JPS604212B2 - 高分子物質に線溶活性を付与する方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、高分子物質に■合成線溶活性化合物あるいは
‘Ｂー合成線溶活性化合物と線溶活性酵素を結合するこ
とを特徴とする高分子物質に線溶活性を付与する方法に
関する。

近年、医療材料の分野において高分子材料が使われるよ
うになったが、高分子材料を人工血管、カテーテル、人
工腎臓、人工弁、人工肺など直接血液と接する部位に使
用した場合、血栓形成を引き起こすという問題がある。

血栓形成は多くの血液凝固系酵素の関与する一連の複雑
な反応により最終的には、血液中のフィブリノーゲンが
不溶性のフイブリンに変化することを意味している。従
来の抗血栓性材料の開発においては、血液凝固系酵素の
阻害剤として働くへパリンを材料表面に適用し、フィブ
リノーゲンのフィブリンへの変化を阻害することに重点
がおかれていた。本発明者は、一たん生成した不溶性フ
ィブリンを溶解せしめるような（つまり線溶活性を有す
る）高分子材料を関発すべ〈鋭意研究したところ、高分
子物質に特定の合成線溶活性化合物を結合することによ
り、高分子物質に線溶活性を付与できることを見し、出
し、本発明に到達したものである。

本発明における高分子物質とは、分子量の大きい有機あ
るいは無機物質を言い、たとえばポリアミド、ポリエス
テル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリアクリル酸
ェステル、ポリメタクリル酸ェステル、ポリアクリロニ
トリル、ポリァクリルアミド、ボリアクリル酸、ボリメ
タクリル酸、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニ
ルアルコール、シリコン樹脂、ポリ無水マレィン酸、ポ
リエチレンィミンなどの合成有機物質、セルロース、で
んぷん、蛋白質、天然ゴム等の天然有機物質、ガラス、
アスベスト、雲母などの天然無機物質、ポリホスファゼ
ンなどの合成無機物質などがあげられる。

本発明における合成線熔活性化合物とは、Ｎ−フェニル
アントラニル酸、Ｎ−（３ーメチルフェニル）−アント
ラニル酸、Ｎ−（２−メチルフェニル）ーアントラニル
酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、Ｎ−（２ートリフ
ルオルメチルフヱニル）ーアントラニル酸、Ｎ−（３・
５ージトリフルオルメチルフェニル）ーアントラニル酸
、Ｎ−フェニルェチルーアントラニル酸などのアントラ
ニル酸議導体、Ｑ−メチル−ｐークロル桂皮酸、Ｑ−エ
チル−ｍ−クロル桂皮酸、Ｑ−ｎ−プロピルーモ毛皮酸
、Ｑ−ｎ−プロピル−ｍーニトロ桂皮酸、Ｑ−ｎ−プロ
ピル−ｐ−クロルモ筆皮酸、Ｑ−ｎ−プロピルーｍ−ク
ロル桂皮酸、Ｑ−ｎ−プロピル−ｍ−フロム桂皮酸、Ｑ
−ｎープロピルーｐ−ブロムモ毛皮酸、Ｑ−ｎ−プロピ
ル−ｍ−ョードキ車皮酸、Ｑ−ｎ−ブロピル−ｐ−ヨー
ド桂皮酸などのを毛皮酸誘導体、フェニルブタゾン、オ
キシフェンブタゾン、ケブタゾン、トリメタゾンなどの
１・２−ジフエニルー３・５ージオキソーピラゾリジン
誘導体、３−（３−クロルベンジル）ーサリナル酸、３
・５−ジョードサリチル酸、３一（４−ィソプロピルベ
ンジル）−サリチル酸、３−（１１１・３・３−テトラ
メチルブチル）−サリチル酸、３−（１・１−ジメチル
プロピル）ーサリチル酸、３−ｔｅｒｔーブチルサリチ
ル酸、チモチン酸などのサリチル酸誘導体、ニフルム酸
、インドメタシン、３−（３・５−ジトリフルオルメチ
ルアニリノ）−４−チオフェンカルボン酸及び３−（２
−クロム−５−メチルアニリノ）−４−チオフェソカル
ボン酸からなる群より選ばれたフィプリンの溶解に寄与
する合成化合物をいう。

これら合成線熔活・性化合物は、共有結合法、イオン結
合法、物理的吸着法などの方法により高分子物質に結合
される。共有結合法は、合成線溶活性化合物と反応性に
富む官能基を有する高分子物質の間に共有結合を形成せ
しめる方法であり、イオン結合法は、イオン交換基をも
つ高分子物質に合成線港活性化合物をイオン的に結合せ
しめる方法であり、物理的吸着法は高分子物質に物理的
に吸着せしめる方法である。合成線溶活性化合物に対す
る高分子物質側結合点である反応性官能基あるいはイオ
ン交換基は、反応性官能基あるいはイオン交換基を有す
るモノマーを単独重合あるいは共重合することにより導
入される。さらに反応性官能基あるいはイオン交換基は
、天然あるいは合成高分子物質を化学的に変性すること
によっても導入することができる。これら反応性官能基
としては、ジアゾニウム基、アジド基、イソシアネート
基、酸クロリド基、酸無水物基、ィミノ炭酸ェステル基
、アミノ基、カルボキシル基などがあげられる。イオン
交換基としてはスルホネート塩、カルボキシレート塩、
アンモニウム塩などの基があげられる。高分子物質と合
成線溶活性化合物の結合に際しては、合成線港活性化合
物において線溶活性に直接関与する反応基以外のところ
で高分子物質に結合することが必要である。

共有結合法により高分子物質と合成線溶活性化合物を結
合する場合には必要に応じて、両者の間に鎖状構造を挿
入して立体障害による活性消失あるいは活性低下を除く
ことができる。高分子物質に線熔活性を付与する方法と
しては、たとえば高分子物質を目的に応じて粉末、ビー
ズ、フィラメント、布、フィルム、チューフ・透過性膜
など種々の形状に加工した後、その表面に合成線溶活性
化合物を結合する方法、高分子物質に合成線溶活性化合
物を結合させた後、種々の形状に加工する方法等があげ
られる。

本発明における線溶活性酵素とは、フィブリンの溶解に
寄与する酵素を言い、たとえばプラスミン、ブリノラー
ゼ、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼなどがあげられ
る。

これら線溶活性酵素は、前記のごとき共有結合法、イオ
ン結合法、物理的吸着法などの方法により高分子物質に
結合される。

たとえば、高分子物質に合成線溶活性化合物を結合する
際に、合成線溶活性化合物とともに線溶活性酵素を高分
子物質に結合することもできる。また、高分子物質を目
的に応じて種々の形状に加工した後、その表面に線溶活
性酵素を結合することもできるし、あるいは高分子物質
に線溶活性酵素を結合させた後、種々の形状に加工する
こともできる。以上のように、高分子物質に合成線澄清
性化合物を結合させるか、あるいは高分子物質に合成線
溶活性化合物と線溶活性酵素を結合させることにより線
溶活性の付与された高分子物質を得ることができる。

本発明の方法によって線溶活性を付与された高分子物質
は特に抗血栓材料として有用である。

次に実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明する。
なお、線溶活性は金井、金井編著「臨床検査法提要」改
訂増補２５版（金原出版）の−１０５を参照し、人フィ
ブリノーゲン水溶液にトロンビン生理食塩水溶液を添加
して作成したフィブリン平板にて測定した。

すなわち、試料片をフィブリン平板上におき、３７ｑ０
で２独特間放置した後、試料片のまわりのフィブリン膜
の溶解の程度により線溶活性を判定した。実施例 １ １−フエニルー２−（ｐーヒドロキシフヱニル）一３・
５ージオキソー４−ｎ一ブチルーピラゾリジン（オキシ
フェンブタゾン）３２３の９、無水マレィン酸−ブタン
ジオールジビニルェーテル共重合体１６９の９およびジ
メチルホルムアミド１０の‘を試験管に入れ５０ｑｏで
５時間振とうした。

反応物を炉別後、ジメチルホルムアミド、引き続き水で
洗練した。少量の粉末状反応物をフィブリン平板上にお
き、３７０で２独特間放置したところ、試料と接する部
分が溶解しているのが認められた。

比較のため、１−フェニルー２一（ｐ−ヒドロキシフエ
ニル）一３・５−ジオキソー４−ｎ−フチルーピラゾリ
ンを除いて同様な処理を行ったものはフィブリン膜を溶
解しなかった。

実施例 ２ アクリル酸−アクリルアミドーメチレンビスアクリルァ
ミド共重合体を塩化チオニル中で処理して得られたアク
リル酸クロリド共重合体１００の９、フルフェナム酸５
００雌およびトルェン１０の【からなる混合物を５時間
還流した。

反応物をトルェン、アセトン、水、ｐＨ７．５のホスフ
ェートバッフア一、水の順に洗練した。少量の粉末状反
応物をフィブリン平板の上におき、３７０で２独時間放
置したところ、試料と接するフィブリン膜の部分が溶解
しているのが認められた。

比較のため、フルフェナム酸を除いて同様な処理を行っ
たものはフィブリン平板を溶解しなかった。

実施例 ３ 外径５側、内径３側のナイロン６チューブを厚さ２肋に
輪切し、輪切片を洲‐ＨＣＩ水溶液中で３０℃で３０分
間振とうした。

輪切片をよく水洗した後、ｌｏｗｔ％ポリエチレンイミ
ン水溶液とその５倍容量のメタノールとからなる混合溶
液中で３０３０で２時間振とうしてから、ポリエチレン
ィミン水溶液の２倍容量のジシクロヘキシルカーポジイ
ミドのメタノール溶液（メタノール１００の‘に対しジ
シクロヘキシカーボジィミド５夕を溶解したもの）を添
加して３０℃で５時間振とうした。輪切片を含水メタノ
ール、引き続き水で洗練後、乾燥した。次に５ｗｔ％の
無水マレィン酸−メチルビニルェーテル共重合体を含む
アセトン溶液に輪切片を入れ、３０℃で５時間振とうし
た後、輪切片をアセトンで洗膝し、乾燥した。次に輪切
片１コを、ウロキナーゼのホスフェート・バッファー溶
液（ｐＨ６．８ふ ６０■単位／泌）０．２泌とフルフ
ェナム酸のホスフェートバッフア一落液（ｐＨ７．５
５の９／凧【）０．２私とからなる混合液中に入れ、４
℃で４虫時間放置した後、ｐＨ７．５のホスフヱートバ
ッフアー、引き続き生理食塩水で洗液した。

この試料片をフィブリン平板上に置き、３７０で２岬時
間放置したところ、試料片のまわりのフィブリン膜を直
径２比奴の円形に溶解しているのが認められた。

また、上記操作におけるウロキナーゼのホスフェート・
バッファー溶液０．２泌とフルフェナム酸のホスフェー
ト・バッファー溶液０．２の‘とからなる混合液のかわ
りにフルフェナム酸のホスフェート・バッファー溶液（
ｐＨ７．５ ５の９′の【）０．４の‘を用いて同機な
処理を行いフルフヱナム酸を固定化した試料（Ｎｏ．２
）を得た。

さらに、比較のため上記混合液のかわりにウロキナーゼ
のホスフェート・バッファー溶液（ｐＨ６．８ふ ６０
山単位／泌）０．４の【を用いて同様な処理を行いウロ
キナーゼを固定化した試料（Ｎｏ．３）を得た。

ウロキナーゼとフルフェナム酸を固定化した試料（Ｎｏ
．１）及びフルフェナム酸を固定化した試料（Ｎｏ．２
）及びウロキナーゼを固定化した試料（Ｎｏ．入比較例
）をそれぞれフィブリン平板の上に置き、それぞれの輪
切片の中空部に人血糠０．０１叫を注入し、３７０で２
餌時間放置したのち、輪切片のまわりに溶解されたフィ
ブリン膜の直径を測定することにより、それぞれの輪切
片の線溶活性を求めた。

このように測定を１０回くりかえした結果は表１のとお
りであった。

なお、くりかえし‘こ際しては、輪切片をイオン交換水
にて洗総してから人血糠の注入を行った。

表１（）内の数字は保持率を示す。

実施例 ４ 内径３柳、外径５肋のナイロン６チューブの内部をｌｏ
ｏ私／分の流速にて、温度３０００の洲‐ＨＣＩ水溶液
を３び分間循環した。

塩酸を流し出した後、イオン交換水を循環することによ
り洗礁した。塩酸により処理したナィ。ンチューブ内を
１００の‘／分の流速にて１０％ポリエチレンィミン水
溶液１容量部とメタノール５容量部とからなる混合液で
室温で２時間循環した。つぎにジシクロヘキシルカーボ
ジイミドの５Ｗｔ％メタノール溶液２容量部を添加して
引き続き１００の‘／分の流速にて６時間循環した。

チューフ内より処理液を流し出した後、メタノールを循
環することにより洗修した。ポリエチレンィミンにより
処理されたナイロンチューブを４級化するため、臭化エ
チルを細ｔ％含有する含水エタノール溶液（エタノール
と水の重量比１：１）によりチューブ内部を満して３日
間室温で放置した後、処理液を流し出し、ェタ／ールで
洗修した。

つぎに臭素イオン（Ｂｒ−）をヒドロキシドィオン（Ｃ
Ｈ【）に変えるため０．０州−ＮａＯＨ水溶液によりチ
ューブ内部を満して２時間室温で放置した後、水にて洗
練した。４級アンモニウムヒドロキシド基を有するナイ
ロンチューブ内をオキシフェンブタゾンの含水エタノー
ル溶液（オキシフェンブタゾン１夕をエタノール２０私
と水１０汎‘からなる混合液に溶解）ににより満して２
時間室温で放置した。

処理液を流し出し、エタノールで洗練した後、乾燥した
。このようにして得られたナイロンチューブの抗血栓性
を検討するためチャンドラーの回転チュ−ブ法〔チヤン
ドラー、ラボラトリーインベステイゲーション、第７巻
、１１０頁（１９５８王）〕により血栓形成時間を測定
したところ、４粉ご間経過後も血栓形成は認められなか
った。比較のため、未処理ナイロンチューブおよびシリ
コン加工チューブについて血栓形成時間を測定したとこ
ろそれぞれ１０分および２０分以内であった。

実施例 ５ オキシフェンブタゾンの含水エタノール溶液の代わりに
メフェナム酸のエタノール溶解（メフェナム酸１夕をエ
タノール３０机【に溶解）を用い６０ｑ０で２時間放置
した以外は実施例４と同様にしてナイロンチューブを処
理した。

得られたナイロンチューブについて実施例４と同様にし
て抗血栓性を測定したところ、血栓形成時間は４５分以
上であった。

実施例 ６ 内径３側、外径５柳のシリコンチューブ内をフェニルブ
タゾンのアセトン溶液（フェニルブタゾン１夕をアセト
ン２０の‘に溶解）により満して２時間室温で放置した
。

処理液を流し出し、ェタノ−ルで洗総した後乾燥した。
得られたチューブについて実施例４と同じ方法により血
栓形成時間を測定したところ４８分以上であった。実施
例 ７ 市販のポリウレタン（日本ポリウレタン工業、Ｐ−２お
Ｍ）を押出成形して得られた厚さ３００仏のフィルム片
（３肌ｘ３肌）を０．弧−ＮａＯＨ水溶液中６０００で
１び分間処理したのち、０．１Ｎ一日ＣＩ水溶液、引き
続きイオン交換水にて洗総した。

このフィルム片をポリエチレンイミンの２Ｗｔ％メタノ
ール溶液中、２５００で１時間処理したのち、２の％の
ジシクロヘキシルカーボジィミドのメタノール溶液を添
加し、引き続き２５こ０で５時間処理した。得られたフ
ィルム片をメタノールにて洗練したのち、３ｗｔ％の臭
化エチルを含む含水エタノール溶液（エタノールと水が
等重量）にて２５００で３時間処理し、エタノールで洗
徹した、次に臭素イオンを（Ｂｒ）をヒドロキシィオン
（ＯＨ）に変えるため、０．０州−ＮａＯＨ水溶液にて
２５ｑｏで２時間処理し、水にて洗族した。得られたフ
ィルム片を０−チモン酸の含水エタノール溶液（エタノ
ール２０の‘と水１０の‘からなる混合液に０−チモチ
ン酸１夕を熔解することにより調製）により２５００で
２独特間処理したのちエタノールで洗修した。得られた
フィルム片について実施例４と同じ方法により血栓形成
時間を測定したところ、４粉ご以上であった。

実施例 ８酢酸ビニル含有量３２％のエチレン・酢酸ビ
ニル共重合体を押出成形して得られた厚さ３００仏のフ
ィルム片（３ｃ被×３ｃｍ）を水酸化ナトリウムの含水
メタノール溶液（メタノール１６仇【及び水４私からな
る混合液に水酸化ナトリウムを３タ溶解して調製）にて
６０００で２時間処理したのちイオン交換水、０．１容
量％の酢酸を含むメタノール溶液、イオン交換水の順で
洗総した。

このようにして得られたフィルム片を８ーアミノジェチ
ルアセタールの３の重量％ＩＮ−ＨＣＩ水溶液にて６０
つ○で２想時間処理したのちイオン交換水、０．０１Ｎ
−ＮａＯＨ水溶液、イオン交換水の順で洗糠した。この
ようにしてアミノ化されたフィルム片を実施例７と同様
にし臭化エチル、引き続き０．０州‐ＮａＯＨ水溶液に
て処理した。得られたフィルム片をＱ−ｎープロピル−
ｐ−クロルキ室皮酸の含水ジメチルホルムアミド溶液（
Ｑ−ｎ−プロピル−ｐ−クロル桂皮酸１夕をジメチルホ
ルムアミド４０羽と水１０の【からなる濠合液に溶解し
て調製）により２５ｏｏで２時間処理したのちジメチル
ホルムアミド、引き続き水にて洗練した。得られたフィ
ルム片について実施例４と同様の方法により血栓形成時
間を測定したところ４５分以上であった。実施例 ９ 市販のポリエステルェラストマー（東洋紡株式会社、Ｐ
４０Ｈ）を押出成形して得られた厚さ３００ｒのフィル
ム片（３肌×３肌）をＩＮ−ＮａＯＨ水溶液中で１時間
煮沸したのち、０．１Ｎ−ＨＣＩ水溶液、引き続きイオ
ン交換水にて洗糠した。

このフィルム片を実施例６と同様にしてポリエチレンィ
ミン、ジシクロヘキシルカーボジィミド、臭化エチル、
０．０州−ＮａＯＨ水溶液の順で処理した。得られたフ
ィルム片をニフルム酸の含水ジメチルホルムアミド溶液
（ニフルム酸１夕をジメチルホルムアミド４０の‘と水
１０の【力）らなる混合液に溶解して調製）により２５
ｏｏで２独特間処理したのち、ジメチルホルムアミド、
引き続き水にて洗糠した。得られたフィルム片について
実施例４と同様の方法により血栓形成時間を測定したと
ころ４５分以上であった。実施例 １０市販のシリコン
シート片（サンコープラスチツク株式会社、厚さ１柵、
３肌×３伽）をｙ−アミノプロピルトリェトキシシラン
のベンゼン溶液（１０容量％）中、５時間還流したのち
メタノールで洗総した。

このようにしてアミノ化されたシリコンシート片を、イ
ンドメタシン０．３夕及びジシクロヘキシルカーボジイ
ミド０．３夕をメタノール３０の上に溶解して得られた
溶液にて２５ｏｏで５時間処・理したのちメタノールで
洗綾した。得られたシート片について実施例４と同様の
方法により血栓成形時間を測定したところ４５分以上で
あった。実施例 １１、１２インドメタシンにかえて３
一（３・５−ジトリフルオルメチルアニリノ）一４−チ
オフエンカルボン酸あるいは３−（２−ク。

ルー５−メチルアニリノ）−４−チオフェンカルボン酸
を用いた以外は実施例１０と同様にしてシリコンシート
片を処理した。得られたシリコンシート片について実施
例４と同様にして血栓形成時間を測定したところいずれ
も４５分以上であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 高分子物質にアントラニル酸誘導体、桂皮酸誘導体
   、１・２−ジフエニル−３・５−ジオキソピラゾリジン
   誘導体、サリチル酸誘導体、ニフルム酸、インドメタシ
   ン、３−（３・５−ジトリフルオルメチルアニリノ）−
   ４−チオフエンカルボン酸及び３−（２−クロル−５−
   メチルアニリノ）−４−チオフエンカボン酸からなる群
   より選ばれた合成線溶活性化合物を結合することを特徴
   とする高分子物質に線溶活性を付与する方法。 ２ 高分子物質にアントラニル酸誘導体、桂皮酸誘導体
   、１・２−ジフエニル−３・５−ジオキソピラゾリジン
   誘導体、サリチル酸誘導体、ニフルム酸、インドメタシ
   ン、３−（３・５−ジトリフルオルメチルアニリノ）−
   ４−チオフエンカルボン酸及び３−（２−クロル−５−
   メチルアニリノ）−４−チオフエンカルボン酸からなる
   群より選ばれた合成線溶活性化合物と線溶活性酵素を結
   合することを特徴とする高分子物質に線溶活性を付与す
   る方法。