SU798098A1 - Циклический аналог брадикинина,обла-дАющий СпОСОбНОСТью СОздАВАТь пРОлОНги-РОВАННый дЕпРЕССОРНый эффЕКТ B эКСпЕРиМЕН-TE ,A ТАКжЕ ВАСКул РНую пРОНи-цАЕМОСТь B эКСпЕРиМЕНТЕ - Google Patents

Description

цикло LM -(1- пизин, 6 - глицин)-брацикинин .

Сиитеэ циклического в на дога браднккаинв

Пример . Синтез цикло-, ( 1-лизин, 6-глицин)бра икинина (1).

В синтезе используют производные аминокислот, поставл емые фирмой Реанал (Венгри ). Упаривани  провод тс  на вакуумном испарителе при ЗО С.

Все аминокислоты, кроме глицина, имеют L -конфигурацию. Температуры

Способ получени  соединени  основан на известных методах (см. схему.)

т

«Ф«

плавлени , определ емые в открытых капилл рах,, ариведены без исправлени . Индивидуальность полученных соединений провер ют с помощью тонкослойной хроматографии (тех) на пластинках Силуфол УФ 254 в системах:

Claims (4)

1. А хлороформ-этанол-этилацетат-уксускислота-вода (85:5:8:2:0,25); Б хлороформ этанол-«-бутанол-9ТИЛ1ацетат-чвода (10:6:4:3:1); В )слороформ-метанол- еода (40:30:5); Г бутанол-уксусна  кислота-вода (4:1:1); Д этилацетат-пиридин-уксусна  кислота-вода (5:5:1:3) и электрофореза на бумаге PN 16 в IN или 5 уксусной кислоте. Эпектрофоретв- ческую подвижность определ ют по отношению к гистидину. П тна веществ обнаруживают при облучении хроматограм ультрафиолетовым светом, а также опрыс киванием кингидрином или при помощи реагента хлора.ензидина. Дл  идентифи- кации соединений используют протонный магнитныйрезонанс (ПМР) при 60 мГц, спектры снимают на приборе Pefkin ЕВг еР R 12 А. Аминокислотный анализ выполн ют на анализаторе Bio CAL-200 после гидролиза пептида в запа нной ампуле при НО в течение 24 ч.. Трет-Бутиповый эфир бенз{шокстсар-. бонилпролилглицина (Е 8-9). К раствору 1О,0 г (4О ммоль)бензил оксикарбонилпролина в 50 мл диК етилфор мамида, добавл ют 4,45 мл (40 ммопь) N-метилморфолина и при (по капл м ) охлажденный раствор 5,30 мл ( 40 ммоль) изобутилового эфира хлоругоп ной кислоты в 10 мл диметилформамида. Реакционную смесь перемешивают ЗО мин при -15 С и добавл ют к ней охлансденную суспензию 10,6 г (50 ммоль) фосфита трет-бутилового эфира глицина в 1ОО мл диметилформамиаа и 0,56 мл (50 ммоль) W -метилморфолина. Смесь перемешивают 30 мин при -15 С и ос- тавл ют на 15 ч при -ЮС. Растворитель упаривают в вакууме, остаток раствор ют в смеси 100 мл этилацетата и 100 мл воды, этилацетатный слой промывают 10%-«ыми растворами бикарбоната кали  и бисульфата кали  и водой, су- шат над сульфатом магни , фильтруют и упаривают. Продукт выкристаллизовывают из полученного масла обработкой последнего смесью эфира с гексаном (1:1). (70 Т,Ш1 71-72 С 49,0° (с 2, диметилформамид ). Выход 9,2 г (63%). R 0,55 (А); 0,64 (Б) и 0,68 (В), Трет-Бутиловый эфир пропипгл цвна (Р8-9). 5,0 г (13,8 ммоль) Е 8-9 раствора ют в 50 мл этанола и гидрируют в Присутствии палладиевой черни в течение 5 ч Катализатор отфильтровывают, маточник упаривают, остаток раствор ют в смеси 7 ЯЯ6 сухого эфира с гексаном (1:2) и снова упаривают досуха. Получают бесцветное кристаллическое вещество. Выхоп 2,8 г (89%). Т. пл. 56-57 C/ti | f - 38,6 (с 1, диметилформамид). .gO,83 (IN уксусна  кислота). Rr 0,28 (В); ОД5 (Г) и 0,70 (Д). П -Нитрофениловый эфир с -бензилоксикарбонил-6 -(трет-бутоксикарбоннл (0--н{1троаргинил)лиаиыа (С-5-6). К раствору 12,8 г (34,3 ммоль) трет-бутоксикарбонш1-СО -ннтро) аргинина и 3,8О мл (34,3 ммоль) N -метилморфолина в 10О мл диметилформамида при добавл ют 4,63 мл (34,3 ммоль) изобутилового эфира хлоругольной кислоты, а затем 10,0 г (22,8 ммопь) порошка хлористоводородной сопи R -нитрофенилового эфира 0& бензилоксикарбониллизина. Смесь перемешивают 30 мин при -10 С, затем в течение 2 ч по капл м добавл ют раствор 2,55 мл (22,8 Л4моль) N -метилморфолина в 5О мл днмётилформамида. Перемешивание продолжают в течение 30 мин при -20 С, затем добавл ют 1,33 мл (12,1 ммоль) 1% -диметиламиноэтиламина . Смесь вновь перемешивают ЗО мин, упаривают растворитель, остаток раствор ют в смеси 1ОО мл этилацетата и 100 мл воды. Эгилацетатный слой отдел ют и промывают 10%-41ыми растворами бикарбоната кали  и бисульфата кали  (дважды) и водой. Сушат над сульфатом магни , фильтруют, упаривают. Получают желтоватое аморфное вещество. Выход 13,5 г (86,5%). 1 0,80 (А) и 0,90 (r)./oi/JJ- 20,9 (с 1, диметилфорйамид ). РО-Бензил оксикарбонил- -(трет- у- тилоксикарбрнил-() аргинил) -лизилиролин (). В раствор 10,0 г (14,2 ммоль) С 5-6 в 1ОО мл диметилформамида ввод т 2,46 г (21,4 ммоль) мелкорастертого пролина и 1,66 мл (1,49 ммоль) N -метилморфолина и смесь перемешивают на магнитной мешалке 20 ч. Затем растворитель упаривают , остаток раствор ют в смеси ЮОмл этилацетата и 1ОО мл раствора бисульфата кали , водный слой отдел ют , этилацетатный слой экстрагируют 10%-ным растворе бисульфата каи , а затем 10%-«ым раствором бикарбоната кали . Водный слой отдел ют, нейтрализуют 1О%-«ым раствором бисульфата кали , довод т рН до 2 и экстра-, гируют продукт атилацетатом (2х1ООмл). Экстракт сушат над сульфатом маг-ни , фильтруют и упаривают. Получеиот бесцвет ное аморфное вещество. Выход 7,9 г (82,0%). /oi/ - 23,1 (с 1, аиметилформамид ). f 0,54 (А) и 0.81 (Г). Трифторацетат об -бензилоксикарбо- НИЛ -((О-нитроаргиннл)лизилпролина (Е 5-7). 5,0 г {7,37 ммопь) D 5-7 раствор ют в смеси трифторуксусно кислоты с хлористым метиленом (1:1) при О С. Выдерживают 20 мин при комнатной тем пературе, затем упаривают при комнатной температуре досуха. Остаток раствор$пот с сухим эфиром, образовавшеес  твердое вещество отфильтровывают и промывают сухим эфиром. Выход бесцветного аморфного вещества 5,0 г (98%). О.49 (5 Ц уксусна  кислота),/о /Q-11,1 (с 1, диметилформамид). R 0,57 (В); 0,70 (Д). Трет-Бутоксикарбон клфен ипап аи ипгл ицнн (С 1-2). 6,4 г (16,6 ммопь) Г -нитрофенилово го эфира трет-бутоксикарбонилфенилалани на; 1,13 г (15 ммоль) глицина и 1,67м ( 15 ммоль) W -метнлморфолина раствор  ют в смеси 200 мл дйметилформамица и 20 мл воды. Полученный раствор выдерживают 2О ч при комнатной температуре упаривают и оставшеес  масло раствор ют в смеси 8О мл 1О%-ного водного раствсфа бикарбоната кали  и 5О мл этилацетата. Этилацетатный слой отдел ю а водный слой экстрагируют 50 мл эфира и 1О%-ным водным раствором бисульфата кали , довод т рН до 2.. Полученный раствор экстрагируют этилацетатом (2x50 мл), экстракт промывают 5О мл воды сушат над безводным сульфатом ма ки , фильтруют и упаривают досуха. Полу чают бесцветное кристаллическое вещество . Выход 4,0 г (82,7%). После перекристаллизации из этилацетата Т. пл, 165°С (с разложением),о (с 1, диметилформамид), R 0,85 (А); О О,90 (Б) и 0,88 (В). - {итробенаиловый эфир трет утоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаланина (с 1-4). К раствору 2,8О г (8,7 ммоль) С 1-2 в 50 мл сухого диметилформамида добавл ют 1,84 г (10 ммоль) пентафтор фенола, смесь охлаждают ао -2О С и добавл ют к ней 1,9О г (9,2 ммоль) дициклогексилкарбодиу1мида .встр хивают до растворени  последнего и выдерживают 30 мин при О С. Затем добавл ют 4,15 г (8,7 ммоль) гиаробромида П - итробензилового эфира пролилфениланина (С 3-4) и 0,97 мл (8,7 ммоль) -метилморфолина. Выдерживают при комнатной температуре, контролиру  рН среды с помощью индикаторной бумаги, и в процессе реакции по капл м добав- л ют N -метилморфолин, дл  поддерживани  рН около 8. Спуст  3 ч после введени  аминокомпоненты смесь упаривают , к остатку добавл ют 1ОО мл хлористого метилена, осадок отфильтровывают , фильтрат промывают последовательно 10%-ными {«створами бикарбоната кали , бисульфата кали  и водой. Сушат над безводным сульфатом магни , фильтруют и упаривают. Полученное масло кристаллизуют растира  с сухим эфиром. Выход 5,4 г (88,4%). Т. пл. 125ISS C/O /jf- 45,б (с 1,диметилформамид ). К± 0,88 (А); 0,91 (В) и 0,91 (ГТ. Гидразит трет-бутоксикарбонилфенил-. аланилглицилпролилфенилаланина (Е 1-4). 3,0 г (4,27 ммаль) Е 1-4 и 1,Омл гидразингидрата нагревают 1 ч в ЗО мл этанола тфи 7О С. Фильтруют, к фильтрату добавл ют 5О мл воды и смесь выдерживают 20 ч при -1О С, осадок отф«5льтровывают и кристаллы на фильтре промывают 30 мл 5О%.-«ого водного этанола, затем водой до нейтральной реакции фильтрата. Сушат над п тиокисью фосфора. Выход 2,ЗО г (92,8%). Т, пл. 140-160°С/0 / -59,80 (с 1,диметилформамид ). К.Ч О,93 (А); О,92 (В) и 0, (Г). (Х--Бензилоксикарбонил-Е -(трет-бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаланил- со-«итро )аргинил)лизилпролин (Г 1-7). К раствору 2,1 г (3,62 ммоль) Е 1-4 в 5О мл диметилформамида, охлажденному до -ЗО С при перемешивании , добавл ют охлажденную (-70 С) смесь 3,5 мл (15,7 ммоль) 4,5 и раствора сухого хлористого водорода в тетрагидрофуране и 2О мл этилацетата. Затем при -ЗО С по капл м добавл ют охлажденный раствор 0,45 мл (3,87 ммоль) трет-бутилнитрита в 10мл этилацетата. Выдерживают 30 мин при -25 С, затем добавл ют 1,76 мл (15,8 ммоль) W .-метнлморфол11на, после чего ввод т раствор 2,68 г ( 3,87 ммоль) Е 5-7 и О,44 мл N -метилморфолина в 5О мл диметилформамида. Смесь выдерживают 3 сут при , упаривают, остаток раствор ют а СМРСИ ЮО мл хлористого метилена и IОО мл воды. Слой хлор(к;то10 мг тилЧ11 отдел ют, промЫйа- ют послецовательно 10%-ными растворами бикарбоната кали , бисульфата кали  и воаой (по 1ОО мл), сушат над безводным сульфатом магни , фильтруют и упаривают. Получают мчсло, из которого при расти- . рании со смесью эфира с этилацетатом (1:1) выкристаллизовываетс  проаукт. Выход 3,50 г (85,8%). Т. пл. 140177®C ./oi/о- 44,1 (с 1, диметипформаМИД ). R.J 0,53 (А); 0,84 (Б) и О,87(Г) Трет-Бутиловый эфир об -бензилоксикар бонил- -(трет-бутоксикарбонилфенилала- нилглицилпролилфенилаланил-(со-нитро)-аргинил )лизилпролилпролилглицина(51-9) К охлажденному цо раствору 2,70 г (2,40 ммоль) F 1-7 в 4О мл диметилформамида добавл ют 2,19 г ( 2,89 ммоль) комплекса дициклогекси- карбодиимида с пентафторфенолом и 1,1 г ( 4,8 ммоль) трет-бутилового эфира про- лилглицина (F 8-9). Смесь выдерживают 2О ч при комнатной температуре, упаривают остаток раствор ют в 50 мл хлористого метилена, фил ьтруют, фильтрат промывают 50 мл 10%-ного раствора бисульфат кали  и 5О мл воды. Сушат над безводным сульфатом магни , фильтруют и упаривают . Остаток дважды раствор ют в минимальном объеме хлористого метилена и осаждают эфиром. Выход 2,8 г (87,2%), Т. пл 15О-193 С с разложением/0(/ -60,3 (с 1, диметилформамид). Rj 0,57 (А); 0,68(Б) и 0,6О(Г). Гидрохлорид 06 -бензилоксикарбонил- - (трет-бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаланил- (UJ-нитро)аргинил)- 1иаилпрсм1илпролилглицина (Н 1-9). 1,8 г (1,346 ммоль) G 1-9 при раствор ют в 2О мл смеси трифторуксусной кислоты с хлористым метиленом (1:1) выдерживают 20 мин при комнатной температуре и упаривают при О С. Остаток кристаллируют растиранием с 5О мл сухого эфира, отфильтровывают и раствор ют 45 в 10 мл сухого диметипформамида. К раствору добавл ют О,33 мл (1,5 ммопь) 4,5 н раствора безводного хлористого водорода в тетрагидрофуране и продукт осаждают 100 мл сухого эфира. Выход 1,55 г so ,( 95%)/Of/2pO 77,8°. Т. пл. 140-192 С R{ 0,73 (В) и 0,74 (Д). ЦиклоГо -бензилоксикарбонил- Е фв- нилаланилглицилпролилфенилаланил-((0 - -нитро)аргинил)лизилпролилпролилглицил О 1-9). К раствору 1,1 г (0,91 ммоль) Н 1-9 в 2 л сухого диметилформамида 79 S10 при перемешивании в атмосфер сухого аргона при О С добавл ют 1,5 г (1,98 ммоль) комплекса дициклогексилкарбодиимида с пентафторфенолом (1:3) (комплекс Р ). Смесь перемешивают в атмосфере аргона при комнатной температуре, в течение 6 ч. Затем добавл ют раствор О,19 мл (1,38 ммоль) триэтиламина в 300 мл диметилформаМида. Полученнную смесь выдерживают при комнатной температуре 2 сут и упаривают при 28 С. Масл нистый остаток закристаллизовы- вают растиранием с сухим эфиром, фильтРУ т и осадок на фильтре просывают эфиР м . затем водой. Полученный продукт чист т на колонке (2х10О см) с силикагелем (средний размер частиц 20 мк) (фирмы Хемапол, ЧССР). Дл  элюировани  используют систему хлороформ:эганол:н-бутанол:этилацетат (1О:6:4:3). Фракции, содержащие предполагаемый циклопептид , собирают и чист т вновь на колонке с силикагелем (3x250 см, средний размер jacTHU 20 мк), использу  систему Б в качестве элюента. Собирают фракции по 20 мл и регистрируют поглощение при 280 нм (Увикорд 11) фракции с 55 по 66 объедин ют и упаривают, остаток обрабатывают эфиром. Получают 1О2 мг (9,73%) кристаллического вещества . Т. пл. 163-165 С, Хроматографически чистый (проверен по ТСХ на пластинках МЕРК в 6 системах). 0,47 (Б). Молекул рный вес найдено 1024 (определен криоскопически, использу  расплав мочевины), вычислено по формуле 1163, 313./Qi/2j5- 64,1 диметилформамид). 0,37 (Л); 0,43 (Б); 0,89 (В); 0,96 (Д) и 0,37 (Г). , Цикло (6 -фенилаланилглицилпролилфе); ннлаланиларгинил)лизилпролилпролилглицин )диацетат (цикло-Гм( 1-лизил 6-Рлицин )-брадикинин1)3 1-9 зо мг (0,043 ммол1) D 1-9 раство в 5 мл уксусной кислоты и гидриру т 2О ч в присутствии палладиевой черни. Катализатор отфильтровывают, и фильтрат лиофилизуют. Остаток раствора нн ют в 10 мл и вновь лиофилизуют. Раствор ют в 10 мл воды, фильтруют через мем- мембранный фильтр Сынпор и вновь , лиофилизуют/ Получают белый рыхлый порошок . Хроматографически гомогенный „76 (с О,65, вода). Выход 45,7 мг (96%). ,0,65 (1 N уксусна  кислота). R 0,69 (Д). Аминокислотный пролил 2,83, глицин 1,90, фенилаланин 1,93; лизин 1,00; аргинин 1,23, При триптическом расщеплении арепарата образуетс  только одно вещество ( IN уксусна  кислота), что  вл етс  покааательством циклического строени  пептида. Результаты испытаний биологической активности циклического брацикинина (ЦАБ). Опреаелено1П vivO вли ние ЦАБ на кров ное давление у наркотиаированнык крыс; П вли ние ЦАБ на сократительную способность матки и подвздошной кишки крыс;4п вли ние ЦАБ на васкул рную проницаемость в экспериментах на наркотизированных морскик свинках . В качестве стандартного соединени  используют синтетичеср:ий препарат брааикннина производства фирмы ReanaB. 1.Определение вли ни  на кров ное давление крыс. Экспер(1менты провод т на крьюах обоих полов весом Животных наркотизируют 25%-«ым уретаном 0,5 МЛ/1ОО г. Кров ное давление и лер ют с помощью ртутного манометра на закопченой ленте кимографа. ЦАБ- ввод т в виде инъекций объемом ОД мл/20 в дозах 0,6-50 мкг/кг. 2.Определение миотропного действи . В экспе риментах используютс  крысы-сам ки весом 20О-220 г. Регистрируют изото нические сокращени  изолированных органо ( матки и подвздошной кишки) в определен ном режиме температуры и аэрации. Используют метод кумул тивных сокращений . Провер ют концентрации ЦАБ в диапа зоне 1О -10 моль/л. Рассматривают также вли ние ЦАБ в этих концентраци х ( с предварительной экспозицией их 3 мин на миотропные эффекты брадикннина (БК) Регистрацию провод т на модифицированном приборе ВИ 6-5МА. 3. Вли ние на васкул рную проницаемость . Эксперименты провод т на наркотизированных , морских свинках мужского пола весом 350-400 г. В бедрюнную вену ввод т 0,5%-ный раствор красите(;|  (Evans ЪВие) в концентрации 2 мл/кг и спуст  6 мин ввод т под кожу ЦАБ в объеме 0,1 мл. Дл  контрол  аналогично ввод т стандартное соединение БК и физиологический раствор в объеме 0,1 мл. Через 30 мин животных декаптируют и На сн тие слое абдоминальной кожи измер ют два перпендикул ныч диаметра по вл ющихс  синих п тен. Исследуют концентрации ЦАБ от 0,0001 до 1 мг/мл. В этих же концентраци х провер ют вли ние ЦАБ на увеличение васкул рной проницаемости , вызванной БК в стандартной концентрации. Результаты. ЦАБ в отличие от БК обладает выра- женым и пролонгированным действием. Порогова  концентраци  ЦАБ 5 мкг/кг (у брадикинина 0,5 мкг/кг). В концентрации 5О мкг/кг ЦАБ вызывает эквипрессорный эффект с БК, но со значительной его пролонгацией. В случае ЦАБ эффект понижени  кров ного давлени  на 30- 40% мм рт. ст. продол каетс  1-2 ч с последующим восстановлением уровн  на 4О-5О% от исходного после 2-3 ч от начала введени  (4мг. 1). В опытах ч П vHrOHa изолированной матке -и подвздошной кишке крысы установлено , что у ЦАБ в концентраци х 1О -iCfS моль/л отсутствует миотроп- нов действие, свойственное природному БК. В этих концентраци х ЦАБ также не вли ет на миотропное действие БК. Эффект увеличени  васкул рной проницаемости у ЦАБ ниже, чем у БК; реакции сравнимы при концентраци х 1 и 25 мкг/кг соответственно (фиг. 2). Таким образом, циклический брадики- НИН по сравнению с природным брадикшнином обладает более выраженной селек- тивностью и продолжительностью гипотензивного эффекта. Формула изобретени  Циклический аналог брадикинина, формулы;

   облапаюший способностью созаавать пролонгированный авпрессорный эффект в эксперименте П V4VO , а также увёличи. вать васкул рную проницаемость в эксперимент -if) .

   Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

   1, Дзизинекий.А. А. и Гомааков О. А. Киннны в физиологии и патологии сердечно-сосудистой системы. Новосибирск, 1976.

   ia.fma.
2. 2.K.A.Saamee9,T.K.A.B.E5kes.Brca3yl inin and cardiovascutar system: estimation of ha6i Bife.Am.J.Physioeogy ,1962,203,p.26(. 3. Шредер, К. Любке, Пептиды. М.,
3. Мир, 1969, т. 2, с. 112-7.
4. 4.Handbook oi Experimental Pharmaco&ogLj ,vo6. XXV. Brady kinin.koCeid-in and KaeBikrein Ed-Erdos Spp nger-YepEag .Bere n-Heideeber.NewyopU -lQro .