JPS5978124A - エリスロポエチンの製法 - Google Patents
エリスロポエチンの製法Info
- Publication number
- JPS5978124A JPS5978124A JP19044782A JP19044782A JPS5978124A JP S5978124 A JPS5978124 A JP S5978124A JP 19044782 A JP19044782 A JP 19044782A JP 19044782 A JP19044782 A JP 19044782A JP S5978124 A JPS5978124 A JP S5978124A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- erythropoietin
- factor
- ammonium sulfate
- saturation
- give
- Prior art date
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- Pending
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はコロニー形成刺激因子を含まないエリスロボエ
チンの製法に関する。
チンの製法に関する。
エリスロポエチンは細胞再生系である面液幹細縞から赤
血球系細胞への分化に必須の因子であ１失なわれた赤血
球を補って赤血球数を一定水準に維持するため血液幹細
胞により生体の血液状態に応じてエリスロボエチンが産
生さｋる。このエリスロポエチンは末梢血や尿中に含ま
れているが、その含有量は極めて少ない。従ってエリス
ロボエチンを取得するに゛は、これを血漿又は尿から効
率よく単離しなければならない。
血球系細胞への分化に必須の因子であ１失なわれた赤血
球を補って赤血球数を一定水準に維持するため血液幹細
胞により生体の血液状態に応じてエリスロボエチンが産
生さｋる。このエリスロポエチンは末梢血や尿中に含ま
れているが、その含有量は極めて少ない。従ってエリス
ロボエチンを取得するに゛は、これを血漿又は尿から効
率よく単離しなければならない。
一般に用いられているエリスロポエチンの単離法は、血
漿を原料とする場合はＤＥＡＥ−セルロースなどの陰イ
オン交換体を用いた酸性条件下でのクロマトグラフィー
、エタノール分画や陰イオアデツクスゲル濾過法であり
、尿を原料とする場合には安息香酸やエタノールなどの
有機溶媒による沈澱法と血漿の場合に用いた方法との組
合せが行われている。これらの単離法を用いてエリスロ
ポエチンを大規模に取得した場合得られるエリスロボエ
チン中に、顆粒球−単球系白血球細胞の形成を促進する
造血因子であるコロニー形成刺激因子（Ｃ８因子と略記
する）が夾雑物質として混入してくるのを避けられず、
Ｃ８因子を含むエリスロボエチンは血球幹細胞から赤血
球系細胞への分化機能が低い。
漿を原料とする場合はＤＥＡＥ−セルロースなどの陰イ
オン交換体を用いた酸性条件下でのクロマトグラフィー
、エタノール分画や陰イオアデツクスゲル濾過法であり
、尿を原料とする場合には安息香酸やエタノールなどの
有機溶媒による沈澱法と血漿の場合に用いた方法との組
合せが行われている。これらの単離法を用いてエリスロ
ポエチンを大規模に取得した場合得られるエリスロボエ
チン中に、顆粒球−単球系白血球細胞の形成を促進する
造血因子であるコロニー形成刺激因子（Ｃ８因子と略記
する）が夾雑物質として混入してくるのを避けられず、
Ｃ８因子を含むエリスロボエチンは血球幹細胞から赤血
球系細胞への分化機能が低い。
本発明者らはＣ８因子を混入しないエリスロボエチンを
大量に取得する方法を種々研究し、その結果エリスロボ
エチン含有液からエリスロボエチンを単離する際、その
含有液に硫安を２段階に加え、１回目に生じた沈澱を除
去し、２回目に生じた沈澱を回収したところ、得られた
エリスロポエに チク６Ｃ８因子が含まれていないことを見出し、この新
知見に基づいて本発明を完成した。
大量に取得する方法を種々研究し、その結果エリスロボ
エチン含有液からエリスロボエチンを単離する際、その
含有液に硫安を２段階に加え、１回目に生じた沈澱を除
去し、２回目に生じた沈澱を回収したところ、得られた
エリスロポエに チク６Ｃ８因子が含まれていないことを見出し、この新
知見に基づいて本発明を完成した。
本発明はエリスロポエチン含有液よりエリスロボエチン
を単離する際、その含有液に硫安を５０〜６０％飽和に
添加して生じた沈澱を除去し、残りの上清に硫安を７５
〜８５％―飽和に添加し、生じた沈澱を回収するのであ
る。
を単離する際、その含有液に硫安を５０〜６０％飽和に
添加して生じた沈澱を除去し、残りの上清に硫安を７５
〜８５％―飽和に添加し、生じた沈澱を回収するのであ
る。
本発明は原料としてエリスロボエチンを含むもの例えば
尿、血漿（血清を含む）、胎盤抽出物などを使用するが
、これらのエリスロボエチン含有液のなかでも貧血患者
（好ましくは再生不良性貧血患者）の尿と血漿が好まし
い。このほか人血漿のフィブリノーゲン、γ−グロブリ
ンおよびアルブミンなどの生物学的製剤の製造に用いら
れていの精製度について制限はないが、例えばホローフ
ァイバー装ｖＯを用いて前処理したものが好ましい。
尿、血漿（血清を含む）、胎盤抽出物などを使用するが
、これらのエリスロボエチン含有液のなかでも貧血患者
（好ましくは再生不良性貧血患者）の尿と血漿が好まし
い。このほか人血漿のフィブリノーゲン、γ−グロブリ
ンおよびアルブミンなどの生物学的製剤の製造に用いら
れていの精製度について制限はないが、例えばホローフ
ァイバー装ｖＯを用いて前処理したものが好ましい。
本発明の製法はエリスロボエチン含有液を例えばトリス
・ハイドロオキシメチル・アミノメタンでｐＨ５〜８に
調整し、続いて硫安を水冷下で徐々に添加して５０〜６
０％飽和にする。これを約１〜３時間静置し、生じた沈
澱を１０，０００〜１５，０００ＸＰの遠心により除去
し、残りの上清に硫安を水冷下で徐々に添加してその―
飽和度を７５〜８５％にする。これを約１〜３時間静置
し、生じた沈澱をｌｏ、ｏ ｏ ｏ〜１５，０ＯＯＸＰ
の遠心により回収する。回収した沈澱を少量の蒸留水に
溶解してセファデックス（ファルマシア社製）によるゲ
ル濾過を行なう。
・ハイドロオキシメチル・アミノメタンでｐＨ５〜８に
調整し、続いて硫安を水冷下で徐々に添加して５０〜６
０％飽和にする。これを約１〜３時間静置し、生じた沈
澱を１０，０００〜１５，０００ＸＰの遠心により除去
し、残りの上清に硫安を水冷下で徐々に添加してその―
飽和度を７５〜８５％にする。これを約１〜３時間静置
し、生じた沈澱をｌｏ、ｏ ｏ ｏ〜１５，０ＯＯＸＰ
の遠心により回収する。回収した沈澱を少量の蒸留水に
溶解してセファデックス（ファルマシア社製）によるゲ
ル濾過を行なう。
本製法はエリスロポエチン含有液よりエリスロポエチン
を単離する際のいずれの処理工程にも組み入れることが
できる。このようにして得られたエリスロボエチンは、
さらに精製したのち、除菌濾過、分注、凍結乾燥などを
行ない、医薬品として提供される。
を単離する際のいずれの処理工程にも組み入れることが
できる。このようにして得られたエリスロボエチンは、
さらに精製したのち、除菌濾過、分注、凍結乾燥などを
行ない、医薬品として提供される。
本発明の製法はエリスロポエチンを大規模に単離する際
、従来法ではどうしても免れえなかったＣ８因子の混入
を確実に防止できるから、品質の良いエリスロボエチン
を大量に取得しうる効果がある。
、従来法ではどうしても免れえなかったＣ８因子の混入
を確実に防止できるから、品質の良いエリスロボエチン
を大量に取得しうる効果がある。
本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明はこ
れらに限定されるものではない。
れらに限定されるものではない。
実施例１
再生不良性貧血患者尿１５／をセライトを用いて濾過し
、不溶物を除去したものをホローファイバー（アミコン
社製）を用いて約１００倍に濃縮する。この患者尿をト
リス・ハイドロオキシメチル・アミノメタンでｐＨ７，
０に調整したのち、硫安を水冷下で徐々に添加し、これ
を５８％飽和にして約２時間静置し、生じた沈澱をｘｏ
、０ＯＯＸＰの遠心により除去する。続いて残りの上清
に硫安を水冷下で徐々に添加し、その−飽和度を８０％
にして約２時間静置し、生じた沈澱を１３，０００ Ｘ
Ｐの遠心により回収する。
、不溶物を除去したものをホローファイバー（アミコン
社製）を用いて約１００倍に濃縮する。この患者尿をト
リス・ハイドロオキシメチル・アミノメタンでｐＨ７，
０に調整したのち、硫安を水冷下で徐々に添加し、これ
を５８％飽和にして約２時間静置し、生じた沈澱をｘｏ
、０ＯＯＸＰの遠心により除去する。続いて残りの上清
に硫安を水冷下で徐々に添加し、その−飽和度を８０％
にして約２時間静置し、生じた沈澱を１３，０００ Ｘ
Ｐの遠心により回収する。
回収した沈澱を少量の蒸留水に溶解し、セファデックス
Ｇ−２５（ファルマシア社製）のカラムにかけてエリス
ロボエチンの精製品を得る。得られた精製エリスロボエ
チンの力価は輸血多血症マウスを用いる方法で測定して
３．６００単位であり、原料尿１５ｒから約２１０ ｍ
９を得た。またこの精製エリスロポエチンにはＣ８因子
が全く含まれていなかった。
Ｇ−２５（ファルマシア社製）のカラムにかけてエリス
ロボエチンの精製品を得る。得られた精製エリスロボエ
チンの力価は輸血多血症マウスを用いる方法で測定して
３．６００単位であり、原料尿１５ｒから約２１０ ｍ
９を得た。またこの精製エリスロポエチンにはＣ８因子
が全く含まれていなかった。
実施例２
貧血患者尿５１をセライトを用いて濾過し、不溶物を除
去したものをホローファイバー（アミコン社製）を用い
て約１００倍に濃縮する。この患者尿をトリス・ハイド
ロオキシメチル・アミノメタンでｐＨ７，５に調製した
のち、硫安を水冷下で徐々に添加し、これを５５％飽和
にして約２時間静置し、生じた沈澱を１３，０ＯＯＸｆ
！の遠心により除去する。続いて残りの上清に硫安を水
冷下で徐々に添加し、そのＱ飽和度を８０％にして約２
時間静置し、生じた沈澱を１３，０ＯＯＸＰの遠心によ
り回収する。
去したものをホローファイバー（アミコン社製）を用い
て約１００倍に濃縮する。この患者尿をトリス・ハイド
ロオキシメチル・アミノメタンでｐＨ７，５に調製した
のち、硫安を水冷下で徐々に添加し、これを５５％飽和
にして約２時間静置し、生じた沈澱を１３，０ＯＯＸｆ
！の遠心により除去する。続いて残りの上清に硫安を水
冷下で徐々に添加し、そのＱ飽和度を８０％にして約２
時間静置し、生じた沈澱を１３，０ＯＯＸＰの遠心によ
り回収する。
回収した沈澱は少量の蒸留水に溶解し、セファデツクス
Ｇ−２５０カラムにかけて精製し、これを凍結乾燥して
精製エリスロボエチンの乾燥品を得た。得られた精製エ
リスロポエチンの力価は３゜５００単位であり、原料尿
５１がら約３８叩を得た。
Ｇ−２５０カラムにかけて精製し、これを凍結乾燥して
精製エリスロボエチンの乾燥品を得た。得られた精製エ
リスロポエチンの力価は３゜５００単位であり、原料尿
５１がら約３８叩を得た。
またこの精製エリスロポエチンにはＥＩ因子が全く含ま
れていなかった。
れていなかった。
１、事件の表示 特願昭５７−１９０４４７号２、発明
の名称 エリスルホニチンの製法３、補正する者 事件との関係 出 願 人 株式会社ミドリ十字 ４、代理人 ５、指令又は通知の日付 自 発 昭和 年 月
日６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容 明細書第６頁９行目と７頁４行目の「５」ｆｒ１５Ｊに
訂正し、同７頁４行目の「８８」をｒ８８０Ｊに訂正し
、同７頁５行目の田Ｉ」「Ｏ８」に訂正する。
の名称 エリスルホニチンの製法３、補正する者 事件との関係 出 願 人 株式会社ミドリ十字 ４、代理人 ５、指令又は通知の日付 自 発 昭和 年 月
日６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容 明細書第６頁９行目と７頁４行目の「５」ｆｒ１５Ｊに
訂正し、同７頁４行目の「８８」をｒ８８０Ｊに訂正し
、同７頁５行目の田Ｉ」「Ｏ８」に訂正する。
Claims (1)
- エリスロボエチン含有液からエリスロボエチンを単離す
る際、その含有液に硫安を５０〜６０％飽和に添加して
生じた沈澱を除去し、残りの上清に硫安を７５〜８５％
・飽和に添加し、生じた沈澱を回収することを特徴とす
るエリスロボエチンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19044782A JPS5978124A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | エリスロポエチンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19044782A JPS5978124A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | エリスロポエチンの製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5978124A true JPS5978124A (ja) | 1984-05-04 |
Family
ID=16258279
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19044782A Pending JPS5978124A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | エリスロポエチンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5978124A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100567448B1 (ko) * | 2003-11-05 | 2006-04-04 | 주식회사 인투젠 | 형질전환 동물의 유즙 전처리방법 및 이를 통한 인체단백질의 정제방법 |
| US7468351B2 (en) * | 2003-12-01 | 2008-12-23 | Bioggnerix Ag | Erythropoietin solution formulation |
-
1982
- 1982-10-28 JP JP19044782A patent/JPS5978124A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100567448B1 (ko) * | 2003-11-05 | 2006-04-04 | 주식회사 인투젠 | 형질전환 동물의 유즙 전처리방법 및 이를 통한 인체단백질의 정제방법 |
| US7468351B2 (en) * | 2003-12-01 | 2008-12-23 | Bioggnerix Ag | Erythropoietin solution formulation |
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