JPS5890537A - Ｎ−カルボキシアルキルプロリン含有トリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＮ−カルボキシアルキルプロリン含有トリペプ
チド、さらに詳しくは、生物活性を有し、その構造がス
ペーサ一単位（３ｐａｃｅｒ　ｕｎｉｔ）によって分離
された２つのプロリル末端基を含むトリペプチド鎖を有
する一群の新規化学物質に関する。

該プロリル基の１つは、必須Ｎ−（酸ぎ能化アルキル）
−置換基を有する。かかる化合物の生物活性は腎血流量
を増加させ、利尿作用を誘引すること−・である。この
ことから、該化合物は高血圧の治療または腎機能の改善
に有用である。

ポロシンら（Ｋ、Ｔ、Ｐｏｒｏｓｈｉｎ　　ｅｔ　　ａ
ｌ　、。

Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ、　５３巻、　
２１６９３ｈ）はＬ−プロリルグリシル−Ｌ−プロリン
を製造する際の中間体としてカルボベンゾキシ−Ｌ−プ
ロリルグリシンを記載しているが、本発明の新規化合物
の構造上の特徴である必須Ｎ−カルボキシアルキル置換
基についても、また、重要な該中央部の単位についても
何ら言及していない、またポロシンらは、彼らが製造し
たいずれの化合物についてもその生物活性には触れてい
ない。以上のことから、本発明化合物は２つの構造上の
パラメーターによりかかる従来技術の化合物とは異なる
ものである。

ヨーロッパ特許出願第１２４０１号には、アンギオテン
シン転化酵素（ａｎｇｉｏｔｅｎｓ　ｉｎ　ｃｏｎｖｅ
ｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅＪ制剤であるある種のカルボキ
シアルキルジペプチド類が開示されている。この出願の
化合物は、化学構造上においても、その作用機序におい
ても本発明物質とは異なるものである。この出願のジペ
プチド類のプロリル基は、Ｎ−カルボキシアルキル置換
基で置換されていない。

このように、本発明の新規化合物はプロリン環の遊離窒
素原子を酸官能化アルキル置換基で置換したプロリル−
スペーサー−プロリンであるトリペプチド構造を有する
ことを特徴とする。それゆえ、その構造は２つの酸グル
ープを含み、そのうちの１つは両性である。

本発明化合物は１式： 〔式中、ｋはカルボキシ（−ＣＯ２Ｈ）、スルホ（−ｓ
０２０Ｈ）またはホスホノ（−Ｐ（０）（ＯＨ）２）の
ような・酸基；ａｌｋｕｌ〜５個の次素原子を有する直
鎖または分枝鎖のエチリデン（＝ＣＨ−ＣＨ３）以外の
アルキレン；Ｘは０またはＨ，ＨｉＹはＨまたはＸがＨ
，Ｈのとき−ＯＨ，−−−一はＸおよびＹが、各々、Ｈ
，ＨまたはＨのときのみ任意のＣ−Ｃ結合；ｎはθ〜３
の整数：およびＡは Ｇ（３ ■ Ｄ−またはＬ　−Ａｌ　ａ　（−ＮＨ−ＣＨ−■−）；
Ｇ（２−Ｃ６Ｈ５ Ｄ−またはＬ　−Ｐｈｅ（−ＮＨ−Ｇ（−■−）；０（
３ Ｄ　−１ｆｒ−はＬ−７１−メチル−７１−ＡＩａ（−
ＮＨ−ａ（ａｔ−ＣＤ−’）。

６Ｈ５ Ｄ−またはＬ−β−７：シレーβ−Ａｌ　ａ　（−ＮＨ
−Ｇ（−Ｇ（２−ＧＯ−）ＨＤ−またはＬ−β−チェニ
ル−Ｇｌｙ（−ＮＨ−ＣＨ−■−）；Ｄ−またはＬ−β
−Ａｌ　ａ　（−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ω−）；ｒ−
アミノ酪酸（−ＮＨ−ＣＩ−１２−Ｑ−１２−ＣＨ２−
ＣＯ−）　？４Ｈｇ 奮 り一またはＬ　−／　／Ｌ／−Ｌ　ｅ　ｕ　（−ＮＨ−
ＣＨ−ω−）；Ｇ（３ ３−アミノ−３−メチル酪酸（−平一〇−Ｑ（２−ＣＯ
−）；およびＣＩ″Ｉ３ ０′Ｉ３ ２−メチル−Ａｌａ（−ＮＲ−Ｃ−ＣＯ）０′Ｎ３ のｉうな結合ペプチド形のスペーサーアミノ酸単位また
はそのＮ−メチル誘導体を意味する〕で示される。

本発明の下位群はＡが置換または非置換β−Ａｌａであ
る式ＣＩ）の化合物から成る。ｋがカルボキシ、ａｌｋ
がメチＬ／７、ＸがＨ，Ｈ，ＹがＨ，ｎが０およびＡが
β−Ａｌａである式〔Ｉ〕の化合物がその有効な代表例
として挙げられる。好ましくは、前記化合物・群の各ア
ミノ酸単位の立体配置はＬ型である。この代表例のＮ−
カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−β−アラニル−Ｌ−
プ６りン硫酸塩が本発明における有利な化き物である。

前記式〔Ｉ〕の化合物の定義において、Ｘが０である末
端基はピログルタミル環、ＹがＯＨである末端基はヒド
ロキシプロリル環および二重結合を有する末端基はデヒ
ドロプロリ゛ル環である。これらすべてのものは基本的
にプロリル誘導体である。

後述する腎臓麻酔犬スクリーニングプロトコールにおい
て、Ｎ−カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リジル
−Ｌ−プロリン、Ｎ−カルボキシメチル−プロリル−グ
リシル− びＮ−（１−カルホキジエチル）−Ｌ−プロリル−β−
アラニル−Ｌ−プロリンはスクリーニングプロトコール
の初期テスト期間中、腎臓血管拡張剤として不活性なも
のであった。このことは、プロリル末端基上のＮ−アル
キル置換基だけでなくスペーサ一単位も重要な性質を示
すことを示している。

本発明化合物にはＮ−カルボキシ−アルキルプロリル部
分の塩基性窒素原子と非毒性酸から形成される塩、また
は医薬上許容されるカチオンとアニオン性酸基とから形
成される塩のような医薬上許容される種々の塩の形も包
含される。前者のものとしては、硫酸塩、塩酸塩、リン
酸塩、臭化水素酸塩，エタンジスルホン酸塩．またはメ
タンスルホン酸塩が挙げられる。後者のものとしては、
ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩および同様な
強塩基との塩が挙げられる。これらのアルカリ金属塩は
最終生成物よりもむしろ中間体として特に有効であるが
、いずれにも用いることができる。

該堪は適当な溶媒中式〔■〕の化合物を，公知の反応条
件を用いて適宜の酸または塩基と反応させることによシ
形成される。通常、過剰量の無機酸まだは無機塩基を水
、または水性エタノールのような適宜の有機溶媒に溶解
した本発明化合物と反応させる。本発明化合物は、水和
物または低級アルコレートのようなツルベートをしばし
ば形成する。

硫酸塩のような酸付加塩はその鋭化合物であるトリペプ
チドと同様本発明化合物の最も有効な形である。

さらに、式ＣＩ）の二酸はアミド、前記各アルキルニオ
いて１〜５個の戻素を有する低級アルキルエステル誘導
体またはベンジルエステルナトのようなプロドラッグの
形で用いることができる。

本発明の化合物は、つぎの反応に従う一連の合成法によ
って製造される。

（ＩＩ　）　　　　　　　（ＩＩ［＞−一連の反応にお
いてＡ、Ｘ、Ｙ、＋−−−またはｎはいずれも前記に示
すとおシである。ｋｌはカルボキシ、スルホまだはホス
ホノの保護され形であシ、例えばそのベンジルエステル
またハ低級アルキルエステルである。ｋ２はカルボキシ
保護基であり、例えばベンジルまたは低級アルキルであ
る。

側鎖の酸基が保護されているＮ−（酸官能化アルキル）
プロリン（Ｉｔ）を末端の酸基が保護されているプロリ
ン含有ジペプチド（Ｉ［〕と反応させて、保護ジカルボ
　ン酸（ＩＶ）形の本発明化合物を得る。該アミノ酸と
該ジペプチド出発物質との反応の間のアミド結合の形成
においては、ペプチドカップリング反応のいずれもの反
応条件を用いることができる。ことに有用な反応はカル
ボジイミド、例えば、ジシクロへキシルカルボジイミド
のようなアシル化促進剤の存在下、アミノ酸単位（ＩＩ
）とジペプチド［Ｉ［［）を反応させることである。該
反応は有機溶媒中、例えばテトラヒドロフラン、ジメチ
ルアセタミドまたはジメチルホルムアミド中、穏やかな
温度で、反応が完了するまで行なう。多くの場合、室温
にて１〜１８時間で反応が完了する。

その他の用いられるカップリング法としては、イソキサ
ゾリウム誘導体、１−エトキシカルボニル−２−エトキ
シ−１，２−ジヒドロキノリン、ホスホニウム誘導体、
Ｎ−カルボキシ無水物誘導体ｔたｔｉＮ−ヒドロキシサ
クシンイミドエステル誘導体が包含される。種々のカッ
プリング法のさらに詳細な説明はペプチド・シンゼシス
（ＰｅｐＬ　１ｄｅＳｙｎｔｈｅｉｓ、　Ｂｏｄａｎｓ
ｚｋｙ、　Ｗｉｌｅｙ、　ｌ　９７６年、第５章）に記
載されている。

ついで、エステル保護基をアミド結合に影響を与えない
標準的反応、例えば、０−ベンジル基については接触水
素添加の使用あるいは水酸化バリウムを用いるような調
節されたアルカリ加水分解により離脱する。

また、該化合物は、ペプチド類の製造に通常用いられる
固相技術（ｓｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ）を利用しても製造される。

本発明化合物は薬理学活性を有し、腎臓に作用し、有用
な医薬化合物である。とりわけ、該化合物は腎血流量を
増加させるかあるいは腎血管抵抗を減少させる。該化合
物の腎機能を回復させる効果はしばしば蓄積的に発現す
る。本発明の化合物はまた利尿作用も有する。従って、
本発明の化合物は比較的持続性の血圧降下薬または腎機
能改善薬でおる。意外にも、本発明の化き物は経口また
は非経口投与のいずれによってもその活性を示す。

式〔工〕の化合物の生物活性は、麻酔したイヌに該化合
物を注入投与し、米国特許第４１９２９７号に詳細に説
明されているテスト法によってＩＶ−均動脈血圧、腎血
流量、腎臓血管抵抗および心搏数を測定することにより
証明される。一般的に該化合物はこのテストにおいてド
パミンの１／３〜１／１００の範囲の用量にて腎臓血管
抵抗を減少させ、腎血流量を増加する。代表的な結果を
実施例に挙げる。

また、該化合物は自然発生性高血圧ラッ）（ＳＨＲ）に
おいて生物活性を示す。このテストでは、雄性のオカモ
トーアオキ系自然発生性高血圧ラット、（１６〜１９週
令）を絶食させ、ついで、翌日の午後、テスト化合物の
第１の用量を２５−／Ｋｇの生理食塩水の経口負荷投与
と共に投与する。

その後該動物を代謝ケージに入れ、３時間尿を採取し分
析する。間接収縮血圧および心搏数を尾部カフによシ測
定する。さらに第２の同じ用量のテスト化合物を投与す
る。２時間後、血圧および心搏数を再度測定する。テス
ト化合物は通常０．０２％のアスコルビン酸を含む食塩
水中で経口または腹腔内投与される。このテストで、本
発明の代表的薬剤は利尿作用を示した。

例えば、（Ｎ−カルボキシメチル）−Ｌ−プロリル−β
−アラニル−し−プロリンヘミ硫酸塩の腹腔内投与は、
２５およびｓ　ｏｗｌ／に７（ｉ、ｐ、）＋　　＋ でＮａ、Ｋ　　または尿排出を著しく増大させた。

腎麻酔したイヌのプロトコールテハソ（７）　ＲＶ　Ｒ
−Ｅ　Ｄ　１５は１２μグ／Ｋｇ　であった。（ドパミ
ンではａ、　ｓ　Ｗ／に７　）。この化合物は腎有効用
量の１０倍量でもアンギオテンシン転化酵素抑制活性は
発現しなかった。まだ該化合物はｉｎ　ｖ＋１ｔｒｏに
おけるドパミン感受性アデニンサイクラーゼ系を刺激も
拮抗もせず、ヒキガエル膀胱抗ＡＤＨ分析でも活性を示
さなかった。該化合物は弱い徐搏効果を示した。

本発明の新規化学物質は腎機能の改善、高血圧の治療あ
るいは利尿に有効なカプセル、錠剤または注射剤のよう
な投与単位に製剤化される。該投与単位に用いられる医
薬担体は、例えば固体または液体のいずれであってもよ
い。固体担体の例としては、乳糖、白陶土、ショ糖、タ
ルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリ
ン酸マグネシウムまたはステアリン酸が挙けられる。液
体担体の例としてはシロップ、落花生油、オリーブ油ま
たは水が挙げられる。同様に、担体または希釈剤にはモ
ノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセ
リルの単独またはワックスとの併用のような公知のいず
れもの遅延物質も包含する。このような徐放性製品なら
びに徐々に代謝されて活性な鋭化合物となる誘導体は必
要であれば本発明の化合物独特な生物活性を持続するた
めに用いることができる。

種々の広範な剤形が採用できる。すなわち、固体担体を
用いる場合、錠剤、ハードゼラチンカプセル入シ粉末、
標準的坐剤、徐放性ペレット、トローチまたはロゼンジ
の剤形にすることができる。

固体担体の量は広範に変えることができるが、約２５１
１Ｆ〜約１ｆが好ましい。液体担体を用いる場合、シロ
ップ、エマルジョン、ソフトゼラチンカプセル、アンプ
ル入りのような滅菌注射液、水性または非水性懸濁液と
することができる。

該製剤は所望の経口または非経口投与用の最終製品に適
した成分の混合、顆粒化、要すれば打錠または混合、充
填、溶解を包含する通常の製剤化技術によって製造され
る。

投与単位製剤中の本発明化合物の量は、該活性トリペプ
チド１０〜３５０■、好ましくは、５０〜２００■の範
囲内から選ばれる効果的で毒性を示さない量である。選
択した用量を各症状の治療の必要に応じて１日１〜５回
経口的に、または注射や注入によシ患者に投与する。該
用量範囲内の低用量を個別にあるいは組合せて非経口投
与するきるＯ 明らかなごとく、本発明化合物は光学異性体またはそれ
らの混合物のような種々の立体配置で存在することがで
きる。異性体化合物は、以下の実施例の化学反応におい
て所望する立体配置のアミノ酸を使用す、るか、異性体
混合物を高圧液体クロマトグラフィーによって分離する
ことにより容易に製造される。

つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが
これらに限定されるものではない。

実施例Ｉ Ｌ−７’ロリンのベンジルエステル６、（１（０，０２
５モ／Ｉ／）、Ｎ−１ｅｒｔ−ブトキシカルボ＝　ルー
　Ｌ−アラニン４．７Ｆ（０，０２５モル）、１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール６．７５Ｆ（０，０５モル）
、Ｎ−エチルモルホリン３．２ｍＺ（２，８２Ｆ、０．
０２５モル）および乾燥テトラヒドロ７ラン６５−の混
液を冷却し、濾過してジシクロへキシルカルボジイミド
５．１５Ｆ（０，０２５モル）およびテトラヒドロ７ラ
ン１０−の混合液に加える。該混合液を０℃にて３０分
間、ついで２５℃にて１８時間攪拌する。反応混合液を
濾過する。ｐ液を蒸発させて残渣を得、これを酢酸エチ
ルに溶解する。該溶液を１〜１０９６酢酸、水、５％重
炭酸す）　ＩＪウムおよび食塩水で順次洗浄し、ついで
無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して粗製のＮ−Ｌ
ｃｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロ
リンベンジルエステル（ｔ−ｂｏｃ）９．８５’　をｍ
る。

ｔ−ｂｏｃ２グ、トリフルオロ酢酸３．０２および乾燥
塩化メチレン１５ｒｎｌの混合液を室温にて２時間反応
させ、ついで減圧下で蒸発させて粗製の対応するトリフ
ルオロ酢酸塩を得る。該塩をエーテルに溶解し、エーテ
ル性塩化水素で酸性にして白色固体のし一アラニルーＬ
−プロリンのベンジルエステル塩酸塩１．１５ｙを得る
。融点１６２〜１６４℃ １０％パラジウム−広素約５００Ｈｇを水で湿潤し、Ｎ
−カルボメトキシメチル−Ｌ−プロリンベンジルｘ　ス
テ／ｌ／　（ＲｏＡｄａｍｓ　、　Ｊ　、Ａｍ、Ｃｈｅ
ｍ、Ｓｏｃ　、３１巻、５８０３頁、１９５９年）１６
．５Ｆ（０，０６モル）およびエタノール５０−の溶液
に加える。

低圧水素添加装置中、水素雰囲気下で２時間振とうした
のち、該混合液を濾過する。炉液を蒸発させる。エタノ
ールを添加して蒸発させ、得られるシロラフ状残渣ヲト
ルエンーエタノール（１：１）に溶解し、冷エーテル性
塩化水素で酸性とする。

得られる白色固体を分離し、エーテルで洗浄して粗製の
Ｎ−カルボメトキシメチル−し−プロリン塩酸ｊｉ１３
．８Ｆを得る。融点１９１〜１９３°ＣＮ−力ｌレボメ
トキシメチル−Ｌ−プロリン塩酸塩２．２３Ｆ（０，０
１モル）、Ｌ−アラニル−し−プロリンベンジルエステ
ルＮ酸Ｎ３．１３９　（０，０１モル）、１−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール２゜７Ｏｆ（０，０２モル）、Ｎ
−エチルモルポリン２゜３９（０，０２モル）および乾
燥テトラヒドロ７ラン４０−の混合液を氷水中で冷却し
、ついでジシクロへキシルカルボジイミド２．０６Ｓｌ
（０，０１モル）と室温にて１７時間反応させる。濾過
して固体を分離する。ｐ液を酢酸エチルで希釈し、１．
５％酢酸５０ｒｎｌで３回、ついで水、５％重炭酸ナト
リウム溶液および食塩水で洗浄する。該乾燥有機層を蒸
発して黄色のシロップ状物質４．３Ｆを得る。

該シロップ状物をシリカゲルのカラムにのせ、塩化メチ
レン、１％メタノール−塩化メチレンおよび１〜１／２
％メタノールー塩化メチレンで溶出して、所望の最終生
成物のプロドラッグ、Ｎ−カルボメトキシメチル−Ｌ−
プロリル−Ｌ−アラニル−プロリンベンジルエステル２
．１りを得る。収率４７％ 該物質２．１９のメタノール３〇−溶液を、水４゜−中
水酸化バリウム水和物５．０２の混合液に加える。４時
間攪拌した後、二酸化戻素ガスを該混合液に通じ、戻酸
バリウムを沈殿させる。無色のろ液を蒸発させて所望の
白色固体のトリペプチド生成物１．２５２を得る。収率
７８％ サンプル３００呼をメタノール−酢酸エチルよシ再結晶
させて、白色固体の対応するバリウム塩を得る。融点２
７０℃（分解） 精製していない該固体Ｏ１９りを水に溶解する。

該混合液を濾過する。ｐ液を希硫酸を用いてｐＨ３，５
に調節する。濾過によシ硫酸バリウムを分離する。ｐ液
を蒸発させてＮ−カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−し
−アラニル−Ｌ−プロリン硫酸塩を得る。融点１９０〜
１９６°Ｃ（分解）元素分析　ｃ１５Ｈ２３Ｎ３０６・
ｌ／４Ｈ２５０４・１／２Ｈ２０として 計算値（％）　：　Ｃ、４８，０６毫Ｈ、６，５９−Ｎ
、１１．２０実測値（％）　：　Ｃ，４８，４８、４８
，２１ｉＨ，６，６９，６，７８Ｎ、１０．８０．１０
．７４ ２５ 〔α）　、　＝　（Ｃ、１、１：　ｌ　ＣＨ３０Ｈ−Ｈ
２Ｏ）−１３２，２’。

３匹の麻酔したイヌを用いた腎臓血管拡張テストでは、
該バリウム塩は３０μｆ　Ａｇ／ｒｎ　ｉ　ｎにおいて
２１．７％の腎血流量の増加および１５％の腎臓血管抵
抗性減少を示す。

実施例２ Ｌ−プロリン塩酸塩のベンジルエステル６．０Ｆ（０，
０２５モル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール６．
７５Ｆ（０，０５モル）、Ｎ−エチルモルホリン３．２
ｔｄ（０，０２５モル）、Ｌ−ｔｅｒｔ−ブトキシ力ル
ポニルフェニルアラニｙ６．６３５＋（０゜０２５モル
）、ジシクロへキシルカルボジイミド５．１５Ｆ（０，
０２５モル）および乾燥テトラヒドロ７フン３５−の混
合液を０℃にて簡単に、ついで２５°Ｃにて４時間攪拌
する。母液を分離して蒸発する。残渣を酢酸エチルおよ
び希塩酸に溶解する。層を分離させる。水性層を酢酸エ
チルで抽出する。有機層を合して希塩酸、水、５％重次
酸ナトリウム溶液および食塩水で洗浄する。有機層を乾
燥し、蒸発してＮ−１ｅｒｔ−ブトキシカルボニル−し
−フェニルアラニル−し−プロリンベンジルエステル１
０．３Ｆを得る。収率９１％該物質７．ＯＦを、トリフ
ルオロ酢酸１０−１乾燥塩化メチレン４０−および１，
３−ジメトキシヘンゼン４−の溶液と２５°Ｃにて２時
間反応させる。

前記と同様に反応を行ない、Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ
−７”ロリンベンジルエステル塩酸塩５．５７１を得る
。

該ベンジルエステル２．２３Ｆ（０，０１モル）ヲＮ−
カルボメトキシメチルーＬ−プロリン塩酸塩３．８９ｇ
、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール２゜７０９（０，
０２モル）、Ｎ−エチルモルホリン４゜０−、ジシクロ
へキシルカルボジイミド２．０６Ｆ（０，０１モル）お
よび乾燥テトラヒドロ７ラン４〇−と２５℃にて１７時
間前記と同様に反応させてＮ−カルボメトキシメチル−
Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−プロリンベ
ンジルエステル２，９ｖを得、シリカゲル上で精製する
。

このジエステルプロドラッグｔ１ｐ（２，１ミリモル）
をメタノール３０ｍｊ中に溶解し、水４０ｍｊ中水酸化
バリウム５．ＯＦの温溶液と反応させる。

該混合液を２５℃にて４時間攪拌し、ついで過剰量の二
酸化戻素を加える。濾過助剤を用°いて濾過して次酸バ
リウムを除去する。ｐ液を蒸発させ、その残渣をエタノ
ールと共沸させてバリウム塩０゜７２９を得（収率８２
９６）、ついでＮ−カルボキシメチル−ｔ−７”ロリル
ーＬ−−ｙエニルアラニル−Ｌ−プロリンのヘミ硫酸塩
０．８９９を得る。融点１４５〜１４８℃ 元素分析　Ｃ２１Ｂ２５Ｎ３０６−１／２　’　Ｂａ−
Ｈ２Ｏとして計算値（４）　：　Ｃ，５１，１５逼Ｈ，
５，３１、Ｎ、８．５２　。

Ｂａ、１３．９２ 実測値（％）　：　Ｃ，５１，４７，５１，６４，Ｈ，
５，２７，５，５０元素分析　Ｃ２１Ｈ２７Ｎ３０６・
１／２Ｈ２５０４として計算値（％）　：　Ｃ，５４，
０７；Ｈ，６，０４；Ｎ、９．０１実測値（％）：　Ｃ
，５３，７１，５３゜６４：に５．９０　、５．９４Ｎ
　、　８．８２　、８．９１ この硫酸塩は３０および３００　ｐ９／Ｋｇ／ｍｉ　ｎ
で腎血流量を増加した。該バリウム塩は麻酔したイヌス
クリーニングテスト−のパラメーター範囲内では活性を
示さなかった。

実施例３ 前記の方法を用い、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
−β−アラニ４レーＬ−プロリンベンジルエｘチル７．
６９をジシクロへキシルカルボジイミドを用いるアシル
化によシ製造する。トリフルオロ酢酸を使用して該保護
基を離脱し、β−アラニル−Ｌ−プＣｌリンベンジルニ
スデル塩酸場を得る。

該化合物６，３９２（０，０２モル）を、１−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール２．７　ｆ　（０，０２モル）、
Ｎ−エチルモルホリン１２−１乾燥テトラヒドロフラン
５ｏｒｎＩ中ジシクロヘキシルカルボジイミド２．０６
Ｆ（０，０１モル）の存在下で室温にて１７時間反応さ
せてＮ−カルボメトキシメチルプロリン塩酸ｊｉ２．２
３Ｆと縮合させる。該生成物は、所望の二酸プロドラッ
グ前駆体であるシロップ状のＮ−カルボメトキシメチル
−Ｌ−プロリル−β−アラニルーＬ−プロリンベンジル
エステル１．９Ｆである。

該ジエステル１．７５　Ｆ（３，９ミリモル）を水酸化
バリウムおよびメタノールを用いて加水分解し、ついで
硫酸で処理して白色固体のＮ−力ルボキシメチルーＬ−
ピロリル−β−アラニル−Ｌ−７’ロリン硫酸塩１．２
１を得る。

元素分析　Ｃ１５Ｈ２３Ｎ３０６・１／２Ｈ２８０４と
して計算値（％）：　Ｃ，４６，１５ｉＨ，６，２０：
Ｎ、１０．７６実測値１　）　：　Ｃ，４５，８１，４
６，１４ｊＨ，６，５０，６，５２Ｎ、９．９４，１０
．２２ ５ 〔α）　Ｄ　＝　（０，８、Ｈ２Ｏ）　−７０，４゜２
５１１７Ｋｆ／の腹腔内投与による自然発生性高血圧ラ
ットテス）　（ｎ＝３　）では、該化合物は次の＋ ようなナトリウム利尿分析結果を示す。Ｎａ　６７６゜
０４（対照群１２６．７６）ｉＫ＋２４２．５３（対照
群８５．１２）ｉ尿量、１６ｔｎｌ／ラツト（対照群３
−／ラット）。また３、３０および３００Ｐ９／ｌ（ｇ
／ｍｉｎ　　の投与を行なった２匹の麻酔したイヌでは
腎血流量は増加し、腎血管抵抗は減少する。

３匹のイヌを用いた第２のテストでは、該化合物は１２
μｆｌ／ＫｇのＥＤ１５’８し、これはドパミンの３．
５μＰ／Ｋｇ（静脈内投与）に匹敵する。

実施例４ β−ブロモプロピオン酸エチル７．２３　Ｆ　（０，０
３モル）およヒフロリンベンジルエステル塩酸塩７．３
３９（０，０４モル）を用いて、前記と同様の反応を行
ない、Ｎ−（２−カルボエトキシ）エチル−Ｌ−プロリ
ンベンジルエステル４．６ｙを得；ｇ収率５０６２％。

該化合物４．６Ｆ（０，０１５モル）を伏素担持パラジ
ウムで水素添加してＮ−（２−カルボエトキシ）エチル
−Ｌ−プロリン塩酸塩２゜９６Ｆを得る。収率７８％。

融点１６９〜１７１℃。該化合物２．４２Ｆ（０，００
９６モル）をジシクロへキシルカルボジイミド法でＬ−
アラニル−Ｌ−プロリンベンジルエステル４酸ｑ　２．
２５９　（０，００７２モル）と縮合させてＮ−（２−
カルボエ）ｌ／）エチル−Ｌ−プロリル−し−アラニル
−Ｌ−プロリンベンジルエステル０．８ｆｔｍる。

該プロトラッグ前駆体を水性メタノール中で水酸化バリ
ウムを用いて加水分解し、Ｎ−（２−カルボキシエチル
）−Ｌ−プロリル−し−アラニル−し−プロリン０．４
９８２を得る、収率６４％。融点１３３〜１３６℃。

元素分析　Ｃ１６Ｈ２５Ｎ３０６・Ｃ２Ｈ５０Ｈ・ｌＨ
２Ｏとして計算値（９ｉ　）　：　Ｃ，５１，５４；Ｈ
，７，９３；Ｎ、Ｉ　Ｏ，０２実測値Ｃ％）：　Ｃ，ｓ
ｘ、９ｓ、ｓｌ、７２：れ７．１２　、７．３２Ｎ、１
０．１９，１０．０４ 〔α）ｏ：（１，Ｈ２Ｏ）−１４７，３°・２匹の麻酔
したイヌにおいて該化合物は、３００ｐ　ｆ！　／　Ｋ
ｇ　／　ｍ　ｉ　ｎの投与量で累積効果を示し、３４％
の腎血流量の増加および２３９６の腎臓血管抵抗の減少
を示した。

実施例５ Ｄ、Ｌ−β−メチル−β−アラニル−Ｌ−プロリンベン
ジルエステル塩１１１１！５．９５９　（０，０１７モ
ト反応す＊、ついで、接触水素添加してベンジルエステ
ルを開裂して得られるＬ−Ｎ−［５−（カルボメトキシ
）ペンチル〕プロリン堪酸塩４．４１Ｐ（０，０１５モ
ル）と反応させる。縮合剤は、テトラヒドロフラン中１
−ヒドロキシベンゾトリアゾールおよびＮ−エテルモル
ホリンの存在下のジシクロへキシルカルボシイもドであ
る。該生成物は、シロップ状のＮ−５−カルボエトキシ
ペンタメチレニル）−Ｌ−７’ロリルーＤ、Ｌ−β−メ
チル−β−アフニルーＬ−プロリンベンジルエステル１
．５グアある。ｍ／ｅ５３０（Ｍ＋１）。該エステル０
．５２を水酸化バリウム加水分解して所望するＬ−（Ｎ
−５−カルボキシペンタメチレニル）プロリル−Ｄ、Ｌ
−β−メチル−β−アラニル−し−プロリン０．２ｙを
得る。融点８０〜８４°Ｃ，［α〕２５■） 、’＝（Ｃｅ　ｌ　＊　ｌ　：　Ｉ　メｌ’　／−ル／
水）−９０，１゜元素分析　Ｃ２ヂ３３Ｎ３０６・１．
２５Ｈ２０として計算値（％）　：　Ｃ，５５，３５；
Ｈ，８，３６；Ｎ、９．６８実測値（％’）　：　Ｃ，
５５，４ＬＨ，８，７８：　Ｎ、　９．０５実施例６ 前記と同じ方法を用い、Ｄ、Ｌ−３−アミノ−３−フェ
ニルプロピオン酸１２．５Ｆ（０，７６モル）をトリエ
チルアミン９．６Ｆ（０，０９５モル）およびジーｔｅ
ｒｔ−ブチルジ次酸塩２０．７　ｆ　（０，０９５モル
）とジメチルホルムアミド２５〇−中２５℃にて１７時
罰反応させて白色固体のｔ　−ｂｏｃ誘導体を得る。融
点１１５〜１１７°Ｃ０該物質７．９５Ｆ（０，０３モ
ル）ｔ−Ｌ−フロリンベンジルエステル塩酸塩７．２３
ｆＣＯ１０５モル）と縮合させてジ・ペプチド１３．６
′Ｉを得る。該保護基を塩化メチレンおよび１，３−ジ
メトキシベンゼン中でトリフルオロ酢酸で処理すること
により離脱し、その後無水塩化水素で処理して白色固体
のり、Ｌ−β−フェニル−β−アラニル−Ｌ−プロリン
ベンジルエステル塩酸塩を得る。該物質１０．１り（０
，０２６モル）をＬ−Ｎ−カルボメトキシメチルプロリ
ン塩酸塩５．８１Ｐ（０，０２６モル）と縮合させ、シ
リカゲルクロマトグラフィーに付して塩化メチレン溶剤
中メタノールで勾配溶出してＮ−カルボメトキシメチル
−Ｌ−プロリル−Ｄ、Ｌ−β−フェニル−アラニル−し
−プロリンベンジルエステル１．８２を得る。該ジエス
テルを水酸化バリウムで加水分解し、その後希硫酸で酸
性化してＮ−カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−Ｄ、Ｌ
−β−フェニル−β−アラニル−Ｌ−プロリン硫酸塩０
．９９２を得５ る。融点２５６〜２６０°Ｃ〔α］、＝（Ｃ，１゜１：
１メタノール／水）−４３，２゜ 元素分析　Ｃ２１Ｈ２７Ｎ３０６・０．２５Ｈ２ＳＯ４
・Ｈ２ＩＯとして計算値（％）：　Ｃ，５４，８３ｉＨ
，６，４６ｉＮ、９．１３実測値（％）　：　Ｃ，５４
，８６：Ｈ，６，４３：Ｎ、８．２４実施例７ 前記と同様の方法を行ない、Ｄ、Ｌ−β−メチル−β−
アラニン（Ｄ、Ｌ−３−アミノ酪酸）１２．５２をジメ
チルホンレムアミド３０〇−中でトリエチルアミン１２
．１２２（０，１５モル）およびジーｔｅｒｔ−ブチル
ジ炭酸塩３２．７ｙ（０，１５モル）と反応させて白色
固体のｔ−ｂｏｃ、ｌ　８．５９を得る。収率７６％、
融点９０〜９２℃。該物質４．０６９（０，０２モル）
を前記のジシクロへキシルカルボジイミド反応を用いて
、プロリンベンジルエステル塩酸塩４．８２Ｆ（０，０
２モル）と２５℃にて１７時間縮合させ、トリフルオロ
酢酸ついで無水塩化水素で処理してり、Ｌ−β−メチル
−β−アラニル−Ｌ−プロリンベンジルエステル塩酸塩
ヲ得る。該物質３．５９　（０，０１モル）を前記のと
おりＮ−カルボメトキシメチルプロリン塩酸塩１．１２
ｇ（０，００５モル）と縮合させ、Ｎ−カルボメトキシ
メチル−Ｌ−プロリル−Ｄ、Ｌ−β−メチル−β−アラ
ニル−Ｌ−７’ロリンベンジルエステルを得る。水酸化
バリウム加水分解を行ない、ついで硫酸塩を形成させて
Ｎ−カルボキシメチル−Ｌ−フロリルーＤ、Ｌ−β−メ
チル−β−アラニル−し−プロリンヘミ硫酸塩を得る。

融点１３５°Ｃ０５− ［α］−−６３．３°（Ｃ，１，５０％水性メタノール
） このジアステレオマー混合物（Ｓ、Ｓ、ＳおよびＳ、Ｒ
，Ｓ）混合物を水−メタノール（９：１）に溶解し、水
−メタノール−トリフルオロ酢酸（９０：１０：０．１
）混液を溶出液として用い九〇−１８逆相高圧液体クロ
マトグラフィーにかけること罠より、分離する。ベース
ライン分離（α＝１．２９）で、各々、〔α〕２５−−
５９．９°　（Ｃ− 、１、１：　Ｉ　ＣＨ３０Ｈ−Ｈ２Ｏ）および〔α〕甘
せ４４．８’＋　　（Ｃ，１、ｌ　：　ｌ　ＣＨ３０Ｈ
−Ｈ２Ｏ）の旋光度を示すＳ、Ｓ、ＳおよびＳ、Ｒ，Ｓ
異性体に分離することができる。

この方法において、その低級同族体の代シにＮ−（２−
カルボエトキシ）エチル−Ｌ−７’ロリン塩酸塩を用い
、Ｎ−（２−カルボキシ）エチル−Ｌ−７”ＯＩＪルー
Ｄ、Ｌ−β−メチル−β−アラニル−Ｌ−プロリンを得
る。Ｎ−（３−カルボメトキシ）プロリル−Ｄ、Ｌ−プ
ロリン塩酸塩（実施例４の方法で製造）をＮ−（２−カ
ルボエトキシ）エチル〜Ｌ−プロリン塩酸塩の代わυに
実施例４の方法で使用し、Ｎ−カルボキシプロリル−Ｄ
、Ｌ−プロＶ′ルーＬ−アラニルーＬ−プロリンをｍ基
として得る。

実施例８ Ｎ−１ｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−アラニンｌ　
Ｏ，ＯＦ　（Ｃ１，０５２９モル）、Ｌ−プロリンベン
ジルエステル塩酸塩１２．７５９（０，０５２９モル）
、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１４．２８Ｆ（０
，０１０６モル）、Ｎ−メチルモルホリン１５−および
乾燥テトラヒドロ７ラン１２５−の混合液をジシクロへ
キシルカルボジイミド１ｏ、９Ｆ　（０，０５２９モル
）および乾燥ジメチルホルムアミド１５ｓｔＪと共に反
応させ、前記のように処理して粗製のＮ−ｔｅｒｔ−ブ
トキシカルボニル−Ｄ−７ラニルーＬ−７”ロリンベン
ジルエステル２０゜４Ｆを得る。前記と同様にしてｔ−
ｂｏｃ保護基を離脱すせ、Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン
ベンジルエステル塩酸塩を得る。融点１４０〜１４２°
ｃ０該物質８．３Ｆ（０，０２６５モル）を前記のよう
にＮ−カルボメトキシメチル−Ｌ−プロリン塩酸塩５．
９２ｆ（０，０２６５モル）と縮合させて、シロップ状
のＮ−カルボメトキシエチル−Ｌ−プロリル−Ｄ−７ラ
ニルーし一プロリンベンジルエステル３．ＩＰを得る。

前記ジエステル３．０Ｆ（６，７ミリモル）を水酸化バ
リウムで処理してＮ−カルボキシメチル−Ｌ−フロリル
ーＤ−アラニル−し一プロリン２．１１Ｆを得る。融点
１４５〜１４８°Ｃ１〔α〕２５＝−３９，９”　　（
Ｃ，１，１：　Ｉ　ＣＨ３０Ｈ−Ｈ２Ｏ）同様に、Ｎ−
２−カルボキシエチル−Ｌ−プロリル−Ｄ−アラニル−
Ｌ−プロリンが得られる。

融点１７０°Ｃ（１４２〜１４５′ｔにて軟化）５− 〔α）、−−６７，９°、　（Ｃ、１，、ｌ　：　ｌ　
ＣＨ３０Ｈ・Ｈ２Ｏ） 実施例９ Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−β−アラニン６．
２８グ（０，０３３２モル）、Ｌ−プロリンアミド塩酸
塩５．０Ｆ（０，０３３２モル）、１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール８，９６Ｌｉ（０，０６６４モル）、Ｎ
−メチルモルホリン１２ｒｎｌ、テトラヒドロフラン７
５ｆｎｌ、ジメチルホルムアミド４０ｍ／およびジシク
ロへキシルカルボジイミド６．８４９（０，０３３２モ
ル）の混合液を２５°Ｃにて１７時間攪拌する。溶媒を
減圧蒸発し、残渣を酢酸エチルおよび水に溶解する。分
離した有機層を少量の希塩酸、食塩水、５９６重炭酸塩
ついで食塩水で洗浄する。該乾燥抽出液を濃縮してシロ
ップ状のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−β−アラ
ニル−Ｌ−プロリンアミド３．２Ｆを得る。メタンの化
学的イオン化マススペクトルは該ジペプチド構造と一致
している。

該生成物を乾燥二塩化メチレン３５−中に溶解し、氷水
中で冷却し、ついでトリフルオロ酢酸１５−を加える。

該溶液を０℃にて１５分間攪拌し、さらに２５°Ｃにて
３時間攪拌する。溶媒を４０℃にて減圧蒸発し、シロッ
プ状のβ−アラニル−Ｌ−プロリンアミドのトリフルオ
ロ酢酸塩を得る。

該化合物（〜０．０１モル）を前記のようにＮ−カルボ
メトキシメチル−し−プロリン塩酸塩と縮合させ、Ｎ−
カルボメトキシメチル−し−プロリル−β−アヲニルー
Ｌ−プロリンアミドを得る。これを水酸化バリウムで処
理してＮ−カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−β−アラ
ニル−ｔ−プロリンアミドを得る。

実施例１０ 実施例１においてＮ−カルボメトキシメチル−Ｌ−プロ
リンエステルの代りにアダムスのアルキル化により製造
されるＮ−カルボメトキシメチル−Ｌ−デヒドロプロリ
ンベンジルエステルを用いて、Ｎ−カルボメトキシメチ
ル−Ｌ−デヒドロプロリル−し−アラニル−し−プロリ
ンを硫酸塩として得る。また実施例１において、アダム
スのアルキル化により製造されるＮ−カルボメトキシメ
チル−ピログルタミン酸ベンジルエステルを代用して、
Ｎ−カルボキシメチルピログルタミル−し−アラニル−
プロリンを得る。実施例１において、Ｌ−プロリンのベ
ンジルエステルの代わりに２−ビｏｊＬジニル酢酸を用
いてＮ−カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−し−アラニ
ル−２−ピロリシキル酢酸を得る。実施例１のアラニン
誘導体の代ワシニβ−（２−＋エニル）アラニン（７）
ｔ−ｂｏｃ誘導体（Ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ
　Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ　ｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄ第■巻
、　Ｈａｒｔｏｕｇｈ　、　２６２頁）を用いて、Ｎ−
カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−Ｄ。

Ｌ−β−（２−チェニル）−アラニル−し−プロリンを
ｉる。公知のクロロメタンスルホン酸のメチルエステル
を用いてアダムスのアルキル化法で製造されるＮ−メチ
ルスルホメチルプロリンベンジルエ諷チルを実施例１に
代用してＮ−スルホメチル−Ｌ−プロリル−し−アラニ
ル−し−プロリンを得る。公知のクロロメチルホスホン
酸のジメチルエステルを用いてアダムスのアルキル化を
行ない、ついでＮ−ジメチルホスホノメチルプロリンベ
ンジルエステルを実施例１に代用してＮ−ホスホノメチ
ル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリンを得る
。

特許出願人　　スミスクライン・ベックマン・コーポレ
イション 代　理　人　弁理士　青　山、　葆ほか２名特開昭５８
−９０５３７　（１１）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）式： 〔式中、■はカルボキシメチルホまたはホスホノＨａｌ
   ｋは炭素数１〜５の直鎖または分枝鎖状の、エチリデン
   以外のアルキレン：ＸはＯまたはＨ，Ｈ；ＹはＨまたは
   、ＸがＨ，Ｈの場合、ＯＨ：−ｍ−はＸがＨ，Ｈおよび
   ＹがＨの場合、任意のＣ−Ｃ結合；ｎは０〜３の整数、
   Ａは、Ｄ−またはＬ−Ａｌａ、Ｄ−またはＬ−Ｐｈｅ、
   Ｄ−またはＬ−β−メチル−β−Ａｌａ、　Ｄ−または
   Ｌ　−７エニルーＧｌｙ、Ｄ−４たはＬ−β−フェニル
   −β−Ａｌａ、　Ｄ　−１７’ｃｉｄＬ−β−チェニル
   −Ｇｌｙ、Ｄ−またはＬ−β−Ａｌａ、　γ−アミノ酪
   酸、Ｄ−またはＬ−２−アミノ酪酸、Ｄ−またはＬ−ツ
   ルーＶａｌ、Ｄ−またはＬ−Ｌｅｕ、３−アミノ−３−
   メチル酪酸または２−メチル−Ａｌａから誘導されるア
   ミノ酸残基あるいはそのＮ−メチル誘導体を意味する〕
   で示される化合物、その医薬上許容される塩またはその
   プロドラッグ誘導体。 （２）アミノ酸単位の配置がＬ−配置である前記第（１
   ）項の化合物。 （３）Ｒがカルボキシ、ＸがＨ，Ｈ，ＹかＨおよびｎが
   ０である前記第（２）項の化合物。 （４）Ａがβ−Ａｌａである前記第（３）項の化合物。 （５）Ｎ　−（２−カルボキシメチル）−Ｌ−プロリル
   −β−アラニル−Ｌ−プロリンまたはその医薬上許容さ
   れる塩である前記第（１）項の化合物。 （６１Ｎ　−（２−カルボキシメチル）−Ｌ−プロリル
   −β−アラニル−Ｌ−プロリンである前記第（１）項の
   化合物。 （７）Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｌ−プロリル−
   Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリンまたはその医薬上許容され
   る塩である前記第（１）項の化合物。 （８）Ｎ−カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェ
   ニルアラニル−Ｌ−プロリンまたはその医薬上許容され
   る塩である前記第（１）項の化合物。 （９）Ｎ−カルボキシメチル−Ｌ−プロリル−Ｄ、Ｌ−
   β−メチル−β−アラニル−Ｌ−プロリンまたはその医
   薬上許容される塩である前記第（１）項の化合物。 ＠）非毒性有効量の式： 〔式中、ｋはカルボキ゛シ、スルホまたはホスホノＨａ
   ｌｋは炭素数１〜５の直鎖または分枝鎖状の、エチリデ
   ン以外のアルキレン；Ｘは０またはＨ，Ｈ”ｔ′１Ｈ４
   ｉｔ、Ｘ　；６（Ｈ，Ｈ（７）　場合、０Ｈｉ−一−は
   ＸがＨ，ＨおよびＹがＨの場合、任意のｃ−ｃ結合；ｎ
   はθ〜３の整数；Ａは、Ｄ−またはＬ　、Ａｌａ、Ｄ−
   またはＬ−Ｐｈｅ、Ｄ−またはＬ−β−メチル−β−Ａ
   ｌａ、Ｄ−またはＬ　−７ｘニル−Ｇｌｙ、　Ｄ−また
   はＬ−β−フェニル−β−ＡｌａＳＤ−またはＬ−β−
   チェニル−Ｃ１ｙ、　Ｄ−またはＬ−β−Ａｌａ、　　
   γ−アミノ酪酸、Ｄ−またはＬ−２−アミノ酪酸、Ｄ−
   またはＬ−ツルーＶａｌ、Ｄ−またはＬ−Ｌｅｕ、３−
   アミノ−３−メチル酪酸または２−メ＋ルーＡｌａから
   誘導され名アミノ酸残基あるいはそのＮ−メチル誘導体
   を意味する〕で示される化合物、その医薬上許容される
   曳またはそのプロドラッグ誘導体と担体からなることを
   特徴とする腎機能改善用医薬組成物。