SU1095588A1 - Циклический аналог энкефалина, обладающий анальгетической активностью - Google Patents
Циклический аналог энкефалина, обладающий анальгетической активностью Download PDFInfo
- Publication number
- SU1095588A1 SU1095588A1 SU823561935A SU3561935A SU1095588A1 SU 1095588 A1 SU1095588 A1 SU 1095588A1 SU 823561935 A SU823561935 A SU 823561935A SU 3561935 A SU3561935 A SU 3561935A SU 1095588 A1 SU1095588 A1 SU 1095588A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- enkephalin
- mmol
- ether
- cyclic
- displaying
- Prior art date
Links
Abstract
Циклический аналог энкефалина формулы Н-Туг-Р -prn-Gly-Phe обладающий анальгетической активностью ..
Description
Изобретение относитс к новому биологически активному соединениюциклическому аналогу энкефалина, обладающему анальгетической активностью , которое может найти примейение в медицине.
Известны природные аналоги энкефалина: метионин-энкефалин (H-Tyr-GlyGly-Phe-Met ОН) и лейцин-энкефалнн (H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH), про вл ющие морфиноподобную активность в опытах на специфических модел х опиатного рецептора и подавл ющие стереоспецифическое св зьгаание с рецептором опиатного антагониста налоксона в гомогенатах мозга. Однако и метионин и лейцин-энкеф лины про вл ют слабую и кратковременную (5-15 мин) анальгезию при внутрижелудочковом введении в мозг мыши и неактивны лри других сп собак введени . Известны циклические аналоги энкефалина например, -Tyr-Gly-Gly-Phe Leu), не про вл ющие специфической активности энкефалинов. Наиболее близким по химической структуре вл етс циклический аналог энкефапина Tyr-D-A,, y-Phe,Leu .. однако анальгетическа активность этого циклоаналога не исел дована.
tyr
РЬе
Cly 8 Цель изобретени - расширение арсенала средств воздействи на живой организм. Поставленна цель достигаетс описьшаемым циклическим аналогом энкефалина формулы H-Tyr-D-Orn-Gly-Pheобладающим анальгетической активностью . Описываемое соединение синтезировано по приведенной схеме ступенчатым наращиванием пептидной цепи с использованием активированных эфиром трет-бутилоксикарбониламинокислот .. Дл защиты о -амйнофункдии D-оонитина используют .бензилоксикарбонильную группу гидроксила тирозина - трет-бутилоксикарбонилвнзпо .группу.
Схема синтеза цикпо- - v 7) Огп i дез-Ьеи / энкефалин П р им е р. Дл Синтеза описываемого аналога энкефалина используют аминокислоты и их производные фирмы Reanal (Венгри ). Все амино кислоты, кроме D-орнитина, имеют L-конфигурацию. Температуру плавлени веществ определ ют в капилл ре . (без коррекции). Индивидуальность промежуточных соединений контролируют с помощью тех на пластинках Silufо1 (ЧССР), аналог энкефалина хроматографируют на Стекл нных плас тинках с закрепленным слоем силикагел Silika Gel 60 F-254 фирмы Merck (ФРГ). Исйользуют следующие системы рас ворителей: хлороформ-этанол - уксусна кислота (АсОН), 85:10:5 (А), н-бутанол-пиридин - АсОН - Н 15: :10:3:6 (В)j н-бутанол-АсОН-НзО, 4:1:1 (С), хлороформ - метанол АсОН - , 30:20:4,6 (fl)j 60:18:2: ( Е), н-бутанол - пиридин-АсОН-Н О 15:12:3:10 (Е). Удельное оптическое вращение пептидов измер ют на пол риметре Perkin Elmer 14/М (США). Ки лотный гидролиз провод т при 120 С в течение 24 ч. Аминокислотный состав определ ют .на анализаторе Jeol-3 Дл всех соединений данные элементного анализа удовлетворительно совпадают с вычисленным содержанием Спектры ЯМР -н описываемого ана лога энкефалина получены на спектро;метре Ш-360 в растворе при рН температуре 23°С с внутренним стандартом DSS. Молекул рный вес описываемого цик лопептида определ ют масс-спектромет ;рически наприборе СН-5 VarianMAT .(США)-при температуре приблизительно ; 250 С и ионизирующем напр жении 70 Э N-трет-бутилоксикарбонил-глицил-фенйлаланин (5). 6,6 г (40 ммоль) L-фенилаланина jраствор ют в 40 мл 1 н.раствора гидроокиси натри , добавл ют 3,34 г бикарбоната натри , 50 мл диметилформамида (ДМФА) и 16,94 г (40ммоль) пентахлорфенилового эфира трет-бутилоксикарбонил-глицина , растворен .ного в 20 мл ДМФА. Смесь перемешивают в течение нескольких часов. После завершени реакции(хроматографический контроль) реакционную массу разбавл ют этилацетатом и водой (до разделени слоев), охлаждают до О С и подкисл ют 0,5 н. сол ной кисло- той до рН 3. Этилацетатный слой отдел ют , водную фазу экстрагируют повторно. Объединенный этилацетатный слой промывают водой, насыщенным раствором хлористого натри и сушат над безводным сульфатом натри . Кристаллический осадок, полученный после отгонки растворител , перекристагшизовывают из этилацетата с небольшой добавкой петролейного эфира. Выход дипептвда (5) - 11,4 (86%), т.пл. 144-135С, oi +15,7° (с.1, ДМФА), Rf 0,73 (А); Rf.0,80 (Д) N -трет-бутилоксикарбонил, N -бензилоксикарбонил-О-орнитилглидил- , -фенилаланин (7); 10,9 г (33,8 ммоль) дипептида (5)i раствор ют в 50 мл 70%-ного раствора трифторуксусной кислоты (TFA) в дихлорметане и выдерживают 30 мин. Растворитель отгон ют, остаток растирают эфиром, отфильтровьшают, промывают эфиром на фильтре и сушат в вакууме над гидроокисью кали . Получают 10,4 г (91%) трифторацетата дипептида 6) 0,63 (Д). 5,2 (15,5 ммоль) трифторацета- , та (Ь) раствор ют в 50 мл ДМФА, охлаждают , до 0С и при охлаждении добавл ют 2,65 мл (15,5 ммоль)диизопропилэтиламина в 15 мл ДМФА и 8,2 г (15,5 ммоль) пентафторфени ового эфира К -трет-бутилоксикарбонил, N бензилоксикарбонил-В-орнитина, растворенного в 15 мл ДМФА. Реакци-онную массу перемешивают несколько часов и после завершени р еакции обрабатывают аналогично соедине - . нию (5). Продукт, полученный после отгонки растворител , очищают на колонке с силикагелем фирмы Merck.Элюирование провод т в системе: хлороформ - этанол - этилацетат - АсОН 285:5:8:2:0,25. Соответствующие фракции собирают, упаривают и сушат в вакууме. Получают 5,9 г (67%) масла защищенного трипептида (7)с Rf 0,65 (А), Rf 0,72 (В). 0-ди-трет-бутилоксикарбонил-тирозил Ы -бензилоксикарбонш1-В-орнитил-глицил-фенилаланин (9). 20,0 г (35 ммоль). трипептида (7) раствор ют в 100 мл 50%-ного раствора трифторуксусной кислоты в дихлорметане и выдерживают в течение 20 мин. Растворитель отгон ют, остаток растирают с эфиром. Образовавшийс осадок отфильтровьюают, вновь промьшают эфиром и высушивают в вакууме над гидроокисью кали . По лучают 19,2 (94%) трифторадеЧ-ата трипептида (8) с Rf 0,62 (Д). 18,1 г (31 ммоль) трифторадетата трипептида/ (8) р аствор ют в 100 мл ДМФА, охлаждают до , добавл ют при перемешивании 5,3 мл (31 ммоль) диизопропилэтиламина в 10 мл ДМФА и 16,6 г (31 ммоль) пентафторфенклового эфира N,0-ди-третбутилоксикарбонил-Ъ-тирозина . Реакционкую массу перемешивают 1,5-2 ч (хроматографический контроль) и после завершени реакции обрабатывают аналогично соединению (5). Поо дукт, полученный после отгонки этил ацетата, размешивают с эфиром и охлаждают . Выпавший осадок отфильтровывают , промывают эфиром и сушат в эксикаторе. Выход: 16,0 г (63%) с Rf 0,75 (А); Rf. 0,55 (В) i i/D +5,6 (с 1, ДМФА). Н,0-ди-трет-бутилоксикарбонил-тирозил .-цикло(К - Д-орнитилглицил-фенил аланид-) (II). К 1,8 г (2,2 ммоль) защищенного тетрапептида (9) в 50 мл метанола, 5 мл АсОН и 2 мл добавл ют пал лодиевую чернь и гидрируют в течение нескольких часов. Катализатор о фильтровьюают, фильтрат упаривают. Остаток растирают с эфиром, затем дважды переосаждают из спирта эфиро вновь промьшают эфиром и сушат в ва кууме над гидроокисью кали . Получа 1,2 г (81%) тетрапептида (10)-с Rf 0,83 (Д), Rf 0,77 (I). 500 мг (0,7 ммоль) тетрапептида (10) раствор ют в 500 мл очищенного .ДМФА, охлаждают до -20°С, прибав л ют триэтиламин до рН 7,2 и медлен но прикапьшают 0,45 мл (2,1 ммоль) дифенилфосфорилазида в 50 мл ДМФА. Раствор перемешивают в течение 7 дней и поддерживают рН 7 периодическим добавлением триэтиламина к реакционной массе. По завершении реакции растворитель отгон ют при 40 к остатку добавл ют 1-1,5 мл этилацетата и небольшое количество эфира . Выпавший осадок отфильтровьгоают прокатают эфиром, сушат в вакууме. лучают 355 мг белого порошка защищенного циклического тетрапептида ( II) Ввиду плохой растворимости . (II) очистку не провод т. , Тирозил-цикло(Ы -В-орнитил-глицил-фенйлаланил- ) 350 мг (0,5 ммоль) защищенного циклического тетрапептида (II) раствор ют в 5 мл 70%-ного TFA в хлористом метилене и выдерживают 30 мин. Растворитель отгон ют, остаток растирают с эфиром и сушат в вакууме. Полученный продзост очищают высокоэффективной жидкостной хроматографией на хроматографе Du Pont-830. Элюирование осуществл ют смесью: этанол 0 ,1 М раствор ацетата аммони , 20:80. Соответствующие фракции собирают и лиофилируют., , I Выход 70 мл (28%) циклотетрапептида энкефалина (1), (с 1; 0,2 Н.АСОН); Rf 0,82 (D), Rf 0,83 (F), аминокислотный состав: Gly l,05i Phe 0,98, Туг 0,92; Orn 1,07 EHis 0,72 (1,0 M раствор/AcOH, 950 в). При изменении f)H от 5 до 2наблюдаетс отсутс рвие изменени химического сдвига Н Phe, что указывает на отсутствие свободной карбоксильной группы у тетрапептида, а следовательно , подтверждает циклическое строение. Во-вторых, больша неэквивалент- ; ность J -протонов Orn (iS .«0,45м.д.) также подтверждает циклическое строение полученного соединени . Величина расчетного молекул рного веса совпадает с его экспериментальным значением,,определенным масс- . спектрометрически (М 481). Исследована биологическа активность описьшаемого циклического аналога энкефалина в опытах in vivo. Анальгетическую активность определ ют по методу H.Ueda.. В работе использованы беспородные мыши-самцы массой , 18-22 г. Исследуемое вещество, растворенное в стерильном физиологическом растворе, ввод т при помощи У-образной иглы в usterna magna мозга неанестезированным мьш1ам в количестве 10 мкл. Исследовалс диапазон, доз от 0,075 до 1,0 мкг/жив. Кажда экспериментальна группа состо ла из 8-10 мьшгей. Анальгетический эффект оценивают по методу tail pineh при помощи зажима, накладываемого на основание хвоста. Определение болевой реакции провод т через 5,15,30,60, 90 мин после введени . Результаты выражены альтернативным методом в проценте мышей, показавших анальгети ческую реакцию. При вычислении Efljj, (эффективна доза исследуемого вещества , котора вызывает анальгетиче .скйй эффект у 50% подопытных животных ) используют метод Литчфилда и :Уилкоксона. : Анальгетическа активность- иссле дуемых соединений приведена в табл. и 3. Как видно из табл.2 описьгеаемый цикло-(К -D Огп, дез-Leu) энкефалин обладает выраженной анальгетической активиостьк). Максимальный эффект наблюдаетс на 5 минуте после введени . Анальгетическа активнрсть описываемого циклического аналога энкефалина (1) значительно превьппает активность природных метионин и лейцин-энкефалйнов ив 7,5 раз превьпнаёт анальгезию йорфина а мол рной основе (см.табл.2)« Более того, описываемьй циклический аналог энкефалина в отличие от природных энкефалинов активен при
Химические сдвиги Н циклического тетрапептида
С1у,
4,1,1; 3,40
4,58 3,п; 2,96 Phe
3,24; 2,79
7,27-7,30 внутривенном введении. Его активность (ЕДдд 32 (20-52) ммоль/кг) -. составл ет более половины (56% активности морфина (ЕД g.jj 18 (15-21) ммоль/кг)(см.табл.З). Продолжительность;анальгетической реакции описываемого соединени составл ет 60 мин против 15 мин у природных энкефалинов (2,3) при интрацистернальном введении (см.табл.2) и равна продолжительности действи морфина при обоих способах введени (см.табл.2,3). Ведение описываемого соединени в дозе 200 мг/кг не вызывает токси- ческих эффектов. Учитыва , что эффективна доза описываемого аналога э.нкефалина - 32 мкмол/кг, что составл ет 20 мг/кг, рассчитан терапевти200 мг/кг .ei. ческий индекс: 200 мг/кг описьюаемое соединение обладает достаточно безопасным интервалом дл терапевтического действи . Результаты проведенных биологических испытаний позвол ют сделать вывод о возможности использовани предлагаемого соединени в медицине. Таблица 1
Claims (1)
- Циклический аналог энкефалина формулыН-Туг-Р ргп-С1у-РНеобладающий анальгетической активностью.IСЛСЛооЭО
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU823561935A SU1095588A1 (ru) | 1982-11-26 | 1982-11-26 | Циклический аналог энкефалина, обладающий анальгетической активностью |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU823561935A SU1095588A1 (ru) | 1982-11-26 | 1982-11-26 | Циклический аналог энкефалина, обладающий анальгетической активностью |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1095588A1 true SU1095588A1 (ru) | 1989-08-30 |
Family
ID=21052885
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU823561935A SU1095588A1 (ru) | 1982-11-26 | 1982-11-26 | Циклический аналог энкефалина, обладающий анальгетической активностью |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1095588A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113624898A (zh) * | 2021-08-23 | 2021-11-09 | 成都诺和晟泰生物科技有限公司 | 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法 |
-
1982
- 1982-11-26 SU SU823561935A patent/SU1095588A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Hughes J., Smith Т. W.,, Koster,litz H.W. ,Forthergill L. A., Morgan В. A., Morris H.R. Identification related pentafeptides from the Groin with potent Opiate agonist activity Nature, 1975, V..253, 547. Biiescher H.H., Hill R.C., Romer D., Cardinaux F.,Closse A., Nauser D., Pless I. Evideme for -anailgesic activity of enkephalin in phe mouse. Nature 1976, y. 261, 423.. . Hudson D., Sharf e ..R., Szelke M., Methionins enkephalin and isosteric analogues Int.J. Peptide Protein Res. 1980, V.15, 122. Kessler H., Holzemann G., CycloLeu -Enkephaiip Angew Chem. Int. Ed. Engl., 1981, 20, № 1, 124. Di MaioJ., Schiller P.W. A cyclic enkephalin analog with high in vitro opiate activity. Proc. Natl.Sei. USA, 1980,:77, № 12, 7162-7166. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113624898A (zh) * | 2021-08-23 | 2021-11-09 | 成都诺和晟泰生物科技有限公司 | 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法 |
CN113624898B (zh) * | 2021-08-23 | 2023-08-25 | 成都诺和晟泰生物科技有限公司 | 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1270596A (fr) | Derives peptidiques a structure polycyclique azotee et leur procede de preparation | |
US3853837A (en) | Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor | |
CA2222296C (en) | Peptide and method of obtaining it | |
CA1157467A (en) | Tetrapeptidesemicarbazide derivatives and their production and use | |
RU2067000C1 (ru) | Пептид и способ его получения | |
US4623715A (en) | Novel peptides which are active on the central nervous system and have an action on the cholinergic system | |
US4407746A (en) | Cyclohexyl and phenyl substituted enkephalins | |
SU1396970A3 (ru) | Способ получени производных гонадолиберина | |
JPS61197595A (ja) | 胃液分泌を阻害するトリペプチド及びテトラペプチドのエステル,並びに当該成分を活性成分として含む薬剤組成物の製造方法 | |
EP0077274B1 (en) | 3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoic acid derivatives and pharmaceutical composition containing the same | |
PL127100B1 (en) | Method of obtaining new tripeptidamides | |
US5093320A (en) | Novel peptides inhibiting the maturation of t-lymphocytes and the activity of macrophages, pharmaceutical compositions containing them and process for preparing same | |
SU1095588A1 (ru) | Циклический аналог энкефалина, обладающий анальгетической активностью | |
US3931139A (en) | Tripeptides having an antidepressive and prolactin-releasing action | |
CA2076849A1 (en) | Physiologically active substance well capable of permeating biomembrane | |
WO1993000359A1 (en) | Modified peptides transportable into the central nervous system | |
NL8303845A (nl) | Nieuwe biologisch actieve peptiden. | |
CA1149377A (en) | ANGIOTENSIN-II ANALOGUES WITH ANTAGONIZING EFFECTS, CONTAINING AN .alpha.-HYDROXYCARBOXYLIC ACID RESIDUE IN POSITION 8, AND A PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF | |
Stewart | Peptide synthesis with 1-Aminocyclopropane-1-carboxylic acid | |
EP0227410A2 (en) | Peptide derivatives, their production and use | |
SU1116698A1 (ru) | Аналоги энкефалина, обладающие анальгетической активностью | |
GB1587427A (en) | Polypeptide derivatives | |
US4339440A (en) | Enkephalin analogs and a process for the preparation thereof | |
SU1095587A1 (ru) | Циклический пентапептид, обладающий анальгетической активностью | |
SU1048703A1 (ru) | Аналог энкефалина,обладающий анальгетическим действием |