NO139560B - Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater - Google Patents
Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater Download PDFInfo
- Publication number
- NO139560B NO139560B NO731481A NO148173A NO139560B NO 139560 B NO139560 B NO 139560B NO 731481 A NO731481 A NO 731481A NO 148173 A NO148173 A NO 148173A NO 139560 B NO139560 B NO 139560B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- parts
- weight
- volume
- dissolved
- residue
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 41
- -1 L-norleucyl Chemical group 0.000 claims description 28
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 8
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 125000002435 L-phenylalanyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002061 L-isoleucyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 claims description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 2
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 85
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 75
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 70
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 56
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 53
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 25
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 23
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 23
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 15
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 15
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 15
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 15
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 14
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 13
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 13
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 13
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 11
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 11
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- MNZMECMQTYGSOI-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydron;bromide Chemical compound Br.CC(O)=O MNZMECMQTYGSOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 10
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 10
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 8
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 8
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N tetrahydropyrrole Substances C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 7
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 6
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 6
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 6
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 6
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 6
- MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;methanol Chemical compound OC.CCOCC MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 6
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 6
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 5
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 5
- ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide Chemical compound C1=CC2CC1C1C2C(=O)N(O)C1=O ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 5
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- USPFMEKVPDBMCG-LBPRGKRZSA-N N-benzyloxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 USPFMEKVPDBMCG-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- BLGXFZZNTVWLAY-SCYLSFHTSA-N yohimbine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN3C[C@@H]4CC[C@H](O)[C@@H]([C@H]4C[C@H]33)C(=O)OC)=C3NC2=C1 BLGXFZZNTVWLAY-SCYLSFHTSA-N 0.000 description 3
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide Natural products NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000627 Thyrotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 2
- 102400000336 Thyrotropin-releasing hormone Human genes 0.000 description 2
- 101800004623 Thyrotropin-releasing hormone Proteins 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PSLIMVZEAPALCD-UHFFFAOYSA-N ethanol;ethoxyethane Chemical compound CCO.CCOCC PSLIMVZEAPALCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEVKQMBWAPJFSP-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;2-pyridin-2-ylacetic acid;hydrate Chemical compound O.CCOC(C)=O.OC(=O)CC1=CC=CC=N1 WEVKQMBWAPJFSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachlorophenol Chemical compound OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N thiocyanic acid Chemical compound SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940034199 thyrotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- IKMJGHPYOYVETB-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane;ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O.C1COCCO1 IKMJGHPYOYVETB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichlorophenol Chemical compound OC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJRLIVKLXYDXHQ-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;ethyl acetate;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO.CCOC(C)=O WJRLIVKLXYDXHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXDSLUMUNWTSDB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;chloroform;methanol Chemical compound OC.CC(O)=O.ClC(Cl)Cl VXDSLUMUNWTSDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJGAPUXHSQQWQF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(O)=O WJGAPUXHSQQWQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N aminyl Chemical compound [NH2] MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 125000002102 aryl alkyloxo group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- SAKUKAQFBMDKGX-UHFFFAOYSA-N butan-1-ol;2-pyridin-2-ylacetic acid;hydrate Chemical compound O.CCCCO.OC(=O)CC1=CC=CC=N1 SAKUKAQFBMDKGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- XWBDWHCCBGMXKG-UHFFFAOYSA-N ethanamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCN XWBDWHCCBGMXKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYBWTEQKHIADDQ-UHFFFAOYSA-N ethanol;methanol Chemical compound OC.CCO ZYBWTEQKHIADDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002736 metal compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N methylamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]C NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229950000244 sulfanilic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater.
Description
Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av nye nonapeptidamid-derivater som har sterkt induserende eggløsnings-
aktivitet og har følgende generelle formel: L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-tryptofyl-L-seryl-A^-glycyl-A2-L-arginyl-L-prolyl-Y (I)
;hvor A er L-tyrosyl eller L-fenylalanyl, er L-leucyl,
L-isoleucyl, L-norleucyl, L-valyl, L-norvalyl, L-metionyl eller
L-fenylalanyl, Y representerer NHR, hvor R er en rett eller
forgrenet alkylgruppe med 1-3 karbonatomer som eventuelt er substituert med hydroksy, eller hvor Y alternativt represen-
terer en pyrrolidinrest, eller farmasøytisk akseptable salter derav.
De nedenfor benyttede betegnelser (Pyr)Glu, His, Trp,
Ser, Tyr, Phe, Gly, Leu, ILe, NLe, Val, NVal, Met, Arg og Pro representerer "residua" av L-pyroglutaminsyre, L-histidin, L-
tryptofan, L-serin, L-tyrosin, L-fenylalanin, glycin, L-leucin, L-isoleucin, L-norleucin, L-valin, L-norvalin, L-metionin, L-
arginin og L-prolin, respektivt. Med "residuum" forstås i denne sammenheng et radikal avledet fra den tilsvarende a-aminosyre ved å eliminere OH-delen av karboksylgruppen og H-delen av a-
aminogruppen. I forbindelse med L-arginin som har følgende formel:
og som kan angis ved formelen NH2-A-COOH (NH2 er a-aminoradikalet),
representerer radikalet (-NH-A-CO-) et "residuum" av L-arginin og forkortes- som "-Arg-". Forkortelser for de andre a-amino-syrene som er nevnt ovenfor har tilsvarende betydning som angitt for L-arginin.
Eksempler på gruppen R i de ovenfor definerte nonopeptid-amid-derivater er metyl, etyl, n-propyl, i-propyl, hydroksymetyl, 1-hydroksyetyl, 2-hydroksyetyl, 2-hydroksy-n-propyl, 3-hydroksy-n-propyl og 2,2-dihydroksy-i-propyl.
Det har vært kjent i en rekke år at hypotalamus inneholder faktorer som på et høyere nivå regulerer utskillelsen av tropiske hormoner fra hypofysen. Etter at man isolerte et tyrotropinfri-gjørende hormon (TRH), et hormon som fremmer sekresjon eller utskillelsen av luteiniserende hormon, så er dette blitt ekstrahert i ren form fra svin og sauer, og det har vist seg å være et dekapeptid med følgende struktur: H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2. (A.V. Schally et al, Biochem. Biophys. Res. Commun., £3, 133^ (1971), R. Gnillemin et al, Proe. Nat, Acad. Sei., USA, 69> 278 (1972)). Denne oppdagelse har vært fulgt av en syntese av en rekke tilsvarende peptider, og biologiske prøver har også vært utført på disse analoge^peptider. Det har imidlertid vist seg at en mindre modifikasjon av den ovennevnte aminosyrekompo-sisjoh i meget høy grad svekker peptidets fysiologiske aktivitet, og man har antatt at den ovennevnte kjemiske -struktur har vært vesentlig for å kunne utvikle maksimal fysiologisk aktivitet (A.V. Schally et al, Biochem. Biophys. "Res..Commun., _4, 366 (1972)).
Man har nå syntetisert nonapeptidamid-derivater med formel I så vel som deres farmasøytisk akseptable salter og har over-raskende funnet at disse forbindelser har sterkere eggløsnings-induserende aktivitet enn det naturlig 'forekommende dekapeptid. Man har også funnet at disse forbindelser virker på hypofysen slik at man får fremmet sekresjonen av både luteiniserende hormon og follikkelstimulerende hormon. Videre har man funnet at disse forbindelser ikke bare kan brukes som medisiner for mennesker, f.eks. for diagnose av hypofysefunksjonen eller et underskudd på gonadotropin eller for terapien i forbindelse med manglende menstruasjon, men også kan brukes på dyr, da særlig i forbindelse med husdyravl. Foreliggende oppfinnelse bygger på ovennevnte oppdagelser.
Derivatene med den ovenfor angitte formel I fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse, og denne fremgangsmåte er kjenne-tegnet ved at en reagens (A) som er L-pyroglutaminsyre eller et peptidfragment som har en L-pyroglutaminsyreenhet bundet til det terminale N-atom, og som derifra omfatter ovennevnte aminosyresekvens, kondenseres med en reagens (B) som er et amin som svarer til resten av det ovennevnte nonapeptidamid-derivat, og hvor de to reagenser (A) og (B) eventuelt omfatter en eller flere beskyttende grupper som deretter fjernes, hvoretter, om ønsket, en således erholdt forbindelse omdannes til et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Forholdet mellom reagens A og i forhold til reagens B
er derfor vist på følgende måte:
Når en forbindelse i venstre kolonne anvendes som reagens A, må forbindelsen i høyre kolonne på samme linje anvendes som reagens B, som er den tilsvarende forbindelse med hensyn til reagens A i kondensasjonsreaksjonen. Reagensene A og/eller B kan være beskyttet før kondensasjonsreaksjonen eller aktivert under denne, dvs. før man får dannet peptidbindingen slik denne er beskrevet nedenfor.
Det er velkjent at man kan syntetisere eller fremstille en serie peptider ved a kondensere en aminosyre eller et fragmentert peptid (f.eks. et peptid med et mindre antall enheter) med en annen aminosyre eller et oppdelt eller fragmentert peptid (dvs. et peptid med mindre antall enheter). Det er utviklet en rekke forskjellige fremgangsmåter for denne type av kondensasjonsreaksjoner.
Således kan f.eks. funksjonelle grupper (en aminogruppe, en karboksygruppe, en hydroksygruppe, en guanidinogruppe) som ikke inngår i peptidbindingen (dvs. -C0NH-) dannelsen under kondensasjons-reaks jonen, være beskyttet av en eller flere beskyttende grupper før man starter kondensasjonen. I foreliggende fremgangsmåte kan reagensene A eller _B være beskyttet med hensyn til funksjonelle grupper som ikke deltar i kondensasjonsreaksjonen noe som skjer ved hjelp av fremgangsmåter som i seg selv er kjente.
Det er velkjent at man før peptidbindingsreaksjonen så må den C-terminale karboksylgruppe eller den N-terminale aminogruppe på en aminosyre eller et fragmentert peptid som inngår i peptid-bindingsreaks jonen, være aktivert for at man skulle kunne få dannet peptidbindingen, og hvis man ikke aktiverer disse grupper så må reaksjonen finne sted i nærvær av et dehydratiseringsmiddel. Det er kjent fremgangsmåte for å aktivere den C-terminale karboksylgruppe så
vel som den N-terminale aminogruppe. Kondensasjonen i foreliggende fremgangsmåte kan utføres ved hjelp av et første trinn hvor man aktiverer den C-terminale karboksylgruppe i reagens A eller aktiverer den N-terminale aminogruppe i reagens B, og deretter som annet trinn utfører en peptidbindingsreaksjon mellom den aktiverte reagens A og reagens B, eller mellom reagens A og den aktiverte reagens B, eller alternativt utfører peptidbindingsreak-
sjonen mellom reagens A og reagens B i nærvær av et dehydratiseringsmiddel, hvor eventuelt reagensene A og B er beskyttet.
Videre er det velkjent at når de ovennevnte funksjonelle grupper er beskyttet ved hjelp av en eller flere beskyttende grupper før kondensasjonsreaksjonen, så må nevnte beskyttende gruppe eller grupper fjernes etter kondensasjonsreaksjonen. Den fremgangsmåte som anvendes i foreliggende oppfinnelse for fjerning av slike beskyttende grupper er i seg selv kjent.
I denne forbindelse er det også kjent at en beskyttet L-glutamylgruppe med følgende generelle formel: (hvor R er en alkoksygruppe (f.eks. metoksy, etoksy, n-propoksy, i-propoksy, n-butoksy etc), en aralkyloksygruppe (f.eks. benzyloksy etc.) eller amino) lett omdannes til L-pyroglutramylgruppen i seg selv:
ved kontakt med en base (f.eks. ammoniakk etc.) eller en syre (f.eks. eddiksyre etc.) og at gruppen (II) tilsvarer L-pyroglutamylgruppen selv i denne forbindelse. I foreliggende fremgangsmåte er det således slik at L-pyroglutamyl (dvs. H-(Pyr)Glu-) i reagens A ikke bare innbefatter L-pyroglutamylgruppen i seg selv, men også kan være den beskyttede L-glutamylgruppe med formel II. I de tilfelle hvor H-(Pyr)Gh i reagens A representerer gruppe II, så kan denne gruppe lett omdannes til L-pyroglutamylgruppen i seg selv ved hjelp av kjente fremgangsmåter.
Det er nedenfor angitt noen fremgangsmåter som med fordel kan brukes under dannelsen av peptidbindingen.
(i) Den fremgangsmåte hvor en beskyttet eller ubeskyttet reagens A hvis C-terminale karboksylgruppe er en fri karboksylgruppe, omsettes med en beskyttet eller ubeskyttet reagens B hvis N-terminale aminogruppe er en fri aminogruppe i nærvær av
et kondensasjonsmiddel.
(ii) Den fremgangsmåte hvor en beskyttet eller ubeskyttet reagens A hvis C-terminale karboksylgruppe er blitt aktivert, omsettes med reagens B hvis N-terminale aminogruppe er en fri
aminogruppe.
(iii) Den fremgangsmåte hvor en beskyttet eller ubeskyttet reagens A hvis C-terminale karboksylgruppe er en fri karboksylgruppe, omsettes med en beskyttet eller ubeskyttet reagens B hvis N-terminale aminogruppe er blitt aktivert.
Således kan en beskyttende gruppe for den intramole-kylære acylaminogruppe i L-pyroglutaminsyre innbefatte benzyloksykarbonyl, t-butoksykarbonyl, isobornyloksykarbonyl etc, en beskyttende gruppe for iminogruppen i L-histidin innbefatter benzyl, tosyl, 2,4-dinitrofenyl, t-butoksykarbonyl, karbobenzoksy etc, mens en beskyttende gruppe for hydroksylgruppen i L-serin innbefatter eterdannende grupper såsom benzyl, t-butyl etc, en beskyttende gruppe for hydroksylgruppen i tyrosin innbefatter eterdannende grupper såsom benzyl, t-butyl etc, en beskyttende gruppe for guanidinogruppen i L-arginin innbefatter nitro, tosyl, karbobenzoksy, isobornyloksykarbonyl, adamantyloksykarbonyl etc. Videre kan guanidinogruppen i L-arginin være beskyttet gjennom en saltdannelse med et proton som er avledet fra en syre (f.eks. saltsyre, hydrobromsyre etc), og det er underforstått at nevnte proton inngår i den beskyttende gruppe slik den er definert her.
Den aktiverte form av den C-terminale karboksylgruppe
i reagens A kan eksemplifiseres ved det tilsvarende syréanhydrid, såsom det blandede anhydrid med en karbonsyre monoalkylester, azid, eii aktiv ester (f.eks. den tilsvarende ester av et alkohol såsom pentaklorfenol, 2,4,5-triklorfenol, 2,4-dinitrofenol, cyanometyl-alkohol, P-nitrofenol, N-hydroksysuccinimid, N-hydroksy-5-norbornen-2,3-dikarboksimid, N-hydroksy-ftalimid, N-hydroksybenztriazol etc). Blant disse estere er N-hydroksy-5-norbornen-2,3-dikarboksimidesteren foretrukket. Skjønt N-hydroksy-5-norbornen-2,3-dikarboksimidesteren av aminosyrer eller peptider er nye, så kan de fremstilles på samme måte som når man fremstiller N-hydroksysuccinimidesterene av aminosyrer eller peptider.
Det tilsvarende fosforsyreamid kan angis som et eksempel på en aktivert form av den N-terminale aminogruppe i den beskyttede eller ubeskyttede reagens B.
Som dehydratiserinffsmiddel kan man anvende ethvert middel av den type som brukes i forbindelse med peptidsynteser. Spesielt foretrukket er f.eks. de såkalte karbodiimidreagenser, såsom dicyklo-hexylkarbodiimid.
I forbindelse med foreliggende kondensasjonsreaksjon så kan man selvsagt i en enkelt reaktor tilsette (1) den beskyttede eller ubeskyttede reagens A hvis C-terminale karboksylgruppe er fri, (2) den beskyttede eller ubeskyttede reagens B hvis N-terminale aminogruppe er fri, (3) den ovennevnte alkohol (f.eks. N-hydroksy-5-norbornen-2,3-dikarboksimid, N-hydroksysuccinimid etc.) samt (4) dehydreringsmidlet. I dette tilfelle vil først den beskyttede eller ubeskyttede reagens A hvis C-terminale karboksylgruppe er fri, omsette seg med alkoholen ved hjelp av dehydreringsmidlet slik at man får fremstilt det beskyttede eller ubeskyttede reagens A hvis C-terminale karboksylgruppe er aktivert, hvoretter den aktiverte reagens omsetter seg med den beskyttede eller ubeskyttede reagens B hvis N-terminale aminogruppe er fri. I denne fremgangsmåte vil aktiver-ingen av den C-terminale karboksylgruppe og dannelsen av peptidbindingen bli utført i et trinn.
For fremstilling av ovennevnte peptider har man således en rekke variasjoner eller kombinasjoner av fremgangsmåter.
En foretrukken utførelse av foreliggende fremgangsmåte er skjematisk vist nedenfor.
Symbolet DCC i ovennevnte formler står for N,N'-di-cyklohexylkarbodiimid, mens HONBI står for N-hydroksy-5-norbornen-2,3-dikarboksimid mens Z er en beskyttende gruppe for guanidinogruppen i L-argininresidumet.
Reaksjonen hvor man får dannet peptidbindingen slik det er nevnt ovenfor (i), (ii) eller (iii) blir vanligvis utført i et egnet oppløsningsmiddel. Nevnte oppløsningsmiddel kan eksemplifiseres ved tørr eller vandig dimetylformamid, dimetylsulfoksyd, pyridin, kloroform, dioxan, diklormetan, tetrahydrofuran etc. eller blandinger av slike oppløsningsmidler.
Skjønt reaksjonen vanligvis utføres i området fra -20°C til ca. 30°C, så kan den også utføres ved lavere temperaturer eller under oppvarming.
De to utgangsmaterialer som brukes for å danne peptid-binding brukes vanligvis i ekvimolare mengder, skjønt man kan anvende andre forhold hvis dette er ønskelig. Rent generelt betyr dette at ' for hvert molekvivalent av en utgangsforbindelse, så anvender man vanligvis fra 1 til 2 molekvivalenter, fortrinnsvis fra ca. 1 til ca. 1,4 molekvivalenter av den tilsvarende (motparten) forbindelse. Dehydreringsmidlet anvendes vanligvis i fra 1 til 2 molekvivalenter i forhold til det vann som skal elimineres ved dannelsen av peptidbindingen.
Man oppnår i mange tilfelle tilfredsstillende resultater når reaksjonstiden ligger i området fra ca. 6 til ca. 10 timer.
Etter at reaksjonen er ferdig kan reaksjonsproduktet isoleres, f.eks. ved utfelling ved hjelp av et oppløsningsmiddel (i hvilket produktet er meget svakt løselig), hvoretter bunnfallet kan
innvinnes ved filtrering.
Når reagens A og/eller reagens B er beskyttet ved hjelp av en eller flere beskyttende grupper, har kondensasjonsproduktet vanligvis de beskyttende grupper i sitt molekyl. Disse beskyttende grupper kan imidlertid slik det er nevnt ovenfor, fjernes ved vanlige kjente fremgangsmåter som ikke forstyrrer aminosyrerekkefølgen i produktet, og fjerningen av slike beskyttende grupper etterlater da nonapeptidamidderivat (I) som er fri for beskyttende grupper.
En slik vanlig fremgangsmåte kan eksemplifiseres ved
en katalytisk reduksjon med en katalysator såsom palladium, palladium på karbon eller platina, syrehydrolyse f.eks. med hydrogenfluorid eller trifluoreddiksyre, eller en kjemisk reduksjon f.eks. med natrium-metall i flytende ammoniakk. Etter enhver slik fremgangsmåte kan den forønskede forbindelse isoleres på vanlig kjent måte. Man kan f.eks. anvende en utfelling slik dette er beskrevet ovenfor.
Sluttproduktet kan så renses ved egnet fremgangsmåte, f.eks. kolonnekromatografi på f.eks. karboksymetyl-cellulose, vanlig tilgjengelige polymerer for rensing såsom "Sephadex" eller "Amberlite
Alt avhengig av de anvendte reaksjonsbetingelser vil
den forønskede forbindelse bli oppnådd i form av en base eller som et salt heri innbefattet farmasøytisk akseptable salter. Fra saltet kan man fremstille basen på vanlig kjent fremgangsmåte, eller basen kan omdannes til salter ved at den omsettes med syrer som er egnet for fremstilling av farmasøytisk akseptable salter. Blant slike syrer er flere uorganiske syrer som hydrohalogensyre, f.eks. saltsyre, hydrobromsyre, perklorsyre etc, salpetersyre, thiocyansyre, svovelsyre, fosforsyre etc, flere organiske syrer såsom maursyre, eddiksyre, propionsyre, glycolinsyre, melkesyre, druesyre, oxalsyre, malon-syre, ravsyre, maleinsyre, fumarsyre, antranylinsyre, kanelsyre, naftalensulfonsyre, sulfanylinsyre etc.
Det oppnådde sluttprodukt kan omdannes til metall-komplekse saltforbindelser ved fremgangsmåter som i seg selv er kjente. Man kan f.eks. omsette en vandig oppløsning av det fremstilte nonapeptidamidderivat med saltet, hydroksydet eller oksydet av en eller flere metaller fra gruppen bestående av sink, nikkel, kobolt, kopper og jern, hvoretter man justerer reaksjonsblandingen til en pH mellom 6 og 8, noe som fører til at man får dannet en svakt oppløselig adsorpsjonskomplekssaltforbindelse mellom metallfor-bindelsen og det anvendte nonapeptidamidderivat.
Av de forskjellige metallkomplekssaltforbindelser som kan fremstilles, er sinkkomplekssaltforbindelsene de mest ønskelige ut fra det synspunkt at de har forlenget aktivitet når de tilføres.
På grunn av sin meget lave toksisitet kan nonapeptidamidderivatet eller et farmasøytisk akseptabelt salt av dette fremstilt slik det er angitt ovenfor, trygt tilføres hvoretter forbindelsen vil frembringe en sterk eggløsningsinduserende aktivitet.
Når rotter ble dosert med en minimal mengde (f.eks.
50 til 500 ng/lOO g) av nonapeptidamidderivatet (I) eller et farma-søytisk akseptabelt salt av dette intravenøst, intramuskulært eller subkutant, kunne man observere en sterk stigning i konsentrasjonen av det luteniserende hormon og det follikkel-stimulerende hormon i blodet, og når rotter ble tilført fra 10 til 200 ng/lOO g av forbindelsen intravenøst eller intramuskulært, fikk man indusert en eggløsning i ca. $ 0 % av rottene, og når rottene ble tilført fra 0,1 til 5 ug/l00 g av forbindelsen intravenøst eller intramuskulært, fikk man indusert en eggløsning i alle de rotter som ble prøvet, og dette selv i rotter som var utenfor "løpetiden". Når dosen ble holdt konstant, var intravenøs injeksjon vanligvis to ganger så effektiv som subkutan injeksjon. Den benyttede betegnelse "ng" betyr "nanogram".
Ovenstående fakta indikerer at peptider fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse har sterkere hormonale aktiviteter enn de naturlig forekommende hormoner som frigjør det luteniserende hormon. Injeksjoner kan fremstilles ved å oppløse disse forbindelser i en fysiologisk saltoppløsning. Ettersom forbindel-sene har fysiologisk tilstrekkelig høy aktivitet selv når de brukes i meget små mengder, er det hensiktsmessig at man anvender dem som lyofiliserte ampullepreparater som inneholder manitol som et fortynningsmiddel.
De etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen og her er følgende forkortelser benyttet:
Z-: benzyloksykarbonyl IB0C-: isobornyloksykarbonyl
B0C-: t-butyloksykarbonyl -OEt: etylester
-0SU: N-hydroksysuccinimidester -OtBu: t-butylester
-0NDP: 2,4-dinitrofenolester -0NBI: N-hydroksy—5-norDC,rnen-
2,3-dikarboksiimidester -OEt: etylester
HONBI: N-hydroksy-5-norbornen-2,3-dikarboksimid
DCC: N,N'-dicyklohexylkarbodiimid DMF: N,N-dimetylformamid TLC: tynnsjiktkromatografi DCHA: dicyklohexylamin
MeOH: metanol EtOH: etanol n-BuOH: n-butanol
I tynnsjiktkromatografien ble følgende oppløsnings-middelsystemer anvendt.
Rf 1 = Kloroform-metanol-eddiksyre
(9=1: 0,5)
Rf 2 = Etylacetat-pyridin-eddiksyre-vann
(60 : 20 : 6 : 11)
Rf 3 = n-Butanol-etylacetat-eddiksyre-vann
(1:1:1:1)
Rf 4 = n-Butanol-eddiksyre-vann
(4:1:1)
Rf 5 = n-Butanol-pyridin-eddiksyre-vann
(30 : 20 : 6 : 24)
I disse eksempler har vektdeler det samme forhold til volumdeler som gram til milliliter, og % er beregnet på basis av vekt hvis intet annet er angitt, og "Amberlite CG-400" er en tertiæramin-styren-divinylbenzenkopolymer, mens "Sephadex LH-20" er en forestret dekstrangel, "Amberlite XAD-2" er en makroletikulær-styren-divinylbenzen-kopolymer og "Amberlite IRA-400" er en tertiæramin-styren-divinylbenzen-kopolymer.
Eksempel 1 Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC2H^
a) Fremstilling av Z-Arg(N02 )-Pro-NHC2H,_
I 10 volumdeler DMF ble det oppløst 0,901 vektdeler
Z-Arg(N02)-Pro-0H og 0,l8l vektdeler etylaminhydroklorid, og under avkjøling ved 0°C, ble 0,38 volumdeler trietylamin tilsatt dråpevis. Deretter ble 0,43 vektdeler HONBI og 0,495 vektdeler DCC tilsatt, og blandingen ble rørt ved 0°C i 5 timer og så ved romtemperatur i 10
timer. Det dannede biprodukt nemlig urea ble frafiltrert, og DMF
ble avdestillert. Residuumet ble ekstrahert med kloroform, vasket med vann og tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Kloroformen ble avdestillert, og residuumet behandlet med eter og gjenutfelt fra metanol-eter. Utbytte 0,692 vektdeler, Rf 1 = 0,50, Smeltepunkt 141-145°c (dekomponering), (a)^ =-44»6° (c=l, metanol).
Analyse for C2i<H>3i°6<N>7
Beregnet C 52,82; H 6,54; N 20,53
Funnet C 52,95; H 6,77; N 19,65
b) Fremstilling av Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC2H^
I 5 volumdeler av en 25 % HBr-eddiksyre ble det opp-løst 0,572 vektdeler Z-Arg(N02)-Pro-NHC2H^, og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Deretter ble tørr eter tilsatt reaksjonsblandingen, og det resulterende bunnfall ble innvunnet ved filtrering og tørket. Samtidig ble 0,291 vektdeler Z-Leu-OH oppløst i 5 volumdeler dioxan, og under avkjøling ble denne oppløsning tilsatt 0,247 vektdeler DCC og 0,215 vektdeler HONBI. Blandingen ble rørt i 2 timer hvoretter biproduktet, nemlig urea ble frafiltrert. Filtratet ble tilsatt det ovenfor angitte bunnfall, som var oppløst ved å tilsette 3 volumdeler DMF. Under avkjøling ble 0,17 volumdeler trietylamin tilsatt dråpevis, og blandingen ble så rørt ved romtemperatur over natten". Oppløsningsmidlet :ble avdestillert, og residuumet ekstrahert med kloroform og vasket med vann. Kloroformlaget ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat hvoretter kloroformen ble avdestillert. Residuumet ble behandlet med eter og gjenutfelt fra metanol-eter. Utbytte 0,47 vektdeler (72 %), smeltepunkt 144-146°C (dekomponering), Rf 1 = 0,40, (a)^ = -58,0° (c = 1, metanol). c) I 25 % HBr-eddiksyre ble det oppløst 0,165 vektdeler Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC2H,_, og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Tørr eter ble så tilsatt reaksjonsblandingen, og det dannede bunnfall ble innvunnet ved filtrering og tørket. Dette bunnfall som ble oppløst i 3 volumdeler DMF, ble under avkjøling og røring dråpevis tilsatt 0,05 volumdeler N-etylmorfolin. I denne opp-løsning var det oppløst 0,19 volumdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hydroklorid, hvoretter man tilsatte 0,054 vektdeler HONBI og 0,062 vektdeler DCC.
Blandingen ble rørt ved 0°C i 2 timer og så over natten, ved romtemperatur. Urea som er et biprodukt, ble fjernet ved filtrering og nevnte DMF ble avdestillert. Residuumet ble behandlet med etylacetat, noe som ga et pulver som veide 0,32 vektdeler. Produktet ble påsatt en kolonne av"Amberlite XAD-2" og utløst ved hjelp av et lineært, gradient elueringssystem bestående av 5'% vandig etanol til etanol. Hovedfraksjonen ble lyofilisert, og man oppnådde 0,11 volumdeler rent H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC2H^. Dette produkt ble behandlet med 4 volumdeler hydrogenfluorid ved 0°C i 1 time i nærvær av 0,02 volumdeler anisol og 0,02 volumdeler merkaptoetanol. Hydrogenfluoridet ble avdestillert, og etter tørking ble residuumet oppløst i vann. Oppløsningen ble ført gjennom en kolonne av "Amberlite IRA-400"(acetat-form), og så adsorbert på en kolonne av karboksymetyl-cellulose. Denne kolonne ble eluert med et lineært, gradient elueringssystem bestående av 0,005 N-vandig ammoniumacetat til 0,2 N-vandig ammoniumacetat, og hovedfraksjonen ble igjen lyofilisert. Denne fremgangsmåte ga 0,087 vektdeler rent H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC2H5. Rf 3 = 0,36, (<cc>)^- - -56,2° (c = 0,5, 5 % eddiksyre).
Aminosyreanalyse: His 0,95(1), Arg 0,98(1), Ser 0,95(1),
Glu 0,98(1), Pro 1,00(1), Gly 1,00{1), Leu 1,00(1),
Tyr 1,00(1), NHgC^ 1,10(1).
Tallene i parentes angir de teoretiske verdier.
Eksempel 2 Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC^OH
a) Fremstilling av Z-Arg(N02)-Pro-NHC2H^0H
I 5 volumdeler DMF ble det oppløst 0,9 vektdeler
Z-Arg(N02)-Pro-0H og 0,43 vektdeler HONBI, og under avkjøling ved
0°C ble 0,495 vektdeler DCC tilsatt. Blandingen ble rørt over natten. Ureaforbindelsen som hadde skilt seg ut, ble frafiltrert, og 0,1832 vektdeler etanolamin ble tilsatt filtratet fulgt av røring over natten. Nevnte DMF ble avdestillert under redusert trykk, og dioxan ble tilsatt residuumet . De uløselige, faste stoffer ble frafiltrert. Dioxanen ble avdestillert under redusert trykk, og residumet ekstrahert med n-butanol. Ekstraktet ble vasket med vann, fortynnet saltsyre , vann og en vandig oppløsning av natriumhydrogenkarbonat og
vann i den rekkefølge som er angitt, hvoretter n-butanolen ble avdestillert under redusert trykk. Residuumet ble behandlet med eter og gjenutfelt fra metanol-eter. Utbytte 0,625 vektdeler (63,3 fo), smeltepunkt 124-128°C (dekomponering), Rf 2 = 0,23, ia)^ ° = -36,6°
(c = 0,5, etanol).
b) Fremstilling av Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC2H^0H
I 2 volumdeler 25 # HBr-eddiksyre ble det oppløst 0,493
vektdeler Z-Arg(N02)-Pro-NHC2H^0H og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Deretter ble tørr eter tilsatt, og det resulterende bunnfall ble innvunnet ved filtrering og tørket, hvorved man oppnådde et pulveraktig produkt. Samtidig ble 0,282 vektdeler Z-Leu-0H og 0,215 vektdeler HONBI oppløst i 3 volumdeler DMF og under avkjøling ved 0°C ble 0,248 vektdeler DCC tilsatt, fulgt av røring i 2 timer. Denne oppløsning ble tilsatt det pulveraktige produkt fremstilt som beskrevet ovenfor, hvoretter 0,15 volumdeler trietylamin ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble rørt over natten. Ureaen ble frafiltrert, og DMF avdestillert under redusert trykk. Residuumet ble adsorbert på en kolonne bestående av 50 vektdeler silisiumdioksydgel og eluert med et oppløsningsmiddelsystem bestående av kloroform-metanol-ftddiksyre (9-'l-'0,5). Oppløsningsmidlene ble avdestillert, og residuumet utkrystallisert med eter. Utbytte 0,153 vektdeler, smeltepunkt 110-113°C (dekomponering), Rf 1 = 0,49, = "46«6°
(c = 0,5, etanol).
c) I nærvær av 0,1 volumdeler anisol ble 0,152 vektdeler Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC2H^0H oppløst i 3 volumdeler hydrogenfluorid.
Oppløsningen ble rørt ved 0°C i 1 time^ Hydrogenfluoridet ble avdestillert, og residuumet tørket og så oppløst i vann. Etter tilsetning av en mindre mengde konsentrert saltsyre ble oppløsningen vasket med eter hvoretter vannlaget ble lyofilisert. Det resulterende pulver ble oppløst i 5 volumdeler DMF sammen med 0,19 volumdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hydroklorid og 0,0493 vektdeler HONBI. Opp-løsningen ble avkjølt til 0°C, hvoretter 0,0567 vektdeler DCC og 0,07 volumdeler N-etylmorfolin ble tilsatt. Hele blandingen ble rørt over natten. Nevnte DMF ble avdestillert under redusert trykk, og residuumet oppløst i vann. De uløselige, faste stoffer ble frafiltrert, mens filtratet ble ført gjennom en kolonne,<r>Amberlite IRA-400"
(acetat-form). Den eluerte væske ble oppsamlet og lyofilisert. Dette
produkt ble påsatt en kolonne"Amberlite XAD-2".og eluert med et lineært, gradient elueringssystem bestående av vann-metanol. Hovedfraksjonen ble lyofilisert hvorved man fikk 0,023 vektdeler av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHCgH^OH. Rf 3 <=> 0,28, ( a)* 0 = -54,4°
(c = 0,5, 5 $ vandig oppløsning av eddiksyre).
Aminosyreanalyse: His 1,00(1), Arg 1,05(1), Ser 0,95(1),
Glu 1,00(1), Pro 1,05(1), Gly 1,00(1), Leu 0,95(1),
Tyr 0,76(1).
Tallene i parentes angir de teoretiske verdier.
Eksempel Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHCH^
a) Fremstilling av Z-Arg(N02)-Pro-NHCH^
I 5 volumdeler DMF ble det oppløst 0,675 vektdeler Z-Arg(N0g)-Pro-0H og 0,101 vektdeler metylaminhydroklorid, og under av-kjøling til 0°C ble 0,21 volumdeler trietylamin tilsatt dråpevis.
Deretter ble 0,322 vektdeler HONBI og 0,37 vektdeler
DCC tilsatt, og hele blandingen ble rørt ved 0°C i 5 timer og så ved romtemperatur i 10 timer. Biproduktet nemlig urea, ble frafiltrert, og nevnte DMF ble avdestillert. Residuumet ble ekstrahert med kloroform, vasket med vann og tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Kloroformen ble avdestillert, og residuumet behandlet med etanol og gjenutfelt fra metanol-eter. Utbytte 0,612 vektdeler (88 %),
Rf 1 = 0,30, Smeltepunkt 137-143°C (dekomponering), (a)j^ = -41,5°
(c = 1, metanol).
Analyse for C^H<gg>O<gN>^.
Beregnet C 51,82; H 6,3H N 21,15
Funnet C 51,84; H 6,54; N 21,57
b) Fremstilling av Z-Leu-ArgfNOgJ-Pro-NHCH^
I 5 vektdeler 25 % HBr-eddiksyre ble det oppløst 0,556
vektdeler Z-Arg(N02)-Pro-NHCH^ og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Deretter ble tørr eter tilsatt, og de resulterende krystaller ble innvunnet ved filtrering og så tørket. Samtidig ble 0,312 vektdeler Z-Leu-0H oppløst i 5 volumdeler dioxan-etylacetat (1:1) og under avkjøling ble 0,268 vektdeler DCC og 0,232 vektdeler HONBI tilsatt. Hele blandingen ble rørt i 2 timer. Bi-
produktet nemlig urea, ble frafiltrert, og krystallene fremstilt som beskrevet ovenfor ble tilsatt filtratet og oppløst ved å tilsette 3 volumdeler DMF. Under avkjøling ble så 0,17 volumdeler trietylamin tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Oppløsningsmidlet ble avdestillert. Residuumet ble ekstrahert med kloroform og vasket med vann. Kloroformlaget ble dehydrert over vannfritt magnesiumsulfat, hvoretter kloroformen ble avdestillert. Residuumet ble behandlet med eter og gjenutfelt fra metanol-eter.
Utbytte 0,45 vektdeler (78 Rf 1 = 0,25»
Analyse for C26<H>4<0>^7N8
Beregnet C 54,15; H 7,02; N 19,43
Funnet C 54,37; H 6,98; N 19,52
c) 15 volumdeler 25 1° HBr-eddiksyre ble det oppløst 0,144 vektdeler Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCH^, og etter at oppløsningen
var hensatt ved romtemperatur i 30 minutter ble tørr eter tilsatt. Det resulterende bunnfall ble innvunnet ved filtrering og tørket. Det ble så oppløst i 3 volumdeler DMF og under avkjøling og røring ble så 0,05 volumdeler N-etylmorfolin tilsatt dråpevis.
I denne oppløsning ble det oppløst 0,19 vektdeler H-fPyrjGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hydroklorid fulgt av en tilsetning av 0,054 vektdeler HONBI og 0,062. vektdeler DCC. Hele blandingen ble rørt ved 0°C i 2 timer og så ved romtemperatur over natten. Biproduktet nemlig urea, ble frafiltrert og nevnte DMF avdestillert. Residuumet ble påsatt en kolonne av "Amberlite XAD-2" og eluert med et lineært, gradient elueringssystem bestående av 5 f° vandig etanol til etanol. Hovedfraksjonen ble lyofilisert, hvorved man oppnådde 0,137 vektdeler rent H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCH^. En 0,09 vektdels porsjon av ovennevnte produkt ble behandlet med 4 vektdeler hydrogenfluorid i nærvær av 0,02 volumdeler av anisol og 0,02 volumdeler merkaptoetanol ved 0°C i 1 time. Hydrogenfluoridet ble avdestillert og etter tørking ble residuumet oppløst i vann. Opp-løsningen ble ført gjennom "Amberlite IRA-400"(acetat-form), og så adsorbert på en kolonne av karboksymetyl-cellulose. Kolonnen ble eluert med et lineært gradient elueringssystem bestående av 0,005 N-vandig ammoniumacetat til 0,2 N-vandig ammoniumacetat, og hovedfraksjonen ble lyofilisert. Denne fremgangsmåte ga 0,06 vektdeler rent H ■* (Pyr) Glu-Hi s -Trp-S e r-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro -NHCH ^.
Rf 3 = 0,37, (a)^- = -55,6° (c = 0,5 i en 5 % vandig eddiksyre-oppløsning).
Aminosyreanalyse: His 0,96(1), Arg 0,98(1), Ser 0,96(1),
Glu 1,00(1), Pro 1,00(1), Gly 1,00(1), Leu 0,98(1), Tyr 0,98(1), NH2CH3 1,12(1),
Tallene i parentes angir teoretiske verdier.
Eksempel 4 Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Pyrrolidin
a) Fremstilling av IBOC-Pro-Pyrrolidin
I 30 volumdeler acetonitril ble det oppløst 11,7 vektdeler IB0C-Pro-0SU og 2,3 volumdeler pyrrolidin, og hele oppløsningen ble rørt over natten. Acetonitrilet ble avdestillert og residuumet ekstrahert med etylacetat. Ekstraktet ble vasket med vann og dehydrert over vannfritt natriumsulfat. Etylacetatet ble avdestillert, og de resulterende krystaller omkrystallisert fra etylacetat-petroleum-benzin. Utbytte 8,4 volumdeler (80,2 fo). Smeltepunkt 84-84,5°C.
(<x)j<p> = -83,4° (c = 1,0, metanol)
Analyse for C^H^O^Ng
Beregnet C 68,93; H 9,26; N 8,04
Funnet C 68,93; H 9,43; N 8,17
b) ■ Fremstilling av IB0C-Arg(N02)-Pro-Pyrrolidin
I 30 volumdeler trifluoreddiksyre ble det oppløst 6,96
vékt.-deler IBOC-Pro-Pyrrolidin, og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Deretter ble tørr eter tilsatt oppløsningen, og den resulterende olje ble innvunnet ved avhelling og ble så tørket i en desikator inneholdende natriumhydroksyd. Samtidig ble 7>9^ vektdeler IB0C-Arg(N0?)-0H oppløst i 40 volumdeler acetonitril og under avkjøling til 0 C ble 4,0 vektdeler dinitrofenol og 4>6 vektdeler DCC tilsatt under røring i 2 timer. Biproduktet, nemlig urea, ble frafiltrert og den oljen som ble fremstilt som beskrevet ovenfor, ble tilsatt filtratet. Blandingen ble avkjølt til 0°C, hvoretter 2,5 volumdeler N-etylmorfolin ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Acetonitrilen ble avdestillert,
og residuumet ble adsorbert på 100 vektdeler silisiumdioksydgel og eluert med 5 f° vandig metanol. Etter denne rensing ble oppløsnings-midlet avdestillert, og man fikk 6,0 vektdeler av et pulver. Ut-
bytte 54,5 fo, Smeltepunkt 190-193°C (dekomponering), (<x)jp = -59,7°
(c = 1, metanol)
Analyse for C26H43°<6N>7
Beregnet C 56,82; H 7,88; N 17,84
Funnet C 57,00; H 8,26; N 17,51
c) Fremstilling av IBOC-Leu-ArgtNOg)-Pro-Pyrrolidin
I 30 volumdeler trifluoreddiksyre ble det oppløst 5j49
vektdeler IBOC-Arg^Og)-Pro-Pyrrolidin, og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Deretter ble tørr eter tilsatt, og det resulterende bunnfall ble innvunnet ved filtrering og tørket til et pulver. I mellomtiden ble 3«95 vektdeler IBOC-Leu-OH oppløst i 20 volumdeler dioxan. Mens oppløsningen ble avkjølt til 0°C, ble 1,52 vektdeler N-hydroksysuccinimid og 2,7 vektdeler DCC tilsatt, og hele blandingen rørt i 2 timer. Biproduktet, urea, som var utskilt, ble frafiltrert og det pulver som ble fremstilt som beskrevet ovenfor, ble tilsatt filtratet fulgt av en tilsetning av 10 volumdeler tetrahydrofuran. Blandingen ble avkjølt til 0°C, hvoretter 1,4 volumdeler trietylamin ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Oppløsningsmidlet ble avdestillert, og residuumet ekstrahert med etylacetat. Ekstraktet ble vasket med en 5 i° vandig oppløsning av natriumhydrogenkarbonat og en 10 $ vandig oppløsning av sitronsyre. Den ble så vasket Med vann og dehydrert over vannfritt natriumsulfat. Etylacetatet ble avdestillert.og residuumet behandlet med petroleum-bensin. Det ble så gjenutfelt fra etylacetat-petroleum-bensin. Utbyttet var 5,8 vektdeler, smeltepunkt l85-l86°C (dekompo-nerin<g>), (a)jp = -53,6° (c = 0,98, metanol).
Analyse for C32<H>5<4>°7N<8>'<H>2°
Beregnet C 56,45; H 8,29; N 16,46
Funnet C 56,97; H 8,17; N 15,25 d) I 50 volumdeler metanol ble det oppløst 0,22 vektdeler IB0C-Leu-Arg(N02)-Pro-Pyrrolidin, og oppløsningen ble underkastet
hydrogenolyse i nærvær av palladium svart i 8 timer. Metanolen ble avdestillert, og residuumet behandlet med eter. Det resulterende pulver ble oppløst i en blanding av 5 volumdeler trifluoreddiksyre og 1 volumdel 2N HCl-eddiksyre, og oppløsningen ble så hensatt ved romtemperatur i 40 minutter. Trifluoreddiksyre ble så avdestillert og tørr eter tilsatt. Det resulterende bunnfall ble innvunnet ved
filtrering og tørket. Dette pulver som utgjorde 0,153 vektdeler ble oppløst i 3 volumdeler DMF sammen med 0,24 vektdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hydroklorid, fulgt av 0,0742 vektdeler DCC, 0,0644 vektdeler HONBI og 0,084 volumdeler N-etylmorfolin. Blandingen ble rørt ved 0°C i 5 timer og så ved romtemperatur over natten. Biproduktet urea, ble frafiltrert, og etylacetatet tilsatt til filtratet. Det utfelte bunnfall ble innvunnet ved filtrering, og det veide ialt 0,26 vektdeler. En 0,2 vektdel av dette produkt ble absorbert på en kolonne av 'Amberlite XAD-2" og eluert med et lineært gradient elueringssystem bestående av 5 % vandig etanol (l80 volumdeler) til 5° $ vandig etanol. De fraksjoner som ga veldefinerte soner på tynnsjiktskroma-tografi (silisiumdioksydgel) ble oppsamlet og lyofilisert. Utbyttet var 0,02 vektdeler, (a)j<*1> = -91,0° (c = 0,5, 5 <f» eddiksyre) , papir-kromatografi, Rf = 0,72 (n=butanol-pyridin-eddiksyre-vann=30:20:6:24). Aminosyreanalyse: His 1,09(1), Arg 0,96(1), Ser 0,82(1),
Glu 1,00(1), Pro 0,96(1), Gly 1,00(1), Leu 1,00(1),
Tyr 0,96(1).
Eksempel 5 Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-NLe-Arg-Pro-NH-CH2CH3
a) Fremstilling av Z-NLe-ArgfNOgJ-Pro-NH-CHgCH^
I 4 volumdeler 25 $ hydrogenbromid-eddiksyre ble det
oppløst 0,4775 vektdeler Z-ArgUO^-Pro-NH-CHgCH^, og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Så ble 50 volumdeler tørr eter tilsatt reaksjonsblandingen, og det resulterende bunnfall ble innvunnet ved filtrering, vasket med eter og tørket over natriumhydroksyd under redusert trykk. I mellomtiden ble 0,2653 vektdeler Z-NLe-0H oppløst i en blanding av 2 volumdeler etylacetat og 12 volumdeler dioxan. Mens oppløsningen ble avkjølt til 0°C, ble 0,197 vektdeler HONBI og 0,226 vektdeler DCC tilsatt, og hele blandingen rørt i 3 timer. Biproduktet, urea, som var blitt utskilt, ble frafiltrert, og filtratet tilsatt en oppløsning av det bunnfall hvis fremstilling er beskrevet ovenfor, i 1 volumdel DMF fulgt av en dråpevis tilsetning av 0,28 volumdeler trietylamin. Blandingen ble rørt over natten. Oppløsningsmidlet ble avdestillert, og residuumet ekstrahert med
100 volumdeler kloroform. Ekstraktet ble vasket med 5 f° vandig opp-løsning av natriumhydrogenkarbonat, vann, 0,5 N saltsyre og vann,
og så dehydrert over vannfritt magnesiumsulfat. Kloroformen ble av-
destillert, og residuumet behandlet med eter og gjenutfelt fra etanol-eter. Utbyttet var 0,41 vektdeler, smeltepunkt 10°/-111°C (dekomponering) , (<x){j2 = -50,4° (c = 0,5, EtOH).
Analyse for C^H^O^Ng. l/2 HgO
Beregnet C 54,07; H 7,22; N 18,68
Funnet C 53,79; H 7,09; N 18,24
I 2 volumdeler 25 % hydrogenbromid-eddiksyre ble det oppløst 0,155 vektdeler Z-NLe-Arg(N02)-Pro-NH-CHgCH^, og oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Deretter ble 50 volumdeler tørr eter tilsatt reaksjonsblandingen, og det resulterende bunnfall ble innvunnet ved filtrering, vasket med eter og tørket over natriumhydroksyd under redusert trykk.
Det ble så oppløst i 2 volumdeler DMF og under avkjøling til 0°C ble 0,19 vektdeler H-(Pyr)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hydroklorid, 0,09 vektdeler HONBI, 0,103 vektdeler DCC og 0,1 volumdeler N-etylmorfolin tilsatt i den angitte rekkefølge. Blandingen ble rørt ved 0°C i 5 timer og så ved romtemperatur i 10 timer. Biproduktet, urea, som var blitt utskilt, ble frafiltrert, og nevnte DMF ble avdestillert under redusert trykk. Residuumet ble oppløst i 4 volumdeler 5 f° vandig etanol sammen med 0,2 vektdeler urea, og oppløsningen ble adsorbert på en kolonne av "Amberlite XAD-2" og eluert med et lineært gradient elueringssystem bestående av 5 % vandig etanol til 80 % vandig etanol. Hovedfraksjonen ble lyofilisert og man oppnådde 0,067 vektdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-NLe-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH^. En 0,060 vektdels porsjon av dette produkt ble oppløst i 4 volumdeler hydrogenfluorid ved -50°C og i nærvær av 0,05 volumdeler anisol og 0,02 volumdeler 2-merkapto-etanol, og blandingen ble så rørt ved 0°C
i 1 time. Hydrogenfluoridet ble avdestillert under redusert trykk,
og residuumet tørket i en desikator inneholdende natriumhydroksyd. Residuumet ble oppløst i 20 volumdeler vann, og oppløsningen ført gjennom'Amberlite CG-400"(acetat-form). Den eluerte væske ble lyofilisert og påsatt en kolonne av karboksymetyl-cellulose. Den ble så eluert med et lineært gradient elueringssystem bestående av 0,005 N-ammoniumacetat til 0,2 N-ammoniumacetat. Hovedfraksjonen ble lyofilisert, hvorved man oppnådde 0,035 vektdeler av det forønskede produkt. Dette produkt ble påsatt en kolonne av"Sephadex LH-20" og eluert med 0,1 N-eddiksyre. Den homogene fraksjon ble lyofilisert, hvorved man
oppnådde 0,028 vektdeler rent H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-NLe-Arg-Pro-NH-CHg<C>H^. (a)<25> = -52,2° (c = 0,5, 5 fo eddiksyre).
Aminosyreanalyse: His 1,00(1), Arg 1,02(1), Trp 1,00(1),
Ser 0,91(1), Glu 1,00(1), Pro 1,05(1), Gly 0,98(1),
Tyr 1,00(1), NLe 1,02(1).
Eksempel 6 Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Pro-NH-CH2CH3
a) Fremstilling av Z-Ser-Phe-Gly-OEt
Z-Phe-Gly-OEt (2,5 vektdeler) ble oppløst i 50 volumdeler metanol, og blandingen underkastet katalytisk reduksjon med 5 f° palladium på karbon i 4 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering, og oppløsningsmidlet avdestillert. Residuumet ble oppløst i dimetylformamid (20 volumdeler) og så ble Z-Ser-ODNP (2,6 vektdeler) tilsatt, fulgt av røring i 8 timer. Oppløsningsmidlet ble avdestillert, og residuumet oppløst i etylacetat. Oppløsningen ble vasket med en 5 % vandig oppløsning av natriumhydrogenkarbonat, 1 N-saltsyre og vann og så tørket over magnesiumsulfat. Oppløsningsmidlet ble avdestillert, og det faste residuum utkrystallisert fra etylacetat-petroleum-bensin. Utbyttet var 1,75 vektdeler (74,2 %), smeltepunkt 128-129°C, (a)<22> = -26,2° (c <=> 0,6, EtOH)
Analyse for C^H^O^N^
Beregnet C 6l,13; H 6,20; N 8,91
Funnet C 60,47; H 6,00; N 8,88
b) Fremstilling av Z-Ser-Phe-Gly-NHNH2
1,65 vektdeler Z-Ser-Phe-Gly-OEt ble oppløst i 20 volumdeler metanol hvoretter 0,71 volumdeler hydrazinhydrat ble tilsatt. Blandingen ble hensatt i 8 timer og de resulterende krystaller innvunnet ved filtrering og vasket med metanol-eter (1:1). Utbyttet var 1,6 vektdeler (100 %), Smeltepunkt 191-193°C, (a)<22> = -23,0°
(c = 2, DMF).
Analyse for C22H27N5%
Beregnet C 57,76; H 5,95; N 15,31
Funnet C 57,32; H 6,21; N 15,53
c) Fremstilling av Z-Ser-Phe-Gly-Leu-ArgfNO^-Pro-NH-CHgCH^
Z-Ser-Phe-Gly-NHNH2 (0,8 vektdeler) ble oppløst i 10 volumdeler DMF og oppløsningen ble så avkjølt. Deretter ble 3»5 volumdeler 2N saltsyre tilsatt. Under røring ved -6°C ble en 2N vandig oppløsning av natriumnitrit tilsatt, og blandingen hensatt for reaksjon i 10 minutter. Underveis ble bunnfallet oppløst ved å til-
sette DMF ialt 10 volumdeler. En mettet vandig oppløsning av natriumklorid ble tilsatt reaksjonsblandingen fulgt av ekstraksjon med etylacetat. Ekstraktet ble slått sammen med vaskoppløsningene, og det hele vasket med en 5 1° vandig oppløsning av natriumhydrogenkarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etylacetatlaget som utgjorde 80 volumdeler ble tørket over natriumsulfat og så tilsatt 20 volumdeler av H-Leu-ArgCNO^)-Pro-NH-CHgCH^ i 1,04 vektdeler DMF. Etylacetatet ble avdestillert i et isbad, og den resulterende homogene oppløsning rørt ved 3°C i 2 døgn. Oppløsningsmidlet ble avdestillert og residuumet renset ved kromatografi på silisiumdioksydgel. Kroma-togrammet ble utviklet med et oppløsningsmiddelsystem bestående av etylacetat-pyridin-eddiksyre-vann (60:20:6:10), og de aktive fraksjoner slått sammen og destillert for å fjerne oppløsningsmidlene.
Vann ble tilsatt residuumet , og det resulterende faste stoff ble innvunnet ved filtrering. Utbyttet var 0,87 vektdeler (6l,2 %), smeltepunkt 108°C, (a)<22> = -59,1° (c = 0,7, EtOH).
Analyse for C^H^O^N^HgO
Beregnet C 54,72; H 6,83; N 17,12
Funnet C 54,95; H 6,84; N 16,74
d) Z-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2CH^
(0,836 vektdeler) ble oppløst i metanol, hvoretter
1 volumdel IN saltsyre ble tilsatt. Oppløsningen ble underkastet katalytisk reduksjon med palladium svart. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet avdestillert. Residumet ble opp-løst i 10 volumdeler DMF, hvoretter man tilsatte 0,83 vektdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-0H og 0,36 vektdeler HONBI. Blandingen ble av-kjølt til -5°C hvoretter 0,412 vektdeler DCC ble tilsatt. Blandingen ble hensatt for reaksjon i 2 døgn, hvoretter bunnfallet ble frafiltrert og nevnte DMF ble avdestillert. Residuumet ble renset ved kromatografi idet man anvendte en kolonne av"Amberlite XAD-2" og et lineært gradient elueringssystem bestående av 5 f0 vandig etanol til 80 fo vandig etanol. De aktive fraksjoner ble slått sammen og destillert for å fjerne nevnte etanol, og den gjenværende vandige oppløsning ble lyofilisert. Det resulterende pulver ble ytterligere renset ved ione-utbyttingskromatografi på karboksymetyl-cellulose og ved hjelp av et lineært gradient elueringssystem bestående av 0,005 N til 0,1 N vandig oppløsning av ammoniumacetat. Den aktive fraksjon ble lyofilisert, hvorved man oppnådde et rent, hvitt pulver. Utbyttet var 0,424 vektdeler, (a)<22> = -55<0> (c = 0,5, 5 % eddiksyre).
Aminosyreanalyse: His 1,02(1), Arg 1,01(1), Trp 0,91(1),
Ser 0,90(1), Glu 1,00(1), Pro 1,00(1), Gly 0,98(1),
Leu 1,00(1), Phe 1,00(1), Etylamin 1,06(1).
For å bestemme innvinningsutbyttet av Trp ble alle aminosyreanalysene utført ved hjelp av syrehydrolyse med 5,7 N HC1 i nærvær av thioglycolinsyre.
Eksempel 7 Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-ILe-Arg-Pro-NHCgH^
a) Fremstilling av H-(Pyr)Glu.rHis-Trp-Ser-Phe-Gly-OtBu
1,57 vektdeler H-Gly-0tBu og 4,0 vektdeler Z-Phe-0SU
ble oppløst i 20 volumdeler etylacetat, og blandingen rørt ved romtemperatur over natten. Reaks jonsblandingen ble vasket med en 5 f" vandig oppløsning av natriumhydrogenkarbonat, N-saltsyre og vann, dehydrert over magnesiumsulfat og konsentrert under redusert trykk. Petroleter ble tilsatt til residuumet , og det oppnådde bunnfall ble samlet ved filtrering, hvorved man oppnådde 3,5 vektdeler (85 %) Z-Phe-Gly-0tBu med et smeltepunkt på 78-79°C. (a){p = -16,7°
(c = 1,0, EtOH)
Analyse for Cg^<HggO>^<Ng>
Beregnet C 66,97; H 6",87; N 6,79
Funnet C 67,14; H 6,64; N 6,88
7,0 vektdeler Z-Phe-Gly-0tBu ble oppløst i 50 volumdeler metanol. Oppløsningen ble underkastet katalytisk reduksjon idet man anvendte palladium svart som katalysator og reduksjonen tok ialt 5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert, og filtratet konsentrert ved fordampning av oppløsningsmidlet. Residuumet ble oppløst i 10 volumdeler acetonitril, fulgt av en tilsetning av 1,62 vektdeler Z-Ser-0DNP. Den resulterende blanding ble rørt ved romtemperatur i 1 døgn hvoretter acetonitrilen ble avdampet. Residuumet ble oppløst i etylacetat. Denne oppløsning ble vasket med 10 % vandig ammoniakk,
IN saltsyre og vann, dehydrert over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert ved fordampning av oppløsningsmidlet. Residuumet ble oppsamlet ved hjelp av petroleter og omkrystallisert fra etylacetat-petroleter, hvorved man oppnådde 1,41 vektdeler (70 fo) av Z-Ser-Phe-Gly-OtBu med et smeltepunkt på 105-106°C. (<*)£p = -26,6° (c = 0,74* EtOH).
Analyse for Cg<gH>^O<yN>^
Beregnet C 62,50; H 6,66; N 8,41
Funnet C 62,91; H 6,38; N 8,12
1,34 vektdeler Z-Ser-Phe-Gly-OtBu ble oppløst i 50 volumdeler metanol. Oppløsningen ble underkastet katalytisk reduksjon med palladium svart som katalysator i 5 timer. Blandingen ble filtrert, og filtratet konsentrert til et residum. Residuumet og 1,27 vektdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-OH og 0,83 vektdeler HONBI ble oppløst i 20 volumdeler DMF, fulgt av en isavkjøling. Blandingen ble så tilsatt 0,95 vektdeler DCC, og den resulterende blanding hensatt for en reaksjon over natten. 'Bunnfallet ble fjernet ved filtrering, og filtratet konsentrert. Acetonitril ble tilsatt residumet, fulgt av oppvarming. Pulveret i blandingen ble oppsamlet ved filtrering og underkastet gjenutfelling fra en 50 % vandig etanolopp-løsning, hvorved man oppnådde 1,8 vektdeler (87 %) av H-(Pyr)Glu-His-Tr<p->Ser-Phe-Gl<y->OtBu. (-Op = -20,6° (c = 1,0, DMF).
Analyse for C40<H>4g0gNg-2H20
Beregnet C 58,59; H 6,52; N 15,38
Funnet C 59,02; H 6,62; N 15,23
b) Fremstilling av Z-ILe-Arg(N02)-Pro-NHC2H^
1,43 vektdeler Z-Arg(N02)-Pro-NHC2H^ ble oppløst i
10 volumdeler 25 f» HBr-eddiksyre, og blandingen ble hensatt ved romtemperatur i 40 minutter. Deretter ble 80 volumdeler tørr eter tilsatt, og bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering og tørket til et pulver.
I mellomtiden ble 0,795 vektdeler Z-ILe-0H oppløst i
10 volumdeler dioxan, fulgt av en avkjøling til 0°C. Denne oppløsning ble tilsatt 0,59 vektdeler HONBI og 0,68 vektdeler DCC og blandingen ble rørt i 2 timer. Blandingen ble så filtrert for å fjerne bunnfall, og filtratet ble tilsatt det pulver hvis fremstilling er beskrevet
ovenfor. 0,84 volumdeler trietylamin ble ytterligere tilsatt, og blandingen ble så rørt ved romtemperatur i 12 timer. Oppløsnings-midlet, dioxan, ble så fjernet ved fordampning. Residuumet ble opp-løst i 100 volumdeler kloroform. Oppløsningen ble vasket med 0,1 N saltsyre, en 5 % vandig natriumhydrogenkarbonatoppløsning og vann, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert ved å fordampe kloroformen. Residuumet ble behandlet med eter hvorved man fikk et bunnfall, som ble gjenutfelt fra etanol-eter, hvorved man oppnådde 1,1 vektdeler Z-ILe.-Arg(N02) -Pro-NHCgH^ med et smeltepunkt på 103-105°C (dekom<p>onerin<g>). (a)jp = -58,1° (c = 1, MeOH)
Analyse for H20
Beregnet C 54,08; H 7,23; N 18,68
Funnet C 53,80; H 7,15; N 18,84 c) 0,177 vektdeler Z-ILe-Arg(N02)-ProNHC2H^ ble oppløst i 3 volumdeler 25 % HBr-eddiksyre, og oppløsningen hensatt ved romtemperatur i 30 minutter, hvoretter man tilsatte 50 volumdeler tørr eter. Bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket til en aminkomponent.
Samtidig ble 0,221 vektdeler H-(Pyr)-Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-OtBu oppløst i 5 volumdeler trifluoreddiksyre, og oppløsningen hensatt ved romtemperatur i 40 minutter. 0,05 volumdeler 5,7 N saltsyre ble tilsatt oppløsningen, fulgt av en ytterligere tilsetning av 50 volumdeler eter. Bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering, tørket og oppløst i 3 volumdeler DMF, fulgt av en avkjøling til 0°C. Opp-løsningen .ble så tilsatt ovenfor nevnte aminkomponent, 0,097 vektdeler HONBI, 0,111 vektdeler DCC og 0,126 trietylamin. Den resulterende blanding ble rørt ved 0°C i 5 timer og så ved romtemperatur i 10 timer. Blandingen ble filtrert for å fjerne det dannede dicyklohexylurea, hvoretter filtratet ble konsentrert under redusert trykk. Residuumet ble oppløst i 10 volumdeler 10 fo vandig etanol, og oppløs-ningen helt på toppen av en kolonne pakket med"Amberlite XAD-2". Eluering ble utført med et lineært gradient elueringssystem av 10 $ vandig etanol til 80 fo vandig etanol. De fraksjoner som inneholdt produktet ble oppsamlet, konsentrert ved fordampning av oppløsnings-midlet og deretter lyofilisert, hvorved man oppnådde 0,085 vektdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-ILe-Arg(N02)-Pro-NHC2H5.
0,07 vektdeler av produktet ble oppløst i en blanding
av 0,02 volumdeler anisol, 0,02 volumdeler 2-merkaptoetanol og 4 volumdeler vannfri hydrogenfluorid. Oppløsningen ble rørt ved 0°C
i 1 time, hvoretter hydrogenfluoridet ble fordampet under redusert trykk. Residuumet ble tørket i en desikator, oppløst i 50 volumdeler vann og ført gjennom en kolonne pakket med "Amberlite IRA-400" (acetat-form). Den oppløsning som ble ført gjennom kolonnen ble lyofilisert, hvorved man oppnådde 0,075 vektdeler av et råprodukt. Dette produkt ble absorbert på en kolonne av karboksymetyl-cellulose og eluert med et lineært gradient elueringssystem bestående av 0,005 N ammoniumacetat til 0,2 N ammoniumacetat. De fraksjoner som inneholdt det for-ønskede produkt ble så lyofilisert. Det oppnådde produkt ble oppløst i en vandig 0,1 N eddiksyreoppløsning, og så ført gjennom en kolonne avSephadex LH-20'i Oppløsningen som ble ført gjennom kolonnen ble så lyofilisert, hvorved man oppnådde 0,043 vektdeler av et rent produkt. Rf 3 = 0,41, (a)<23> = -59,4° (c = 0,5, 5 % eddiksyre),
Aminosyreanalyse: His 1,1(1), Arg 1,1(1), Trp 0,87(1),
etylamin 1,0(1), Ser 0,8l(l), Glu 1,03(1), Pro 1,0(1),
Gly 1,0(1), ILe 1,06(1), Phe 0,97(1), tallene i parentes angir teoretiske verdier.
Eksempel 8 Fremstilling av H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Met-Arg-Pro-NHCgH^
a) Fremstilling av BOC-Met-Arg-Pro-NHCgH^
1,91 vektdeler Z-Arg(N02)-Pro-NHC2H^ ble oppløst i
10 volumdeler 25 % HBr-eddiksyre, og oppløsningen ble hensatt i
30 minutter, fulgt av en tilsetning av tørr eter. Bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket til en aminkomponent .
Samtidig ble 1,75 vektdeler B0C-Met-0H.DCHA oppløst i 100 volumdeler eter, fulgt av to gangers vasking med 50 volumdeler 0,2 N vandig oppløsning av svovelsyre og tørking over vannfritt natriumsulfat. Eteren ble avdampet, og residuumet oppløst i 20 volumdeler dioxan. Oppløsningen ble avkjølt til 0°C, og oppløsningen ble tilsatt 0,905 vektdeler DCC og 0,79 vektdeler HONBI. Blandingen ble rørt i 2 timer. Den dannede dicyklohexylurea ble frafiltrert, .og filtratet konsentrert. Residuumet ble tilsatt 5 volumdeler DMF og den ovenfor fremstilte aminkomponent. Den resulterende oppløsning ble avkjølt, hvorpå den ble tilsatt 1,12 volumdeler trietylamin. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer hvoretter nevnte DMF ble avdampet. Residuumet ble oppløst i 100 volumdeler kloroform, vasket med 0,1 N saltsyre, en 5 f> vandig natriumhydrogenkarbonat-oppløsning og deretter med vann, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert ved fordampning av kloroformen. Eter ble tilsatt residumet, hvorved man fikk et fast materiale. Dette ble gjenutfelt fra
etylacetat-eter, hvorved man fikk fremstilt 1,4 vektdeler BOC-Met-Arg-Pro-NHC2H^ som smeltet ved 101-104°C (dekomponering), (a)2,<2> = -64,4°
(c = 1,0, MeOH).
Analyse for C2<yi>^<20yNgS*>l/2 H20
Beregnet C 47,33; H 7,42; N 19,20; S 5,49 Funnet c 47,67; H 7,23; N 18,94; s 5,48
b) H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Met-Arg-Pro-NHC 2H^
0,275 vektdeler B0C-Met-Arg(N02)-Pro-NHC2H^ ble oppløst
i en blanding av 0,1 volumdeler 2-merkaptoetanol og 5 volumdeler trifluoreddiksyre og så hensatt ved romtemperatur i 30 minutter. Blandingen ble så tilsatt 0,085 volumdeler 5,7 N saltsyre.
Den resulterende blanding ble avkjølt, og blandingen ble tilsatt 50 volumdeler eter. Det dannede bunnfall ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter, tørket, oppløst i DMF og avkjølt til 0°C-. Oppløsningen ble så tilsatt 0,318 vektdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hydroklorid, 0,107 vektdeler HONBI, 0,124 vektdeler DCC og 0,17 volumdeler N-etylmorfolin, og den resulterende blanding ble rørt i 12 timer. Det utfelte dicyklohexylurea ble fjernet ved filtrering, og filtratet konsentrert under redusert trykk. Residuumet. ble oppløst i 5 volumdeler 5 % vandig etanol, påsatt en kolonne av"Amberlite XAD-2" og eluert i et lineært gradient elueringssystem av 5 % vandig etanol til 80 % vandig etanol. Hovedfraksjonen ble lyofilisert hvorved man oppnådde 0,135 vektdeler H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Met-Arg(N02)-Pro-NHCgH^. 0,1 vektdel av dette produkt ble oppløst i en blanding av 0,02 volumdeler anisol, 0,02 volumdeler etanol og 0,02 volumdeler 2-merkaptoetanol samt 6 volumdeler hydrogenfluorid, og blandingen ble rørt ved 0°C i 1 time. Nevnte hydrogenfluorid ble fjernet ved fordampning under redusert trykk, og residuumet tørket i en eksikator. Residuumet ble så oppløst i 20 volumdeler vann og ført gjennom en kolonne av"Amberlite CG-400"
(acetat-form). Den oppløsning som kom igjennom kolonnen ble så lyo-
filisert. Residuumet ble oppløst i 20 volumdeler vann og tilsatt 0,4 volumdeler thioglycolinsyre. Blandingen ble så hensatt ved 60°C i 10 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 volumdeler vann, adsorbert på en kolonne av karboksymetyl-cellulose og eluert med et lineært gradient elueringssystem av 0,005 N ammoniumacetat til 0,2 N ammoniumacetat. Hovedfraksjonene ble lyofilisert, hvorved man fikk 0,02 vektdeler av et råprodukt. Dette ble adsorbert på en kolonne av"Sephadex LH-20"og eluert med 0,1 N eddiksyre. Den eluerte opp-løsning ble lyofilisert, hvorved man fikk et renset produkt.
TLC: Rf = 0,31 (silisiumdioksydgel, n-butanol:eddiksyre:etylacetat: vann = 1:1:1:1) (a)<2>^ = -43,2° (c = 0,25, 5 1° eddiksyre)
Aminosyreanalyse: His 0,9(1), Arg 0,9(1), Trp 0,8(1)
Ser 0,7(1), Glu 0,9(1), Pro 1,1(1), Gly 1,0(1), Met 0,9(1), Tyr 0,7(1), etylamin 0,9(1). Tallene i parentes angir teoretiske verdier.
Eksperiment
Nonapeptidamid-derivater fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse ble subkutant tilført hunnrotter utenfor den normale befruktningstid, og derivatenes eggløsningsinduserende aktivitet
-b-!e....s-å bestemt. Disse derivater er på grunn av sin spesielt fordelaktige aktivitet foretrukket. De oppnådde resultater er
vist i nedenstående tabell.
Claims (1)
- Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater med den generelle formel: L-pyroglutamy1-L-histidy1-L-tryptofy1-L-sery1-A^-glycyl-A2-L-arginyl-L-prolyl-Y (I)hvor A^ er L-tyrosyl eller L-fenylalanyl, A^ er L-leucyl, L-isoleucyl, L-norleucyl, L-valyl, L-norvalyl, L-metionyl eller L-fenylalanyl, Y representerer NHR, hvor R er en rett eller forgrenet alkylgruppe med 1-3 karbonatomer som eventuelt er substituert med hydroksy, eller hvor Y alternativt representerer en pyrrolidinrest, eller farmasøytisk akseptable salter derav, karakteris'ert ved at en reagens (A) som er L-pyroglutaminsyre eller peptidfragment som har en L-pyroglutaminsyreenhet bundet til det terminale N-atom, og som derifra omfatter ovennevnte aminosyresekvens, kondenseres med en reagens (B) som er et amin som svarer til resten av det ovennevnte nonapeptidamid-derivat, og hvor de to reagenser (A) og (B) eventuelt omfatter en eller flere beskyttende grupper som deretter fjernes, hvoretter, om ønsket, en således erholdt forbindelse omdannes til et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4268672A JPS5324423B2 (no) | 1972-04-29 | 1972-04-29 | |
JP11845272A JPS5324424B2 (no) | 1972-11-24 | 1972-11-24 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO139560B true NO139560B (no) | 1978-12-27 |
NO139560C NO139560C (no) | 1979-04-04 |
Family
ID=26382407
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO1481/73A NO139560C (no) | 1972-04-29 | 1973-04-10 | Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3853837A (no) |
AT (1) | AT333988B (no) |
AU (1) | AU453931B2 (no) |
CA (1) | CA1005815A (no) |
CH (1) | CH580065A5 (no) |
CS (1) | CS188162B2 (no) |
DE (2) | DE2321174C2 (no) |
DK (1) | DK147851C (no) |
ES (1) | ES414197A1 (no) |
FI (1) | FI56676C (no) |
FR (1) | FR2183021B1 (no) |
GB (1) | GB1403642A (no) |
HU (1) | HU168696B (no) |
NL (2) | NL176856C (no) |
NO (1) | NO139560C (no) |
PL (1) | PL95790B1 (no) |
SE (1) | SE397520B (no) |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3931138A (en) * | 1973-03-13 | 1976-01-06 | Abbott Laboratories | N-carbobenzoxy-pyroglutamyl-histidine |
CS180644B2 (en) * | 1973-09-29 | 1978-01-31 | Takeda Chemical Industries Ltd | Process for preparing nonapeptides |
GB1532211A (en) * | 1974-10-25 | 1978-11-15 | Wellcome Found | Lh-rh peptide analogues |
US4338305A (en) * | 1975-03-24 | 1982-07-06 | American Home Products Corporation | Use of LRH and LRH agonists |
AU497512B2 (en) * | 1975-04-15 | 1978-12-14 | Ici Australia Limited | Nona and deca-peptides |
US4034082A (en) * | 1976-03-01 | 1977-07-05 | Abbott Laboratories | Method to prevent reproduction in warm-blooded female animals with nonapeptides |
DE2905502C2 (de) * | 1979-02-14 | 1982-07-15 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung von LH-RH bzw. LH-RH-Analoga und Pyroglutamyl-N↑i↑m↑-dinitrophenyl-histidin |
DE3020941A1 (de) * | 1980-06-03 | 1981-12-17 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Nonapeptid, verfahren zu seiner herstellung, dieses enthaltendes mittel und seine verwendung |
US4675189A (en) * | 1980-11-18 | 1987-06-23 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Microencapsulation of water soluble active polypeptides |
US4659696A (en) * | 1982-04-30 | 1987-04-21 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Pharmaceutical composition and its nasal or vaginal use |
HU193607B (en) * | 1985-07-18 | 1987-11-30 | Innofinance Altalanos Innovaci | Process for production of sexual products applyable for natural or artificial insemination for mammates |
US4897268A (en) * | 1987-08-03 | 1990-01-30 | Southern Research Institute | Drug delivery system and method of making the same |
US5068221A (en) * | 1989-05-09 | 1991-11-26 | Mathias John R | Treatment of motility disorders with a gnrh analog |
JP2653255B2 (ja) | 1990-02-13 | 1997-09-17 | 武田薬品工業株式会社 | 長期徐放型マイクロカプセル |
CA2050425A1 (en) | 1990-09-03 | 1992-03-04 | Yoshiaki Uda | Pharmaceutical composition and its mucous use |
NZ240214A (en) | 1990-10-16 | 1993-02-25 | Takeda Chemical Industries Ltd | Polymer compositions comprising a polylactic acid and a copolymer of glycolic acid and a hydroxycarboxylic acid; use as carrier for prolonged release pharmaceutical compositions of water soluble drugs |
US5434136A (en) * | 1990-12-14 | 1995-07-18 | Mathias; John R. | Treatment of motility disorders with a GNRH analog |
US5518730A (en) * | 1992-06-03 | 1996-05-21 | Fuisz Technologies Ltd. | Biodegradable controlled release flash flow melt-spun delivery system |
EP0582459B1 (en) | 1992-08-07 | 1998-01-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production of microcapsules of water-soluble drugs |
CA2143044C (en) * | 1994-02-21 | 2005-04-12 | Yasutaka Igari | Matrix for sustained-release preparation |
US6117455A (en) * | 1994-09-30 | 2000-09-12 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Sustained-release microcapsule of amorphous water-soluble pharmaceutical active agent |
US5837281A (en) | 1995-03-17 | 1998-11-17 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Stabilized interface for iontophoresis |
US6413536B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-07-02 | Southern Biosystems, Inc. | High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device |
US7833543B2 (en) * | 1995-06-07 | 2010-11-16 | Durect Corporation | High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device |
CA2192782C (en) | 1995-12-15 | 2008-10-14 | Nobuyuki Takechi | Production of microspheres |
CA2192773C (en) | 1995-12-15 | 2008-09-23 | Hiroaki Okada | Production of sustained-release preparation for injection |
US5908400A (en) * | 1996-06-20 | 1999-06-01 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Device structure for iontophoresis |
US20060025328A1 (en) * | 1997-05-28 | 2006-02-02 | Burns Patrick J | Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs |
US6051558A (en) * | 1997-05-28 | 2000-04-18 | Southern Biosystems, Inc. | Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs |
EP0882736A1 (en) * | 1997-06-02 | 1998-12-09 | Laboratoire Theramex S.A. | LH-RH peptide analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them |
JP4414517B2 (ja) | 1999-09-01 | 2010-02-10 | 久光製薬株式会社 | イオントフォレーシス用デバイス構造体 |
US20040001889A1 (en) | 2002-06-25 | 2004-01-01 | Guohua Chen | Short duration depot formulations |
SI1575569T1 (sl) | 2002-12-13 | 2010-12-31 | Durect Corp | Oralni sistem dostave zdravila, ki obsega visokoviskozne tekoče nosilne materiale |
EP2415484B1 (en) | 2004-09-17 | 2014-06-18 | Durect Corporation | Sustained local anesthetic composition containing SAIB |
US20070027105A1 (en) | 2005-07-26 | 2007-02-01 | Alza Corporation | Peroxide removal from drug delivery vehicle |
DK2117521T3 (da) | 2006-11-03 | 2012-09-03 | Durect Corp | Transdermale indgivelsessystemer omfattende bupivacain |
CA2706931C (en) | 2007-12-06 | 2015-05-12 | Durect Corporation | Oral pharmaceutical dosage forms |
US20100260844A1 (en) * | 2008-11-03 | 2010-10-14 | Scicinski Jan J | Oral pharmaceutical dosage forms |
EP2983468A4 (en) | 2013-03-15 | 2016-09-07 | Durect Corp | COMPOSITIONS WITH RHEOLOGY MODIFIER TO REDUCE RESOLUTION VARIABILITY |
CA3167217A1 (en) | 2020-01-13 | 2021-07-22 | Durect Corporation | Sustained release drug delivery systems with reduced impurities and related methods |
-
1973
- 1973-04-10 NO NO1481/73A patent/NO139560C/no unknown
- 1973-04-18 AU AU54676/73A patent/AU453931B2/en not_active Expired
- 1973-04-25 DK DK225073A patent/DK147851C/da not_active IP Right Cessation
- 1973-04-25 US US00354381A patent/US3853837A/en not_active Expired - Lifetime
- 1973-04-25 FR FR7315044A patent/FR2183021B1/fr not_active Expired
- 1973-04-26 SE SE7305905A patent/SE397520B/xx unknown
- 1973-04-26 DE DE2321174A patent/DE2321174C2/de not_active Expired
- 1973-04-26 DE DE2366379A patent/DE2366379C2/de not_active Expired
- 1973-04-27 CA CA169,683A patent/CA1005815A/en not_active Expired
- 1973-04-27 NL NLAANVRAGE7305995,A patent/NL176856C/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 1973-04-27 AT AT377173A patent/AT333988B/de not_active IP Right Cessation
- 1973-04-27 CS CS733045A patent/CS188162B2/cs unknown
- 1973-04-27 CH CH606673A patent/CH580065A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-04-27 FI FI1375/73A patent/FI56676C/fi active
- 1973-04-28 HU HUTA1249A patent/HU168696B/hu unknown
- 1973-04-28 ES ES414197A patent/ES414197A1/es not_active Expired
- 1973-04-28 PL PL1973162210A patent/PL95790B1/pl unknown
- 1973-04-30 GB GB2042773A patent/GB1403642A/en not_active Expired
-
1993
- 1993-02-04 NL NL930004C patent/NL930004I1/nl unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU453931B2 (en) | 1974-10-17 |
HU168696B (no) | 1976-06-28 |
CA1005815A (en) | 1977-02-22 |
NL930004I1 (nl) | 1993-04-01 |
FR2183021A1 (no) | 1973-12-14 |
DE2366379C2 (de) | 1985-01-17 |
FI56676C (fi) | 1980-03-10 |
FR2183021B1 (no) | 1976-04-09 |
NL7305995A (no) | 1973-10-31 |
ES414197A1 (es) | 1976-05-01 |
NL176856C (nl) | 1985-06-17 |
CS188162B2 (en) | 1979-02-28 |
DE2321174A1 (de) | 1973-11-08 |
DK147851C (da) | 1986-03-10 |
AT333988B (de) | 1976-12-27 |
CH580065A5 (no) | 1976-09-30 |
SE397520B (sv) | 1977-11-07 |
DK147851B (da) | 1984-12-24 |
AU5467673A (en) | 1974-10-17 |
PL95790B1 (pl) | 1977-11-30 |
DE2321174C2 (de) | 1982-04-15 |
ATA377173A (de) | 1976-04-15 |
NO139560C (no) | 1979-04-04 |
FI56676B (fi) | 1979-11-30 |
US3853837A (en) | 1974-12-10 |
GB1403642A (en) | 1975-08-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO139560B (no) | Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater | |
FI60553B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat | |
US4008209A (en) | Nonapeptide amide analogs of luteinizing releasing hormone | |
US4024248A (en) | Peptides having LH-RH/FSH-RH activity | |
US4118483A (en) | Peptides having gonadoliberin activity and process for their manufacture | |
NO145691B (no) | Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme decapeptidamider. | |
IE40257L (en) | Nona and decapeptide amides | |
WO1983004250A1 (en) | Gonadoliberin derivatives, process for the preparation and pharmaceutical and veterinary compositions thereof | |
HU211603A9 (en) | Nonapeptide bombesin antagonists | |
US4301065A (en) | Novel polypeptides having thymic activity or an antagonistic activity and processes for their synthesis | |
US4638046A (en) | Retro-inverso C-terminal hexapeptide analogues of substance P | |
EP0082568A2 (en) | Retro-inverso analogues of C-terminal penta and hexapeptides of substance P. | |
FI82255C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya gonadoliberinderivat som paoverkar djurens foeroekningsprocesser. | |
US3749703A (en) | Asn15-bovine thyrocalcitonin | |
NO137151B (no) | Analogifremgangsm}te for fremstilling av terapeutisk aktive ortiotropin-peptider | |
US4111923A (en) | Octapeptides and methods for their production | |
US3801561A (en) | Derivatives of salmon thyrocalcitonin | |
JPH0631314B2 (ja) | 新規なゴナドリベリン誘導体 | |
JPS6220200B2 (no) | ||
US4001199A (en) | Novel polypeptides useful for treating diabetes and hypercholesteremia | |
JPH051798B2 (no) | ||
SCHOELKENS et al. | 1, 8-Disubstituted Analogues of [Ile5] and [Val5] Angiotensin II: Difference in Potency and Specificity of Angiotensin II-Antagonistic Activity | |
Bentley et al. | 1176. Polypeptides. Part I. The synthesis of peptides related to eledoisin | |
UCHIYAMA et al. | Studies on Secretin. I. Synthesis of Completely Protected Secretin | |
RU2087480C1 (ru) | Производные пептидов и способ их получения |