JPS5934155A - 免疫分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、流体試料中の微量成分測定用の免疫分析素子
に関し、更に詳しくは定量測定が改良された流体試料用
の免疫分析素子に関する。

生物学的流体試料中に含まれる極微量含有される物質を
検出する方法として、各種分析法の開発がなされてきた
。この分析方法は主どして、免疫反応をその原理とする
ものである。免疫反応を起しうるものとしては例えば、
抗原、抗体、ハプテン抗原補体等が挙げられ、例えば血
清中に存在する免疫活性物質（以下、便宜上抗原と略−
１−）と、該免疫活性物質と特異的に結合する物質（以
下、便宜上抗体と略記する）との特異的結合反応（即ち
免疫反応）を用いるものである。上記原理を用いる測定
法として種々のものが卯発されてきたが、最も精度の高
いものとしては免疫測定法（以下イムノアッセイと略す
）が知られて（・る。

イムノアッセイは、１９５８年ＢｅｒｓｏｎとＹａｌｌ
ｏｗ等が放射性ヨードで標識したウシインシュリンと糖
尿病患者血清中の抗インシュリノ抗体を用いて血清中の
インシュリンを測定することに成功していらい、放射免
疫測定法（ラジオイムノアッセイ、ＲＩＡと略記する）
が広く用いられている。

上記の放射免疫測定法は、高い感度を有する良好な定量
分析法であるが、標識化合物に放射性同位元素を同いる
ため、特殊な施設が必要であり、通常の実験室では使用
が困難で、また廃液の処理にも細心の配慮を要し半減期
の短かい放射性同位元素の場合、長時間保存ができない
などの欠点を有している。このため放射性同位元素を他
の標識で置きかえた方法が注目され始め、例えば標識物
質として、酵素、バクテリオファージ、金属および有機
金属の錯体、補酵素、酵素基質、酵素阻害物質、循環反
応体、有機補欠分子族、化学発光性反応体および螢光性
分子等が挙げられる。これらの中で現在実際上測定に使
用されているものは酵素を用いた酵素イムノアッセイ（
ＥＩＡ）、ｌ光性分子を用いた螢光イムノアッセイ（Ｆ
ＩＡ）等である。

しかしなから、上記の分析方法には下記に述べる如き種
々の欠点を有している。

１）典型的には１０−２００μｌの流体試料を用いる慣
用の化学分析または血液分析と比較して、比較的多量（
例えば０．１〜ｌ、　Ｑ　ｍｌ　）の流体試料が必要で
ある。

２）試験混合物の特異的結合反応に多大の時間（例えば
数時間〜１晩）が必要である ３）反応終了後に抗原−抗体結合複合体と未結合体の物
理的分離（Ｂ／Ｆ分離という）が必要である。

４）免疫分析反応を完了させるためには多くの工程が必
要であり、またその工程けｌｌ？、ｌ々別々に行わねば
ならない。（例えば試料添加、インキュベート、分離、
ラベル即ち標識体の定量等の工程） ５）自動化システムへの適応が困難である。

これらの諸欠点を克服することが可能な乾燥糸の化学（
ドライ・ケミストリー）を用いる分析系が例えば特開昭
５５−９０８５９号に開円くされて（・る。

ドライ・ケミストーリーを用いた分析方法はく」シ自体
で溶液系の化学（ウェット・ケミストリー）に比べて操
作が簡便で、かつ試桑調製の労力を著るしく軽減し、そ
の上廃液による環境汚染を防止することが可１・１５で
あり、また試料中に含まれる種々の菌体やウィルス等に
よる二次感染を防止し得るという長所を有している。

この方法は可撓性プラスチック支持体上に高分子ビーズ
重合体からなる構造層（レジストレーション層と称する
）、抗体な′不動化した着色高分子ビーズ重合体からな
る構造体を順次塗布したものに代表される素子に未ラベ
ル抗原（被検流体）と一定量の螢光ラベル抗原を混合し
た試料を一定量適用すること罠より、未ラベル抗原とラ
ベル抗原が抗体に対して競合結合し、レジストレーショ
ン層へ泳動した未反応のラベル抗原量を測定することに
より、流体試料中の抗原を定量するものであり有用であ
る。

しかしながら、上記方法では、レジストレーション層へ
泳動した未４．１１合ラベル抗原の検出（Ｆ検出と称す
）または不動化抗体へ結合した結合ラベル抗原の検出（
Ｂ検出と呼ぶ）により、流体試料中の未ラベル抗原の量
を決定するが、上記Ｆ検出により未ラベル抗原の量を決
定するため、必然的に大きな誤差を含む可能性があると
いう欠点を有している。これは特に極ｅ、　ｊ４ｉシか
存イｊ（１７：ｔ−い成分、を検出する際に著しい。す
なわち、極すｋｈ口ｙＶ、分の検７Ｂ結果は、ラベル抗
原１１１−のバラク４、非１９ｂ゛・−重結合生成、塗
布膜厚のバラツキ、または例えば光源輝度の変動による
強度の艮化六）（））如き結果検出の測定に帰因するバ
ラツキ霜匠よ勺て定−Ｉ、；植の信頼性を低下せしめて
いる。

そこで本発明の目的は、免疫反応シートに、抗原−抗体
結合複合体と未結合体との物１１１１的分離を１７ｒ１
便かつ迅速に行なうことによって測定の定う１；、性が
改良し得る免疫分析素子を提供づ゛ろことにある。

本発明者等が鋭意検討を重ねた結果、ｆ２ｉＪ記の目的
は、流体試料と自由に接触しｆ！ｊ　４＞相方、連絡空
隙構造を有する多孔性媒体からなる免疫反１＋ｉ、−シ
ートと、未結合物収納層を有する未結合物収納シートと
が互に独立して対をなす流体分析用免疫分析素子におい
て、上記免疫反応シートの多孔性媒体が空隙率２５乃至
８５パーセントで、前記流体試別に対して非膨潤性であ
ると共に不浸透性であり、かつ該多孔性媒体には上記流
体中の免疫活性物質と特異的に結合する物質を含有せし
め、さらにこれと対を゛なす未結合物収納シートには、
前記免疫反応シート中で免疫反ｒ；ａ；にあずからなか
った物質な含む流体夕収納し得ろごとくなした免疫分析
素子により達成し得ろことがわかった。

以下、更に詳細に本発明を説明する。

本発明の免疫分析素子を用うる流体試料の測定は、分析
を７：（ｊべき未知の抗原を含む流体試料をラベル抗原
の存在下において上記素子と接触せしめることにより行
オつれる。上記ラベル抗原を免疫分析素子と協働させる
方法としては、下記に記載されるようないくつかの方法
がある。

すなわち、（１）流体試料（未ラベル抗原を含む）へ、
ラベル抗原を直接添加し、次いでラベル抗原を含む流体
試料を分析のために免疫分析素子に適用する。（２）免
疫分析素子へ、ラベル抗原および流体試料を個別的て添
加する。（例えば（イ）流体試料、添加の直前または直
後にラベル抗原を添加する。

あるいは（ロ）ラベル抗原を分析素子へ添加し、続いて
乾燥し、そして流体試料添加の際に素子を再湿潤させる
。）（３）流体試料を単に適用す４）ことにより分析の
開始を可能にするように、ラベル抗原を免疫分析素子に
組み入れる。例えばラベル抗原を分析素子の遮蔽層およ
び検出層、または不動化抗体を含む該素子の抗原抗体反
応層に組み入れることができる。どの場合もラベル抗原
を分析素子罠組み入れる時は、ラベル抗原を不動化抗体
と離して保存し、ラベル抗原の抗体への時期尚早の結果
を回避せしめる。

上記の如き各種の方法により協働し得る状態に置かれた
ラベル抗原の存在下に、液体試料を免疫分析素子と接触
せしめろと、ラベル抗原と未ラベル抗原（試料中に存在
する測定すべき未知検体である）は、素子内の抗原−抗
体反応層に不動化して存在する抗体に対して競合結合す
る。

その結果、前記構成になる本発明の免疫分析素子の一方
のシート側から測定することにより、未反応のラベル抗
原ｆｔ（Ｆ検出による）が、また本発明の上記素子の＋
他方のシート側から測定することにより、反応したラベ
ル抗原量（Ｂ検出による）がそれぞれ測定可能にされる
。

上記の測定法においては、実際には、Ｂ検知に際しては
反応したラベル抗原のみならず未反応のラベル抗原や、
その他非特異的結合体等も含まれるが、これらは上記の
Ｆ検出値から補正することができる。

上記により明らかなように本発明の免疫分析素子によれ
ば同時にＦ検出値とＢ検出値とを測定することができる
。そして本発明によれば流体試料中の未ラベル抗原の量
は、測定値の上記Ｐ゛とＢとを用いて精度良く決定する
ことが可能である。

本発明の光疫分析素子は府述のとおり、免疫反応シート
と未結合物収納シートとを組合わせてなることを特徴と
する。そして上記本発明に係わる免疫反応シートは、２
５％〜８５％の空隙率を有する相互連絡空隙構造を特徴
とする多孔性媒体からなるものである。

本発明における多孔性媒体とは、検体である液体試料を
単位面積当り一定容量の割合で収納し得るものであり、
かつ該媒体内を流体試料が自由に移動することができ、
さらには該媒体の孔表面に自由に接触することが可能と
されるものを意味する。このような機能を有する多孔性
媒体の１４体例としては、メンブレンフィルター、布、
ガラス繊維１紙、ガラスフィルター、Ｐ紙等を挙げるこ
とかできる。この他の多孔性媒体と］−ては、例えば特
開昭５５−９０８５９号、特願昭５５−１７９６１３号
、同５５−１７９６１４号に記載さねたものもある。−
に記特開昭５５−９０８５９号に記載された媒体は、流
体に対して非膨潤性かつ非不浸透性の熱安定性有機高分
子重合体粒子結合体からなる多孔性媒体である。上記粒
子結合体とは、異４１ｆｔの有機ポリマーからなる接着
剤により粒子が三次元格子を形成しているものである。

また前記特願昭５５−１７９６１３号には、粒子表面に
官能基を有する如き流体試４Ｆに対して非膨潤性、かつ
不浸透性の熱安定性有機高分子重合体粒子単位・を低分
子化合物を介して結合せしめた粒子結合体が記載されて
おり、更に前記特願昭５５−１７９６１４号には、上記
と同じ熱容定性有機高分子重合体粒子単位同志が直接結
合した粒子結合体げ特願昭５６−１８９７８４号および
特願昭　５７−６５０５号記載の媒体が′挙げられるが
、２前者は粒子表面に官能基な有する有機高分子重合体
粒子単位ン核とし、該粒子単位表面に親水性重合体を殻
として有する核殻多層構造を有する単位からなるもので
あり、後者は核部分がガラス、無機物質でなるものであ
る。

上記の粒子単位表面の殻を描成する親水性重合体の例と
しては、例えばゼラチン、酸処理のゼラチンの如き、ゼ
ラチン類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエ
チルセルロース等の水溶性セルロース誘導体類、プルラ
ン、カルボキシメチルプルラン等のプルラン誘導体類、
ポリビニルア）ｖ　コーｙ　、ポリビニルピロリドン、
ポリアクリルアミド、ポリアクリルアミド等の水溶性ビ
ニルポリマー類等が挙げられる。

更に前述の粒子単位の親水外殻表面にはｉｌｌ離性放射
線又は光架橋性官能基を導入する４１１が＋ｉＪ能であ
る。これら官能基は、特公昭５６−５７６１３、同５６
−５７６２号及び同５６−５７６３ち・等に詳細に記載
されている。

また更に、前記の核殻多層借造をイｊする粒子単位は、
該粒子の親水性重合体に少なくとも一種の試薬を含有す
ることができる。ここで試薬とは基質または合成基質、
色原体等およびラベル体とｌが。

慟して有意義な検出糸を形成−３−ることができる物質
、例えば希土類原子イＡン等を挙げる仁とができる。

前記本発明に係わる免疫反応シートとじて用いられる多
孔性媒体の具体例については前述の通りであるが、特に
特願昭５５−１７９６１３号、同５５−１７９６１．４
　　号、同５６−１８９７８４号および同５７−６５０
５号等に記載のある媒体は、塗布により成膜が可能であ
り、このため膜厚を一冗に管理１−ることか容易なので
有用であるが、そのｒＭ　ＩＪＬＩも充分満足に足るも
のである。

前記の粒子単位の合成は、前記刊行物に群細に記載され
ており、これに従って容易に合成することができる。

本発明における粒子単位表面には、例えば物理吸着法ま
たは化学結合法等により免疫活性物質例えば抗原あるい
は抗体等を担持させることができる。

上記物理吸着法によれば、抗原あるいは抗体を水または
適当な緩衝液に溶解させて、この中に上記粒子単位また
は該粒子単位を粒子結合体としたものを浸漬して吸着さ
せる。この際の緩衝液としては０．０１〜１．０（ル程
度の適当な濃度のものを用いることができる。また吸着
させる物質の濃度は０．００１〜１．０％の範囲で用い
られ、表面を十分圧清浄にした粒子単位または粒子結合
体を浸漬せしめ吸着させる。吸オｊ時の温度は室温また
はそれ以下が好ましく、所要時間は１０〜１００時間が
好ましし）。

上記により得られた粒子単位または粒子結合体は、分離
の後、水または緩衝液で洗浄し、吸着にあずからなかっ
た抗原あるいは抗体を取り去ることが好ましい。前記化
学結合法では、抗原あるいは抗体を粒子単位表面上の官
能基と直接的に、または多官能性試薬を用いて間接的に
結合させる７、これらの方法は、例えば千畑一部編［固
定化酵素Ｊ　（１９７５年講談社刊）Ｋ記載されている
酵素等の固定化技術を応用する事が出来る。−例を挙げ
ればジアゾ化法、アミド法、アルギル化法及びグルタル
アルデヒドへキサメチレンジイソシアネート等がある。

当然のことながら、抗原又は抗体の結合は本発明に係わ
る粒子単位に結合させてから粒子結合体を作製すること
もでき、また、あらかじめ粒子結合体を作製した後、抗
原又は抗体を結合することもできる。更に本発明に係わ
る粒子単位には、必要に応じて免疫反応における非特異
的反応を排除する目的で、測定すべき免疫反応に関与し
ないタンパク質を担持する串が可能である。これらの代
表的な例としては補乳動物の正常血清タンパク質、アル
ブミン、ゼラチン及びその分解物等が挙げられる。

これらの担持方法は前述と同じように物理吸着法及び化
学結合法を適宜用いる事が出来る。

本発明に係わる粒子単位は、種々の方法を用いて塗布す
ることができ、例えば好ましい方法の１つとして下記の
工程な拳げることができる３゜（Ｉ）本発明に係わる粒
子単位を、該粒子を溶解しンよい液体キャリヤに分散し
安定な分散液を調製し、 （２）　　この安定な分散液を支持体に適用し、（３）
該粒子単位を適当な温度で該粒子単位同志の結合を起さ
せながら液体キャリヤを除去づ−る。

（４）皮膜形成後、必要に応じて支持体から粒子結合体
を剥離する。

上記の安定な分散液とは、粒子単位同志が凝集塊を形成
することなくキャリヤ中に存在することを意味する。前
述の免疫反応シートを製造するために有用な分散液は、
同分散液を支持体−ヒに適用するに十分な時間、安定で
ある必要がある。

Ｃ−のような安定な分散液を製造するためには、多くの
方法を単独又は組合わせて用いる事が可能である。例え
ば有用な方法の一つとして、界面活性剤を液体キャリヤ
ーへ添加し粒子単位の分＠液中における分布及び安定化
を促進１′ろｊＪＧかできる。

使用可能な代表的な界面活性剤の例としては、トライト
ン■Ｘ−１００（ロームアントノ１−ス社製オクヂルフ
エノキシボリエトキシエタノール）サーフアクタン）Ｌ
ＯＧ■（オリーン社製）ニルフェノキシポリグリシドー
ル）等の非イ」ン性界面活性剤がある。

上記界面活性剤は広範に選択された］Ｉｔを用いろ事が
可能であるが、重合体粒子単位の重りにに対して、１０
重量パーセント乃至０．００５重量パーセント好ましく
は６重量パーセント乃至０．０５重量パーセント用いる
事ができる。更に別の方法として該粒子単位と液体キャ
リヤーの音波処理、物理的混合及び物理的攪拌処理、ｐ
ＨＦｍ製がある。こわらは前記の方法と組合わせる事に
より、さらに有用である。

本発明に係わる粒子単位は分散液の液体キャリヤーを除
去する際に該粒子単位同志の接触界面で結合させる事で
多孔性の層を製造するものであるが、結合を起こさせる
触媒、たとえは酸、アルカリを分散液中に存在させるこ
とも有用である。特に酸触媒のうち揮発性酸触媒（例え
ば酢酸等）その他を用いる事は有用である。又液体キャ
リヤーを除去する操作は粒子単位の熱安定性温度以下お
よび免疫活性物質と特異的に結合する物質の失活する温
度以下であることが望ましいが、好ましくは１０乃至６
０℃の温度により実施することができる。

前記分散液の液体キャリヤーは、水性液体を用いること
ができる。しかしながら、該粒子単位がキャリヤーに不
溶性であり、従って、それらの粒状特性が保持されると
いう条件で種々の有機液体のような他の液体キャリヤー
も使用可能である。

人以外の代表的な液体キャリヤーには、水混和性有機溶
媒、水と水混和性有機溶媒の水性混和物及び適当な水不
混和性有機溶媒がある。水混和性有機溶媒には、低級ア
ルコール（即ち、アルキル基の炭素数１乃至４個のアル
コールフ、アセトン及びテトラヒドロフランがある。水
不混和性溶媒には、酢酸エチルの如き低級アルキルエス
テル、及びハロゲン化炭化水素（例えばクロロホルム塩
化メチレン及び四塩化炭素等）の如きハロゲン化有機溶
媒がある。

本発明に係わる粒子単位を塗布してなる層を有する分析
素子は、例えば浸漬塗布法、エアーナイフ法、カーテン
塗布法又は米国特許第２．６８１゜２９４号明細書に記
載の如きポツパーを用いる押し出し塗布性等各種の塗布
法で塗布する事が可能であり、所望により、二層又はそ
れ以上の層を米国特許第２，７６１，７９１号及び英国
特許第８３７゜０９５号明細書に記載の方法で同時に塗
布１゛る小も出来る。

本発明に係わる免疫反応シートの膜厚は、空隙率と適用
される流体試料の量によ一つて決められるべきであるが
、例えば約５０ミクロン〜１０００　　ミクロン、好ま
しくは約１５０ミクロン〜５００ミクロンである。

また上記免疫反応シートは、それ自身が自己支特性を有
しているので、特に支持体を必要と′することはないが
、支持体を用うる場合には好ましい支持体として液体不
浸透性支持体を用うろことができる。

しかしながら、免疫分析における最終の検知反応が分光
学的測定、例えば可視または紫外領域における濃度の測
定あるいは螢光光度測定および発光反応における発光強
度測定法等の場合には、支持体は光透過性である必要が
ある。この際、検出反応に必要な波長領域以外の波長に
対しては光不透過性であってもよい。

また更に放射性同位元素による放射能計測を検ａｔする
場合には光透過性であってもなくてもよいことは言うま
でもない。

本発明において必要に応じて用いられる支持体の一例と
して、三酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタＬ／−
）、ホリカーボネート、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン
等の如き合成高分子物質またはガラス、金属等を挙げる
ことができる。

次に本発明の免疫分析素子において前記免疫反応シート
と対をなして使用される未結合物収納シートは、吸水性
の素材からなるシートが用いられろ。この吸水性につい
ては、例えば上記シートを構成する素材自体が吸水性を
有してい゛（もよく、Ｔｉだ多孔性のシートの場合には
、該シートの孔に毛細管現象を利用して吸収させること
もできるので、このように多孔性であってもよく、また
上記の双方の性質を兼ね備えたものであ−）゛（もよい
７、上記吸収性を有する素材の例としては、天然または
合成の親水性ポリマーがあるが、例えはセラチン、ゼラ
チン誘導体、アガロース、アルギン酸およびその塩、ア
クリルアミドおよびその！＋ｉｉ分加水分解水分解物ビ
ニルピロリドン、カルボギシメチルセルロースのアルカ
リ塩、ヒドロキシエチルセルロース等の親水性セルロー
ス誘導体、さらには超吸水性高分子物として知られるア
クリロニトリルグラフト化デン粉の加水分解物等を挙げ
ることができる。

また前述の免疫分析シートで用いられた親水性高分子物
質も本発明に係わる未結合物収納シートとして有用に用
いることができる。

更には、親水性ゲルを粒子状態にし、これをシート状に
加工したものは、多孔性かつ吸水性の未結合物収納シー
トとして好ましく用いられる。これらの叙水性の素材は
、例えば架橋ポリアクリルアミド、架橋デキストリン、
カラギーナン、架橋アガロース等からなる親水性ゲルを
用いることＫより得られる。これらの親水性ゲルは、バ
イオゲ■ Ａ／　　（Ｂｉｏ　−Ｇｅｌ＠　バイオラッド社）、セ
ファデックス［Ｆ］（５ｅｐｈａｄ＠ρファルマシア社
）の商品名で呼ばれている。

本発明に係わる上記未結合物収納層は、該層が自己支持
性を有する限り支持体を用いることは任意であるが、支
持体上に塗布することが好ましい。

この際の塗布方法としては、前述の免疫反応シートの場
合と全く同様に写真工業の分野で用いられている一般的
な塗布方法を適用することができる。

また用いられる親水性高分子物質は必要にｌｉｔ、〜じ
て、その吸水性を調節するためにａｍ剤の使用により架
橋反応を利用することができる。

また更には、前記のセファデックス■またはバイオゲル
［Ｆ］等の親水性ゲルの粒子を上記のシートの素子とし
て用いる場合忙は、その粒子同志の接触面を二官能試薬
、例えばカルボイミド、ゲルタールアルデヒド等により
結合させることにより本発明に係わる未結合物収納シー
トを形成させることが好ましい。このよ５Ｋして７ηら
れた粒子結合体は任意な形状（例えば粒状、ブレイク状
、実用的には球状）の粒子単位間の接触部位を化学結合
により結合させた結合体であって、該結合体内には相互
連絡した空隙を有し、広大な内表面を有している。

本発明に係わる未結合物収納シートを構成する上記の如
き吸水性のＪ曽に、ラベル抗原または抗体と特異的に結
合する抗体または抗原を含有せしめることができる。こ
れＫよって免疫反応にあずからなかった未結合ラベル抗
原または抗体を不動化することが可能であり、Ｆ検知の
測定をより精度良く行な５ことができる。

また上記未結合物収納層は免疫反応にあ１がらなかった
未結合物を含有する流体を吸収するに十分な膜厚があれ
ばよい。例えば約２５ミクロン〜８００ミクロンの範囲
で適宜選択することが可能である。

以下に本発明の免疫分析素子ケ用いた分析法の一例を競
合法により説明１−る。

（１）未知量の抗原を含む流体試料に一定量のラベル抗
原を混合し、該混合液を免疫反応シート上に一定量滴下
する。

（２）一定温度、一定時間インキュベーションを行なう
。

（３）　　未結合物収納シートと免疫反応シートとを重
ね合わせ、不用の流体試料を該収納シートに吸収させる
。（この際、必要に応じて洗浄のための綴衝液等を新た
に免疫反応シート側から滴下することができる） 以上のようシこしてＢ　／　Ｆ分離されたものを標識化
合物の種類に従って結果検出のための工程を行なう。結
果検出は、免疫反応シートを測定することによりＢ検出
が行われ、または未結合物収納シートを測定することに
よりＦ検出が行われてなし得るものであるが、上記の両
検出による測定を同時に行なって補正することによつＣ
１Ｌり精り川の高い分析結果を得ることができる。当然
のことながら、結果検出は仕職化合物、検出Ｊｙ応等の
様式により選択されなければならない。例えば放射免疫
測定法（ラジオイムノアッセイ）の場合、標識化合物で
ある放射性同位元素の放射能をシンチシ・−ジョン計測
を行なう必要があり、酵素免疫測定法（エンザイムイム
ノアツ七イ）の場合には、標識化合物でｌ、＋る酵素と
協働する基質および／または色原体の種類により、可視
または紫外部の吸光度または螢光度または発光強度を測
定する必要があり、また史に螢光免疫測定法（フルメロ
イムノアッセイ〕の場合では、標識化合物である螢光物
質の螢光強度を測定する必要がある。

本発明における免疫反応の様式も競合法、ツンドイツチ
法、二抗体法等種々のものがあり、必要に応じて組合わ
せて用いることができる。

こねらについては各種の文献に詳細に説明されているが
、例えば入江實編「ラジオイムノアッセイＪ　（１９７
４年、講談社）、石川栄治、河合忠、宮井潔編集「酵素
免疫測定法Ｊ　（１９７８年、医学書院〕等に記載があ
る。

本発明の免疫分析素子はイムノアッセイにおけるＢ　／
　Ｆ分離をより容易かつ簡便に改良しただけでなく、本
質的にドライ・ケミストリーによる方式であり、各種の
利点を有するものである。

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、本発明はこれらによって限定されるものではない。

実施例１ （１）免疫反応シートの作製 平均粒径２１μｍのポリ（スチレン−ツーｎ−ブチルメ
タアクリレート−コーグリシジルメタアクリレート）（
但し、重量％７５　；１５　；ｉｏ　）の高分子重合体
粒子単位表面Ｋ、ウサギ抗ヒトα−１−フェトプロティ
ン抗体（デンマーク、ダコバツク社）を吸着させた抗体
感作高分子重合体粒子単位を５重量％のトリトン［Ｆ］
Ｘ−１００（ノニオン界面活性剤、ロームエンドハース
社製）と共に乾燥膜厚約３５０μｍになるようにポリエ
チレンテレ−フタレート支持体上に塗布し、４２℃、３
０分間乾燥を行ない、成膜後、支持体から剥離し、本発
明の免疫反応シートとした。

（２）未結合物収納シートの作製 下塗り済みポリエチレンテレフタレート支持体上に、下
記組成の塗布液を乾燥膜厚約８０μｍになるよ５に塗布
し、未結合物収納シートとした。

（塗布液組成） （３）ヒトα−１−フェトプロティンの測定上記の如く
作製した免疫反応シートに対して、標識抗原としてフル
オレセインインチオシアネー）　（ＦＩＴＣ）標識α−
１−フェトプロティン１×１０７Ｍ　及び未ラベル抗原
として下記第１表が示す如くＯ〜ｌＸｌ０−’Ｍまでの
種々のヒトα−１−フェトプロティンを含む試験検体を
調製し、各々１０μｌを免疫反応シート上に滴下し、３
７℃、２０分間インキュベーションを行なった後、前述
の未結合物収納シートと未結合物収納層と免疫反応シー
トが接するように重ね合わせ、不用の流体を吸収させた
後、１免疫反応シートを４８５ｎｍに励起フィルター、
５２５ｎｍに発光フィルターを有する反射螢光光度計を
用いてフルオレセインの螢光光度を測定した。

その結果を下記第１表に示す。

（第１表） 以上第１表の結果から明らかな如く、本発明の免疫分析
素子けＢ／Ｆ分離を１７ｔＪ便に行なえると同時に良好
な検量線をえかくことが出来る。

実施例２ （１）未結合物収納シート 実施例１の上記シートの代りに、下記のシートを未結合
物収納シート（２）とした。

（未結合物収納シート組成） 上記組成の塗布液な下塗り済みポリエチレンテレフタレ
ート支持体上に乾燥膜厚的４００　ｔｔｍになるように
塗布して乾燥後、上記支持体から５７４１離して、本実
施例の未結合物収納シート（２）とした。

また同様に実施例１の前記シートの代りに、下記のシー
トを未結合物収納シート（３）とした。

（未結合物収納シート組成） ｒｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−１５０（７アルマシア・シャ
ツ（ソ株））上記組成の塗布液を下塗り済みポリエチレ
ンテレフタレート支持体上に乾燥膜厚約６００ミクロン
になるように塗布、乾燥し、本実施例の未結合物収納シ
ート（３）とした。

上記により得られた未結合物収納シート（２）および（
３）を実施例１において作製した免疫反応シートと組合
わせ、本発明の免疫分析素子とした。

（２）モトα−１−フェトプロティンの測定上記により
免疫分析素子として組合わされた免疫反応シート上に、
　　Ｆ工ＴＣ−α−１−フェトプロティンｌＸｌ０−’
Ｍ米テラベル抗原してα−１−フェトプロティンｌＸｌ
０−’Ｍの濃度の検体試料を１０μ１滴下し、３７℃、
２０分間インキュベーションを行ない、実施（γす１と
同様にして螢光強度を測定し。

その結果を下記第２表に示した。

以工倹↑白 （５、っスソ″ （第２表） 変動係数（１）　　３．６１％　　　３．４５％上記第
２表の示す結果からも明らかなように本発明の免疫分析
素子は良好な測定精度を有するものであることがわかる
。

代理人　　桑　原　鵜　美

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 流体試料と自由に接触し得る相互連絡空隙構造を有する
   多孔性媒体からなる免疫反応シートと、未結合物収納層
   を有する未結合物ηメ納シートとが、互に独立して対を
   なす流体分析用免疫分析素子において、上記免疫反応ン
   ートの多孔性媒体が、空隙率２５乃至８５パーセントで
   、前記流体試料に対して非膨潤性であると共に不浸透性
   であり、かつ該多孔性媒体には上記流体中の免疫活性物
   質と特異的に結合する物質を含有せしめ、さらＫこれと
   対をなす未結合物収納シートには、前記免疫反応シート
   中で免疫反応にあずからなかった物質゛を含む流体を収
   納し得るごとくなしたことを特徴とする免疫分析素子。