JP3009242B2 - 精製単量体健康人血清アルブミン（ヒト） - Google Patents
精製単量体健康人血清アルブミン（ヒト）Info
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- JP3009242B2 JP3009242B2 JP3110900A JP11090091A JP3009242B2 JP 3009242 B2 JP3009242 B2 JP 3009242B2 JP 3110900 A JP3110900 A JP 3110900A JP 11090091 A JP11090091 A JP 11090091A JP 3009242 B2 JP3009242 B2 JP 3009242B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Description
【０００１】
【発明の分野】本発明は実質的にアルミニウム及び他の
中毒物を含まないより純度が高くより安全な健康人血清
アルブミン（ヒト）の調製物を得るための新しい組成及
びその処理方法を特徴とする治療組成物に関する。ここ
に記載されたある種の組成物は少なくとも以下の３つの
理由により実質的に日付期間が延長される：１）高分子
量成分が存在しない、２）アルミニウム及び他の混入物
の除去、及び３）精製度（１００％）。表示したレベル
は日付時間の間一定である。
中毒物を含まないより純度が高くより安全な健康人血清
アルブミン（ヒト）の調製物を得るための新しい組成及
びその処理方法を特徴とする治療組成物に関する。ここ
に記載されたある種の組成物は少なくとも以下の３つの
理由により実質的に日付期間が延長される：１）高分子
量成分が存在しない、２）アルミニウム及び他の混入物
の除去、及び３）精製度（１００％）。表示したレベル
は日付時間の間一定である。
【０００２】治療薬としてヒトアルブミンを用いること
はよく知られている。そのような生成物のひとつとして
「プラスブミン」（“ＰＬＡＳＢＵＭＩＮ”）２５％及
び５％がある（カッターバイオロジカル、マイル社、バ
ークレー、カリフォルニア（（Ｃutter Ｂiological、
Ｍiles Ｉnc.，Ｂerkeley、Ｃalifornia))）。多くの
人がアルブミン調製物を改良しようと努め、ある程度ま
で改良した組成物を得られるようになってきた。しかし
どれもがある意味において本発明の新規組成物の特性を
欠いている。例えば：あるアルブミンの製造物は９６pp
bまで低くアルミニウムのレベルが下っている。その生
成物の４０℃での安定性試験で、そのレベルは３８０pp
bまで増加した。本発明は原料である血漿（ヒト）を卓
越した貯蔵寿命を持ち日付時間の間は変わることがない
実証された表示値を持つアルブミン調製物までにする過
程で必要な方法を教示する。
はよく知られている。そのような生成物のひとつとして
「プラスブミン」（“ＰＬＡＳＢＵＭＩＮ”）２５％及
び５％がある（カッターバイオロジカル、マイル社、バ
ークレー、カリフォルニア（（Ｃutter Ｂiological、
Ｍiles Ｉnc.，Ｂerkeley、Ｃalifornia))）。多くの
人がアルブミン調製物を改良しようと努め、ある程度ま
で改良した組成物を得られるようになってきた。しかし
どれもがある意味において本発明の新規組成物の特性を
欠いている。例えば：あるアルブミンの製造物は９６pp
bまで低くアルミニウムのレベルが下っている。その生
成物の４０℃での安定性試験で、そのレベルは３８０pp
bまで増加した。本発明は原料である血漿（ヒト）を卓
越した貯蔵寿命を持ち日付時間の間は変わることがない
実証された表示値を持つアルブミン調製物までにする過
程で必要な方法を教示する。
【０００３】アルブミン中のアルミニウムは治療上アル
ブミンを投与する臨床医師の主な心配ごとである。コッ
ペル（Ｋoppel）ら、ジャーナル トキシコル クリン
トキシコル（Ｊ．Ｔoxicol．Ｃlin．Ｔoxicol．）２６
（５−６）：３３７−５６１０月−１１月号 １９８８
年。
ブミンを投与する臨床医師の主な心配ごとである。コッ
ペル（Ｋoppel）ら、ジャーナル トキシコル クリン
トキシコル（Ｊ．Ｔoxicol．Ｃlin．Ｔoxicol．）２６
（５−６）：３３７−５６１０月−１１月号 １９８８
年。
【０００４】本発明は合衆国登録簿（Ｆederal Ｒegis
ter）に記載されているように血漿源（Ｓource Ｐlasm
a）（ヒト）のような実質的にヘモグロビンが低含量で
あるアルブミン源の利用に向けられる。しかし、本発明
の方法及び新規発明生成物は組換えＤＮＡによって生成
した源のような遺伝子工学による源及び他の実質的にヘ
モグロビンが低含量であるアルブミン源由来のアルブミ
ンにも適応される。今日において主要なアルブミン源は
血漿であるため、これらの組成物を調製する方法は基本
的に血漿または血清に関連する。例えば、ヘモグロビン
を含有する胎盤源調製物には向かない。出発材料として
用いる胎盤ようなヘモグロビンを含有する材料からの浸
出によって精製アルブミンを回収する多くの方法が知ら
れている。方法の概説も与えられている米国特許第４,
１９７,２３８を参照。胎盤またはヘモグロビンを含有
する他の溶血血液から調製した精製アルブミンについて
も述べている米国特許第４,１６９,８２９を参照。本発
明の新規性はセルロースアセテートの電気泳動によって
純度１００％であり、処理過程で用いた残留するすべて
の化学試薬を含まない単量体アルブミン（９９％以上）
が本発明で教示された方法によって得られることを教示
する。調製物は実質的に二量体アルブミンよりも大きい
分子量の物質を含まない。血漿源（ヒト）のような実質
的にヘモグロビンが含有しないアルブミン源から製造し
た重合体タンパク質を含有せず、実質的にアルミニウム
を含まない調製物はこれまで知られていない。これらの
特性に加えて本発明の生成物の効力は日付時間内では混
入物は表示した値のままであることである。
ter）に記載されているように血漿源（Ｓource Ｐlasm
a）（ヒト）のような実質的にヘモグロビンが低含量で
あるアルブミン源の利用に向けられる。しかし、本発明
の方法及び新規発明生成物は組換えＤＮＡによって生成
した源のような遺伝子工学による源及び他の実質的にヘ
モグロビンが低含量であるアルブミン源由来のアルブミ
ンにも適応される。今日において主要なアルブミン源は
血漿であるため、これらの組成物を調製する方法は基本
的に血漿または血清に関連する。例えば、ヘモグロビン
を含有する胎盤源調製物には向かない。出発材料として
用いる胎盤ようなヘモグロビンを含有する材料からの浸
出によって精製アルブミンを回収する多くの方法が知ら
れている。方法の概説も与えられている米国特許第４,
１９７,２３８を参照。胎盤またはヘモグロビンを含有
する他の溶血血液から調製した精製アルブミンについて
も述べている米国特許第４,１６９,８２９を参照。本発
明の新規性はセルロースアセテートの電気泳動によって
純度１００％であり、処理過程で用いた残留するすべて
の化学試薬を含まない単量体アルブミン（９９％以上）
が本発明で教示された方法によって得られることを教示
する。調製物は実質的に二量体アルブミンよりも大きい
分子量の物質を含まない。血漿源（ヒト）のような実質
的にヘモグロビンが含有しないアルブミン源から製造し
た重合体タンパク質を含有せず、実質的にアルミニウム
を含まない調製物はこれまで知られていない。これらの
特性に加えて本発明の生成物の効力は日付時間内では混
入物は表示した値のままであることである。
【０００５】本発明の目的は貯蔵寿命が長いアルブミン
を提供することである。さらに本発明の目的は出発材料
として実施的にヘモグロビンを含有しない源由来で医学
的治療に用いることができる主要成分としてのアルブミ
ンから成る経済的であり安全な方法及び生成物を提供す
ることである。実質的にアルミニウムを含有しない本発
明の組成物の効力によって治療薬の日付期間にわたって
表示したレベルはそのままである。
を提供することである。さらに本発明の目的は出発材料
として実施的にヘモグロビンを含有しない源由来で医学
的治療に用いることができる主要成分としてのアルブミ
ンから成る経済的であり安全な方法及び生成物を提供す
ることである。実質的にアルミニウムを含有しない本発
明の組成物の効力によって治療薬の日付期間にわたって
表示したレベルはそのままである。
【０００６】製造方法は第Ｖ画分（Ｆraction Ｖ）ま
たは粗アルブミン段階に適応するいくつかの点でコーン
（Ｃohn）のアルブミン分画法のような方法をアルブミ
ン源に対して用いる。源はまたコーンの第IV-１画分
（Ｃohn Ｆraction IV-１）及びコーンの第IV-４画分
（Ｃohn Ｆraction IV-４）のような前段階の処理を
受ける。処理困難な蒸気の容積を減少させるために薄膜
蒸発法が用いられる。コーン（Ｃohn）ら、ジャーナル
オブ アメリカン ケミカル ソサイアティー（Ｊ．
Ａm．Ｃhem．Ｓoc.）６８、４５９（１９４６）を参
照。第Ｖ画分の沈殿またはより精製したコーン画分を約
３倍容前後の冷却した、ピロゲン（Ｐyrogen）を含まな
い蒸留水に懸濁する。水の温度は室温以下であり好まし
くは８℃プラスマイナス４℃である。この温度に保持し
た溶液を充分に混合する。溶液中に沈殿ができたら、p
Ｈを測定し、必要であれば、４.５±０.２の範囲になる
ように調整する。この段階で理想的で最も好ましいpＨ
は４.５から４.６である。pＨは常に５.０以下でなけれ
ばならない。アルブミンはＡＭＦ キユノ社（ＡＭＦ
Ｃuno Ｃorp．）より入手できるような深部濾過器（de
pth filter）によって濾過される。濾過媒体は出発材
料から実質的にすべての脂溶性タンパク質類の物質が除
去できるように深くなければならない。アルブミン濾過
物のpＨを１.０Ｍの炭酸ナトリウムまたは１.０Ｍの水
酸化ナトリウムのような希釈塩基性溶液によってαグロ
ブリンのおよその等電点の範囲（pＨ約５.０から６.
０；好ましくは５.３）に調整する。pＨを上昇させるた
めに便宜的な塩基性の緩衝系を用いることができる。
たは粗アルブミン段階に適応するいくつかの点でコーン
（Ｃohn）のアルブミン分画法のような方法をアルブミ
ン源に対して用いる。源はまたコーンの第IV-１画分
（Ｃohn Ｆraction IV-１）及びコーンの第IV-４画分
（Ｃohn Ｆraction IV-４）のような前段階の処理を
受ける。処理困難な蒸気の容積を減少させるために薄膜
蒸発法が用いられる。コーン（Ｃohn）ら、ジャーナル
オブ アメリカン ケミカル ソサイアティー（Ｊ．
Ａm．Ｃhem．Ｓoc.）６８、４５９（１９４６）を参
照。第Ｖ画分の沈殿またはより精製したコーン画分を約
３倍容前後の冷却した、ピロゲン（Ｐyrogen）を含まな
い蒸留水に懸濁する。水の温度は室温以下であり好まし
くは８℃プラスマイナス４℃である。この温度に保持し
た溶液を充分に混合する。溶液中に沈殿ができたら、p
Ｈを測定し、必要であれば、４.５±０.２の範囲になる
ように調整する。この段階で理想的で最も好ましいpＨ
は４.５から４.６である。pＨは常に５.０以下でなけれ
ばならない。アルブミンはＡＭＦ キユノ社（ＡＭＦ
Ｃuno Ｃorp．）より入手できるような深部濾過器（de
pth filter）によって濾過される。濾過媒体は出発材
料から実質的にすべての脂溶性タンパク質類の物質が除
去できるように深くなければならない。アルブミン濾過
物のpＨを１.０Ｍの炭酸ナトリウムまたは１.０Ｍの水
酸化ナトリウムのような希釈塩基性溶液によってαグロ
ブリンのおよその等電点の範囲（pＨ約５.０から６.
０；好ましくは５.３）に調整する。pＨを上昇させるた
めに便宜的な塩基性の緩衝系を用いることができる。
【０００７】pＨ調整に続いて、上述の温度にある系を
ヒートショックを受けられるようにする。先ず、ある量
のカプリル酸ナトリウムをヒートショック中の系のタン
パク質濃度に基づいて系に添加し、例えば濾過物中のタ
ンパク質キロ当り、約３０グラムのカプリル酸ナトリウ
ムを系に添加する。ＳＤＡ-３Ａアルコールのようなエ
タノールを容量当り約１０％から２０％アルコールとな
るように安定化アルブミン濾過物に添加する。撹拌中系
の温度は約２０℃に達し、次に約２０℃から約５０℃に
上昇させる。好ましい温度上昇は５０℃までである。こ
の温度を少なくとも１時間保ち、その好ましい範囲は約
１から３時間である。一般に、達した温度が高ければ高
いほど、その温度における時間は少なくて済む。それゆ
え温度上昇がより小さいにもかかわらず、その温度での
過度に長い時間の保持が必要となる。ヒートショックが
終了したら、系の温度を約１０℃以下という通常の血漿
処理温度にまで低くする。１グラムのＤＥＡＥセファデ
ックス（ファルマシア社（（Ｐharmacia Ｉnc.))）を
溶液リットル当りに添加し、系をＡＭＦ キユノ社（Ａ
ＭＦ Ｃuno Ｃorp．）が供給するような適当な深部媒
体に通して濾過する。精製アルブミン濾過物のpＨを約
６.０から約８.５（最も好ましくは７.２）に調整す
る。精製アルブミンをロミコン社（Ｒomicon，Ｉnc．）
またはコッホ社（Ｋoch ＣＯ.）製のような限外濾過器
に供する。アルブミン溶液をダイアフイルトレーシヨン
（diafiltration）にかけ、３％塩化ナトリウムまたは
酢酸ナトリウムまたはある場合ではカプリル酸ナトリウ
ム溶液、最も好ましくは塩化ナトリウムのような弱塩溶
液で容量の置換を行う。精製アルブミン溶液をダイアフ
イルトレーシヨンにかけ、塩置換の結果アルミニウム及
び他の混入物は除却される。水（最も好ましくは４容の
冷却蒸留水）に対してダイアフイルトレーシヨンを行
う。賦形剤を添加して所望のタンパク質レベルとなる濃
度になった精製、洗浄アルブミンを限外濾過器から回収
する。アルブミン濃度に基づくカプリル酸のモル濃度に
よって上述の方法で調製される最終生成物の好ましい組
成が与えられる。すなわち、２５％のタンパク質調製物
は一般に０.０２Ｍから約０.１Ｍ、好ましくは０.０４
Ｍのカプリル酸で安定化する。Ｅ．Ｊ．コーン（Ｅ．
Ｊ．Ｃohn）による元来の調製物は「塩欠乏」であっ
た。本発明の特上の組成はわずかに希釈した場合強壮性
を保証するために約０.１Ｍのアミノ酢酸を含んでい
る。こうして得られる組成は最上の貯蔵寿命を持ち生物
活性が保持される。本明細書に記載されている調製物
は、もし所望するのであれば、最終的に１３０から１６
０mＥq／Ｌのナトリウムとなるように塩化ナトリウムを
加えた０.０２Ｍのカプリル酸ナトリウム及び０.０２Ｍ
のアセチル-dl-トリプトファン（acetyl-dl-tryptopha
n）と調合する。アルブミン中のトリプトファンの存在
によって生成物は古くなると黒くなり、トリプトファン
が分解した生成物に対する心配が生じる。
ヒートショックを受けられるようにする。先ず、ある量
のカプリル酸ナトリウムをヒートショック中の系のタン
パク質濃度に基づいて系に添加し、例えば濾過物中のタ
ンパク質キロ当り、約３０グラムのカプリル酸ナトリウ
ムを系に添加する。ＳＤＡ-３Ａアルコールのようなエ
タノールを容量当り約１０％から２０％アルコールとな
るように安定化アルブミン濾過物に添加する。撹拌中系
の温度は約２０℃に達し、次に約２０℃から約５０℃に
上昇させる。好ましい温度上昇は５０℃までである。こ
の温度を少なくとも１時間保ち、その好ましい範囲は約
１から３時間である。一般に、達した温度が高ければ高
いほど、その温度における時間は少なくて済む。それゆ
え温度上昇がより小さいにもかかわらず、その温度での
過度に長い時間の保持が必要となる。ヒートショックが
終了したら、系の温度を約１０℃以下という通常の血漿
処理温度にまで低くする。１グラムのＤＥＡＥセファデ
ックス（ファルマシア社（（Ｐharmacia Ｉnc.))）を
溶液リットル当りに添加し、系をＡＭＦ キユノ社（Ａ
ＭＦ Ｃuno Ｃorp．）が供給するような適当な深部媒
体に通して濾過する。精製アルブミン濾過物のpＨを約
６.０から約８.５（最も好ましくは７.２）に調整す
る。精製アルブミンをロミコン社（Ｒomicon，Ｉnc．）
またはコッホ社（Ｋoch ＣＯ.）製のような限外濾過器
に供する。アルブミン溶液をダイアフイルトレーシヨン
（diafiltration）にかけ、３％塩化ナトリウムまたは
酢酸ナトリウムまたはある場合ではカプリル酸ナトリウ
ム溶液、最も好ましくは塩化ナトリウムのような弱塩溶
液で容量の置換を行う。精製アルブミン溶液をダイアフ
イルトレーシヨンにかけ、塩置換の結果アルミニウム及
び他の混入物は除却される。水（最も好ましくは４容の
冷却蒸留水）に対してダイアフイルトレーシヨンを行
う。賦形剤を添加して所望のタンパク質レベルとなる濃
度になった精製、洗浄アルブミンを限外濾過器から回収
する。アルブミン濃度に基づくカプリル酸のモル濃度に
よって上述の方法で調製される最終生成物の好ましい組
成が与えられる。すなわち、２５％のタンパク質調製物
は一般に０.０２Ｍから約０.１Ｍ、好ましくは０.０４
Ｍのカプリル酸で安定化する。Ｅ．Ｊ．コーン（Ｅ．
Ｊ．Ｃohn）による元来の調製物は「塩欠乏」であっ
た。本発明の特上の組成はわずかに希釈した場合強壮性
を保証するために約０.１Ｍのアミノ酢酸を含んでい
る。こうして得られる組成は最上の貯蔵寿命を持ち生物
活性が保持される。本明細書に記載されている調製物
は、もし所望するのであれば、最終的に１３０から１６
０mＥq／Ｌのナトリウムとなるように塩化ナトリウムを
加えた０.０２Ｍのカプリル酸ナトリウム及び０.０２Ｍ
のアセチル-dl-トリプトファン（acetyl-dl-tryptopha
n）と調合する。アルブミン中のトリプトファンの存在
によって生成物は古くなると黒くなり、トリプトファン
が分解した生成物に対する心配が生じる。
【０００８】
【実施例１】４年以上貯蔵した５kgのコーン第５画分
（Ｃohn Ｆraction Ｖ）のペイスト（ＢＲ ７２０
９）をロット番号３３８８-７０として処理した。ペイ
ストを３容の５℃の蒸留水に懸濁し、２時間充分に混合
した。ベックマン（Ｂeckman）pＨメーターで直接測定
した溶液のpＨは４.６５であった。ＡＭＦ キユノ（Ａ
ＭＦ Ｃuno）のマルチカートリッジ濾過器のわくをキ
ユノ（Ｃuno）製の名称「９０Ｓp」と２つの使い捨てキ
ユノ（Ｃuno）濾過器のカートリッジで準備した。深部
媒体より製造による残片を除去するため濾過器系を１０
０リットルの熱蒸留水及び６０リットルの冷却蒸留水で
洗浄した。第Ｖ画分溶液を濾過器によって濾過器のわく
内を通過させ、１０国際濁度ユニット（ハッチ比濁計、
ラブランド、コロラド（（Ｈach Ｎephelometer，Ｌov
eland，Ｃolorado)））以下の濾過物を回収した。濾過
終了時に濾過媒体由来の可溶性タンパク質を除却するた
めに適当量の５℃の蒸留水で濾過器のわくを洗浄した。
はじめに懸濁したてタンパク質の９８％以上が回収され
たことを測定して確認した。濾過物のpＨは４.６６であ
った。濾過物のpＨを１.０Ｍの炭酸ナトリウムで５.１
５に調整した。存在するアルブミンタンパク質の量によ
って、すなわち第Ｖ画分ペイストキロ当り３０グラムの
炭酸ナトリウムを添加し、次に処理したアルブミン濾過
物リットル当り１８１グラムのＳＰＡ３Ａアルコールを
添加した。アルコール性アルブミン濾過物の温度を５０
℃に上昇させ本温度に２時間保持した。ヒートショック
処理物質を８℃に冷却した。１グラムのＤＥＡＥセファ
デックス（ファルマシア（（Ｐharmacia)））を１リッ
トルの物質に添加した。上述したキユノ（Ｃuno）濾過
器を用いて変性したグロブリン及び添加された不溶性の
ＤＥＡＥセファデックス（ファルマシア（（Ｐharmaci
a）））を除去した。濾過物中の回収タンパク質を分析
したところ始めに得られるタンパク質の９７％を含むこ
とが明らかになった。溶液の濁度は１０国際濁度ユニッ
ト以下であった。高純度アルブミン濾過物のpＨを１.０
Ｍの炭酸ナトリウムを用いて７.２２に調整した。濾過
物をＰＭ３０ ロミコン（Ｒomicaon）ホロファイバー
限外濾過カートリッジ（ローム＆ハス((Ｒohm＆Ｈas
s)）製）が装備されたパイロットモデルの限外濾過器に
供した。３％単純塩を用いて３容分交換した。流通速度
は良好であり、２００ml／カートリッジ／分の速度が通
常であった。次に冷却蒸留水を用いて５容分の交換を行
った。生成物の温度を常に１０℃以下に保った。生成物
を濃縮し限外濾過器から回収した。タンパク質濃度は２
６.５％と測定され、生成物の濁度は５国際濁度ユニッ
ト以下であった。ヒートショック処理中のカプリル酸が
アルブミンに結合し、そして過剰量のカプリル酸が問題
を起こすという心配がある。生成物そのもののサンプル
を６０℃に加熱し１０分以内にゲル化することをもって
ヒートショックによってカプリル酸が問題にならないレ
ベルまで減少したことが証明された。サンプルを上述し
たように最終容器中の構成に調合し、表は実験結果を説
明する。
（Ｃohn Ｆraction Ｖ）のペイスト（ＢＲ ７２０
９）をロット番号３３８８-７０として処理した。ペイ
ストを３容の５℃の蒸留水に懸濁し、２時間充分に混合
した。ベックマン（Ｂeckman）pＨメーターで直接測定
した溶液のpＨは４.６５であった。ＡＭＦ キユノ（Ａ
ＭＦ Ｃuno）のマルチカートリッジ濾過器のわくをキ
ユノ（Ｃuno）製の名称「９０Ｓp」と２つの使い捨てキ
ユノ（Ｃuno）濾過器のカートリッジで準備した。深部
媒体より製造による残片を除去するため濾過器系を１０
０リットルの熱蒸留水及び６０リットルの冷却蒸留水で
洗浄した。第Ｖ画分溶液を濾過器によって濾過器のわく
内を通過させ、１０国際濁度ユニット（ハッチ比濁計、
ラブランド、コロラド（（Ｈach Ｎephelometer，Ｌov
eland，Ｃolorado)））以下の濾過物を回収した。濾過
終了時に濾過媒体由来の可溶性タンパク質を除却するた
めに適当量の５℃の蒸留水で濾過器のわくを洗浄した。
はじめに懸濁したてタンパク質の９８％以上が回収され
たことを測定して確認した。濾過物のpＨは４.６６であ
った。濾過物のpＨを１.０Ｍの炭酸ナトリウムで５.１
５に調整した。存在するアルブミンタンパク質の量によ
って、すなわち第Ｖ画分ペイストキロ当り３０グラムの
炭酸ナトリウムを添加し、次に処理したアルブミン濾過
物リットル当り１８１グラムのＳＰＡ３Ａアルコールを
添加した。アルコール性アルブミン濾過物の温度を５０
℃に上昇させ本温度に２時間保持した。ヒートショック
処理物質を８℃に冷却した。１グラムのＤＥＡＥセファ
デックス（ファルマシア（（Ｐharmacia)））を１リッ
トルの物質に添加した。上述したキユノ（Ｃuno）濾過
器を用いて変性したグロブリン及び添加された不溶性の
ＤＥＡＥセファデックス（ファルマシア（（Ｐharmaci
a）））を除去した。濾過物中の回収タンパク質を分析
したところ始めに得られるタンパク質の９７％を含むこ
とが明らかになった。溶液の濁度は１０国際濁度ユニッ
ト以下であった。高純度アルブミン濾過物のpＨを１.０
Ｍの炭酸ナトリウムを用いて７.２２に調整した。濾過
物をＰＭ３０ ロミコン（Ｒomicaon）ホロファイバー
限外濾過カートリッジ（ローム＆ハス((Ｒohm＆Ｈas
s)）製）が装備されたパイロットモデルの限外濾過器に
供した。３％単純塩を用いて３容分交換した。流通速度
は良好であり、２００ml／カートリッジ／分の速度が通
常であった。次に冷却蒸留水を用いて５容分の交換を行
った。生成物の温度を常に１０℃以下に保った。生成物
を濃縮し限外濾過器から回収した。タンパク質濃度は２
６.５％と測定され、生成物の濁度は５国際濁度ユニッ
ト以下であった。ヒートショック処理中のカプリル酸が
アルブミンに結合し、そして過剰量のカプリル酸が問題
を起こすという心配がある。生成物そのもののサンプル
を６０℃に加熱し１０分以内にゲル化することをもって
ヒートショックによってカプリル酸が問題にならないレ
ベルまで減少したことが証明された。サンプルを上述し
たように最終容器中の構成に調合し、表は実験結果を説
明する。
【０００９】
【表１】
【００１０】本発明の主なる特徴と態様は以下のとおり
である。
である。
【００１１】１．高圧液体クロマトグラフィーによる測
定で少なくとも９８％が単量体であり且つ原子吸光によ
る測定でアルミニウムを３０ppb以下の実質的に存在し
ないヒト血清アルブミン。
定で少なくとも９８％が単量体であり且つ原子吸光によ
る測定でアルミニウムを３０ppb以下の実質的に存在し
ないヒト血清アルブミン。
【００１２】２．該アルブミンのタンパク質濃度は２５
％でありハッチ（Ｈach）比濁計によって測定される国
際濁度ユニットが５以下である第１項記載の生成物。
％でありハッチ（Ｈach）比濁計によって測定される国
際濁度ユニットが５以下である第１項記載の生成物。
【００１３】３．リットル当り１０から３５０グラムの
アルブミンを含む第１項記載の生成物。
アルブミンを含む第１項記載の生成物。
【００１４】４．単量体以外の該アルブミンの分子量は
アルブミン二量体以上ではない第１項記載の生成物。
アルブミン二量体以上ではない第１項記載の生成物。
【００１５】５．免疫電気泳動による測定でアルファ-
１-酸-糖タンパク質が存在しない第１項記載の生成物。
１-酸-糖タンパク質が存在しない第１項記載の生成物。
【００１６】６．該生成物を保存する容器からのアルミ
ニウム混入物が時間が経ても該生成物に混入しない第１
項記載の生成物。
ニウム混入物が時間が経ても該生成物に混入しない第１
項記載の生成物。
【００１７】７．通常の製薬学的賦形剤を含む第１項記
載の生成物。
載の生成物。
【００１８】８．該アルブミンにはセルロースアセテー
ト電気泳動実験による検査で唯一のタンパク質しか存在
しない第１項記載の生成物。
ト電気泳動実験による検査で唯一のタンパク質しか存在
しない第１項記載の生成物。
【００１９】９．該アルブミンは遺伝子工学によって得
られる第１項記載の生成物。
られる第１項記載の生成物。
【００２０】１０．アルファグロブリンを充分に変性さ
せるため一定時間一定温度で低ヘモグロビン源である血
漿アルブミンを加熱し次に該アルブミンを処理するのに
先立って得られた変性アルファグロブリンを除去するこ
とを特徴とするアルミニウムを実質的に含有せず貯蔵容
器からアルミニウムが吸収されないようにして長い貯蔵
寿命の間実質的にアルミニウムがない状態に保つヒト血
清アルブミンの調製方法。
せるため一定時間一定温度で低ヘモグロビン源である血
漿アルブミンを加熱し次に該アルブミンを処理するのに
先立って得られた変性アルファグロブリンを除去するこ
とを特徴とするアルミニウムを実質的に含有せず貯蔵容
器からアルミニウムが吸収されないようにして長い貯蔵
寿命の間実質的にアルミニウムがない状態に保つヒト血
清アルブミンの調製方法。
【００２１】１１．該アルブミン源はコーン第IV-１、I
V-４、Ｖ画分（Ｃohn ＦractionIV-１、IV-４、Ｖ）、
またはより精製されたコーン画分である第１０項記載の
方法。
V-４、Ｖ画分（Ｃohn ＦractionIV-１、IV-４、Ｖ）、
またはより精製されたコーン画分である第１０項記載の
方法。
【００２２】１２．温度上昇は約５０℃を越えない第１
０項記載の方法。
０項記載の方法。
【００２３】１３．上昇した温度での保持時間は約１時
間以下ではなく約３時間を越えない第１２項記載の方
法。
間以下ではなく約３時間を越えない第１２項記載の方
法。
【００２４】１４．アルブミン源に水を加えて第１懸濁
液とし該第１懸濁液のpＨを５以下となるように調整し
次に該第１懸濁液から固体を除去し次にカプリル酸ナト
リウム及びエタノールを添加してpＨを約５から約６に
上昇させ１０から２０％アルコールの第２懸濁液とし、
得られた第２懸濁液の温度を該第２懸濁液初期温度以上
であるが約５０℃を超えない温度範囲まで上昇させ少な
くとも約１時間その上昇した温度で該第２懸濁液を保持
し、次に第２懸濁液の温度を通常血漿を処理する温度ま
で下げ、第２懸濁液より固体を除去し便宜的な温度でイ
オン透析濾過緩衝液でpＨが約６から約８.５の間に得ら
れた濾液を透析濾過することを特徴とする実質的に単量
体でアルミニウムの混入が実質的になく長い保存期間そ
の状態にあるヒトアルブミンの調製方法。
液とし該第１懸濁液のpＨを５以下となるように調整し
次に該第１懸濁液から固体を除去し次にカプリル酸ナト
リウム及びエタノールを添加してpＨを約５から約６に
上昇させ１０から２０％アルコールの第２懸濁液とし、
得られた第２懸濁液の温度を該第２懸濁液初期温度以上
であるが約５０℃を超えない温度範囲まで上昇させ少な
くとも約１時間その上昇した温度で該第２懸濁液を保持
し、次に第２懸濁液の温度を通常血漿を処理する温度ま
で下げ、第２懸濁液より固体を除去し便宜的な温度でイ
オン透析濾過緩衝液でpＨが約６から約８.５の間に得ら
れた濾液を透析濾過することを特徴とする実質的に単量
体でアルミニウムの混入が実質的になく長い保存期間そ
の状態にあるヒトアルブミンの調製方法。
【００２５】１５．少なくとも１０時間約６０℃で最終
的に熱処理する第１４項記載の方法。
的に熱処理する第１４項記載の方法。
【図１】図１はアルミニウム含有容器中に４０℃で貯蔵
し実験時間を促進させた時の本発明のアルブミンにおけ
るアルミニウムレベルを市販のアルブミンと比較して表
す。
し実験時間を促進させた時の本発明のアルブミンにおけ
るアルミニウムレベルを市販のアルブミンと比較して表
す。
【図２】図２は本発明のアルブミンにおけるアルミニウ
ムレベルを種々製造元ＡからＥの市販のアルブミンにお
けるアルミニウムレベルと比較する。
ムレベルを種々製造元ＡからＥの市販のアルブミンにお
けるアルミニウムレベルと比較する。
【図３】図３はすべて高圧液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）によって測定した本発明のアルブミンにおける
高分子量成分を種々製造元ＡからＥの市販のアルブミン
における高分子量成分と比較する。
ＰＬＣ）によって測定した本発明のアルブミンにおける
高分子量成分を種々製造元ＡからＥの市販のアルブミン
における高分子量成分と比較する。
【図４】図４はすべてセルロースアセテート電気泳動
（ＣＡＥ）によって測定した本発明のアルブミンの純度
を種々製造元ＡからＥの市販のアルブミンの純度と比較
する。
（ＣＡＥ）によって測定した本発明のアルブミンの純度
を種々製造元ＡからＥの市販のアルブミンの純度と比較
する。
【図５】図５はすべてハッチ比濁計（Ｈach Ｎephelom
eter）で国際濁度ユニット（ＮＴＵ）を測定した本発明
のアルブミンの濁度レベルを種々製造元ＡからＥの市販
のアルブミンの濁度レベルと比較する。
eter）で国際濁度ユニット（ＮＴＵ）を測定した本発明
のアルブミンの濁度レベルを種々製造元ＡからＥの市販
のアルブミンの濁度レベルと比較する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭62−294621（ＪＰ，Ａ) 特開 昭50−53515（ＪＰ，Ａ) 特開 昭50−154413（ＪＰ，Ａ) 特表 平４−506349（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ｔｒａｃｅ Ｅｌｅｍ．Ｅｌｅｃ ｔｒｏｌｙｔｅｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉ ｓ．，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１（1989) ｐ．39〜42 Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊ ｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．295（1987）ｐ. 1062 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 14/765 C07K 1/34 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】 Ａ．アルブミン源に水を加えて第１懸濁
液を作成し、 Ｂ．該第１懸濁液のｐＨを５以下となるように調整し、 Ｃ．該第１懸濁液から固体を除去し、 Ｄ．ｐＨを５ないし６の範囲内に調整し、 Ｅ．カプリル酸ナトリウム及びエタノールを添加して１
０ないし２０％アルコールの第２懸濁液を形成し、 Ｆ．得られた第２懸濁液の温度を該第２懸濁液初期温度
以上の温度範囲であって、２０℃ないし５０℃の温度範
囲まで上昇させ、 Ｇ．少なくとも１時間その上昇した温度で該第２懸濁液
を保持し、 Ｈ．該第２懸濁液の温度を１０℃以下の温度範囲まで下
げ、 Ｉ．該第２懸濁液から固体を除去し、次いで Ｊ．得られた濾液をｐＨ６ないし８.５におけるイオン
ダイアフイルトレーシヨン緩衝液を用いてダイアフイル
トレーシヨンする、 連続工程を含んでなる実質的に単量体でアルミニウムの
混入が実質的になく長い保存期間その状態にあるヒトア
ルブミンの調製方法。
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|---|---|
| JPH0733800A JPH0733800A (ja) | 1995-02-03 |
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| JPH07102148B2 (ja) * | 1992-05-20 | 1995-11-08 | 株式会社ミドリ十字 | 遺伝子操作により得られるヒト血清アルブミンの製造方法、およびそれにより得られるヒト血清アルブミン含有組成物 |
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| DE19830914C1 (de) * | 1998-07-10 | 1999-06-24 | Centeon Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung einer Proteinlösung |
| GB9902000D0 (en) | 1999-01-30 | 1999-03-17 | Delta Biotechnology Ltd | Process |
| AU3624400A (en) * | 1999-03-19 | 2000-10-09 | Bayer Corporation | Chromatographic albumin process |
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|---|---|---|---|---|
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| US3926939A (en) * | 1973-08-24 | 1975-12-16 | Mikhail Ivanovich Ivanov | Method of extracting pure serum albumin from biological fluids using a salt of a carboxylic aliphatic acid |
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| US4228154A (en) * | 1979-02-26 | 1980-10-14 | Armour Pharmaceutical Company | Purification of plasma albumin by ion exchange chromatography |
| FR2543448A1 (fr) * | 1983-04-01 | 1984-10-05 | Rhone Poulenc Spec Chim | Procede de fractionnement du plasma |
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-
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- 1991-04-06 ES ES91105453T patent/ES2224094T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-06 AT AT91105453T patent/ATE269872T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-04-06 EP EP91105453A patent/EP0452753B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-06 DE DE69133399T patent/DE69133399T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-09 CA CA002040036A patent/CA2040036A1/en not_active Abandoned
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-
1999
- 1999-10-19 JP JP11296909A patent/JP2000095798A/ja active Pending
Non-Patent Citations (2)
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|---|
| Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．２９５（１９８７）ｐ．１０６２ |
| Ｊ．Ｔｒａｃｅ Ｅｌｅｍ．Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓ．，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１（１９８９）ｐ．３９〜４２ |
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| DE69133399D1 (de) | 2004-07-29 |
| ES2224094T3 (es) | 2005-03-01 |
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