結
合して速やか罠失活するため、治療効果をあげるためＫ
は、これらを大量に投与して、血中のプラスミンインヒ
ビタ−の量を上回るプラスミンを生成する必要がある。

しかし、大量のプラスミンが生成されるとフィブリノー
ゲンを分解して、出血傾向という副作用を引き起すこと
Ｋなる。これに対しフィブリンに親和性が高く、フィブ
リン上でプラスミンを生成することができれば、循環血
液中のプラスミンインヒビタ−の影響を受けることなく
、少量でフィブリンを分解することができ、循環血液中
のフィブリノーゲンを分解する作用も弱くなる。かかる
実情からフィブリン親和性が高く、少量でかつ血栓溶解
活性が高く、副作用の少ない血栓溶解剤が望まれている
。

先に、本発明者らは、種々の人の正常組織由来細胞の組
織培養液にりいて検索したところ、ウロキナーゼとは異
なるプラスミノーゲン・アクチベーター活性を有する物
質が官まれていることを見い出し、これを分離精製する
ことに成功し、特許出願した（特願昭５７−１５５６５
５号）。

その後、このプラスミノーゲン・アクチベーター活性を
有する物質について種々研究を重ねた結果、該物質が複
数の蛋白よりなる混合物であること、さらに、それらが
一本鎖と二本鎖とからなる蛋白フラグメントを有するこ
と、および同様のプラスミノーゲン・アクチベーター活
性を有することを見出し、本発明に到達した。

本発明の目的は、フィブリン親和性が高く、少量で効果
を有す・る新規な二本鎖プラスミノーゲン・アクチベー
ターを提供することにある。

他の目的は、該二本鎖プラスミノーゲン・アクチベータ
ーを分離精製して製造する方法、および得られた二本鎖
プラスミノーゲン・アクチベーターを有効成分とする新
規な血栓溶解剤を提供することである。

かかる目的で、本発明者らは、二本鎖プラスミノーゲン
・アクチベーターを選択的Ｋｍ造する方法、すなわち、
一本鎖または二本鎖との混合状態のプラスミノーゲン・
アクチベーターを二本鎖プラスミノーゲン・アクチペー
ターに変換する方法、および二本鎖プラスミノーゲン・
アクチベーターの性質について検討し、本発明を完成し
た。

本発明の二本鎖プラスミノーゲン・アクチベーターは、
適肖彦生育培体中で人の正常組織由来細胞、たとえは、
人胎児の腎、腸、肺、心臓、輸尿管、皮膚、包皮および
全胎児由来の細胞、人の胎盤由来の細胞あるいは人の腎
、腸、肺、甲状腺、心臓、輸尿管、皮膚由来の細胞等を
用いた組織培養液からプラスミノーゲン・アクチベータ
ー活性を有する両分を分取し、これを、酵素処理または
１０〜８０Ｃ１より好ましくは２０〜４０Ｃで５〜１０
日間インキュベートし、分離精製することにより製造す
ることができる。

培養液からの分離精製方法としては、蛋白質化学におい
て通常使用される方法、たとえば、担体による吸着法、
イオン交換法、分別沈殿法、ゲル濾過法、電気泳動法、
各種アフイニテイクロマトグラフイー特に特異抗体を用
いた方法が望ましく、これらを単独または組み合わせて
使用できる。かくして得られたプラスミノーゲン・アク
チベーターの用途としては、血栓溶解剤としての医薬用
途以外に、たとえば、人工血管、人工臓器等の材料に結
合させ、血栓の形成を防止する薬剤として、あるいは血
栓症等の診断薬としての用途があげられる。

本発明で用いる人の正常組織由来細胞の組織培養液は、
プラスミノーゲン・アクチベーター産生能を有する細胞
を種々の培養液中で培養したものを用いることができ、
たとえば、特開昭５４−１０７５１０号公報、特開昭５
４−１０７５１１号公報、特開昭５５−１９００１号公
報、特開昭５５−１５９３２３号公報、特公昭５７−５
１５９号公報記載の培養液等があげられる。代表的な培
養方法については、参考例１．２に例示する。

培養液からのプラスミノーゲン・アクチペーター混合物
または一重鎖プラスミノーゲン・アクチベーターから本
発明の二本鎖プラスミノーゲン・アクチベーターへの変
換は、分離精製の任意の工程で行うことができ、酵素処
理法または単に１０〜８０Ｃ１よシ好ましくは２０〜４
０Ｃでインキュベートすることによシ達成できる。

酵素処理の方法は、直接酵素を作用させるか、あるいは
固定化酵素と接触させる方法等、通常の酵素反応に用い
る方法が使用できる。酵素としては、プラスミン、カリ
クレイン、活性化された血液凝固の第Ｍ因子および第朋
因子等、固定化用担体としては、セファロース等、通常
酵素固定用に使用される担体を用いることができる。

本発明のプラスミノーゲン会アクチベーターの具体的な
分離精製方法の一例を上げれば、組織培養液あるいは濃
縮した培養液をプラスミンセファロースカラ五に通した
後、硫酸アンモニウムを加えて生ずる沈殿を分取し、塩
化ナトリウムを加えたロダンアンモニウム溶液に溶解さ
せ、抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムに通し
、フィブリンセファロースカラムに吸着させる。これを
アルギニンを溶出溶媒として用いて得られる溶出液を、
さらに抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセフ７０−スカラムに通
した後、凍結乾燥処理し濃縮する。

濃縮液をセファデックスＱ−１５０（ファルマシア社登
録商標）を用いゲル沖過することによシ、目的の二本鎖
プラスミノーゲンΦアクチベーターが得られる。本物質
はプラスミノーゲンを含まないフィブリンは溶解せず、
プラスミノーゲンを含むフィブリンを溶解することから
プラスミノーゲン・アクチペーターであることは明らか
である。

かくして得られる本発明の二本鎖プラスミノーゲン・ア
クチベーターの物理化学的性質について、以下に説明す
る。なお、力価測定は次の方法で行なった（以下の実験
についても同じ）。

９５％凝固フィブリノーゲン（プラスミノーゲン＠量約
５０カゼイン単位／２凝向蛋白）を原料として作製した
寒天加フィブリン平板を用い、ウロキナーゼを標準品と
するブＶ−）法で測定した。

本発明物質溶液を、１１％ゼラチン、０．１Ｍ塩化ナト
リウムおよび０．１％窒化ナトリウムを含む０．０６７
　Ｍ　）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で希釈し、フィ
ブリン平板上で１０　ＩＵ／ｍｌ！のウロキナーゼと同
じ溶解窓を示す本発明物質溶液の濃度を１０Ｕ／−とし
た。

ａ）分子量：６３０００±１００００ １．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１　ＭＥＤＴＡ、０．１
　Ｍアルギニノおよび０．１％ツイン８０（化工アトラ
ス登録商標）を含む０．０１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７
，０）で平衡化したセファデックスＱ−１５０を用いる
ゲル濾過法にて測定した。

ｂ）等電点ニア、０〜８．５ アンフオライトを用いた等電点電気泳動法にて等電点分
画し測定した。

Ｃ）フィブリンに対する親和性： 生理食塩水に溶解したブラスミノーゲノフリーフイプリ
ノーゲン溶液（０，２％）９５０μｔに、本発明物質（
、り　００　ｕ／ｍｇ）　２　Ｄμｔを加え、さらに、
トロピン（３０Ｕ／ｄ）５０μｔを加えて、室温で１時
間放置する。生じたフィブリンを分取し、脱水後、生理
食塩水で洗浄する。２Ｍアンモニウムチオシアネート溶
液１＃Ｉ／で、フィブリン中の本発明物質を抽出する。

この結果、本発明物質は、その約７０％がフィブリン塊
へ取り込まれた。一方、対照として、ウロキナーゼ（ｓ
　ｏ　ｏ　ｘｕ／ｄ）ヲ用いた場合には全く取シ込まれ
なかった。

ｄ）コンカナバリンＡＫ対する親和性：本発明物質（３
０Ｕ／ｗＩｔ）２Ｗ１１を生理食塩水に溶解してコンカ
ナバリンＡ−セファロース（ファルマシア社裂）のカラ
ム（０，５Ｘ４０Ｉ）Ｋ吸着させ、１Ｍ塩塩化ナトタウ
ム溶液で洗浄したところ、はげ１００％が吸着した。

ｅ）至適ＰＨ：　７〜９．５ 生理食塩水に溶解した本発明物質５０μｔｌＣ。

１０％グリセリンを含む生理食塩水に溶解したプラスミ
ノーゲン（８ＣＵ／ｄ　）　５０μｔおよび０．１０Ｍ
塩化ナトリウムを含む０．０５　Ｍクエン酸緩衝液（Ｐ
　Ｈ５，０、６，０）、リン酸緩衝液（ｐＩ（６，０、
７，０、８，０）またはグリシン−水酸化ナトリウム緩
衝液（ｐ　Ｈ８，０、９，０、１０，０、１１，０）（
ｐ　ｌ（５，０、６，０、７，０、８，０、９，０、１
，０，０。

１１．０の７種）を１００μｔずつ混合し、３７［で３
０分間ブレインキュベートする。次いで、０．１５　Ｍ
　）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で溶解したＢｏＣ−
Ｇｌｕ　−Ｌｙｅ　−Ｌｙｉ　−ＭＣＡを５００μを加
え、さらに５７Ｃで１５分間インキュベートした後、酢
酸１−を加え反応を停止させて、生成するアミノメチル
クマリンを螢光法にて測定し、至適ｐＨをめた。

ｆ）安定性： ０．０２％トウイーン８０を含む生理食塩水に溶解した
本発明物質（１００Ｕ／＋ｄ）Ｋ、ｓ　ｓＣ，ｓ時間の
加熱処理を施したが、活性の低下は認められない。

ｇ）各種合成基質に対する氷解活性： 本発明物質（１００Ｕ／ｄ）５０μｔＩＣ，０，１Ｍ塩
化ナトリウムを含む０．０５　Ｍ　トリス塩酸緩衝液（
ｐＨ８，０）　４５０　μｔテ溶解した各種基質１１ｍ
Ｍを加え、３７Ｃで１５分間反応させる。２０饅酢酸０
．５−を加え反応を停止させ、これを励起波長５７０　
ｎｍｑ　スリット幅５ｒ１ｍｓ螢元波長４６０　ｎｍ、
スリット幅５　ｎｍで生ずるアミノメチルクマリンを測
定し、氷解活性をめた。

結果を第１表に示す。

第　１　表 氷解活性（イ）０ ※　１μＭアミノメチルクマリン＝１００％※※−二＜
２９６ ｈ）各種蛋白分解酵素阻害剤の影響 本発明物質（１００Ｕ／ｄ）５０μｔに、各種蛋白分解
酵素阻害剤の溶液５０μｔと０．１Ｍ塩化ナトリウムを
含む０．０５　Ｍ　）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）　
３００μｔを加え、３７Ｃで５分間反応を行う。次に、
本発明物質に対してＦｉｏ、１ｍＭのＢｏｃ−Ｐｂｅ−
８ｏｒ−Ａｒｇ　−ＭＣＡ　（ペプチド研究所）を、ウ
ロキナーゼに対しては０．１ｍＭのＧｌｔ　−Ｇ１７−
Ａｒｇ　−ＭＣＡ　（ペプチド研究所）をそれぞれ１０
０μを加え、３７Ｃで６００分間反応せる。ついで２０
％酢酸０．５−を加え、反応を２停止させ、これを励起
波長３７０　ｎｍ％スリヅト幅２・ａｍ’、螢光波長４
６０ｎｍ、スリット幅２ｍｍで生ずるアミノメチ９寸リ
ンを測定し１　水解活性をめた。

本発明物質の活性を５０％阻害する蛋白分解酵素阻害剤
の濃度（ＩＣ５ｏ　）をめ、その結果を第２表に示す。

第　２　表 Ｉｌｌ　ＫＩ　Ｕ／ｄ （２１小野薬品工業ｆ掬 ｉ）還元処理に対する挙動 本発明物質（０，５〜プロティン／−）を２ｑＩｂドデ
シル硫酸ナトリウム、２チβ−メルカプトエタノールお
よび４０％グリセリンのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６，８
）と等量混合し、１００Ｃで５分間加熱処理する。この
溶液をＬｅａｍｍｌｉ等の方法（Ｎａｔｕｒｅ　２２７
，６８０，１９７０　）にしたがって、５Ｄ８−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動に付した。本発明物質は、分
子量約３５，０００および約５５．０００　Ｋ二つのバ
ンドとして分解していることが確認された。なお、分子
量はカリブレーションキット（ファルマシア・ファイン
ケミカル社製）を用いて同・定した。

ｊ）フィブリンによる活性増強 プラスミノーゲン（１０ＣＵ／ｄ）溶液５０μΔ本発明
物質５０１１ｔ、　０．１　ｍＭ　ＢｏＣ−ｖａｌ　−
Ｌｅｕ−Ｌｙｇ　−ＭＣＡ　１００μｔおよびトロンビ
ン（２［Ｊ／コ）溶液１００μｔを、順次０．０５％フ
ィブリノーゲンを溶解した０、１Ｍ塩化ナトリウムを含
むｏ、ｏ　５　Ｍ　）リス塩酸緩衝液（、）（７，５）
２００μｔに加え、２５Ｃで１時間反応させる。２０％
酢酸５００μｔで反応を停止させ、試験（ｇ）と同様に
して氷解活性をめた。なお、フィブリノーゲン無添加の
場合と比較した。

結果を第３表に示す。

第　３　表 以上の各種性質から、本発明の二本鎖プラスミノーゲン
・アクチベーターは、人尿あるいは腎細胞の組織培養物
由来のウロキナーゼとは異なる新規な物質である。

次に１本発明二本鎖プラスミノーゲン・アクチペーター
の血栓溶解活性をチャンドラ−・ループ法（Ｑｕａｒｔ
、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｐｈｙｉｉｏｌ、　４６．１　（
１９１Ｓ１））Ｋより測定した結果を第１図に示す。な
お、血液はヒト新鮮血を用い、血栓形成時間は３０分、
血栓溶解時間は４時間で行なった。

この結果、本発明二本鎖プラスミノーゲン・アクチペー
ターの血栓溶解活性は、ウロキナーゼに比べて６０倍強
力であることが確認された。

したがって、本発明プラスミノーゲン、アクチベーター
は、少量の投与で強力な血栓溶解効果が得られる血栓溶
解剤として極めて有用である。

本発明物質は、血管内、特に血栓発生部位の血管内に投
与することができ、通常は静脈内投与するのが好ましく
、投与敞は患者の状態により異なるが、１日当り５０〜
１，０００，０００単位の範囲で投与できる。静脈内投
与の方法としては、注射による投与が好ましく、輸液等
に溶解して投与することもできる。

製剤例１ 本発明物質　１２，０００単位 精製ゼラチン　２０ｍｇ マンニトール　１００　ｍｇ 塩化ナトリウム　７．８　ｍｇ リン酸ナトリウム　１５．４　呼 上記成分を注射用蒸留水２−に溶解し、無菌バイアルに
入れ、−３０Ｃ〜−４０Ｃで２時間予備凍結し、−３０
Ｃ〜＋２０Ｃ１真空度０．０５〜０．Ｉ　Ｔｏｒｒで３
５時間、−次乾燥し、次いで３０′ｃ、真空度０．０１
〜０．０５　Ｔｏｒｒ　で５時間、二次乾燥して、注射
用バイアルを製造した。

このものは、用時生理食塩水もしくはブドウ糖注射液５
００　ｍｌに溶解して点滴静注する。

製剤例２ 本発明物質　６０００　単位 アルブミン　５　ｍｇ マンニトール　２５ｍｇ 塩化ナトリウーム　１．９５　〜 リン酸ナトリウム　３．８５Ｉ／Ｕｊ 上記成分にて、製剤例１と同様にして注射用バイアルを
製造した。

参考例１ ヒト胎児腎細胞を１００ｍｍプラスチックディツシュに
７　ｘ　１０’　ｃｅｌｌｓ／−の密度で植え込み、３
７Ｕｓ　５％炭酸ガスを含む空気中で、成育培地として
１０チウシ胎児血清を含むメジウムＭＥＭを１０−添加
し、充分増殖させた後、生理食塩水で洗浄し、血清を含
まない０．５チラクトアルブミン氷解物および０．８チ
フマール酸を含むメジウム１９９から成る生産培地２０
−におきかえる。７日間保持した後、新鮮な生産培地と
交換し、本発明物質を含む培養液を回収する。

参考例２ ヒト胎児肺細胞を５００ｄ容スピナーフラスコに１０’
　ｃｅｊｌｓ／−の密度で２．５ダ／ｄ濃度のサイトデ
ツクスＩ（細胞培養用ビーズ担体、ファルマシア社登録
商標）と共に植え込み、３７ｃｓｓｑｂ炭酸ガスを含む
空気中で、成育培地として１０饅ウシ胎児血清を含むメ
ジウムＭＥＭｆＳＯ０−添加し、６０　ｒｐｍの回転数
で攪拌しながら懸濁培養する。８日間培養し、細胞を充
分増殖させた後、生理食塩水で細胞が接着したビーズ担
体を洗浄し、血清を含まない０．５チラクトアルプミン
水解物を含むメジウム１９９　５００−におきかえ、６
０ｒｐｍの回転数で攪拌しながら培養する。５日目毎に
、この培地を交換しながら、本発明物質を含む培養液を
回収する。

実施例１ 参考例１の培養をアプロチニンの存在下に行って分離精
製した一重鎖プラスミノーゲン・アクチベーターを、１
チヒト血清アルブミンおよび０．１４Ｍ塩化ナトリウム
を含む０．Ｏｊ　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）に溶解
し、２５０　Ｕ／ｌＲ１に調製オ６．．：。ッｉ２００
　＃えＩｃ　７’　５　Ｘ　ｉ’７よ（江゛）３００μ
ｍ１１加え、６７Ｃで反応させる。一定時間後にアプロ
チニンの緩衝溶液２００μｔを加え、プラスミン活性を
中和し、反応を停止させる。

この溶液７０μｔを用い、０．１ｍＭの合成基質（注２
） Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−８ｅｒ−Ａｒｇ−ＭＣＡ　の水解活性
を測定した。

処理前後の本発明物質の力価を測定した。結果を第２図
に示す。プラスミン処理した結果、１００−の本発明物
質が得られてｂる。また、プラスミン処理前後で活性の
低下は認められない。

なお、２０分以上反応させた反応液を、（ｉ）項に示し
たβ−メルカプトエタノールを用いた還元処理に付した
結果、１００％分解した。このことから、プラスミン処
理により、完全に二本鎖プラスミノーゲン・アクチペー
ターに変換していることがわかる。

注１市販のプラスミン液（ミドリ十字社製）を抗つロキ
ナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムおよびリジンセファ
ロースカラムで処理し、ウロキナーゼを含まないプラス
ミン液を調製し、これを上記リン酸緩衝液で０，０４　
ＣＵ／＋ｄに希釈して用いた。

注２合成基質ＢｏＣ−Ｐｈｅ−８ｅｒ−Ａｒｇ−ＭＣＡ
は、−重鎖プラスミノーゲン・アクチベーターによル、
はとんど水解されない。

実施例２ 参考例１で製造した培養液を濃縮して得た一本鎖、二本
鎖混合プラスミノーゲン・アクチベーター溶液３０００
Ｕ／−を、０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２　
Ｍ　）　リス塩酸緩衝液に溶解する。

この溶液２−とプラヘミンセファ・−ス１．（注）を混
合し、２５Ｃで５時間反応させる。反応後、プラスミン
セファロースを戸去し、変換例（１）と同様にして、合
成基質に対する氷解活性および還元処理の結果から、二
本鎖プラスミノーゲン・アクチベーター含量を測定した
。この結果、プラスミンセファロース処理によｊ）、１
００％二本鎖プラスミノーゲン・アクチベーターに変換
されたことが確認された。

（注）プラスミン・セファロースは以下の方法で調製し
たものを用いた。

ヒトプラスミノーゲン（１ｏ　ｏｃＵ／ｄ）１−をウロ
キナーゼセファロース（１００ＩＵ／ｄ　）　０．１−
と混合し、室温で１晩反応し、プラスミンに変換する。

このプラスミン液’ｔ濾過してウロキナーゼセ７７　ｏ
−スヲ除去した後、ブロムシアン（ＢｒＣＮ　）で活性
化したセファロースと反応させて、プラスミンセファロ
ースを作製する。これを合成基質（Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−Ｌ
ｙｓ−Ｌｙｓ−ＭＣＡ　）を用い、活性測定したところ
、樹脂１−当勺約０，５ＣＵの活性を示した。

実施例３ 人胎児包皮由来の細胞培養液３．６ｔに６０チ飽和にな
るよう硫安を加え、ＯＣで２時間攪拌する。

生じた沈殿ｆ：５０００　ｒｐｍ　５０分間の遠心分離
にて集め、０．１５Ｍ塩化ナトリウム訃よび０．１％ツ
イン８０を含む０．０２　Ｍ　）　リス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，５）に溶解し、この溶解液と同じ組成の溶液に対
して４−Ｃ−晩透析する。次いで、２５Ｃで１週間イン
キュベートした後、これを亜鉛セファロースカラム（２
，６φＸ　６　ｔ：ｍ　）に吸着させ、５０　ｍＭイミ
ダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウムおよび０．１チツイ
ン８０を含む０．０５　Ｍ　）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７
，５）で溶出する。得られた溶出液は液量１５６＋ｄ、
本発明物質の活性は１７３１Ｊ／ｄ、比活性８５０Ｕ／
Ａ２８Ｇであった◎ 得られた溶液ｔ−０，１チツイン８０　を含ｔｒ　０．
０２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，６）で１０倍に希釈
し、この希釈に用いた緩衝液と同一組成の溶液で平衡化
したリジンセファロースカラム（１，６φＸ　６　ｃｍ
　）に吸着させた後、０．０５Ｍ塩化ナトリウム、０．
５Ｍロダンカリウム、０．ＩＭ　Ｅ−アミノ−ｎ−カプ
ロン酸および０．１チツイン８０を含む０．０２　Ｍト
リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，６）で溶出する。得られた溶
出液は液量２０．５ｄ、本発明物質の活性は１０３Ｕ／
ｄ、比活性２１０００Ｕ／Ａ２８０であった。

このもの’ｋ　（ｉ）項に示した還元処理し、　Ｓ０８
電気泳動法によシ、処理前後の本発明物質含量を測定し
た結果、ｚｓｃ、１週間処堺によシ、はぼ１００％本発
明物質が得られたことがわかる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明物質の濃度と血栓溶解率の関係を示すグ
ラフ、第２図は一重鎖グラスミノーグン・アクチペータ
ーのプラスミン処理時間と合成基質分解活性およびフィ
ブリン分解活性との関係を示すグラフである。 代迩人　漕　＊　ｂ 第１図 ０．８１　２　４６８１０ 本発明物貰浬度（Ｕ／ｍＡ血液） 手続補正誉 昭和５９年３月１２日 特許庁長官　若杉和夫　殿 １　事件の表示 特願昭５９−１３４５６号 ２　発明の名称 新規なプラスミノーゲン・アクテベーターおよびその製
法ならびにこれを含有する薬剤３　補正をする者 事件との関係・特許出願人 図　面 ６　補正の内容 第１図を別紙添付の第１図、のとお、＋り゛・補正する
。 第１図 ０．８１　２　４６８Ｋ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １１１人の正常組織由来細胞の組織培養液より採取した
   、下記の性質を有する二本鎖プラスミノーゲン・アクチ
   ベーター。 ａ）分子量：　６３０００±１００００ｂ）等電点ニア
   、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性：あり ｄ）コンカナバリンＡに対する親和性コありｅ）至適ｐ
   、）ｉ　：　７〜９．５ ｆ）安定性：５５Ｃ９５時間処理で安定ｇ）還元処理に
   対する挙動：分解 ｈ）合成基質に対する氷解活性二車１表のとおり（２）
   人の正常組織由来細胞の組織培養液よりプラスミノーゲ
   ン・アクチベーターを含む両分を分取し、これを酵素処
   理または１０〜８０Ｃでインキュベートした後、精製す
   ることを特徴とする下記の性質を有する二本鎖プラスミ
   ノーゲン・アクチベーターの製法。 ａ）分子量：５ｏｏｏｏ〜ｅｏｏｏ。 ６）等電点ニア、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性：あり ｄ）フンカナバリンＡＫ対する親和性：ありｅ）至適Ｐ
   Ｈニア〜９．５ ｆ）安定性：５５Ｃ，５時間処理で安定ｇ）還元処理に
   対する挙動二分解 ｈ）合成基質に対する氷解活性：第１表のとおり（３１
   下記の性質を有する二本鎖プラスミノーゲン・アクチベ
   ーターを有効成分として含有する血栓溶解剤。 ａ）分子量＝６５０００±１００００ ｂ）等電点ニア、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性：あり ｄ）コンカナバリンＡＫ対する親和性：ｔｊすｅ）至適
   ｐＨ：　７〜９．５ ｆ）安定性：５５７：、Ｓ時間処理で安定ｇ）還元処理
   に対する挙動二分解 ｈ）合成基質に約する氷解活性二組１表のとおり