JPS601200A - 新規なハプテンステロイドの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、次大豆■ （ここでｂは３〜１Ｂの間の整数である）の新規なハプ
テンステロイドの製造法を目的とする。

基−（Ｃ）ｉｔ）ｂ−ｃｏｔＨは、好ましくは、４〜１
２個の炭素原子を含有するアルカン酸、例えば酪酸、イ
ソ酪酸、吉草酸、ウンデシル酸又はドデシル酸の残基を
表わす。

これらのハプテンの中でも特に下記のものを例示できる
。

５．１６α、１７β−トリヒドロキシエストラ−１へ５
（１（１−）リエンー７α−酪酸４１６α、１７β−ト
リヒドロキシエストラ−１Ｓ、５（ｌＯｌ−トリエン−
７α−ウンデカン酸本発明の式ＸＸＩのハプテンは、抗
原の製造に使用することができる。

例えば、本発明の大豆■のハプテンは、これをハロぎ酸
アルキル、特にクロルぎ酸イソブチルを使用して混成無
水物に変換し、この無水物を牛血清アルブミンに固定す
ることによって抗原の製造に応用することができる。

これらの抗原から出発して、典型的な方法、特にＥｒｌ
ａｎｇｅｒの方法（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　ｃｈｅｍ、　２
２８．７１５　）に従って抗体を調製することが可能で
ある。

このようにして得られた抗体は、式ＸＸ■のステ平衡透
析法によって立証せしめられる。この特異性は、そのよ
うにして得られた抗体をエストリオールを定量するため
の試薬として有用ならしめるものである。また、姫娠し
た女性の血液及び尿中のエストリオールの量を定量でき
ることについて関心があることが知られているので、こ
のことはある種の胎児の異常を明らかにさせるものであ
る。

本発明は、次式ＸＴｉ （ここでＬはアシル基を表わす） の化合物に次式 ％式％） （ここでＨａｌは塩素又は臭素原子を表わし、ＯＭはエ
ーテルの形でプリツクされたヒト田キシル基を表わす） の化合物を作用させ、次いで生じた生成物に酸試剤を作
用させ、得られた生成物に式ＤＯＨ（Ｄはアシル基を表
わす）の酸又はこの酸の官能性誘導体を作用させて次式
■ の化合物を得、この化合物にけん北側を作用させて次式
■ の化合物を得、この化合物に酸化剤を作用させて次式Ｗ の化合物を得、この化合物に脱水素剤を作用させて次式
ＸＭ の化合物を得、式■の化合物に式ＴＯＨ（Ｔはアルキル
基を表わす）のアルコール又はこのアルコールの官能性
誘導体を作用させて次式■の化合物を得、この化合物に
式Ｙｏｕ（Ｖはアシル基を表わす）の酸又はこの酸の官
能性誘導体を作用させて３位のヒドロキシル官能基及び
１７位のエノール官能基をエステル化して次式藷の化合
物を得、この化合物にエポキシ化剤を作用させて次大豆 の化合物を得、この化合物を加水分解して次式ＸＸＩの
化合物を得、この化合物に還元剤を作用させ、次いでけ
ん北側を作用させて次式ＸＸ■の化合物を得ることを／
ｌｖ−徽とするハプテンの製造法に関する。

Ｌは、好ましくは、飽和又は不飽和の脂肪族又はシクロ
脂肪族の酸、特に、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪
酸又はウンデシル酸のようなアルカン酸；例えばシクロ
プロピル、シクロペンチル又はシクロへキシルカルボン
酸、シクロペンチル又はシクロヘキシル酢酸又はプロピ
オン酸のようなシクロアルキルカルボン酸又はシクロア
ルキルアルカン酸；安息香酸又はフェニル酢酸又はフエ
ニルプロビオン酸のような７エエルアルカン酸；ジエチ
ルアミノ酢酸又はアスパラギン酸のようなアミノ酸；ぎ
酸の如き酸の残基である。Ｈａｌは塩素又は臭素原子を
表わす。Ｍは好ましくはベンジル又はテトラヒドロピラ
ニル基を表わす。

使用される酸試剤は好ましくは塩酸、硫酸、くえん酸、
酢酸又はｐ−トルエンスルホン酸でア’）、また使用さ
れるエステル化剤は好ましくは弐〇〇Ｈ（ＤはＬについ
て前述した意味をとり得る）の酸又はこの酸の官能性誘
導体である。けん他剤は、好ましくは、特にか性ソーダ
又はカリ、ナトリウムアミド、カリウムｔ−ブチラード
又はエチレンジアミン中のりチウムアセチリドであり、
そしてけん化反応はメタノール又はエタノールのような
低級アルコール中で行なわれる。使用される酸化剤は、
特に無水クロム酸、炭酸銀、けい酸銀又は四酢酸鉛であ
る。脱水素は、好ましくは生化学的経路により、特にバ
クテリアのアルド田バクチル・シンプＬ／　ｙ　ｐ　ス
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅｘ　）　Ｕ
、　０゜１０４７を使用して行なわれる。弐■の化合物
のエステル化剤は好ましくはアルコールＴＯＨ（Ｔは１
〜８個の炭素原子を含有するアルキル基を表わす）であ
る。３位のヒドロキシル官能基及び１７位のケトン官能
基のエノール型をエステル化できるエステル化剤は、好
ましくは酸無水物、例えば無水酢酸、或いは次式 ％式％ （ここでＲ１は１〜８個の炭素原子、好ましくは１〜４
個の炭素原子を含有するアシル基を表わす）の誘導体で
ある。使用されるエポキシ化剤は、過塩素酸又は過７タ
ル酸のような過酸或いはへキサフルオルアセトンヒト田
ペルオキシドである。加水分解は、酸媒質中で、特に硫
酸又は酢酸媒質中で行なわれる。還元剤は、好ましくは
混成水素化物、例えば水素化はう素ナトリウム又は水素
化はう素リチウムである。使用されるけん他剤は、前述
したけん他剤のうちの任意のものである。

本発明の方法を実施する好ましい方法において、Ｌはア
セチル基であり、Ｈａｌは塩素原子を表わし、Ｍはテト
ラヒドロピラニル基を表わし、酸試剤は塩酸であり、エ
ステル化剤は無水酢酸であり、けん他剤はメタノール媒
質中のカリであり、酸官能基のエステル化剤は好ましく
はエチルアルコールであり、３位のヒドロキシル官能基
及び１７位のケトンのエノール型のエステル化剤が酢酸
イソプ四ベニルであり、エポキシ化剤がヘキサ７／Ｌ／
オルアセトンヒトジベルオキシドであり、加水分解が硫
酸媒質中で行なわれ、水素化剤が水素化ホウ素ナトリウ
ムであり、けん他剤がメタノール媒質中の水酸化カリウ
ムであ−る。

式Ｘ■゛に相当する出発化合物は、フランス特許第１．
１８０，９０７号に記載の方法によって製造することが
できる。

工程Ｉニアα−〔４″−ヒドロキシブチル〕−１７！！
−二−チード一旦−±−ヱー巳−ろ−１−？−二−４−
二王一？＝−ｕ−Ｔ。

オンジアセテート ５７５ｃｃのマグネシウム４−クロルブタノールの０．
６２　Ｍテトラヒドロビラニルエーテル溶液をテトラヒ
ドロ７ランに導入する。この溶液を窒素下に一３０℃に
冷却し、２−６７７の塩化鋼を加える。

２０分間攪拌し、次いで９５．９の６−ジヒドロ−１９
−フルチストステロンアセテートを３００ＣＣのテトラ
ヒドロフランに溶解してなる溶液を１時間１０分で加え
る。この溶液をさらに１時間−３０℃に保持し、４０ｃ
ｃの酢酸と３００ｏｃの水を加える。エーテルで抽出し
、有機相を水洗し、乾燥し、減圧下に蒸発乾燥する。し
かして、１７４ｇの油状物を得、５５ｏｃｔのメタノー
ルと８８ｏｃのＮ／２　塩酸を補充する。２時間加熱還
流する。冷却し、水で希釈し、塩化メチレンで抽出し、
洗浄し、乾燥し、蒸留する。１２２Ｉの樹脂を集め、ク
ロマドグラフイーし、生成物を得、これに周囲温度で一
夜２容の無水酢酸と２容のピリジンを作用させる。反応
混合物を濃縮乾燥し、しかして１１３℃で融解する７α
−〔４′−ヒドロキシブチル）−１７β−ヒドロキシエ
ストラ−４−エン−３−オンジアセテートを得る。

工程■ニアα−〔４′−ヒト四キシブチル〕−１７オン 前目己の工程で製造された５１の生成物を１０ＣＣのメ
タノールに導入する。この溶液に窒素を吹きこみなから
１２ωの２Ｎメタノールカリを加える。

Ｏ，Ｓ時間後に酢酸で中和し、希釈し、塩化メチレンで
抽出する。しかして４．３ｇの７α−〔４′−ヒトルキ
シブチ＆）−１７β−ヒドロキシエストラ−４−エン−
３−オンを得、これはそのまま次の工程に使用する。

工程ＩＩＩ：！１，１７−シオキソエストラー４−エン
−７α−酪酸 上の工程で得られた生成物を２５００Ｃのアセトンに溶
解する。０℃で攪拌する。１０ＣＣの８Ｎ無水り′ロム
酸の希硫酸溶液を加える。攪拌をざらにα５時間続け、
次いでメタノールと水を加える。

アセトンを真空蒸留により除去する。氷冷し、真空ｆ過
し、水洗し、乾燥する。しかして２５０℃で融解する５
、９１の３，１７−シオキソエストラー４−エン−７α
−酪酸を得る。エタノールで再結晶化後の融点は９５℃
。

１９．９の硫酸モノカリウムを１４５０ｃｃの蒸留水に
溶解してなる溶液を１ＮソーダでｐＨ＝７に中和し、蒸
留水によって２８０　Ｄｅｃの容積とすることによって
得られたｐＨ＝７の緩衝溶液１５００ｃｃに攪拌し且つ
空気を流入しながら３ｇのハイフロス−パーセルを導入
する。次いで３ｇのへ１７−シオキソエストラー４−エ
ン−７α−酪酸、次いで３０ｍ９のメナジオン、３０ｇ
のアルトロバクターアセトン粉末及び３５ｃｃのメタノ
ールを加える。

その懸濁液を６４℃で１１２時間保持し、その間６．５
時間後に１５Ｉのア七トン粉末及び１ｓｃｃのメタノー
ルを加え、９６時間後に１５．９のア七トン粉末を加え
る。そして１１２時間後に、この溶液に濃ソーダ液を加
えてｐＨ＝１４とし、５ｏｏｃｃの酢酸エチルを加え、
ｆ過する。Ｐ液を濃塩酸で酸性化し、硫酸アンモニウム
で飽和する。デカンテーションし、酢酸エチルで再抽出
し、抽出物を洗浄し、乾燥する。不溶物をメタノールで
洗浄し、水洗する。ｆ液に濃塩酸を加えてｐＨ＝１とな
し、蒸発乾燥する。二つの乾燥抽出物をクロマトグラフ
ィーにより精製する。しかして、酢酸水溶液で再結晶し
た後２０６℃で融解するｔ９２．ｊｉ＋の３−ヒドロキ
シ−１７−オキツエストラー１．３．５　（ｉｔ）　−
トリエン−７α−酪酸を得る。

ＩＲスペクトル（クロロホルム） Ｃ＝０　１７ケトン　１７３３Ｇ−１ 酸１７１０ｃＩ１１−１ 遊離ＯＨ１７１０の一１ 芳香族　１６１３Ｃ１１−’ １５８９ｃｍ−１ １４９９α−１ ルエステル ５ｃｃのエタノールに１００■の３−ヒトジキシ−１７
−：４キソエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−
７α−酪酸を増大する。ガス状塩酸を飽和するまで吹き
こみ、１時間還流させる。減圧下に蒸留乾燥し、酢酸エ
チルで溶解する。洗浄し、脱水乾燥させる。得られた樹
脂をクロマトグラフィーし、８１ｒ２の６−ヒドロキシ
−１７−オキツエストラー　１．５．５　ＱＯ）−トリ
エン−７α−酪酸のエチルエステルを無定形生成物の形
で得る。

３０ｃｃの再蒸留した酢酸インプロペニルに１４１１の
３−ヒト四キシー１７−オキツエストラーｔ３．５（１
（１１−）リエンー７α−酪酸を導入する。そのように
して得られた溶液に１５０１ｎ９のｐ−）ルエンスルホ
ン成−水塩を加える。還流させ、そして酢酸イソプロペ
ニルを加えることによって一定容に保ちつつ蒸留する。

８時間蒸留した後、反応混合物を周囲温度に戻し、重炭
酸ナトリウム飽和溶液を加え、塩化メチレンで抽出し、
洗浄する。脱水乾燥させる。１１ｇの生成物を分離し、
これはそのまた次の工程に使用する。

ンー７α−酪酸のエチルエステル 前記の段階で得られた９５６ｎｒｙの生成物を１０国の
塩化メチレンに溶解する。そのようにして作った溶液に
１滴のピリジンを加え、次いで水浴中で１５分以内で２
．５ＣＣのヘキサフルオルアセトンヒドロペルオキシド
の１．２モルフ四ルメチレン溶液を加える。周囲温度に
戻し、窒素雰囲気下に２時間３０分攪拌する。塩化メチ
レンで希釈し、水洗し、脱水し乾燥させる。１ｇの生成
物を得、これはそのまま次の段階に使用する。

１ｇの６；１７β−ジアセトキシ−１６α、１７α−エ
ポキシエストラ−１，３，５（１（１−トリエン−７α
−酪酸のエチルエステルを１０ｅｅのメタノールに導入
する。得られた溶液を攪拌しながら周囲温度に３０分間
保ち、次いで２時間還流させる。周囲温度に冷却し、水
で希釈し、酢酸エチルで希釈し、洗浄し、脱水乾燥させ
る。しかして８８２Ｔｎ９のへ１６α−ジヒドロキシ−
１７−オキツエストラー１．３．５　（１０）−トリエ
ン−７α−酪酸のメチルエステルを得る。

上の工程で得られた８８２■の樹脂を１０ｃｃのメタノ
ールに溶解し、次いで罵素を吹きこみながら９００ｍ９
の水素化はう素ナトリウムを加える。

１時間１５分後に、４５（１１／の水素化はう素ナトリ
ウムを加える。周囲温度にさらに１時間保ち、１ｃｃの
蒸留水とｊｃｃのカリ液を加える。１５分間還流させ、
周囲温度に戻し、水で希釈し、濃塩酸を用いて酸性化し
、エチルエーテルで抽出し、洗浄する。脱水し乾燥する
。７９５■の樹脂を得、これをクロマトグラフィーによ
り精製する。しかして、１６０〜１７０℃で融解する５
７５１ｎ９のへ１６α、１７β−トリヒドロキシエスト
ラ−１，３゜５（Ｉｏｌ−トリエン−７α−醋酸を分あ
！ｆする。〔α〕２ｏＯ＝＋４２＠　（１％、エタノー
ル）。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）　次式ｘｘｎ 〔ここでｂは３〜１８の間の整数である〕のハブテンス
   テロイドを製造するにあたり、次式（ここでＬはアシル
   基を表わす） の化合物に次式 ％式％ （ここでＨａｌは塩素又は臭素原子を表わし、ＯＭはエ
   ーテルの形でプソツクされたヒドロキシル基を表わす） の化合物を作用させ、次いで生じた生成物に酸試剤を作
   用させ、得られた生成物に式Ｄｏｎ（Ｄはアシル基を表
   わす）の酸又はこの酸の官能性誘導体を作用させて次式
   ｘｍ の化合物を得、この化合物にけん北側を作用させて次式
   Ｗ の化合物を得、この化合物に酸化剤を作用させての化合
   物を得、この化合物に脱水素剤を作用させて次式罰 の化合物を得、弐■の化合物に式ＴＯＨ（Ｔはアルキル
   基を表わす）のアルコール又はこのアルコールの官能性
   誘導体を作用させて次式■の化合物を得、この化合物に
   弐ＶＯ）Ｉ（Ｖはアシル基を表わす）の酸又はこの酸の
   官能性ｕ導体を作用−させて３位のヒドロキシル官能基
   及び１７位のエノール官能基をエステル化して次大豆の
   化合物を得、この化合物にエポキシ化剤を作用の化合物
   を得、この化合物を加水分解して次式■■の化合物を得
   、この化合物に還元剤を作用させ、次いでけん北側を作
   用させて大豆■の所望ハプテンを得ることを特徴とする
   ハブテンステロイドの製造法。