JPS6010734B2 - 固体表面に線維素溶解活性を付与する方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、固体表面に線総素溶解活性を付与する方法に
関する。

近年、医療材料の分野において高分子材料が使われるよ
うになったが、高分子材料を人工血管、カテーテル、人
工腎臓、人工心臓、人工弁、人工肺など直接血管と接す
る部位に使用した場合、血栓形成を引きおこすという問
題がある。

血栓形成は多くの血液凝固系酵素の関与する一連の複雑
な反応により、最終的にはフィプリノーゲンが不溶性の
フィブリンに変化することを意味している。従来の抗血
栓性材料の開発は、この血液凝固系に注目し、血液凝固
系酵素の阻害剤として働くへパリンを材料表面に適用し
、フィブリノーゲンのフイブリンへの変化を阻害するこ
とにあった。本発明者らは、いったん生成したフイプリ
ンを溶解せしめるような（つまり線縦素溶解活性を有す
る）材料を関発すべく研究し、材料表面にウロキナーゼ
のような線維素溶解活性酵素を固定化することにより線
綬素溶解活性を付与できることを見し、出し、先に出願
したが（特閥昭５２−１０３７８号、袴関昭５２一９０
成規号）、その固定化処理方法は比較的煩雑であり、か
つ材質により処理方法を変える必要があった。本発明者
らはへ この問題にかんがみ、簡便でかつどの材質にも
適用しうる処理方法について引続き鋭意研究した結果、
固体表面をポリカルボン酸により処理したのち線総素溶
解活性酵素溶液と接触せしめることにより、固体表面に
、簡便に線維素溶解活性を付与できることを見し、出し
、本発明に到達したものである。

すなわち本発明は、無機物質表面、天然高分子表面及び
合成高分子表面からなる群より選ばれた固体表面を、ア
クリル酸、メタクリル酸、マレイン酸、マレイン酸モノ
ェステル、フマル酸、アスパラギン酸あるいはグルタミ
ン酸のホモポリマーあるいはコポリマー、デンプン、セ
ルロースあるいはポリビニルアルコールのカルボキシメ
チル誘導体、アルギン酸及びペクチン酸からなる群より
選ばれたポリカルボン酸により処理したのち線総素溶解
活性酵素溶液と接触せしめることを特徴とする固体表面
に線縦素溶解活性を付与する方法である。

本発明における固体表面とはガラス、カオリナィト、ベ
ントナィト、活性炭などの無機物質表面、天然ゴム、セ
ルロール、コラーゲン、アガロース「デキストランなど
の天然高分子表面及びポリスチレン「ポリアミド、ポリ
エステルｔポリアミ／酸トポリヱチレン、ポリプロピレ
ン、シリコーン「ポリ塩化ビニル、ポリメタクリル酸ェ
ステル、ポリビニルアルコールなどの合成高分子表面を
いう。

本発明におけるポリカルボン酸とは、アクリル酸トメタ
クリル酸〜マレィン酸、マレイン酸モノェステル〜フマ
ル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸のホモポリマ−あ
るいはコポリマー、デンプントセルロース「ポリビニル
アルコールの力ルボキシメチル誘導体「アルギン酸「ペ
クチン酸をいつｏこれらのポリカルボン酸による固体表
面処理はトポリカルボン酸を適当な溶媒に溶鮫し、その
溶液を固体表面に接触せしめることにより行なうことが
できる。

ポリカルボン酸を溶解する溶媒としては、水、メタノー
ルキェタゾール「プロパノール「ジメチルホルムアミド
、ジメチルスルホキシド、含水メタノール、含水ェタノ
ｈルなどがとくに好ましく用いられる。ポリカルボン酸
溶液を固体表面に接触せしめた後は「必要に応じて上記
の溶媒による洗浄あるいは乾燥を行なってもよい。ポリ
カルボン酸が溶媒に不綾の場合には「 ポリカルボン酸
のナトリウム塩、カリウム塩ｔアンモニウム塩などの水
溶液により固体表面を処理した後、塩酸「硫酸「硫酸な
どの水溶液と接触せしめることにより固体表面をポリカ
ルポン酸により被覆することができる。このようにして
ポリカルボン酸により処理された固体表面は、線総秦溶
解活性酵素溶液と接触せせしめ、線総秦溶解活性酵素を
イオン結合させることにより固体表面に線総素溶解活性
を付与することができる。

本発明における線総素溶解活性酵素とは、フィブリンの
溶解に関与する酵素のことをいいトたとえばフィブリン
分解酵素であるプラスミン、ブリノラーゼ、プラスミノ
ーゲン、アクチベータ−であるウロキナーゼ、ストレプ
トキナーゼなどがあげられる。

これら線維素溶解活性酵素は、水あるいはアルコール、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの有
機溶媒と水との混合溶媒に溶解して用いられる。綾織素
溶解活性酵素溶液は、必要に応じてイオン強度やｐＨな
どを調節して用いられる。線総素溶解活性酵素溶液と、
ポリカルボン酸により処理した固体表面とを接触せしめ
るに際しては、温度を０〜５０ｑ０に保ち、必要に応じ
て、櫨拝、振とうなどの手段を用いて表面を更新するの
が好ましい。本発明により線維素溶解活性を付与された
固体表面は、すぐれた抗血栓性を示すので人工血管、カ
テーテル、人工心臓、人工肺、人工腎臓などの血液接触
表面として有用である。

次に実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明する。

なお「線維素溶解活性は、金井、金井編著「臨床検査法
提要」改訂第２７版（金漏出版）Ｗ−ｌｉｏを参照し、
人フィブリノーゲン水溶液にトロンビンを生理食塩水溶
液を添加して作成したフィブリン平板にて測定した。す
なわち、試料片をフィブリン平板上におき、３７℃で２
岬時間放置した後；試料片のまわりのフィブリン膜の溶
解の程度を（長径）×（短径）柵で表わした。同一試料
片についてくりかえし活性測定を行なう場合には、測定
ごとに試料片を浄浄し新しいフィブリン平板にて測定を
行なった。実施例 １ 内径２脚、外径４側のポリ塩化ビニル製のチューフトシ
リコーン製のチューブおよびナイロン製のチューブをそ
れぞれ厚さ２柳に輪切にし、輪切片を次のようにしてカ
ルボキシメチル化セルロースにより処理したのちウロキ
ナ−ゼ溶液と接触せしめた。

カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩２００の９
を水１５泌に溶解し、これにＩＮ−ＨＣＩ水溶液を滴下
して斑を３．５〜４．５に調節した。

このようにして得られたカルボキシメチルセルロース溶
液にポリ塩化ビニル製チューブの輪切片、シリコーン製
チューブの輪切片、およびナイロン製チューフの輪切片
を入れ、７℃で５時間静遣した後、水洗した。引き続き
これらカルボキシメチルセルロースを被覆した３種類の
輪切片をウロキナーゼの生理食塩水溶液（６００単位／
肌）中に浸潰し、７℃で２岬時間静贋した。静贋後、ウ
ロキナーゼがイオン結合した輪切片を生理食塩水で洗浄
し、線総秦溶解活性の測定をくりかえし５回行なった。
その結果は表１に示すとおりであった。表 １ 表１から明らかなように、いずれの材質の輪切片につい
ても、５回目の活性測定ではなお線紙素溶解活性が認め
られた。

実施例 ２ カルボキシメチルセルロースの代りにマレイン酸−メチ
ルビニルェーテル共重合体の５Ｍ％水溶液を用いたほか
は実施例１と同様にしてウロキナーゼがイオン結合した
輪切片を得、実施例１と同様にして線維素溶解活性の測
定を行なった。

その結果は表２に示すとおりであった。表 ２実施例
３ 実施例１の方法に従ってアルギン酸の１％水溶液（ｐＨ
４）を用いてセロフアンフィルム片（直径４側）を処理
しアルギン酸を被覆した後、ウロキナーゼ生理食塩水溶
液と接触せしめた。

ウロキナーゼがイオン結合したセロフアンフイルムは５
回目の活性測定においても線雛素溶解活性（１２１柵）
を示した。実施例 ４ ポｌｊプロピレンフィルム片（直径４柵）をマレイン酸
モノェチルェステルーメチルビニルェーブル共重合体の
１％メタノール溶液中に浸潰して１時間室温で静遣した
。

マレィン酸モノェチルェステルーメチルビニルェーテル
共重合体で被福麹されたフィルム片をとり出し風乾した
後、ウロキナーゼの生理食塩水溶液（６００単位／私）
中に浸渡し、７℃で２独時間静遣した。ウロキナーゼが
イオン結合したフィルム片を生理食塩水で洗浄し、つい
でくりかえし５回活性測定したところ、５回目の活性は
１３２めであった。実施例 ５ 多孔性ガラス（Ｃｏｍｉｎｇ社製）を１％アルギン酸水
溶液と１％ペクチン酸水溶液を混合した水溶液中に浸潰
して、１時間、室温で静直したのち、取り出して風乾し
た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 無機物質表面、天然高分子表面及び合成高分子表面
   からなる群より選ばれた固体表面を、アクリル酸、メタ
   クリル酸、マレイン酸、マレイン酸モノエステル、フマ
   ル酸、アスパラギン酸あるいはグルタミン酸のホモポリ
   マーあるいはコポリマー、デンプン、セルロースあるい
   はポリビニルアルコールのカルボキシメチル誘導体、ア
   ルギン酸及びペクチン酸からなる群より選ばれたポリカ
   ルボン酸により処理したのち線維素溶解活性酵素溶液と
   接触せしめることを特徴とする固体表面に線維素溶解活
   性を付与する方法。