JPS5988423A - ヒト腫瘍細胞変性因子の製造方法 - Google Patents
ヒト腫瘍細胞変性因子の製造方法Info
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- JPS5988423A JPS5988423A JP57197242A JP19724282A JPS5988423A JP S5988423 A JPS5988423 A JP S5988423A JP 57197242 A JP57197242 A JP 57197242A JP 19724282 A JP19724282 A JP 19724282A JP S5988423 A JPS5988423 A JP S5988423A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法に関する。
本発明者等は広範囲に各種動物細胞を培養中、ヒト胎児
線維芽細胞の培養液にヒトガン細胞を縮退させる作用の
あることを発見し、本培養液中の有効成分について鋭意
研究した結果新規なヒト腫瘍細胞障碍因子［以下Ｔ Ｄ
Ｆ （Ｔｕｍｏｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｆａ
ｃｔｏｒ）と略称］の抽出精製に成功した。
線維芽細胞の培養液にヒトガン細胞を縮退させる作用の
あることを発見し、本培養液中の有効成分について鋭意
研究した結果新規なヒト腫瘍細胞障碍因子［以下Ｔ Ｄ
Ｆ （Ｔｕｍｏｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｆａ
ｃｔｏｒ）と略称］の抽出精製に成功した。
ＴＤＦはヒト正常細胞また異種動物のガン細胞には何ら
作用せず、ヒトのガン細胞にのみ特異的に縮退作用を発
揮し、しかもその効果′はヒト白血球インターフェロン
により増強されることを発見した。さらに本発明者等は
ヒト胎児線維芽細胞に効率良＜ＴＤＦを産生させるため
にＴＤＦ誘導剤について検討を行なった結果、ヒトガン
細胞とヒト線維芽細胞を混合培養することによりＴＤＦ
が高濃度に培養液中に産生ずることを見出した。
作用せず、ヒトのガン細胞にのみ特異的に縮退作用を発
揮し、しかもその効果′はヒト白血球インターフェロン
により増強されることを発見した。さらに本発明者等は
ヒト胎児線維芽細胞に効率良＜ＴＤＦを産生させるため
にＴＤＦ誘導剤について検討を行なった結果、ヒトガン
細胞とヒト線維芽細胞を混合培養することによりＴＤＦ
が高濃度に培養液中に産生ずることを見出した。
本発明はこれらの知見に基づくもので、ヒト胎児線維芽
細胞培養液を水に対し透析し、透析内液を酸性条件下に
吸着剤と接触させて有効成分を吸着させ、次いで吸着剤
から弱アルカリ性水溶液で有効成分を抽出し、抽出液を
熱処理後ゲル濾過して有効成分を分取することを特徴と
するヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法、ヒト胎児線維芽
細胞とヒト上皮性ガン細胞との混合培養液を水に対して
透析し、透析内液を酸性条件下に吸着剤と接触させて有
効成分を吸着させ、次いで吸着剤から弱アルカリ性水溶
液で有効成分を抽出し、抽出液を熱処理後ゲル濾過して
有効成分を分取することを特徴とするヒト腫瘍細胞障碍
因子の製造法、およびヒト線維芽細胞培養液またはヒト
胎児線維芽細胞とヒト上皮性ガン細胞との混合培養液を
水に対して透析し、透析内液を酸性条件下に吸着剤と接
触させて有効成分を吸着させ、次いで吸着剤から弱アル
カリ性水溶液で有効成分を抽出し、抽出液を熱処理後ゲ
ル濾過して有効成分を分取し、これにヒト白血球インタ
ーフェロンを添加すること特徴とする作用の増強された
ヒｌ−１ｆｆｊ瘍細胞障碍因子含有剤の製造方法である
。
細胞培養液を水に対し透析し、透析内液を酸性条件下に
吸着剤と接触させて有効成分を吸着させ、次いで吸着剤
から弱アルカリ性水溶液で有効成分を抽出し、抽出液を
熱処理後ゲル濾過して有効成分を分取することを特徴と
するヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法、ヒト胎児線維芽
細胞とヒト上皮性ガン細胞との混合培養液を水に対して
透析し、透析内液を酸性条件下に吸着剤と接触させて有
効成分を吸着させ、次いで吸着剤から弱アルカリ性水溶
液で有効成分を抽出し、抽出液を熱処理後ゲル濾過して
有効成分を分取することを特徴とするヒト腫瘍細胞障碍
因子の製造法、およびヒト線維芽細胞培養液またはヒト
胎児線維芽細胞とヒト上皮性ガン細胞との混合培養液を
水に対して透析し、透析内液を酸性条件下に吸着剤と接
触させて有効成分を吸着させ、次いで吸着剤から弱アル
カリ性水溶液で有効成分を抽出し、抽出液を熱処理後ゲ
ル濾過して有効成分を分取し、これにヒト白血球インタ
ーフェロンを添加すること特徴とする作用の増強された
ヒｌ−１ｆｆｊ瘍細胞障碍因子含有剤の製造方法である
。
本発明におけるＴＤＦの抽出精製法の骨子は次のとおり
である。ヒト胎児線維芽細胞培養液またはヒト胎児線維
芽細胞とヒトガン細胞の混合培養液を水に対して十分透
析して低分子物質を除去した後酸性条件下で吸着剤と接
触、吸着させこの吸着剤を弱アルカリ性水溶液で処理し
て有効成分る抽出し、ＴＤＦが失活しない程度で熱処理
し生じた不純物の沈澱を除いた後ゲル濾過法によりＴＤ
Ｆを分離溶出する。
である。ヒト胎児線維芽細胞培養液またはヒト胎児線維
芽細胞とヒトガン細胞の混合培養液を水に対して十分透
析して低分子物質を除去した後酸性条件下で吸着剤と接
触、吸着させこの吸着剤を弱アルカリ性水溶液で処理し
て有効成分る抽出し、ＴＤＦが失活しない程度で熱処理
し生じた不純物の沈澱を除いた後ゲル濾過法によりＴＤ
Ｆを分離溶出する。
本発明に用いるヒト胎児線維芽細胞は次のようにして得
ることができる。
ることができる。
ヒト妊娠初期の流産胎児を等張塩類溶液中で細切し、次
いでトリプシンで消化した後、細胞濾過器を通して単細
胞浮遊液を得、これを遠心分離して細胞を集める。この
細胞を細胞培養液中で培養し、−週間後に増殖してくる
初代ヒト胎児線維芽細胞を得る。これに用いる培養液は
１０％（Ｖ、７Ｖ ：ｊ牛胎児血清（米国、メリーラン
ド州、エム・エイ・バイオプロダクツ製）を含むイーグ
ル−Ｍ’ＥＭ培地［東京、日水製薬株製〕、ダルベツコ
変法イーグル−Ｍ Ｅ Ｍ培地および１９９培地（同上
製）が適している。
いでトリプシンで消化した後、細胞濾過器を通して単細
胞浮遊液を得、これを遠心分離して細胞を集める。この
細胞を細胞培養液中で培養し、−週間後に増殖してくる
初代ヒト胎児線維芽細胞を得る。これに用いる培養液は
１０％（Ｖ、７Ｖ ：ｊ牛胎児血清（米国、メリーラン
ド州、エム・エイ・バイオプロダクツ製）を含むイーグ
ル−Ｍ’ＥＭ培地［東京、日水製薬株製〕、ダルベツコ
変法イーグル−Ｍ Ｅ Ｍ培地および１９９培地（同上
製）が適している。
ＴＤＦを含むヒト胎児線維芽細胞培養液は次のようにし
て得ることができる。初代ヒト胎児線維芽細胞をトリプ
シン処理により培養器から細胞をはがし、細胞濃度を１
〜５×１０ 個／ ｍｅに調整し新たに培養器に移植し
３７℃で培養する。こ＼で用いる培養器は動物組織培養
用シャーレ、フラスコ及びローラーボトルまたはサイド
デツクス（７アルマシヤ製）の様なビーズに細胞を付着
させたスピンナーフラスコが適している。ヒトガン細胞
と混合培養する場合は培養液中のヒト胎児線維芽細胞は
５×１ｏ 個／ｒｎｌとし、ガン細胞の濃度は１〜５×
１０ 個／ｄとするのがよい。ここで用いることのでき
るヒトガン細胞は継代可能な樹立株である。例へばＨｅ
１ａ細胞ＣＨｅ１ａ、 Ｃ（Ｊ２）。
て得ることができる。初代ヒト胎児線維芽細胞をトリプ
シン処理により培養器から細胞をはがし、細胞濃度を１
〜５×１０ 個／ ｍｅに調整し新たに培養器に移植し
３７℃で培養する。こ＼で用いる培養器は動物組織培養
用シャーレ、フラスコ及びローラーボトルまたはサイド
デツクス（７アルマシヤ製）の様なビーズに細胞を付着
させたスピンナーフラスコが適している。ヒトガン細胞
と混合培養する場合は培養液中のヒト胎児線維芽細胞は
５×１ｏ 個／ｒｎｌとし、ガン細胞の濃度は１〜５×
１０ 個／ｄとするのがよい。ここで用いることのでき
るヒトガン細胞は継代可能な樹立株である。例へばＨｅ
１ａ細胞ＣＨｅ１ａ、 Ｃ（Ｊ２）。
ＫＢ細胞（ＩＣＢＣＣＬ １７） 、Ｆ Ｌ細胞（ヒト
の正常前膜細胞由来）等が用いられる。ヒト胎児線維芽
細胞のみを培養した場合約−週間で細胞は培養壁全面に
広がった時にＴＤＦを含む培養液を採取する。
の正常前膜細胞由来）等が用いられる。ヒト胎児線維芽
細胞のみを培養した場合約−週間で細胞は培養壁全面に
広がった時にＴＤＦを含む培養液を採取する。
培養液を採取した後のヒト胎児線維芽細胞はくり返し継
代培養をつづけてこの目的に使用可能である。まずトリ
プシン処理により細胞をはがし前記の細胞濃度で新し゛
い培養器に移植することにより細胞が増殖能力を失うま
で再使用できる。このようにしＣ得られるＴＤＦを含む
培養液を濾過して不溶性異物を除去し、水に対して十分
透析し、透析性の低分子物質を除いた後、たとえば希塩
酸で酸性にし適当な吸着剤に接触させる。吸着剤として
はカオリン、ベントナイト、活性白土等を用いることが
できる。吸着操作は上記溶液に吸着剤を添加、攪拌、接
触させ、有効成分を吸着させることによって行われる。
代培養をつづけてこの目的に使用可能である。まずトリ
プシン処理により細胞をはがし前記の細胞濃度で新し゛
い培養器に移植することにより細胞が増殖能力を失うま
で再使用できる。このようにしＣ得られるＴＤＦを含む
培養液を濾過して不溶性異物を除去し、水に対して十分
透析し、透析性の低分子物質を除いた後、たとえば希塩
酸で酸性にし適当な吸着剤に接触させる。吸着剤として
はカオリン、ベントナイト、活性白土等を用いることが
できる。吸着操作は上記溶液に吸着剤を添加、攪拌、接
触させ、有効成分を吸着させることによって行われる。
つぎに吸着剤を傾しゃ法、濾過法、遠心分離法等の適当
な方法で溶液から分離した後、吸着剤から弱アルカリ性
水溶、例えばアンモニア水等で有効成分を抽出し、抽出
液を希塩酸などで中性にし熱処理により不純物を沈澱さ
せる。熱処理の操作は３０〜６０分間６０°＝ｓｏ０ｃ
に保持する方法が好ましい。沈澱物を除いた後、限外濾
過、減圧蒸留もしくは凍結乾燥などにより抽出液の濃縮
を行ない、これをセファデックスＧ−１００のゲルを充
填したカラムにかけ、アルブミン溶出位の前部位に流出
されてくる活性画分を集めＴＤＦを得る。
な方法で溶液から分離した後、吸着剤から弱アルカリ性
水溶、例えばアンモニア水等で有効成分を抽出し、抽出
液を希塩酸などで中性にし熱処理により不純物を沈澱さ
せる。熱処理の操作は３０〜６０分間６０°＝ｓｏ０ｃ
に保持する方法が好ましい。沈澱物を除いた後、限外濾
過、減圧蒸留もしくは凍結乾燥などにより抽出液の濃縮
を行ない、これをセファデックスＧ−１００のゲルを充
填したカラムにかけ、アルブミン溶出位の前部位に流出
されてくる活性画分を集めＴＤＦを得る。
本発明によって得られるＴＤＦの性状は淡黄色粉末、水
に可溶、メタノール、エタノールに難溶、エーテノペア
セトン、ベンゼンに不溶、紫外部最大吸収は２７５〜２
８０ ｎｍに存在するっ元素分析による窒素含量は１０
．１〜１５．８％、ニンヒドリン、フェノール硫酸、ビ
ユレット反応などいずれも陽性、非透析性で糖蛋白質と
推定される。ＴσＦは以下に示すような生物的性質を示
す。ＴＤＦを１〜１００μ２を水溶液として培養ヒトガ
ン細胞培養液に加えるとたとえば第１図に示すようにガ
ン細胞縮退作用を示す。またこの時にＴ Ｄ Ｆと同時
にヒトインターフェロン１〜１００１） Ｉ Ｕを加え
るとガン細胞はさらに縮退する（第２Ａ。
に可溶、メタノール、エタノールに難溶、エーテノペア
セトン、ベンゼンに不溶、紫外部最大吸収は２７５〜２
８０ ｎｍに存在するっ元素分析による窒素含量は１０
．１〜１５．８％、ニンヒドリン、フェノール硫酸、ビ
ユレット反応などいずれも陽性、非透析性で糖蛋白質と
推定される。ＴσＦは以下に示すような生物的性質を示
す。ＴＤＦを１〜１００μ２を水溶液として培養ヒトガ
ン細胞培養液に加えるとたとえば第１図に示すようにガ
ン細胞縮退作用を示す。またこの時にＴ Ｄ Ｆと同時
にヒトインターフェロン１〜１００１） Ｉ Ｕを加え
るとガン細胞はさらに縮退する（第２Ａ。
２Ｂ、３Ａ、３Ｂ図参照）。上記作用はＫＢ。
Ｈｅ１ａ細胞のようなヒト上皮性ガン細胞に特異的で、
マウスＬ細胞には以上のような操作を行なっても縮退作
用は認められない３）以下実施例によってさらに詳しく
説明する。
マウスＬ細胞には以上のような操作を行なっても縮退作
用は認められない３）以下実施例によってさらに詳しく
説明する。
実施例１
ヒト胎児線維芽細胞６日目の培養液を集めザイン濾過器
にて濾過して細胞残渣などの不溶性異物を除いた後セル
ロースチューブに入れ、純水に対して一夜透析を行った
後ＩＮ−塩酸で培養液のｐＨを４．３に調整し液量の２
％のカオリン［大阪、和光紬薬■製］を添加し２時間攪
拌接触させた後２時間静置し、大部分の上清を傾しゃし
て除きカオリンをメツチェ上に減圧済過して採取する。
にて濾過して細胞残渣などの不溶性異物を除いた後セル
ロースチューブに入れ、純水に対して一夜透析を行った
後ＩＮ−塩酸で培養液のｐＨを４．３に調整し液量の２
％のカオリン［大阪、和光紬薬■製］を添加し２時間攪
拌接触させた後２時間静置し、大部分の上清を傾しゃし
て除きカオリンをメツチェ上に減圧済過して採取する。
カオリンの含湿重量の１．５倍量の１％アンモニア水テ
３回抽出を行ない、抽出液を合してＩＮ−塩酸でｐＨを
７．０とし、８０°で３０分間加温する。加温後生じた
沈澱を遠心分離して除き上浦液を純水に対して透析した
後減圧蒸留により水を留去、残留物を少量の水に溶解し
、セファデックスＧ−１００［東京、７アルマシア・ジ
ャパンＭ）のカラムにかけ溶出液を分画しガン細胞縮退
活性を指標としてアルブミン溶出位の前溶出位の活性ピ
ークを集め、凍結乾燥してＴＤＦを得る。収量は培養液
１１当り約１．２ ｍｆである、。
３回抽出を行ない、抽出液を合してＩＮ−塩酸でｐＨを
７．０とし、８０°で３０分間加温する。加温後生じた
沈澱を遠心分離して除き上浦液を純水に対して透析した
後減圧蒸留により水を留去、残留物を少量の水に溶解し
、セファデックスＧ−１００［東京、７アルマシア・ジ
ャパンＭ）のカラムにかけ溶出液を分画しガン細胞縮退
活性を指標としてアルブミン溶出位の前溶出位の活性ピ
ークを集め、凍結乾燥してＴＤＦを得る。収量は培養液
１１当り約１．２ ｍｆである、。
実施例２
ヒト胎児線維芽細胞とＫ Ｂ細胞の混合培養液を集め無
菌濾過器にかけ不溶物を除き、セルローズチューブに入
れ純水で一夜透析した後ｐＨを４，３として液量の２％
のカオリンを加えてＴ Ｄ Ｆを吸若、カオリンを１％
アンモニア水で抽出し、抽出液をｐＨ７，０に調整し、
７０°Ｃで４０分間加温し、生じた沈澱を除去し、純水
で透析後減圧下に水を留去して残留物をセファデックス
Ｇ−１００のカラムにかけガン細胞縮退活性を示すピー
クを分取し凍結乾燥してＴＤＦを得る。収量は培養液１
．０ｅ当り約２，３ｙ＋ｙである。
菌濾過器にかけ不溶物を除き、セルローズチューブに入
れ純水で一夜透析した後ｐＨを４，３として液量の２％
のカオリンを加えてＴ Ｄ Ｆを吸若、カオリンを１％
アンモニア水で抽出し、抽出液をｐＨ７，０に調整し、
７０°Ｃで４０分間加温し、生じた沈澱を除去し、純水
で透析後減圧下に水を留去して残留物をセファデックス
Ｇ−１００のカラムにかけガン細胞縮退活性を示すピー
クを分取し凍結乾燥してＴＤＦを得る。収量は培養液１
．０ｅ当り約２，３ｙ＋ｙである。
ＴＤＦは淡黄色無定形の粉末で、水に可溶、メタノール
、エタノールには殆んど溶解しない。エーテル、アセト
ン、ベンゼンには全く不溶。紫外部吸収：λｍａｘ２７
５〜２８０ｎｍ、 ニンヒドリン反応、フェノール硫
酸反応、ビユレット反応側れも陽性である。また水に対
して非透析性である。
、エタノールには殆んど溶解しない。エーテル、アセト
ン、ベンゼンには全く不溶。紫外部吸収：λｍａｘ２７
５〜２８０ｎｍ、 ニンヒドリン反応、フェノール硫
酸反応、ビユレット反応側れも陽性である。また水に対
して非透析性である。
実施例３
インターフェロンのＴＤＦガン細胞縮退作用に対する増
強効果を次のような方法で調べた。
強効果を次のような方法で調べた。
内径３ ｃｍのプラスチックペトリー皿に１．２１−１
．４Ｘ１０ ／ｍｅのガン細胞培養液２ｍｅを加え一
夜り７℃、５％炭酸ガスふらん器で培養し、これにＴＤ
Ｆ１０μ２を加えて培養し、その上にヒト白血球インタ
ーフェロン〔京都赤十字血液センターから入手、Ｄｙｅ
−ＬＪｐｔａｋｅ法（今西ら： ＢｉｋｅｎＪｏｕｒｎ
ａｌ ３４１３１９５ （１９８１） ）で力価を測定
〕液を加え２−３日間培養した後、ギムザ液で染色し、
このシャーレを写真に撮り、マヌユアル・オプテイカル
・ピクチュア・アナライジング・システム（西Ｌ ミュ
ンヘン、コントロン社ＭＯＰＡＭＯ３）にかけて細胞破
壊領域の比率（至）を計測する。各試験は２〜４回くり
返し行なった。その結果を第１表にまとめた、を−検定
の結果Ｐ−値０．０５以下を有義とする。
．４Ｘ１０ ／ｍｅのガン細胞培養液２ｍｅを加え一
夜り７℃、５％炭酸ガスふらん器で培養し、これにＴＤ
Ｆ１０μ２を加えて培養し、その上にヒト白血球インタ
ーフェロン〔京都赤十字血液センターから入手、Ｄｙｅ
−ＬＪｐｔａｋｅ法（今西ら： ＢｉｋｅｎＪｏｕｒｎ
ａｌ ３４１３１９５ （１９８１） ）で力価を測定
〕液を加え２−３日間培養した後、ギムザ液で染色し、
このシャーレを写真に撮り、マヌユアル・オプテイカル
・ピクチュア・アナライジング・システム（西Ｌ ミュ
ンヘン、コントロン社ＭＯＰＡＭＯ３）にかけて細胞破
壊領域の比率（至）を計測する。各試験は２〜４回くり
返し行なった。その結果を第１表にまとめた、を−検定
の結果Ｐ−値０．０５以下を有義とする。
上記表で明らかなようにヒト胎児線維芽細胞のガン細胞
障碍因子の活性はヒト白血球インターフェロンにより増
強された、また異種賜物ガン細胞であるネズミガン細胞
Ｌ９２９には上記障碍因子は活性を示さず、またヒト白
血球インターフェロンも増強作用を示さなかった。、 第 １ 表 効果 ０ ２．７０＋１．４５ − ＫＢ １．０００ ８．１
３±８．５２ ｐ＜ｏ、ｏｓｌｏ、 ｏｏｏ
ｕ、ｔｏ ＋Ｉｏ、ｓｓ ｐ＜０．００１０
８．００＋１．５４ −ＨｅＬａ １．０
００ ５．１３±１．６７ ｎ、 ｓ、 ””１
０．０００ ９．４８±２．７７ ｐ＜０．０１０
１．６０＋０．１４ −＋ ＦＬ １，０００ ５．９０ １．７１
ｐ＜ｏ、ｏｓ＋ ＩＱ ０００ ８．３５ １．０３
ｐ＜０．００１０ １．２５±０．３１ ｈｕｍａｎ １００ ０．９３ ＋ＩＯ，４０
ｎ、 ｓ。
障碍因子の活性はヒト白血球インターフェロンにより増
強された、また異種賜物ガン細胞であるネズミガン細胞
Ｌ９２９には上記障碍因子は活性を示さず、またヒト白
血球インターフェロンも増強作用を示さなかった。、 第 １ 表 効果 ０ ２．７０＋１．４５ − ＫＢ １．０００ ８．１
３±８．５２ ｐ＜ｏ、ｏｓｌｏ、 ｏｏｏ
ｕ、ｔｏ ＋Ｉｏ、ｓｓ ｐ＜０．００１０
８．００＋１．５４ −ＨｅＬａ １．０
００ ５．１３±１．６７ ｎ、 ｓ、 ””１
０．０００ ９．４８±２．７７ ｐ＜０．０１０
１．６０＋０．１４ −＋ ＦＬ １，０００ ５．９０ １．７１
ｐ＜ｏ、ｏｓ＋ ＩＱ ０００ ８．３５ １．０３
ｐ＜０．００１０ １．２５±０．３１ ｈｕｍａｎ １００ ０．９３ ＋ＩＯ，４０
ｎ、 ｓ。
十
ｈｅｐａｔｏｍａ １．０００ ７．９５ ５．
６３ ｐ＜０．０５＋ １０．０００ ’１７．０８ ２．２３ ｐ＜
０．０００１０ ０．７０ ＋ ０．３４
−Ｌ９゜９ＬＯＯＯ１，１５±０４１３ １０、０００ ０．９０±０．５９ 米 ＳＤ：標準偏差 米※ ｎ、ｓ、：有意差なし
６３ ｐ＜０．０５＋ １０．０００ ’１７．０８ ２．２３ ｐ＜
０．０００１０ ０．７０ ＋ ０．３４
−Ｌ９゜９ＬＯＯＯ１，１５±０４１３ １０、０００ ０．９０±０．５９ 米 ＳＤ：標準偏差 米※ ｎ、ｓ、：有意差なし
第１図はヒトガン細胞（Ｋ Ｂ ）培養液にＴＤＦを加
えたときのガン細胞ｔｌＡＡ作用を示す写真で、第２１
３図は同細胞の培養液にＴＩ）Ｆと同時にヒトインター
フェロンを加えたときのガン細胞縮退作用を示す写真（
１００倍）、第２Ａ図は無添加の対照写真（１００倍）
である。第３Ｂ図はヒトガン細胞（Ｈｅｌａ）培養液に
Ｔ Ｄ Ｆと同時にヒトインターフエロンを加えたとき
のガン細胞縮退作用を示す写真（１００倍）、第３Ａ図
は同無添加の対照写真（１００倍）である。第１図下方
左側はヒト線維芽細胞、下方右側はＫＢ細胞を示し、第
１．２Ｂ、３Ｂ図において空洞部は細胞破壊領域を示す
。 特許出願人 日本ケミカルリサーチ株式会社代理人
弁理士 竹 内 卓ＦＩｇ、 ２Ａ Ｆｅｇ、 ２８ 「ｉ（Ａ、 ３Ｂ 手続ネ市正書 く自発） 昭和５７年１２月２４日 特許庁長官殿 ２、発明の名称 ヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 兵庫県神戸市東灘区御影本町３丁目４番２０号 名称 日本ケミカルリサーチ株式会社 代表者 芦１）信 ４、代理人 由の発明の名称と、特許請求の範囲、 ２、特許請求の範囲 １、 ヒト胎児線維芽細胞培養液を水に対し透析し、透
析内液を酸性条件下（こ吸着剤と接触させて有効成分を
吸着させ、次いで吸着剤から弱アルカリ性水溶液で有効
成分を抽出し、抽出液を熱処理後グルヂ過して有効成分
を分取することを特徴とするヒト腫瘍細胞障碍因子の製
造方法。 補正の内容 １．願書の発明の名称を「ヒトｌ１ｉｉ瘍細胞変性因子
の製造方法Ｊに訂正しまず。 ２、明＠書の発明の名称の欄の 「ヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法Ｊを１ヒト腫瘍細胞
変性因子の製造方法」と訂正します。 ３、特許請求の範囲を別紙のとおりに訂正します。 ４、（１） 明細書の文中、下記の「障碍因子」を「
変性因子Ｊに訂正しまず。 第１頁上より１０行目、同１８行目。 第２頁上より７行目、同１０行目、１６行目。 第３頁下Ｊ−り２行目。 第４頁上より７行目。 第１１頁上より８行目。 （２） 第７頁下より６行目、「ベンゼンに不溶、」の
次に［分子量はゲルヂ過法で１４５゜０００、Ｊを挿入
しまず。 以上
えたときのガン細胞ｔｌＡＡ作用を示す写真で、第２１
３図は同細胞の培養液にＴＩ）Ｆと同時にヒトインター
フェロンを加えたときのガン細胞縮退作用を示す写真（
１００倍）、第２Ａ図は無添加の対照写真（１００倍）
である。第３Ｂ図はヒトガン細胞（Ｈｅｌａ）培養液に
Ｔ Ｄ Ｆと同時にヒトインターフエロンを加えたとき
のガン細胞縮退作用を示す写真（１００倍）、第３Ａ図
は同無添加の対照写真（１００倍）である。第１図下方
左側はヒト線維芽細胞、下方右側はＫＢ細胞を示し、第
１．２Ｂ、３Ｂ図において空洞部は細胞破壊領域を示す
。 特許出願人 日本ケミカルリサーチ株式会社代理人
弁理士 竹 内 卓ＦＩｇ、 ２Ａ Ｆｅｇ、 ２８ 「ｉ（Ａ、 ３Ｂ 手続ネ市正書 く自発） 昭和５７年１２月２４日 特許庁長官殿 ２、発明の名称 ヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 兵庫県神戸市東灘区御影本町３丁目４番２０号 名称 日本ケミカルリサーチ株式会社 代表者 芦１）信 ４、代理人 由の発明の名称と、特許請求の範囲、 ２、特許請求の範囲 １、 ヒト胎児線維芽細胞培養液を水に対し透析し、透
析内液を酸性条件下（こ吸着剤と接触させて有効成分を
吸着させ、次いで吸着剤から弱アルカリ性水溶液で有効
成分を抽出し、抽出液を熱処理後グルヂ過して有効成分
を分取することを特徴とするヒト腫瘍細胞障碍因子の製
造方法。 補正の内容 １．願書の発明の名称を「ヒトｌ１ｉｉ瘍細胞変性因子
の製造方法Ｊに訂正しまず。 ２、明＠書の発明の名称の欄の 「ヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法Ｊを１ヒト腫瘍細胞
変性因子の製造方法」と訂正します。 ３、特許請求の範囲を別紙のとおりに訂正します。 ４、（１） 明細書の文中、下記の「障碍因子」を「
変性因子Ｊに訂正しまず。 第１頁上より１０行目、同１８行目。 第２頁上より７行目、同１０行目、１６行目。 第３頁下Ｊ−り２行目。 第４頁上より７行目。 第１１頁上より８行目。 （２） 第７頁下より６行目、「ベンゼンに不溶、」の
次に［分子量はゲルヂ過法で１４５゜０００、Ｊを挿入
しまず。 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 ヒト胎児線維芽細胞培養液を水に対し透析し、透
析内液を酸性条件下に吸着剤と接触さ処理後ゲル濾過し
て有効成分を分取することを特徴とするヒト腫瘍細胞障
碍因子の製造方法。 ２、 ヒト胎児線維芽細胞とヒト上皮性ガン細胞との混
合培養液を水に対して透析し、透析内液を酸性条件下に
吸着剤と接触させて有効成分を吸着させ、次いで吸着剤
から弱アルカリ性水溶液で有効成分を抽出し、抽出液を
熱処理後ゲル済過して有効成分を分取することを特徴と
するヒト腫瘍細胞障碍因子の製造方法。 ３、 ヒト線維芽細胞培養液またはヒト胎児線維芽細胞
とヒト上皮性ガン細胞との混合培養液を水に対して透析
し、透析内液を酸性条件下に吸着剤と接触させて有効成
分を吸着させ、次いで吸着剤から弱アルカリ性水溶液で
有効成分を抽出し、抽出液を熱処理後ゲル濾過して有効
成分を分取し、これにヒト白血球インターフェロンを添
加すること特徴とする作用の増強されたヒト腫瘍細胞障
碍因子含有剤の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57197242A JPS5988423A (ja) | 1982-11-09 | 1982-11-09 | ヒト腫瘍細胞変性因子の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57197242A JPS5988423A (ja) | 1982-11-09 | 1982-11-09 | ヒト腫瘍細胞変性因子の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5988423A true JPS5988423A (ja) | 1984-05-22 |
| JPH0244515B2 JPH0244515B2 (ja) | 1990-10-04 |
Family
ID=16371207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57197242A Granted JPS5988423A (ja) | 1982-11-09 | 1982-11-09 | ヒト腫瘍細胞変性因子の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5988423A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6124520A (ja) * | 1984-07-12 | 1986-02-03 | Takeshi Makitsubo | 腫瘍壊死因子様物質を抽出する方法 |
| JPS6156131A (ja) * | 1984-07-17 | 1986-03-20 | Takeshi Makitsubo | 腫瘍壊死因子様物質 |
| WO2002046375A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Xgene Corporation | In vitro synthesis of a layered cell sorted tissue |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0519480U (ja) * | 1991-05-14 | 1993-03-12 | 関東自動車工業株式会社 | 自動車のドア取付構造 |
-
1982
- 1982-11-09 JP JP57197242A patent/JPS5988423A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6124520A (ja) * | 1984-07-12 | 1986-02-03 | Takeshi Makitsubo | 腫瘍壊死因子様物質を抽出する方法 |
| JPS6156131A (ja) * | 1984-07-17 | 1986-03-20 | Takeshi Makitsubo | 腫瘍壊死因子様物質 |
| WO2002046375A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Xgene Corporation | In vitro synthesis of a layered cell sorted tissue |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0244515B2 (ja) | 1990-10-04 |
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