JPS60158116A - 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 - Google Patents
新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤Info
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- JPS60158116A JPS60158116A JP59013455A JP1345584A JPS60158116A JP S60158116 A JPS60158116 A JP S60158116A JP 59013455 A JP59013455 A JP 59013455A JP 1345584 A JP1345584 A JP 1345584A JP S60158116 A JPS60158116 A JP S60158116A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規なプラスミノーゲン・アクチベ−ターお
よびその製法ならびにこれを有効成分として含有する血
栓溶解剤に関する。さらに詳しくは、人の正常組織由来
細胞の組織培養液より採取した一本鎖プラスミノーゲン
・アクチベーターおよびこれを分離精製して得る方法な
らびにこれを有効成分として含有する血栓溶解剤として
の医薬用途に関する。
よびその製法ならびにこれを有効成分として含有する血
栓溶解剤に関する。さらに詳しくは、人の正常組織由来
細胞の組織培養液より採取した一本鎖プラスミノーゲン
・アクチベーターおよびこれを分離精製して得る方法な
らびにこれを有効成分として含有する血栓溶解剤として
の医薬用途に関する。
プラスミノーゲン・アクチベーターとしては今日、尿ま
たは培養腎細胞から分離４′＃製されたウロキナーゼ、
およびストレプトコツキより採取されるストレプトキナ
ーゼが血栓溶解剤として実用に供されている。
たは培養腎細胞から分離４′＃製されたウロキナーゼ、
およびストレプトコツキより採取されるストレプトキナ
ーゼが血栓溶解剤として実用に供されている。
しかし、これらはフィブリンに対する親和性の点で劣る
ので、治療に際し必要な効果を得るには大量に投与する
場合が多く、内出血等の副作用が発現することが知られ
ている。すなわち、これらによって循環血液中で生成さ
れるプラスミンは、血中のプラスミンインヒビタ−と結
合して速やかに失活するため、治療効果をあげるために
は、これらを大量に投与して、血中のプラスミンインヒ
ビタ−の量を上回るプラスミンを生成する必要がある。
ので、治療に際し必要な効果を得るには大量に投与する
場合が多く、内出血等の副作用が発現することが知られ
ている。すなわち、これらによって循環血液中で生成さ
れるプラスミンは、血中のプラスミンインヒビタ−と結
合して速やかに失活するため、治療効果をあげるために
は、これらを大量に投与して、血中のプラスミンインヒ
ビタ−の量を上回るプラスミンを生成する必要がある。
しかし、大量のプラスミンが生成されるとフィブリノー
ゲンを分解して、出血傾向という副作用を引き起すこと
になる。これに対しフィブリンに親和性が高く、フィブ
リン上でプラスミンを生成することができれば、循環血
液中のプラスミンインヒビタ−の影響を受けることなく
、少量でフィブリンを分解することができ、循環血液中
のフィブリノーゲンを分解する作用も弱くなる。かかる
実情からフィブリン親和性が高く、小量でかつ血栓溶解
活性が高く、副作用の少ない血栓溶解剤が望まれている
。
ゲンを分解して、出血傾向という副作用を引き起すこと
になる。これに対しフィブリンに親和性が高く、フィブ
リン上でプラスミンを生成することができれば、循環血
液中のプラスミンインヒビタ−の影響を受けることなく
、少量でフィブリンを分解することができ、循環血液中
のフィブリノーゲンを分解する作用も弱くなる。かかる
実情からフィブリン親和性が高く、小量でかつ血栓溶解
活性が高く、副作用の少ない血栓溶解剤が望まれている
。
先に、本発明者らは、種々の人の正常組織由来細胞の組
織培養液について検索したところ、ウロキナーゼとは異
なるプラスミノーゲン・アクチベーター活性を有する物
質が含まれていることを見い出し、これを分離精製する
ことに成功し、特許出願した（特願昭５７−１５５６５
５号）。
織培養液について検索したところ、ウロキナーゼとは異
なるプラスミノーゲン・アクチベーター活性を有する物
質が含まれていることを見い出し、これを分離精製する
ことに成功し、特許出願した（特願昭５７−１５５６５
５号）。
その後、このプラスミノーゲン・アクチベーター活性を
有する物質について種々研究を重ねた結果、該物質が複
数の蛋白よシなる混合物であること、さらに、それが一
本鎖、二本鎖からなることを見出し、本発明に到達した
。
有する物質について種々研究を重ねた結果、該物質が複
数の蛋白よシなる混合物であること、さらに、それが一
本鎖、二本鎖からなることを見出し、本発明に到達した
。
本発明の目的は、フィブリン親和性が高く、少量で効果
を有する新規な一本鎖プラスミノーゲン・アクチペータ
ーを提供することにある。
を有する新規な一本鎖プラスミノーゲン・アクチペータ
ーを提供することにある。
他の目的は、該一本鎖プラスミノーゲン・アクチベータ
ーを分離精製して製造する方法、および得られた一本鎖
プラスミノーゲン・アクチベーターを有効成分とする新
規な血栓溶解剤を提供することである。
ーを分離精製して製造する方法、および得られた一本鎖
プラスミノーゲン・アクチベーターを有効成分とする新
規な血栓溶解剤を提供することである。
かかる目的で、本発明者らは、一本鎖プラスミノーゲン
・アクチベーターを選択的に製造する方法、さらに、一
本鎖プラスミノーゲン・アクチベーターの性質について
検討し、本発明を完成した。
・アクチベーターを選択的に製造する方法、さらに、一
本鎖プラスミノーゲン・アクチベーターの性質について
検討し、本発明を完成した。
本発明の一本鎖プラスミノーグン・アクチベーターは、
適当な生育培体中で人の正常組織由来細胞、たとえば、
人胎児の腎、腸、肺、心臓、輸尿管、皮膚、包皮および
全胎児由来の細胞、人の胎盤白米の細胞あるいは人の腎
、腸、肺、甲状腺、心臓、輸尿管、皮膚由来の細胞等を
組織培養するに際し、培養液中に蛋白分解酵素阻害剤を
添加し、さらに培養液から分離精製する工程を蛋白分解
酵素阻害剤の存在下に行なうことにより、選択的に製造
することができる。
適当な生育培体中で人の正常組織由来細胞、たとえば、
人胎児の腎、腸、肺、心臓、輸尿管、皮膚、包皮および
全胎児由来の細胞、人の胎盤白米の細胞あるいは人の腎
、腸、肺、甲状腺、心臓、輸尿管、皮膚由来の細胞等を
組織培養するに際し、培養液中に蛋白分解酵素阻害剤を
添加し、さらに培養液から分離精製する工程を蛋白分解
酵素阻害剤の存在下に行なうことにより、選択的に製造
することができる。
培養液からの分離精製方法としては、蛋白質化学におり
て通常使用される方法、たとえば、担体による吸着法、
イオン交換法、分別沈殿法、ゲル濾過法、電気泳動法、
各種アフイニテイクロマトグラフイー特に特異抗体音用
いた方法が望ましく、これらを単独または組み合わせて
使用できる。かくして得られたプラスミノーゲン・アク
チベーターの用途としては、血栓溶解剤としての医薬用
途以外に、たとえば、人工血管、人工臓器等の材料に結
合させ、血栓の形成を防止する薬剤として、あるいは血
栓症等の診断薬としての用途があげられる。
て通常使用される方法、たとえば、担体による吸着法、
イオン交換法、分別沈殿法、ゲル濾過法、電気泳動法、
各種アフイニテイクロマトグラフイー特に特異抗体音用
いた方法が望ましく、これらを単独または組み合わせて
使用できる。かくして得られたプラスミノーゲン・アク
チベーターの用途としては、血栓溶解剤としての医薬用
途以外に、たとえば、人工血管、人工臓器等の材料に結
合させ、血栓の形成を防止する薬剤として、あるいは血
栓症等の診断薬としての用途があげられる。
本発明で用いる人の正常組織由来細胞の組織培養液は、
プラスミノーゲン・アクチベーター産生能を有する細胞
を種々の培養液中で培養したもの全周いることができ、
たとえば、特開昭５４−１０７５１０号公報、特開昭５
４−１０７５１１号公報、特開昭５５−１９００１号公
報、特開昭５５−１５９３２５号公報、特公昭５７−５
１５９号公報記載の培養液等があげられる。代表的な培
養方法については、参考例１，２に例示する。
プラスミノーゲン・アクチベーター産生能を有する細胞
を種々の培養液中で培養したもの全周いることができ、
たとえば、特開昭５４−１０７５１０号公報、特開昭５
４−１０７５１１号公報、特開昭５５−１９００１号公
報、特開昭５５−１５９３２５号公報、特公昭５７−５
１５９号公報記載の培養液等があげられる。代表的な培
養方法については、参考例１，２に例示する。
培養および分離精製工程において添加可能な蛋白分解酵
素阻害剤としては、例えば、アプロチニン、ンイビーン
トリブシンインヒビター、ロイペプチン等の天然の蛋白
分解酵素阻害剤、ＦＯＹ（小野薬品工業社製）、ε−ア
ミノカプロン酸、トランス−４−７ミノメチルシクロヘ
キサンカルボン酸等の合成阻害剤等が挙けられ、これら
は単独あるいは組合せて使用することができる。
素阻害剤としては、例えば、アプロチニン、ンイビーン
トリブシンインヒビター、ロイペプチン等の天然の蛋白
分解酵素阻害剤、ＦＯＹ（小野薬品工業社製）、ε−ア
ミノカプロン酸、トランス−４−７ミノメチルシクロヘ
キサンカルボン酸等の合成阻害剤等が挙けられ、これら
は単独あるいは組合せて使用することができる。
本発明のプラスミノーゲン・アクチベーターの具体的な
分ｌｌｌ＃精製方法の一例を挙げれば、蛋白分解酵素阻
害剤の存在下に組織培養した培養液あるいは濃縮した培
養液を、蛋白分解酵素阻害剤の存在下または不存在下に
硫酸アンモニウムを加えて生ずる沈殿を分取し、塩化ナ
トリウムを加えた四ダンアンモニウム溶液に溶解させ、
抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムに通し、フ
ィブリンセファロースカラムに吸着させる。これをフル
ギニンを溶出溶媒として用いて得られる溶出液を、さら
に抗ウロキナーゼＩｇ −Ｇセファロースカラムに通し
た後、凍結乾燥処理し濃縮する。濃縮液をセファデック
スＧ−１５０（ファルマシア社登録商標）を用いゲル沖
過することによシ、目的の一本鎖プラスミノーゲン・ア
クチベーターが得られる。本物質はプラスミノーゲ／を
含まないフィブリンは溶解せず、プラスミノーゲンを含
むフィブリンを溶解することから、プラスミノーゲン・
アクチベーターであることは明らかである。
分ｌｌｌ＃精製方法の一例を挙げれば、蛋白分解酵素阻
害剤の存在下に組織培養した培養液あるいは濃縮した培
養液を、蛋白分解酵素阻害剤の存在下または不存在下に
硫酸アンモニウムを加えて生ずる沈殿を分取し、塩化ナ
トリウムを加えた四ダンアンモニウム溶液に溶解させ、
抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムに通し、フ
ィブリンセファロースカラムに吸着させる。これをフル
ギニンを溶出溶媒として用いて得られる溶出液を、さら
に抗ウロキナーゼＩｇ −Ｇセファロースカラムに通し
た後、凍結乾燥処理し濃縮する。濃縮液をセファデック
スＧ−１５０（ファルマシア社登録商標）を用いゲル沖
過することによシ、目的の一本鎖プラスミノーゲン・ア
クチベーターが得られる。本物質はプラスミノーゲ／を
含まないフィブリンは溶解せず、プラスミノーゲンを含
むフィブリンを溶解することから、プラスミノーゲン・
アクチベーターであることは明らかである。
かくして得られる本発明のプラスミノーゲン・アクチベ
ーターの物理化学的性質について、以下に説明する。な
お、力価測定は次の方法で行なった（以下の実験につい
ても同じ）。
ーターの物理化学的性質について、以下に説明する。な
お、力価測定は次の方法で行なった（以下の実験につい
ても同じ）。
９５チ凝固フイブリノーゲン（プラスミノーゲン含量約
５０カゼイン単位／２凝固蛋白）を原料として作製した
寒天加フィブリン平板を用い、ウロキナーゼを標準品と
するプレート法で測定した。
５０カゼイン単位／２凝固蛋白）を原料として作製した
寒天加フィブリン平板を用い、ウロキナーゼを標準品と
するプレート法で測定した。
本発明物質溶液を、１裂ゼラチン、０，１Ｍ塩化ナトリ
ウムおよび０．１ ％窒化ナトリウムを含む０．０６７
Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で希釈し、フィ
ブリン平板上で１０ ｒＵ／ａｔのウロキナーゼと同じ
溶解窓を示す本発明物質溶液の濃度を１０ ＴＪ ／
ｍｅとした。
ウムおよび０．１ ％窒化ナトリウムを含む０．０６７
Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で希釈し、フィ
ブリン平板上で１０ ｒＵ／ａｔのウロキナーゼと同じ
溶解窓を示す本発明物質溶液の濃度を１０ ＴＪ ／
ｍｅとした。
ａ）分子量：６３０００±１００００
１．５Ｍ塩化ナトリウム、口、Ｉ Ｍ ＥＤＴＡ、ｏ、
１ｙ１アルギニンおよび０．１饅ツイン８０（花王アト
ラス登録商標）を含む０．０１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ
７，０）で平衡化したセファデックスＱ−１５０’ｉ用
いるゲル濾過法にて測定した。
１ｙ１アルギニンおよび０．１饅ツイン８０（花王アト
ラス登録商標）を含む０．０１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ
７，０）で平衡化したセファデックスＱ−１５０’ｉ用
いるゲル濾過法にて測定した。
ｂ）等’ｉｌＬ点＝７．０〜８．５
アンフオライトを用いた等電点電気原動法にて等゛ｌδ
点分画し測定した。
点分画し測定した。
Ｃ）フィブリンに対する親和性：
生理食塩水に溶解したプラスミノーゲンを含有しないフ
ィブリノーゲン溶液（０，２％ ） ９５０μｔ、本発
明物質（５００Ｕ／ｄ）２０μｔを加え、室温で１時間
放置する。生じたフィブリンを分取し、脱水後、生理食
塩水で洗浄する。２Ｍロダンアンモニウム溶液１−でフ
ィブリン中の本発明物質を抽出したところ、本発明物質
は約７０チがフィブリンに取シ込まれた。一方、組織培
養ウロキナーゼは全く取り込まれなかった。
ィブリノーゲン溶液（０，２％ ） ９５０μｔ、本発
明物質（５００Ｕ／ｄ）２０μｔを加え、室温で１時間
放置する。生じたフィブリンを分取し、脱水後、生理食
塩水で洗浄する。２Ｍロダンアンモニウム溶液１−でフ
ィブリン中の本発明物質を抽出したところ、本発明物質
は約７０チがフィブリンに取シ込まれた。一方、組織培
養ウロキナーゼは全く取り込まれなかった。
ｄ）コンカナバリンＡに対する親和性：本発明物質（５
０Ｕ ／ ｍｌ ） ２ ｍｌを生理食塩水に溶解シテ
コンカナバリンへ−セファロース（ファルマシア社製）
のカラム（０，５ｘ４ｃｒｎ）に吸着させ、１Ｍ塩化ナ
トリウム溶液で洗浄したところ、はぼ１００チが吸着し
た。
０Ｕ ／ ｍｌ ） ２ ｍｌを生理食塩水に溶解シテ
コンカナバリンへ−セファロース（ファルマシア社製）
のカラム（０，５ｘ４ｃｒｎ）に吸着させ、１Ｍ塩化ナ
トリウム溶液で洗浄したところ、はぼ１００チが吸着し
た。
Ｃ）至適ｐＨ： ７〜９．５
生理食塩水に溶解した本発明物質５０μｔに、１０チグ
リセリンを含む生理食塩水に溶解したプラスミノーゲ７
（８ＣＵ ／ ＊／ ） ５０ ｆｉｌおよび０．１
０Ｍ塩化ナトリウムを含むｏ、ｏ ｓ Ｍクエン酸緩衝
液（ｐＨｓ、ｏ 、 ６．０ ）、リン酸緩衝液（ｐ）
ｌ ６．０ 。
リセリンを含む生理食塩水に溶解したプラスミノーゲ７
（８ＣＵ ／ ＊／ ） ５０ ｆｉｌおよび０．１
０Ｍ塩化ナトリウムを含むｏ、ｏ ｓ Ｍクエン酸緩衝
液（ｐＨｓ、ｏ 、 ６．０ ）、リン酸緩衝液（ｐ）
ｌ ６．０ 。
７．０ 、８．０ ）またはグリシン−水酸化ナトリウ
ム緩衝７ｆｉ （ｐｌｉ ｓ、ｏ 、 ？、０ 、１０
．０．１１．０ ） （ｐｌ（５．０ 、 ６，０ 、
７．０ 、 ８，０ 、 ９，０ 、 １ ０，０
、 １ １．０の７種）を１００μｔずつ混合し、３７
ｐで３０分間グレインキュベートする。次いで、０．１
５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で溶解したＢｏｃ
−Ｇｌｕ −Ｌｙｓ −Ｌｙｓ −ＭＣＡ（５５００
ｐｔ加え、さらに３７Ｇで１５分間インキュベートした
後、酢酸１−を加え反応を停止させて、生成するアミノ
メチルクマリ／を螢光法にて測定し、至適ｐＨ１に給１
ｏｕＣ，ｉ分間の脱つィルス処８！會施したところ、約
１５優の失活が認めらｉｚ７こ。
ム緩衝７ｆｉ （ｐｌｉ ｓ、ｏ 、 ？、０ 、１０
．０．１１．０ ） （ｐｌ（５．０ 、 ６，０ 、
７．０ 、 ８，０ 、 ９，０ 、 １ ０，０
、 １ １．０の７種）を１００μｔずつ混合し、３７
ｐで３０分間グレインキュベートする。次いで、０．１
５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で溶解したＢｏｃ
−Ｇｌｕ −Ｌｙｓ −Ｌｙｓ −ＭＣＡ（５５００
ｐｔ加え、さらに３７Ｇで１５分間インキュベートした
後、酢酸１−を加え反応を停止させて、生成するアミノ
メチルクマリ／を螢光法にて測定し、至適ｐＨ１に給１
ｏｕＣ，ｉ分間の脱つィルス処８！會施したところ、約
１５優の失活が認めらｉｚ７こ。
ｇ）各種合成基質に対する氷解活性：
不発ｊＪＪ物質（１００Ｕ ／ ｍｅ ） ５０１１１
に、０．１Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０５ Ｍ ）リ
ス塩酸緩１荀液（１）Ｈ８，０） ４５０μｔで溶解し
た各種基質０．１ｍＭ會加え、３７Ｃで１５分間反応さ
せる。２０チ酢酸υ、５ｍｌを加え反応全停止させ、こ
れを励起成長３７０ｎｍ、スリット幅５ｎｍ、螢光波長
４６０ｎｍ、スリット幅５ ｎｍで生ずるアミノメチル
クマリンを測定し、氷解活性をめた。
に、０．１Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０５ Ｍ ）リ
ス塩酸緩１荀液（１）Ｈ８，０） ４５０μｔで溶解し
た各種基質０．１ｍＭ會加え、３７Ｃで１５分間反応さ
せる。２０チ酢酸υ、５ｍｌを加え反応全停止させ、こ
れを励起成長３７０ｎｍ、スリット幅５ｎｍ、螢光波長
４６０ｎｍ、スリット幅５ ｎｍで生ずるアミノメチル
クマリンを測定し、氷解活性をめた。
結果を第１表に示す。
第 １ 表
氷解活性（９））８
′ｐｉ １μＭアミノメチルクマリンミ１００チ＊＊
−：（２チ ｈ）各種蛋白分解酵素阻害剤の影響 本発明物質（１００Ｕ／ｍ／り ５０ ／Ｉｔに、各種
蛋白分解酵素阻害剤の溶液５０μｔと０．Ｉ Ｍ塩化ナ
トリウム金倉む０．０５ Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ
８，０） ３００μｔを加え、５７Ｃで５分間反応を行
う。次に、０．１ｍＭのＢｏｃ−Ｐｈｅ−８ｅｒ−Ａｒ
ｇ−ＭＣＡ（ペプチド研究所）を１００μを加え、５７
ｃで６００分間反応せる。ついで２０％酢酸Ｑ、５ｔｎ
ｌを加え、反応を停止させ、これを励起波長３７０ｎｍ
、スリット幅２ｎｍ、螢光波長４６０ｎｍ、スリット幅
２ ｎｍで生ずるアミノメチルクマリンを測定し、氷解
活性をめた。
−：（２チ ｈ）各種蛋白分解酵素阻害剤の影響 本発明物質（１００Ｕ／ｍ／り ５０ ／Ｉｔに、各種
蛋白分解酵素阻害剤の溶液５０μｔと０．Ｉ Ｍ塩化ナ
トリウム金倉む０．０５ Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ
８，０） ３００μｔを加え、５７Ｃで５分間反応を行
う。次に、０．１ｍＭのＢｏｃ−Ｐｈｅ−８ｅｒ−Ａｒ
ｇ−ＭＣＡ（ペプチド研究所）を１００μを加え、５７
ｃで６００分間反応せる。ついで２０％酢酸Ｑ、５ｔｎ
ｌを加え、反応を停止させ、これを励起波長３７０ｎｍ
、スリット幅２ｎｍ、螢光波長４６０ｎｍ、スリット幅
２ ｎｍで生ずるアミノメチルクマリンを測定し、氷解
活性をめた。
本発明物質の活性を５０チ阻害する蛋白分解酵素阻害剤
の濃度（ＸＣ，。）をめ、その結果を第２表に示す。
の濃度（ＸＣ，。）をめ、その結果を第２表に示す。
第２表
（１１ＫＩＵ／ｍ
（２） 小野薬品工業■
ｉ）還元処理に対する挙動：
本発明物質（０，５〜プロテイン／ゴ）を２チドデシル
硫酸ナトリウム、２チβ−メルカプトエタノールおよび
４０チグリセリンのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６，８）と
等量混合し、１００Ｃで５分間加熱処理する。この溶液
ｆ Ｌｅａｍｍｌ ｉらの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２２７
、６８０ 、１９７０ ）にしたがって、ＳＤＲ・ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動に付した。
硫酸ナトリウム、２チβ−メルカプトエタノールおよび
４０チグリセリンのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６，８）と
等量混合し、１００Ｃで５分間加熱処理する。この溶液
ｆ Ｌｅａｍｍｌ ｉらの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２２７
、６８０ 、１９７０ ）にしたがって、ＳＤＲ・ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動に付した。
本発明物質は、分子量約６８０００に単一バンドとして
確認された。なお、分子量はカリブレーションキット（
ファルマシア・ファインケミカル社製）を用いて同定し
た。
確認された。なお、分子量はカリブレーションキット（
ファルマシア・ファインケミカル社製）を用いて同定し
た。
蛋白分解酵素阻害剤を用いずに培養、分離、精製して製
造したものは、この還元処理をすると、分子量が約５３
０００．３５０００および約６８０００の５ケ所にバン
ドを示した。
造したものは、この還元処理をすると、分子量が約５３
０００．３５０００および約６８０００の５ケ所にバン
ドを示した。
ｊ）フィブリンによる活性増強：
プラスミノーゲ７ （１０ＣＵ／ｍｅ ）溶液５０μｔ
５本発明物質５０ ｆｉｔ、０．１ ｍＭ Ｂｏｃ−Ｖ
ａｌ −Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＭＣＡ １００μｔおよびト
ロンビン（２Ｕ／ｍ ）溶液１００μｔを、順次０．０
５チフイブリノーゲンを溶解した０、１Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．０５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，ｓ ）
２００μｔに加え、２５Ｃで１時間反応させる。２０
％酢酸５００μｔで反応を停止させ、試験（ｇ）と同様
にして氷解活性をめた。なお、フィブリノーゲン無添加
の場合と比較した。その結果を第３表に示す。
５本発明物質５０ ｆｉｔ、０．１ ｍＭ Ｂｏｃ−Ｖ
ａｌ −Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＭＣＡ １００μｔおよびト
ロンビン（２Ｕ／ｍ ）溶液１００μｔを、順次０．０
５チフイブリノーゲンを溶解した０、１Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．０５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，ｓ ）
２００μｔに加え、２５Ｃで１時間反応させる。２０
％酢酸５００μｔで反応を停止させ、試験（ｇ）と同様
にして氷解活性をめた。なお、フィブリノーゲン無添加
の場合と比較した。その結果を第３表に示す。
第 ３ 表
以上の各種性質から、本発明の一本鎖プラスミノーゲン
アクチベーターは、人尿おるいは腎細胞の組織培養物由
来のウロキナーゼとは異なる新規な物質である。
アクチベーターは、人尿おるいは腎細胞の組織培養物由
来のウロキナーゼとは異なる新規な物質である。
次に、本発明の一本鎖プラスミノーグンアクチベーター
の血栓溶隔活性をチャンドラ−・ループ法［Ｑｕａｒｔ
、 Ｊ、Ｅｘｐ、 Ｐｈｙｓｉｏｌ、 ４６ 、１ （
１９６１））により測定した結果を図面に示す。なお、
血液はヒト新鮮血を用い、血栓形成時間は３０分、血栓
溶解時間は４時間で行なった。
の血栓溶隔活性をチャンドラ−・ループ法［Ｑｕａｒｔ
、 Ｊ、Ｅｘｐ、 Ｐｈｙｓｉｏｌ、 ４６ 、１ （
１９６１））により測定した結果を図面に示す。なお、
血液はヒト新鮮血を用い、血栓形成時間は３０分、血栓
溶解時間は４時間で行なった。
この結果、本発明−重鎖プラスミノーゲンアクチベータ
ーの血栓溶解活性は、ウロキナーゼに比べて３０倍強力
であることが確認された。
ーの血栓溶解活性は、ウロキナーゼに比べて３０倍強力
であることが確認された。
したがって、本発明−重鎖プラスミノーゲンアクチベー
ターは、少量の投与で強力な血栓溶解効果が得られる血
栓溶解剤として極めて有用である。
ターは、少量の投与で強力な血栓溶解効果が得られる血
栓溶解剤として極めて有用である。
本発明物質は、静脈内投与するのが好ましく、投与量は
患者の状態により異なるが、１日当９５０〜１，０００
，０００単位の範囲で投与できる。静脈内投与の方法と
しては、注射による投与が好ましく、輸液等に溶解して
投与することもできる。
患者の状態により異なるが、１日当９５０〜１，０００
，０００単位の範囲で投与できる。静脈内投与の方法と
しては、注射による投与が好ましく、輸液等に溶解して
投与することもできる。
参考例１
ヒト胎児腎細胞−１１００１１票プラスチックディツシ
ュに７ Ｘ １０’ ｃｅｌｌｓ／−の密度で植え込み
、３７Ｃ，５％炭酸ガスを含む空気中で、成育培地とし
て１０％ウシ胎児血清を含むメジウムＭＥＭ ′ｆｃ１
０ｍｅ添加し、充分増殖させた後、生理食塩水で洗浄し
、血清を含まない０．５ ％ラクトアルブミン氷解物、
口、１３ ％フマール酸および２０ ＫＩＵ／−アプロ
チニンを含むメジウム１９９から成る膀培地２０−にお
きかえる。７日間保持した後、新鮮な生産培地と交換し
、本発明物質を含む培養液を回収する。
ュに７ Ｘ １０’ ｃｅｌｌｓ／−の密度で植え込み
、３７Ｃ，５％炭酸ガスを含む空気中で、成育培地とし
て１０％ウシ胎児血清を含むメジウムＭＥＭ ′ｆｃ１
０ｍｅ添加し、充分増殖させた後、生理食塩水で洗浄し
、血清を含まない０．５ ％ラクトアルブミン氷解物、
口、１３ ％フマール酸および２０ ＫＩＵ／−アプロ
チニンを含むメジウム１９９から成る膀培地２０−にお
きかえる。７日間保持した後、新鮮な生産培地と交換し
、本発明物質を含む培養液を回収する。
参考例２
ヒト胎児肺細胞を５０ロー容スピナーフラスコに１０’
ｃｅｌｌｓ／−の密度で２．５Ｉｎ９／ｄ濃度のサイ
トデツクス■（細胞培養用ビーズ担体、ファルマシア社
登録商標）と共に植え込み、３７Ｃ，５％炭酸ガスを含
む空気中で、成育培地として１０％ウシ胎児血清を含む
メジウムＭＥＭを５００ｍ１添加し、６０ ｒｐｍの回
転数で攪拌しながら懸濁培養する。８日間培養し、細胞
を充分増殖させた後、生理食塩水で細胞が接着したビー
ズ担体を洗浄し、血清を含まない０．５チラクトアルプ
ミン水解物および２０ ＫＩＵ／−アプロチニンを含む
メジウム１９９３００−におきかえ、６０ ｒｐｍの回
転数で攪拌しながら培養する。５日目毎に、この培地を
交換しながら、本発明物質を含む培養液を回収する。
ｃｅｌｌｓ／−の密度で２．５Ｉｎ９／ｄ濃度のサイ
トデツクス■（細胞培養用ビーズ担体、ファルマシア社
登録商標）と共に植え込み、３７Ｃ，５％炭酸ガスを含
む空気中で、成育培地として１０％ウシ胎児血清を含む
メジウムＭＥＭを５００ｍ１添加し、６０ ｒｐｍの回
転数で攪拌しながら懸濁培養する。８日間培養し、細胞
を充分増殖させた後、生理食塩水で細胞が接着したビー
ズ担体を洗浄し、血清を含まない０．５チラクトアルプ
ミン水解物および２０ ＫＩＵ／−アプロチニンを含む
メジウム１９９３００−におきかえ、６０ ｒｐｍの回
転数で攪拌しながら培養する。５日目毎に、この培地を
交換しながら、本発明物質を含む培養液を回収する。
実施例１
人胎児腎組織培養液３２ｔＫ硫安を５００ ｆ／ｌの割
合で加え、ＯＣ２時間攪拌する。生じた沈殿を５００Ｏ
ｒｐｍ、３０分間の遠心分離にて集め、０．５Ｍ塩化ナ
トリウム、０．１％ツイン８０および２５ ＫＩＵ／ｍ
１！アプロチニンを含む０．０２ Ｍ ）リス塩酸緩衝
液（ｐＨ７゜５）で溶解し、これと同一組成の溶液に対
して４Ｃで一晩透析する。得られた溶液は液量３２０
ｍｅ、本発明物質の活性は１８Ｕ ’／ ｍｅ 、比活
性は９．Ｉ Ｕ／Ａ２８０であった。
合で加え、ＯＣ２時間攪拌する。生じた沈殿を５００Ｏ
ｒｐｍ、３０分間の遠心分離にて集め、０．５Ｍ塩化ナ
トリウム、０．１％ツイン８０および２５ ＫＩＵ／ｍ
１！アプロチニンを含む０．０２ Ｍ ）リス塩酸緩衝
液（ｐＨ７゜５）で溶解し、これと同一組成の溶液に対
して４Ｃで一晩透析する。得られた溶液は液量３２０
ｍｅ、本発明物質の活性は１８Ｕ ’／ ｍｅ 、比活
性は９．Ｉ Ｕ／Ａ２８０であった。
これを亜鉛セファロースカラム（４φ×７．１ｃｍ）に
吸着させｆｃ後、５０ ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩
化ナトリウム、０．１％ツイン８０および２５ＫＩ Ｕ
／ｍｅアプロチニンを０．０２ Ｍ ）リス塩酸緩衝
液（ｐＨ７，５）で本発明物質を溶出する。溶出液は液
量１１８＋＋＋ｌ、本発明物質の活性は４１ Ｕ ／
ｒｒｔ、比活性は３２０ Ｕ／、Ａ２８０であった。
吸着させｆｃ後、５０ ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩
化ナトリウム、０．１％ツイン８０および２５ＫＩ Ｕ
／ｍｅアプロチニンを０．０２ Ｍ ）リス塩酸緩衝
液（ｐＨ７，５）で本発明物質を溶出する。溶出液は液
量１１８＋＋＋ｌ、本発明物質の活性は４１ Ｕ ／
ｒｒｔ、比活性は３２０ Ｕ／、Ａ２８０であった。
この溶出液を０．１％ツイン８０および２５ ＫＩＵ／
ｌｎｔアプロチニンを含む生理食塩水で透析し、抗つロ
キナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムを通過させた後、
アルギニンセファロースカラム（１，５φＸ ８ ｃｍ
）に連続的に吸着させる。０．１チツイン８０および
２５ ＫＩＵ／ｍ／アプロチニンを含む０．５Ｍ塩化ナ
トリウム溶液で充分洗浄後、０．１％ツイン８０および
２５ ＫＩＵ／ｄアプロチニンを含む０．５Ｍアルギニ
ン溶液で本発明物質を溶出する。得られた溶液は液量４
７−１本発明物質の活性は８７ Ｕ ／ ｍｅ ％比活
性は３５００ Ｕ／Ａ２８０であった。
ｌｎｔアプロチニンを含む生理食塩水で透析し、抗つロ
キナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムを通過させた後、
アルギニンセファロースカラム（１，５φＸ ８ ｃｍ
）に連続的に吸着させる。０．１チツイン８０および
２５ ＫＩＵ／ｍ／アプロチニンを含む０．５Ｍ塩化ナ
トリウム溶液で充分洗浄後、０．１％ツイン８０および
２５ ＫＩＵ／ｄアプロチニンを含む０．５Ｍアルギニ
ン溶液で本発明物質を溶出する。得られた溶液は液量４
７−１本発明物質の活性は８７ Ｕ ／ ｍｅ ％比活
性は３５００ Ｕ／Ａ２８０であった。
この溶液を限外濾過で濃縮後、１．５ Ｍ ＮａＣ１゜
０．１チツイン８０を含む０．０１ Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）で平衡化したセファデックスＱ−１５０の
カラム（１，５φＸ１０１１１ｃｒｒ１）でゲル濾過し
て、活性のある部分を集める。得られた溶液は液量１５
ｄ、本発明物質の活性は２１０Ｕ／７、比活性は１４０
００Ｕ／Ａ２８０であった。
０．１チツイン８０を含む０．０１ Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）で平衡化したセファデックスＱ−１５０の
カラム（１，５φＸ１０１１１ｃｒｒ１）でゲル濾過し
て、活性のある部分を集める。得られた溶液は液量１５
ｄ、本発明物質の活性は２１０Ｕ／７、比活性は１４０
００Ｕ／Ａ２８０であった。
得られた標品はＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動によ
る分析で、１チドデシル硫酸ナトリウム、１％β−メル
カプトエタノールおよび２０％グリセリン存在下、１０
０Ｃ５分間の還元処理で分解しないことから、一本鎖で
あることが確められた。
る分析で、１チドデシル硫酸ナトリウム、１％β−メル
カプトエタノールおよび２０％グリセリン存在下、１０
０Ｃ５分間の還元処理で分解しないことから、一本鎖で
あることが確められた。
実施例２
人胎児肺組織培養液１．５ｔを抗つロキナーゼＩｇ−Ｇ
セファロースカラム通過後、フィブリンセファロースカ
ラム（１，５φＸ１２ｃＷ１）に吸着させる。０．１
％ ツイン８０および２５ ＫＩＵ／ｍｇアプロチニン
を含む０．５Ｍ塩化す） ＩＪウム溶液で充分洗浄後、
０．１チツイン８０および２５ ＫＩＵ ／−アプロチ
ニンを含む０．５Ｍアルギニン溶液で溶出し、本発明物
質の活性を有する部分の溶液６５ゴを集める。本発明物
質の活性は６８ Ｕ ７φＸ 、比活性は１０２０ Ｕ
／Ａ２８０であった。
セファロースカラム通過後、フィブリンセファロースカ
ラム（１，５φＸ１２ｃＷ１）に吸着させる。０．１
％ ツイン８０および２５ ＫＩＵ／ｍｇアプロチニン
を含む０．５Ｍ塩化す） ＩＪウム溶液で充分洗浄後、
０．１チツイン８０および２５ ＫＩＵ ／−アプロチ
ニンを含む０．５Ｍアルギニン溶液で溶出し、本発明物
質の活性を有する部分の溶液６５ゴを集める。本発明物
質の活性は６８ Ｕ ７φＸ 、比活性は１０２０ Ｕ
／Ａ２８０であった。
この溶液を０．１チツイン８０および２５ ＫＩＵ／ｄ
アプロチニンを含む生理食塩水に透析後、コンカナバリ
ンＡセファロースカラム（１φＸ ２５ ｃｍ ）に吸
着させ、１Ｍ塩化ナトリウム、０．１％ツイン８０およ
び２５ ＫＩＵ／窟ｌアプロチニンを含む０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄後、当該溶液から０．
４Ｍメチルマンノシド、２Ｍロダンアンモニウム、０．
１ ％ツイン８０および２５ ＫＩＵ／−アプロチニン
を含む０．０１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）まで直
線的に濃度を変え、本発明物質を溶出する。
アプロチニンを含む生理食塩水に透析後、コンカナバリ
ンＡセファロースカラム（１φＸ ２５ ｃｍ ）に吸
着させ、１Ｍ塩化ナトリウム、０．１％ツイン８０およ
び２５ ＫＩＵ／窟ｌアプロチニンを含む０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄後、当該溶液から０．
４Ｍメチルマンノシド、２Ｍロダンアンモニウム、０．
１ ％ツイン８０および２５ ＫＩＵ／−アプロチニン
を含む０．０１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）まで直
線的に濃度を変え、本発明物質を溶出する。
得られた溶液は液量３１−５本発明物質の活性は１０２
Ｕ／−１比活性は６５００ Ｕ／Ａ２８０であった。得
られた溶液を限外濾過で濃縮し、七ファデックスＧ−１
５０でゲル濾過して、活性を有する部分を１５−回収し
た。活性は１５１ Ｕ／ｍ／、比活性は１５１００Ｕ／
Ａ２８０であった。
Ｕ／−１比活性は６５００ Ｕ／Ａ２８０であった。得
られた溶液を限外濾過で濃縮し、七ファデックスＧ−１
５０でゲル濾過して、活性を有する部分を１５−回収し
た。活性は１５１ Ｕ／ｍ／、比活性は１５１００Ｕ／
Ａ２８０であった。
得られた標品はＳＯＳポリアクリルアミド電気泳動によ
る分析で、１チドデシル硫酸ナトリウム、１チβ−メル
カプトエタノールおよび２０％グリセリン存在下、１０
０Ｃ５分間の還元処理で分解しないことから、一本鎖で
あることが確められた。
る分析で、１チドデシル硫酸ナトリウム、１チβ−メル
カプトエタノールおよび２０％グリセリン存在下、１０
０Ｃ５分間の還元処理で分解しないことから、一本鎖で
あることが確められた。
実施例５
人胎児包皮組織由来の細胞を参考例２に示した方法と同
じ方法で培養して得た培養液３，４ｔｔ−１遠心分離に
て不溶物を除去した後、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０
．１チツイン８０および２５ ＫＩＵ／７！アプロチニ
ンを含んだ０．０２ Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化した亜鉛セファロースカラム（４φＸ７，
５ｃｒｎ）に吸着させる。このカラムの平衡化に用いた
緩衝液と同じ溶液で充分洗浄した後、５０ｍＭイミダゾ
ール、０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１チツイン８０お
よび２５ ＫＩＵ／−アプロチニンを含む０．０５ Ｍ
） ’）ス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）で溶出する。得
られた溶液は液量１６０ｍ１゜本発明物質の活性は８０
Ｕ／ｍｅ、比活性は２６６Ｕ／Ａ２８０であった。
じ方法で培養して得た培養液３，４ｔｔ−１遠心分離に
て不溶物を除去した後、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０
．１チツイン８０および２５ ＫＩＵ／７！アプロチニ
ンを含んだ０．０２ Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化した亜鉛セファロースカラム（４φＸ７，
５ｃｒｎ）に吸着させる。このカラムの平衡化に用いた
緩衝液と同じ溶液で充分洗浄した後、５０ｍＭイミダゾ
ール、０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１チツイン８０お
よび２５ ＫＩＵ／−アプロチニンを含む０．０５ Ｍ
） ’）ス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）で溶出する。得
られた溶液は液量１６０ｍ１゜本発明物質の活性は８０
Ｕ／ｍｅ、比活性は２６６Ｕ／Ａ２８０であった。
この溶液をウサギよシ得た本発明物質に対する特異抗体
Ｉｇ−Ｇを結合させたセファロース４Ｂカラム（２φＸ
５ ｃｍ ）に吸着させ、２ ｓ ＫＩＵ／ゴアプロ
チニンを含む生理食塩水で充分洗浄後、２５ＫＩＵ／ｒ
ｎｔアプロチニンを含む０．２Ｍグリシン塩酸緩衝液（
ｐＨ２，５）で溶出する。溶出液は直ちにｐＨを中性付
近に上げた後、活性を測定し、液量８２−５活性１１６
Ｕ／ｍ７！、比活性４８００ Ｕ／Ａ２８０の溶液？得
る。
Ｉｇ−Ｇを結合させたセファロース４Ｂカラム（２φＸ
５ ｃｍ ）に吸着させ、２ ｓ ＫＩＵ／ゴアプロ
チニンを含む生理食塩水で充分洗浄後、２５ＫＩＵ／ｒ
ｎｔアプロチニンを含む０．２Ｍグリシン塩酸緩衝液（
ｐＨ２，５）で溶出する。溶出液は直ちにｐＨを中性付
近に上げた後、活性を測定し、液量８２−５活性１１６
Ｕ／ｍ７！、比活性４８００ Ｕ／Ａ２８０の溶液？得
る。
この液を限外濾過で濃縮した後、０．１チツイ／８０．
１Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２ Ｍリン酸緩衝液で
平衡化したセファクリルＳ−２００のカラム（１，５φ
ｘｉｏｏ、、、２）でグル濾過しで活性のある部分を回
収する。得られた溶液は液量１５ｍ、本発明物質の活性
は４８０ Ｕ ／ ｍｋ比活性は１６０００ Ｕ／Ａ２
８０であった。
１Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２ Ｍリン酸緩衝液で
平衡化したセファクリルＳ−２００のカラム（１，５φ
ｘｉｏｏ、、、２）でグル濾過しで活性のある部分を回
収する。得られた溶液は液量１５ｍ、本発明物質の活性
は４８０ Ｕ ／ ｍｋ比活性は１６０００ Ｕ／Ａ２
８０であった。
得られた標品はＳＤＳポリアクリルアミド亀気泳動によ
る分析で、１チドデシル硫酸ナトリウム、１チβ−メル
カプトエタノールおよび２０ｔｌＪグリセリン存在下、
１００Ｃ５分間の還元処理で分解しないことから、−重
鎖であることが確められた。
る分析で、１チドデシル硫酸ナトリウム、１チβ−メル
カプトエタノールおよび２０ｔｌＪグリセリン存在下、
１００Ｃ５分間の還元処理で分解しないことから、−重
鎖であることが確められた。
製剤例１
本発明物質 １，２００単位
精製ゼラチン ２０〃ｌ
マンニトール １００／ｆｆｊｐ
塩化ナトリウム ７．８〜
リン酸ナトリウム １５．ｔｍｇ
上記成分を注射用蒸留水２−に溶解し、無菌バイアルに
入れ、−３０Ｃ〜−４０Ｃで２時間予備凍結し、−３０
Ｃ〜＋２０Ｃ１真空度０．０５〜０、Ｉ Ｔｏｒｒで３
５時間、−次乾燥し、次いで３０Ｃ５真空度０．０１〜
０，０５ Ｔｏｒｒで５時間、二次乾燥して、注射用バ
イアルを製造した。
入れ、−３０Ｃ〜−４０Ｃで２時間予備凍結し、−３０
Ｃ〜＋２０Ｃ１真空度０．０５〜０、Ｉ Ｔｏｒｒで３
５時間、−次乾燥し、次いで３０Ｃ５真空度０．０１〜
０，０５ Ｔｏｒｒで５時間、二次乾燥して、注射用バ
イアルを製造した。
このものは、用時生理食塩水もしくはブドウ糖注射液５
００−に溶解して点滴静注する。
００−に溶解して点滴静注する。
製剤例２
本発明物質 ６，０００単位
アルブミン ５ ｍ９
マンニトール ２５ｍｇ
塩化ナトリウム １．９５７１１９
リン酸ナトリウム ３，８５１ｖ
上記成分にて、製剤例１と同様にして注射用バイアルを
製造した。
製造した。
図面は本発明物質の濃度と血栓溶解率の関係金子すグラ
フである。 代理人 清 水 猛 ０．１！ＩＩ ２ ４６８１０ 本発ＥＡ物貿濃度（Ｕ／ｍＡ血５夜）
フである。 代理人 清 水 猛 ０．１！ＩＩ ２ ４６８１０ 本発ＥＡ物貿濃度（Ｕ／ｍＡ血５夜）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （υ 人の正常組織由来細胞の組織培養液よシ採取した
、下記の性質を有する一本鎖ブラスミノーグン・アクチ
ベーター。 ａ）分子量二６３０口０±１００００ ｂ）等電点ニア、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性：あり ｄ）コンカナバリンＡに対する親和性：あシｅ）至適ｐ
）ｌ ： ７〜９．５ ｆ）還元処理に対する挙動：実質的に分解しないｇ）合
成基質に対する氷解活性：第１表のとおり（２）人の正
常組織由来細胞の組織培養液よシプラスミノーゲン・ア
クチベーターを含む両分を分取し、これを精製するに際
し、培養および分離精製を蛋白分解酵素阻害剤の存在下
に行なうことを特徴とする下記の性質を有する一本鎖プ
ラヌミノーゲン・アクチペーターの製法。 ａ）分子量：６５００Ｑ±１００００ ｂ）等電点ニア、０〜８．５ Ｃ）ブイプリンに対する親和性：あシ ｄ）コンカナバリンＡＫ対する親和性：あ）ｅ）至適ｐ
Ｈ： ７〜９．５ ｆ）還元処理に対する挙動：実質的に分解しないｇ）合
成基質に対する氷解活性：第１表のとおり（３）下記の
性質を有する一本鎖プラスミノーゲン・アクチベーター
を有効成分として含有する血栓溶解剤。 ａ）分子量Ｈ６３ｏｏｏ±１００００ ｂ）等電点ニア、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性＝アシ ｄ）コンカナバリンＡに対する親和性：あシｅ）至適ｐ
Ｈ： ７〜９．５ ｆ）還元処理に対する挙動：実質的に分解しないｇ）合
成基質に対する氷解活性：第１表のとおシ
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59013455A JPS60158116A (ja) | 1984-01-30 | 1984-01-30 | 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 |
| DE8585100804T DE3582338D1 (de) | 1984-01-30 | 1985-01-26 | Verfahren zur herstellung eines doppelkettigen plasminogenaktivators. |
| EP85100804A EP0151996B1 (en) | 1984-01-30 | 1985-01-26 | Process for the preparation of a double-chain plasminogen activator |
| ES539925A ES8605583A1 (es) | 1984-01-30 | 1985-01-29 | Un procedimiento de producir un activador de plasminogeno monocatenario |
| ES548974A ES8701840A1 (es) | 1984-01-30 | 1985-11-16 | Un procedimiento para preparar un activador de plasminogeno bicatenario purificado |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59013455A JPS60158116A (ja) | 1984-01-30 | 1984-01-30 | 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60158116A true JPS60158116A (ja) | 1985-08-19 |
Family
ID=11833617
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59013455A Pending JPS60158116A (ja) | 1984-01-30 | 1984-01-30 | 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60158116A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6051223A (en) * | 1989-09-21 | 2000-04-18 | Mitsui Toatsu Chemicals Incorporated | Method of improving solubility of tissue plasminogen activator |
-
1984
- 1984-01-30 JP JP59013455A patent/JPS60158116A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6051223A (en) * | 1989-09-21 | 2000-04-18 | Mitsui Toatsu Chemicals Incorporated | Method of improving solubility of tissue plasminogen activator |
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