JPH0315702B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は流体試料中の微量成分測定法に関し更
に詳しくは定量免疫分析素子の測定法に関する。 流体（特に生物学的流体試料）中に微量しか存
在しない物質の定量法として免疫学的反応が種々
用いられてきた。免疫学的反応は流体試料中の免
疫活性物質（例えば抗原）と該活性物質と特異的
に結合する物質（例えば抗体）の特異的な結合反
応であり、この原理を利用し種々の分析反応の開
発がなされてきた。 特に1958年にBersonとYallwが放射性ヨード
¹³¹Iで標識したインシユリンと糖尿病患者の血清
からとりだしたインシユリン抗体を用いて血清中
のインシユリンを測定する事に成功した。 該放射免疫測定法（ラジオイムノアツセイ、
RIAと略す）は高い感度を有する良好な定量析法
であるが、標識化合物に放射性同位元素を用いる
為、特殊な施設が必要で、通常の実験室では使用
が困難であること、又廃液にも細心の配慮が必要
であること、半減期の短かい放射性同位元素の場
合長時間保存ができないこと等々の欠点も有す
る。このため放射性同位元素を他の標識で置きか
えた方法が注目されはじめた。その例としては標
識物質として酵素、バクテリオフアージ、金属及
び有機金属の錯体、補酵素、酵素基質、酵素阻害
物質、循環反応体、有機補欠分子族、化学発光性
反応体及び螢光性分子等が挙げられる。これらの
中で現在実際に測定に使用されているものは酵素
を用いた酵素イムノアツセイ（EIA）、螢光性分
子を用いた螢光イムノアツセイ（FIA）等であ
る。 しかしながら通用しているこれら前記の免疫分
析方法では、下記に示す種々の欠点を有してい
る。 (1) 典型的には10乃至200μの流体試料を用い
る慣用の化学分析又は血液分析と比較して、比
較的多量（例えば、0.1乃至1.0ml）の流体試料
が必要である。 (2) 試験混合物の特異的結合反応に多大の時間が
必要である。（例えば数時間乃至１晩） (3) 反応終了後に抗原一抗体結合複合体と未結合
体の物理的分離（Ｂ／Ｆ分離という）が必要で
ある。 (4) 免疫分析反応を完了させるためには多くの工
程が必要であり、又その工程は個々別々に行な
らねばならない（例えば試料添加、インキユベ
ート、分離、ラベル（標識体）の定量等の工
程）。 (5) 自動化システムへの適合が困難である。 一方これらの欠点を克服することが可能な乾燥
系の化学（ドライ・ケミストリー）を用いる分析
系が特開昭55−90859号に開示されている。この
方法は、可撓性プラスチツク支持体上に高分子重
合体ビーズからなる構造層（レジストレーシヨン
層と称する）に抗体を不動化した着色高分子重合
体ビーズからなる構造層を順次塗布したものに代
表される免疫分析素子に未ラベル抗原（流体試
料）と一定量の螢光ラベル抗原を混合した試料を
一定量適用することにより未ラベル抗原とラベル
抗原が抗体に対して競合結合し、レジストレーシ
ヨン層へ泳動した未反応のラベル抗原量を測定す
ることにより流体試料中の抗原を定量するもので
ある。 しかしながらこの方法では、(A)レジストレーシ
ヨン層へ泳動した未結合ラベル抗原の検出（Ｆ検
出と称す）又は、(B)Ｂ）不動化抗体へ結合した結
合ラベル抗原の検出（Ｂ検出と称す）により流体
試料中の未ラベル抗原の量を決定するが、Ｆおよ
びＢどちらか一方の検出により、未ラベル抗原の
量を決定するため、必然的に大きな誤差を含む可
能性があるという欠点を有している。これは特に
極微量しか存在しない成分を検出する際に著し
い。即ち極微量成分の検出結果はラベル抗原量の
ばらつき、非特異的結合の生成混入、或は塗布膜
厚のばらつき、測定条件の変動（例えば光源輝度
等）に起因する誤差を含むという欠点を有し、定
量値の信頼性を低くしている。 本発明の目的は、上記した種々の欠点を有しな
い免疫分析素子測定法を提供することにある。 本発明者らは鋭意検討を重ねた結果、多孔性媒
体から成る第一検知層、遮蔽層及び第二検知層の
少なくとも３層を順次積層して有し、かつ第１検
知層又は第２検知層のいずれか一方にのみ流体試
料中の免疫活性物質と特異的に結合する物質を含
有した免疫分析用分析素子を用い、免疫反応終了
後に免疫反応量に対応した検知量を前記第一検知
層及び第二検知層の両方から測定し、第一検知層
側の測定値と第二検知層側の測定値の和に対する
第一検知層側の測定値との比、または第一検知層
側の測定値と第二検知層側の測定値の和に対する
第二検知層側の測定値との比を求めることを特徴
とする免疫分析素子測定法により上記欠点を克服
することができた。 以下に本発明を詳しく説明する。 本発明は免疫分析において例えばラベル抗原と
抗体が結合した複合体（Bound、Ｂと略す）と未
結合のラベル抗原（Free、Ｆと略す）を同時に
測定し、流体試料中の道の抗原量を決定すること
から成るものであるが、まづこの免疫分析素子
（以後誤を犯す恐のないときには、分析素子、更
に素子と略すことがある）を用いる測定原理につ
いて説明する。未知の抗原の分析をすべき流体試
料をラベル抗原の存在下で素子と接触させる。ラ
ベル抗原を次のような、いくつかの方法の１つに
より免疫分析素子と協働させることができる。 即ち、流体試料（未ラベル抗原を含む）ヘラ
ベル抗原を直接添加し、次いでラベル抗原を含む
流体試料を分析のために免疫分析素子に適用す
る。免疫分析素子へ、ラベル抗原及び流体試料
を個別的に添加する（たとえば(イ)流体試料添加の
直前又は直後のラベル抗原の添加並びに(ロ)ラベル
抗原を素子へ添加し、続いて乾燥し、そして流体
試料添加の際素子を再湿潤させる）。流体試料
を単に適用することにより分析開始可能にするよ
うにラベル抗原を免疫分析素子に組み入れる。た
とえばラベル抗原を素子の遮蔽層及び検知層か、
又は不動化抗体を含み抗原体反応を行なう素子構
成要素層に組み入れることが出来る。どの場合も
ラベル抗原を素子に組み入れる時は、ラベル抗原
を不動化抗体と離して保持し、ラベル抗原の抗体
への時期尚早の結合を回避するよう注意を払わね
ばならない。 前述のような協働ラベル抗原の存在下で液体試
料を免疫分析素子と接触させる時ラベル抗原及び
未ラベル抗原（試料中に存在し、そして測定すべ
き未知物である）は、素子内の抗原一抗体反応を
行わせる層に不動化して存在する抗体へ競合結合
する。 その結果分析素子の一方の側から測定すれば、
未反応のラベル抗原量(F)他方の側から測定すれ
ば、反応したラベル抗原量(B)（実際には未反応の
ラベル抗原その他非特異的結合も存在するがＦの
値から補正する事が可能である。）を測定するこ
とができる。 本発明に係る分析素子は同時にＦとＢを測定す
ることができる。流体試料中の未ラベル抗原の量
は、測定値ＦとＢとを用いて精度良く決定するこ
とが可能である。 本発明に係る第一検知層、遮蔽層及び第二検知
層は、多孔性媒体であれば用いることが可能であ
る。本発明における“多孔性媒体”とは、検体で
ある流体試料を単位面積当り一定量収納する事が
可能であり、かつ該媒体内及び媒体層間の流体試
料の自由な移動が可能であり、更に媒体層の界面
に流体試料が自由に接触する事が可能であるもの
をいう。例えば、メンブレンフイルター、布、濾
紙或は、ガラス繊維濾紙が挙げられる。更に他の
多孔性媒体としては特開昭55−90859号及び特開
昭57−101760号、同55−101761号に記載されたも
のが挙げられる。特開昭55−90859号に於る方法
は前述の如く流体に対して非膨潤性かつ不浸透性
の熱安全性有機高分子粒子と該粒子とは異種の有
機ポリマーから成る接着剤により三次元格子を形
成するものである。又特開昭57−101761号に於る
粒子結合体は表面に官能基を有する流体試料に対
して非膨潤性かつ不浸透性の熱安定性有機高分子
粒子単位を低分子化合物を介して結合させた粒子
結合体であり、特開昭57−101761号に於ては表面
に官能基を有する流体試料に対して非膨潤性かつ
不浸透性の熱安定性有機高分子重合体粒子単位が
該粒子単位同志が直接結合した粒子結合体であ
る。 上記引用例は本発明に係る多孔性媒体から成る
層として有用に用いる事が可能である。 他の好ましい多孔性媒体として特開昭56−
189784号及び特開昭57−6505号等に記載のものが
挙げられる。前者は媒体の構成素材である各個の
粒子表面に官能基を有する有機高分子重合体粒子
を核とし該粒子表面に親水性重合体を殻として有
する核殻多層構造の機能的な粒子単位から成るも
のであり、後者は核部分がガラス、無機物質であ
るものである。 前記の親水性殻部分を構成する素材としては、
例えばゼラチン、酸処理のゼラチンの如き、ゼラ
チン類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキ
シエチルセルロース等の水溶性セルロース誘導体
類、プルラン、カルポキシメチルプルラン等のプ
ルラン誘導体類、ポリビニルアルコール、ポリビ
ニルピロリドン、ポリアクリルアミド等の水溶性
ビニルポリマー類等が挙げられる。 更に前述の粒子単位の親水性殻表面には電離性
放射線又は光による架橋性官能基を導入する事が
可能である。これら官能基は特開昭56−5761号、
同56−5762号及び同56−5763号に詳細に記載され
ている。 更に前述の核殻多層構造を有する粒子単位は該
粒子の親水性殻部分に、少なくとも一種の試薬を
含有する事が可能である。ここにおける試薬とは
基質又は合成基質色原体等及びラベル体と協働し
て有意な検出系を形成することが可能な物質例え
ば希土類原子イオン等が挙げられる。 前述の粒子単位の合成は前記特許等に詳細に記
載されている。これらに従えば容易に合成する事
が可能である。本発明の粒子単位表面には免疫活
性物質例えば、抗原又は抗体等を担持する事が出
来る。担持の例えば物理吸着による方法及び化学
結合により抗原又は抗体を担持する方法がある。 物理吸着法としては抗原又は抗体を水又は適当
な緩衝液に溶解させ、これに本発明の粒子単位又
は粒子単位を粒子結合体としたものを浸漬して吸
着させる事が出来る。 この際緩衝液は0.01乃至1M程度の適当な緩衝
液を用いる事が出来る。又吸着させる物質の濃度
は0.001乃至1.0％の範囲で用い表面を十分に清浄
にした本発明に係る粒子単位又は粒子結合体を浸
漬し吸着させる。 上記吸着の為の温度は室温又はそれ以下が好ま
しく、時間は10乃至100時間が好ましい。 得られた粒子単位又は粒子結合体は、浸漬液か
ら分離した後水又は緩衝液で洗浄し吸着にあづか
らなかつた抗原又は抗体をとりさる事が好まし
い。 化学結合を用いる方法としては抗原又は抗体を
本発明の粒子単位表面上の官能基と直接又は多官
能性試薬を用いて結合する事が可能である。これ
らの方法は、例えば、千畑一郎編「固定化酵素」
（1975年講談社刊）に記載されている酵素等の固
定化技術を応用する事が出来る。一例を挙げれば
ジアゾ化法、アミド化法、アルキル化法及びグル
タルアルデヒド、ヘキサメチレンジイソシアネー
ト等を用いる方法がある。 当然の事ながら抗原又は抗体の結合は本発明に
係る粒子単位に結合させてから粒子結合体を作製
する事も又あらかじめ粒子結合体を作製した後抗
原又は抗体を結合する事も可能である。 更に該粒子単位には必要に応じて免疫反応にお
ける非特異的反王を排除する目的で、測定すべき
免疫反応に関与しない蛋白質を担持する事が可能
である。これらの代表的な例としては哺乳動物の
正常血清タンパク質、アルブミン、ゼラチン及び
その分解物等が挙げられる。 これら担持方法は前述と同じように物理吸着法
及び化学結合法を適宜用いる事が出来る。 以上詳述した素材方法を用いて本発明に係る多
孔性媒体から成る第一及び第二検知層を構成する
ことができる。また第一検知層若しくは第二検知
層のいづれかにのみ免疫反応に与る試薬或は物質
を付帯させることができ、ラベル物質との協働の
下に免疫反応を検知する様式に対応した検知量が
測定される。 また本発明に係る遮蔽層は前述の検知層と同様
のものを用いる事が可能である。その際第一及び
第二検知層の検知量測定に於て相互に干渉し合わ
ないようにする為に遮蔽剤として種々の顔料、染
料又は金属微粉末を含有する事が必須である。こ
の際の顔料又は染料は検知の様式によつて選択さ
れるものである。例えば、可視又は紫外部領域に
おける反射濃度を用いる場合その用いられる顔料
又は染料は二酸化チタン硫酸マグネシウム等の白
色が用いられる。又螢光強度によつて定量する場
合、用いる螢光物質から出る螢光を吸収する顔料
又は染料が用いられる。これらは用いられる螢光
物質の発螢光の波長により適宜選択されるべきで
あるが、例えばリーガル 300（カボツト社）、ウ
ツトング レツドＢピグメント（デユボン社）等
種々のものが挙げられる。又放射性同位元素を用
いる場合鉛等の放射性遮蔽剤を含有する事が可能
である。 上記顔料又は染料は例えば布、濾紙、ミクロフ
イルターの如きあらかじめ多孔性を有しているも
のは後から染色しても良いし布であれば紡糸の際
に紡糸液中の混合する事も可能であり、又ミクロ
フイルターにおいては、製造時に必要量を含有し
あらかじめ着色されたものを用いる事も可能であ
る。又特開昭55−90859号、特開昭57−101760号、
同57−101761号、特開昭56−189784号及び同57−
6505号等に記載の粒子結合体はあらかじめ製造時
に粒子単位内に顔料又は染料を含有する事は容易
でありそれらの詳細については同上公報或は明細
書に開示されている。 本発明に係る遮蔽剤は遮蔽層を構成する重量の
約0.1乃至約25重量パーセント含有する事が出来
る。 更に本発明に係る遮蔽層も前述の検知層と同様
に免疫反応における非特異的結合反応を防止する
為にその表面に非免疫性蛋白質例えば正常なセキ
ツイ動物の血清蛋白質やウシ血清アルブミン等を
担持する事が出来る。 本発明に用いられる分析素子は少なくとも第一
検知器、遮蔽層及び第二検知層の３層を有し、遮
蔽層を第一及び第二検知層の間に介在させて順次
積層してなりかつ各々が前記した多孔性媒体から
形成され、更に第一検知層又は第二検知層のいづ
れか一方に抗原又は抗体を担持したものである。 例えばあらかじめ多孔性の構造を有するものは
親水性の高分子例えばゼラチンの如きものの水溶
液を接着剤として各々の層を圧着する事により積
層する事が出来る。 更に塗布によつて積層する事も可能である。例
えば前述の特開昭55−90859号、特開昭57−
101760号、同57−101761号、特願昭56−189784号
及び同57−6505号等の粒子単位は塗布によつて前
述の各層を形成する事が出来る。 前記粒子単位は、種々の方法を用いて塗布する
事が可能である。好ましい方法の１つとして下記
の工程を挙げる事ができる。 (1) 前記粒子単位を、該粒子を溶解しない液体キ
ヤリヤーに分散し安全な分散液を調製し (2) この安定の分散液を支持体に適用し、そして (3) 該粒子単位を適当な温度で、該粒子単位同志
の結合を起こさせながら液体キヤリヤーを除去
する。 “安全な分散液”とは、粒子単位同志が凝集塊
を形成する事なくキヤリヤー中に存在する事を意
味する。前述の各層を製造するために有用な分散
液は、同分散液を支持体上に適用するに十分な時
間、安定である必要がある。 このような安定な分散液を製造するためには、
多くの方法を単独又は組合わせて用いる事が可能
である。例えば有用な方法の一つとして、界面活
性剤を液体キヤリヤーへ添加し粒子単位の分散液
中における分布及び安定化を促進する事ができ
る。 使用可能な代表的な界面活性剤の例としては、
トライトン Ｘ−100（ロームアンドハース社製；
オクチルフエノキシポリエトキシエタノール）サ
ーフアクタント10G （オリーン社製；ニルフエ
ノキシポリグリシドール）等の非イオン性界面活
性剤がある。 上記界面活性剤は広範に選択された量を用いる
事が可能であるが、重合体粒子単位の重量に対し
て、10重量パーセント乃至0.005重量パーセント
好ましくは６重量パーセント乃至0.05重量パーセ
ント用いる事ができる。更に別の方法として該粒
子単位と液体キヤリヤーの音波処理、物理的混
合、及び物理的撹拌処理、PH調整がある。これら
は前記の方法と組合わせる事により、さらに有用
である。 本発明に係る粒子単位は分散液の液体キヤリヤ
ーを除去する際に該粒子単位同志の接触界面で結
合させる事で多孔性の層を製造するものである
が、結合を起こさせる触媒、たとえば酸アルカリ
を分散液中に存在させる事も有用である。特に酸
触媒のうち揮発性酸触媒（例えば酢酸等）その他
を用いる事は有用である。又液体キヤリヤーを除
去する操作は、粒子単位の熱安定性温度以下及び
免疫活性物質と特異的に結合する物質の矢活する
温度以下である事が望ましいが、好ましくは10乃
至60℃の温度により実施する事ができる。 前記分散液の液体キヤリヤーは、水性液体を用
いることができる。しかしながら、該粒子単位が
キヤリヤーに不溶性であり、従つてそれらの粒状
特性が保持されるという条件で種々の有機液体の
ような他の液体キヤリヤーも使用可能である。 水以外の代表的な液体キヤリヤーには、水混和
性有機溶媒、水と水混和性有機溶媒の水性混和物
及び適当な水不混和性有機溶媒がある。水混和性
有機溶媒には、低級アルコール（即ち、アルキル
基の炭素数１乃至４個のアルコール）、アセトン
及びテトラヒドロフランがある。水不混和性溶媒
には、酢酸エチルの如き低級アルキルエステル、
及びハロゲン化炭化水素（例えばクロロホルム、
塩化メチレン及び四塩化炭素等）の如きハロゲン
化有機溶媒がある。 本発明に係る粒子単位を塗布して成る層を有す
る分析素子は例えば浸漬塗布法、エアーナイフ
法、カーテン塗布法又は米国特許第2681294号明
細書に記載の如きホツパーを用いる押し出し塗布
法等各種の塗布法で塗布する事が可能であり、所
望により、二層又はそれ以上の層を米国特許第
2761791号及ひ英国特許第837095号明細書に記載
の方法で同時に塗布する事も出来る。 本発明に係る素子に用いられる支持体としては
液体不浸透性ものであれば良い。但し、免疫分析
における最終の検知量測定が分光学的測定例え
ば、可視又は紫外領域における濃度あるいは螢光
光度測定及び発光反応における発光強度測定等の
場合支持体は光透過性である事が必要である。こ
の時検知量測定に必要な波長領域以外の波長に対
しては光不透過性であつても不都合はない。 更に放射性同位元素による放射能計測を検出す
る場合には光透過性でなくてもあつても良い事は
言うまでもない。 用いられる支持体の一例として、三酢酸セルロ
ース、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボ
ネート、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン等の合成
高分子又はガラス金属等種々のものが挙げられ
る。 次に本発明に係る素子の態様を１実施例に断面
図を用いて説明する。第１図は該図を示す。１は
第一検知量であつて粒子結合体による多孔性媒体
とし、粒子単位に免疫反応に於る特異反応物質を
付帯させた。２は遮蔽層であり、粒子結合体の粒
子単位に遮蔽剤を含有させている。３は同じく粒
子結合体よりなる第二検知層である。４は支持体
である。 前記３種の層は各々単一層であつてもよいし複
数層であつてもよい。また各層独自にまた積層構
成層は自己の形体を保持する剛性（自己支持性）
を有する故に支持体４は必ずしも必要ではない。 また前記３種の層は予め個所の薄層としてお
き、測定条件に最適の厚みに複数枚重ねて圧接し
層を構成して分析素子として使用する形態として
もよい。 本発明に係る免疫分析素子に適用する事が可能
なイムノアツセイは、その検知様式の如何にかか
わらず、全て用いる事が可能である。例を挙げれ
は放射免疫測定法（ラジオイムノアツセイ
（RIA））、酵素免疫測定法（エンザイムイムノア
ツセイ（EIA））、螢光免疫測定法（フルオロイム
ノアツセイ（FIA））等があげられる。 又反応の検出様式も、競合法、サンドイツチ法
二抗体法等種々のものが挙げられる。同上記の
種々の検知測定法及び種々の反応検出様式を所望
に応じて組合わせて用いる事が可能である。これ
らについては種々の成書又は総説に詳細に説明が
なされているが、例えば、入江寛編「ラジオイム
ノアツセイ」（1974年刊 講談社）石川栄治、河
合忠、宮井潔編集「酵素免疫測定法」（1978年刊
医学書院）に詳細に記載されている。 本発明に係る免疫分析素子を用いた測定法は、
BoundとFreeを両方測定する事により免疫分析
の精度をより向上させるものである。以下に本発
明を実施例をもつて説明するが、本発明はこれに
よつて何ら限定されるものではない。 実施例 １ 平均粒径21μｍのポリ（スチレン−コ−ｎ−ブ
チルメタクリレート−コ−グリシジメタクリレー
ト（75：15：10重量パーセント）の粒子10重量部
を非イオン性界面活性剤Triton Ｘ−100（ロー
ムアンドハース社製）0.5重量部、牛血清アルブ
ミン（和光純薬(株)）0.1重量部を含む燐酸緩衝剤
（0.01M、PH7.0）溶液に懸濁させ、懸濁液をポリ
エチレンテレフタレート支持体（膜厚180μｍ）
上に該粒子に関し塗布量を1.6ｇ／ｄm²に制御し
て塗布した後、フイルムドライヤーで42℃30分間
乾燥させ第１検知層を作成した。 この検知層上に同様にして遮蔽層、第２検知層
を塗布により形成して、ヒトα−フエトプロテイ
ン測定用分析素子を作成した。 遮蔽層、第２検知層は以下の通りである。 遮蔽層： リーガル300 （ガボツト社製）を２％重量だ
け分散含有するポリ（スチレン−コ−ｎ−ブチル
メタクリレート−コ−グリシジルメタクリレー
ト）（75：15：10重量パーセント）の平均粒径
21μｍの黒色粒子 塗布量0.8ｇ／ｄm² 第２検知層： 第１検知層に用いたのと同様に粒子にウサギ抗
ヒトα−フエトプロテイン抗体（デンマークダコ
パツク社）を吸着させた粒子 塗布量1.6ｇ／ｄ
m² この分析素子に正常成人血清から免疫吸着体を
用いてα−フエトプロテインを除いた血清に対し
て、ラベル抗原としてFITCラベル（フルオレセ
インイソチオシアネート）α−フエトプロテイン
１×10^-7M及び未ラベル抗原として０〜１×
10^-6Mにいたる種々のα−フエトプロテインを含
む試験血清を用意し、各々について10μを分析
素子に適用し、37℃で20分間インキユベートし
た。 その後485nｍに励起フイルター、525nｍに発
光フイルターを有する反射螢光光度計を用いて第
１検知層側、第２検知層側からフルオレセインの
螢光強度を測定し、表−１に示す結果を得た。

【表】 表からわかるように第１検知層、第２検知層の
みの測定だけでも各濃度のα−フエトプロテイン
を識別可能であるが、第１検知層側と第２検知層
側の測定値の和は一定していない。 これは螢光測定時の光源の変動等の種々の要因
に起因すると考えられるが、片方のみの測定では
測定値に常にこのような誤差を含んでいる危険性
があり又その程度を知る手段もない。本発明の如
く両方から測定することによつて初めて、測定値
の信頼性を確認することが可能である。 実施例 ２ 実施例１の分析素子にラベル抗原としてFITC
−α−フエトプロテイン１×10^-7M、未ラベル抗
原として１×10^-7Mの試験血清10μを滴下し37
℃20分間インキユベートし、実施例１と同様に螢
光強度を測定した所表−２に示す結果を得た。

【表】 ここで、Ｆ／Ｂ＋Ｆ、Ｂ／Ｂ＋Ｆをそれぞれに
ついて計算すると（変動分の補正） Ｆ／Ｂ＋Ｆで 変動係数 4.14％ Ｂ／Ｂ＋Ｆで 変動係数 1.38％ が得られた。 このように本発明の第１検知層、第２検知層の
両方から測定し、上記のような補正を加えること
によつて再現性が高まることは明らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係る分析素子の１実施例の断
面図である。 １……第一検知層、２……遮蔽層、３……第二
検知層、４……支持体、５……検知測定方向。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 多孔性媒体から成る第一検知層、遮蔽層及び
   第二検知層の少くとも３層を順次積層して有し、
   かつ第一検知層又は第二検知層のいずれか一方に
   のみ流体試料中の免疫活性物質と特異的に結合す
   る物質を含有した免疫分析素子を用い、免疫反応
   終了後に免疫反応量に対応した検知量を前記第一
   検知層及び第二検知層の両方から測定し、第一検
   知層側の測定値と第二検知層側の測定値の和に対
   する第一検知層側の測定値との比、または第一検
   知層側の測定値と第二検知層側の測定値の和に対
   する第二検知層側の測定値との比を求めることを
   特徴とする免疫分析素子測定法。