JPS5847498A - 生体液中の成分の測定方法 - Google Patents
生体液中の成分の測定方法Info
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- JPS5847498A JPS5847498A JP14456781A JP14456781A JPS5847498A JP S5847498 A JPS5847498 A JP S5847498A JP 14456781 A JP14456781 A JP 14456781A JP 14456781 A JP14456781 A JP 14456781A JP S5847498 A JPS5847498 A JP S5847498A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は生体液中の成分、すなわち基質または酵素活性
を主としてレドックス反応を使用して測定するに当り共
存する妨害物質をｐ−オキシ安息香酸およびその低級ア
ルキルエステル（以下ＲＨＢという）の特異な性質を利
用して除去する方法に関する。さらに詳しくは生体液中
の成分の測定にレドックス反応を適用し定量的に生成す
る過酸化水素を、ペルオキシダーゼの存在下、４−アミ
ノアンチピリンあるいは３−メチル−２−ペンゾチアゾ
リノヒドラゾン（以下ＭＢＴＨという）とＮ−エチル−
Ｎ−スルホプロピル−ｍ −）ルイジン（以下ｇｓｐ’
ｒという）との酸化縮合による発色を比色定量すること
によシ検体中の目的成分を測定する方法において検体中
に共存する妨害物質が反応の過根で過酸化水素を生成し
その過酸化水素が目的成分の測定結果に誤差を生じる虞
のある場合、ＲＨＢの特性すなわち酸化縮合の発色剤が
存在しない場合ペルオキシダーゼの存在下過酸化水素に
よりＲＩＢ自身が変化すると同時に存在する過酸化水素
を消尽することしかも変化し九物質が無色であることを
利用して予じめ妨害物質を除去し九後検体中の成分を正
確に測定する方法′Ｋｌｌする。
を主としてレドックス反応を使用して測定するに当り共
存する妨害物質をｐ−オキシ安息香酸およびその低級ア
ルキルエステル（以下ＲＨＢという）の特異な性質を利
用して除去する方法に関する。さらに詳しくは生体液中
の成分の測定にレドックス反応を適用し定量的に生成す
る過酸化水素を、ペルオキシダーゼの存在下、４−アミ
ノアンチピリンあるいは３−メチル−２−ペンゾチアゾ
リノヒドラゾン（以下ＭＢＴＨという）とＮ−エチル−
Ｎ−スルホプロピル−ｍ −）ルイジン（以下ｇｓｐ’
ｒという）との酸化縮合による発色を比色定量すること
によシ検体中の目的成分を測定する方法において検体中
に共存する妨害物質が反応の過根で過酸化水素を生成し
その過酸化水素が目的成分の測定結果に誤差を生じる虞
のある場合、ＲＨＢの特性すなわち酸化縮合の発色剤が
存在しない場合ペルオキシダーゼの存在下過酸化水素に
よりＲＩＢ自身が変化すると同時に存在する過酸化水素
を消尽することしかも変化し九物質が無色であることを
利用して予じめ妨害物質を除去し九後検体中の成分を正
確に測定する方法′Ｋｌｌする。
本発明でいうレドックス反応で過酸化水素を生成する反
応を利用する最も簡単なものには酵素グルコースオキシ
ダーゼを用いるグルコースの測定方法、あるいは酵素ウ
リカーゼを用いる尿酸の測定方法がある。また一方目的
の成分に何らかの処理を施こし例えば酵素を作用してレ
ドックス反応の基質に導き、次いで酸化酵素を用いて過
酸化水素を生成しこれを比色定量する方法がある。この
場合反応の途中に種々の中間体を経て最後にレドックス
反応が行なわれることが多いのでそれだけ検体中に共存
する妨害物質の影響を受は易い。
応を利用する最も簡単なものには酵素グルコースオキシ
ダーゼを用いるグルコースの測定方法、あるいは酵素ウ
リカーゼを用いる尿酸の測定方法がある。また一方目的
の成分に何らかの処理を施こし例えば酵素を作用してレ
ドックス反応の基質に導き、次いで酸化酵素を用いて過
酸化水素を生成しこれを比色定量する方法がある。この
場合反応の途中に種々の中間体を経て最後にレドックス
反応が行なわれることが多いのでそれだけ検体中に共存
する妨害物質の影響を受は易い。
例えば（１）トリグリセライドの測定は次の反応により
行なわれる。
行なわれる。
グリセロール＋ＡＴＰ グリセロールキナーゼグリ
セロール−３−リン酸＋ＡＤＰ ジヒドロキシアセトン モノリン酸エステル＋Ｈ８０゜ 上記原理によるトリグリセライド測定においては検体中
のグリセロールが測定値に正誤差を与えることは明らか
である。因に人血清中には約０．１露ｏｔ／ｌのグリセ
ロールが含まれておりトリオレイン換算的８ｗｇ／ｃｍ
に相当するが時には（例えば透析患者血清）さらに高く
なることもある。また（２）トランスアミナーゼ（ＧＯ
Ｔ、ＧＰＴ）活性測定は次の反応により行なわれる： ピルビン酸＋Ｌ−グルタミン酸 ピルビン酸オキシダーゼ ピルビン酸＋０．＋リン酸 アセチルリン酸＋ｃｏ、＋ｎ、ｏ。
セロール−３−リン酸＋ＡＤＰ ジヒドロキシアセトン モノリン酸エステル＋Ｈ８０゜ 上記原理によるトリグリセライド測定においては検体中
のグリセロールが測定値に正誤差を与えることは明らか
である。因に人血清中には約０．１露ｏｔ／ｌのグリセ
ロールが含まれておりトリオレイン換算的８ｗｇ／ｃｍ
に相当するが時には（例えば透析患者血清）さらに高く
なることもある。また（２）トランスアミナーゼ（ＧＯ
Ｔ、ＧＰＴ）活性測定は次の反応により行なわれる： ピルビン酸＋Ｌ−グルタミン酸 ピルビン酸オキシダーゼ ピルビン酸＋０．＋リン酸 アセチルリン酸＋ｃｏ、＋ｎ、ｏ。
ＧＯＴ ：Ｌ−アスパラギン酸十−−ケトゲルタール酸
−−→オキザロ酢酸＋Ｌ−グルタミン酸 オキザロ酢酸！虚グヱ１±！二上グｐ土！弐Ｚ＃ ピ
ルビン酸＋Ｃｏ。
−−→オキザロ酢酸＋Ｌ−グルタミン酸 オキザロ酢酸！虚グヱ１±！二上グｐ土！弐Ｚ＃ ピ
ルビン酸＋Ｃｏ。
ビルビｙｌｌ＋ｏ、 ＋９７酸 ピルビン酸オキシダー
ゼアセチルリン酸＋Ｃｏ、 ＋Ｈ，Ｏ鵞 これらの場合検体中のピルビン酸が測定値に正誤差を与
える。因に人血清中のピルビン酸は通常的０．１■ａｔ
／Ｌであるが病的にはさらに増加することがある。ＩＩ
Ｆ（３）ｇ−アミラーゼ活性測定は次の反応によシ行な
われる。
ゼアセチルリン酸＋Ｃｏ、 ＋Ｈ，Ｏ鵞 これらの場合検体中のピルビン酸が測定値に正誤差を与
える。因に人血清中のピルビン酸は通常的０．１■ａｔ
／Ｌであるが病的にはさらに増加することがある。ＩＩ
Ｆ（３）ｇ−アミラーゼ活性測定は次の反応によシ行な
われる。
ｆンプン’ニー７ ｉ ５−−≦し マルトースｗ、
ｖ）−ｘ”’≦野りε＝も ２グルコースグルコース＋
０． ！量ヱ：２−」コロｔ−４グルコン酸＋Ｈ，Ｏ。
ｖ）−ｘ”’≦野りε＝も ２グルコースグルコース＋
０． ！量ヱ：２−」コロｔ−４グルコン酸＋Ｈ，Ｏ。
上記原理によるα−アミラーゼ活性の測定において社検
体中のマルトースおよびグルコースが正誤差を与えるこ
とになる。因に人血清中のグルコースは約６ｍｍｏＬ／
ｌであるが病的に増加することがあり、またマルト ースについてはこれを含有する輸液を用いている患者の
場合血清中のマルトースは異常に高くなる。
体中のマルトースおよびグルコースが正誤差を与えるこ
とになる。因に人血清中のグルコースは約６ｍｍｏＬ／
ｌであるが病的に増加することがあり、またマルト ースについてはこれを含有する輸液を用いている患者の
場合血清中のマルトースは異常に高くなる。
以上の例のほかアシルＣｏ−Ａシンセターゼ、ミオキナ
ーゼ、ピルビン酸オキシダーゼを組合せた遊離脂肪酸の
測定の場合のピルビン酸、アルいはホスホリパーゼ−Ｄ
１コリンオキシダーゼを組合せたリン脂質測定の場合の
プリン等の妨害物質の影響を取シ除くために本発明方法
は有効であり、さらに今後開発される測定方法への適用
も充分考えられる。
ーゼ、ピルビン酸オキシダーゼを組合せた遊離脂肪酸の
測定の場合のピルビン酸、アルいはホスホリパーゼ−Ｄ
１コリンオキシダーゼを組合せたリン脂質測定の場合の
プリン等の妨害物質の影響を取シ除くために本発明方法
は有効であり、さらに今後開発される測定方法への適用
も充分考えられる。
従来これら妨害物質の影響を取シ除くためには目的の成
分に直接反応する酵素あるいは基質を除いた条件でそれ
以外は全く同じ方法で測定する所謂検体盲検値を測定し
これを全体の一定値から差引くことが一般に行なわれて
いる。しかしこれは操作、計算が煩雑でありさらに精度
も劣る。また他の方法としては始めに目的の成分に変化
を与えない条件で共存する妨害物質を消尽し生成する過
酸化水素をカタラーゼを加えて除去し次いでカタラーゼ
阻害剤を加えた後目的成分の測定反応を実施する方法が
あるが、この場合にはカタラーゼ阻害剤を必要とし試薬
組成、操作が複雑となるばかりでなくカタラーゼ阻害剤
であるシアンナトリウムは公害上問題がありまたアジ化
ナトリウムは酸性条件下でアジ化水素を発生する勢の障
害がある。
分に直接反応する酵素あるいは基質を除いた条件でそれ
以外は全く同じ方法で測定する所謂検体盲検値を測定し
これを全体の一定値から差引くことが一般に行なわれて
いる。しかしこれは操作、計算が煩雑でありさらに精度
も劣る。また他の方法としては始めに目的の成分に変化
を与えない条件で共存する妨害物質を消尽し生成する過
酸化水素をカタラーゼを加えて除去し次いでカタラーゼ
阻害剤を加えた後目的成分の測定反応を実施する方法が
あるが、この場合にはカタラーゼ阻害剤を必要とし試薬
組成、操作が複雑となるばかりでなくカタラーゼ阻害剤
であるシアンナトリウムは公害上問題がありまたアジ化
ナトリウムは酸性条件下でアジ化水素を発生する勢の障
害がある。
本発明者等はこれら従来技術の欠点を取除くため糧々研
究し、ＲＩＢの特性すなわちＲＨａｄ酸化縮合の発色剤
が存在しかいときはペルオキシダーゼの存在下、過酸化
水素を消尽してそれ自身が発色することなく変化する。
究し、ＲＩＢの特性すなわちＲＨａｄ酸化縮合の発色剤
が存在しかいときはペルオキシダーゼの存在下、過酸化
水素を消尽してそれ自身が発色することなく変化する。
という知見に基づき研究を重ねた結果本発明を完成し友
。
。
本発明は生体液中の成分すなわち基質また定量的に生成
する過酸化水素をペルオキシダーゼの存在下酸化縮合に
より発色する発色剤によシ比色定量することにより検体
中の目的の成分を測定する方法において、始めに全試薬
の中、目的の成分に直接作用する基質あるいは酵素およ
びＥＳＰＴと４−アミノアンチピリンあるいはＭＢＴＨ
を含むものと、ＲＨＢ及びペルオキシダーゼを含むその
他のものとに分け、後者の試薬を用い予め検体中に共存
する妨害物質を除去することを１＃像とする生体液中の
成分の測定方法を提供する。本発明の方法によ如検体中
の妨害物質の影響を受けないかつ正確な生体液中の成分
の測定が可能となる。
する過酸化水素をペルオキシダーゼの存在下酸化縮合に
より発色する発色剤によシ比色定量することにより検体
中の目的の成分を測定する方法において、始めに全試薬
の中、目的の成分に直接作用する基質あるいは酵素およ
びＥＳＰＴと４−アミノアンチピリンあるいはＭＢＴＨ
を含むものと、ＲＨＢ及びペルオキシダーゼを含むその
他のものとに分け、後者の試薬を用い予め検体中に共存
する妨害物質を除去することを１＃像とする生体液中の
成分の測定方法を提供する。本発明の方法によ如検体中
の妨害物質の影響を受けないかつ正確な生体液中の成分
の測定が可能となる。
次に試験例により本発明の詳細な説明する。
試験例１．妨害物質としての過酸化水素の除去効果：
１、 試薬
（１）ペルオキシダーゼ ０．０１ｙ／ｄｐ−オキシ
安息香酸イチル（以下ＭＨ Ｂという） 、 １．０ ｍｍｏｔ／ｌを含む０
．１ｍ！ｈＬ／Ｌ リン酸緩衝液、（ｐｕ＆８）（２
） Ｅ ８ Ｐ Ｔ １．０．ｒｎ ｍｏｌ／Ｌと
、４−アミノアンチピリン０．８ ｍ ｍａｔ／Ｌを含
む０．１ｍ ｏ ｔ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６，８）２
測定 ０〜１．ＯｍｍｏＡ″／ｌＨ，ｏ、溶液の系列の夫々０
．０２−を採シこれに試薬（１） １．５−を加え３７
℃、５分間加温後、試薬（２） １．５−を加えこれに
さらに０〜４．０ ｍｍｏｌ／ＩＨＩ Ｏ＠ 溶液の
系列を夫々０．０２−加え５分間放置後波長５５０ ｎ
ｒｍ で吸光度を測定する。その結果を表１に示す。数
値は吸光度を表わす。
安息香酸イチル（以下ＭＨ Ｂという） 、 １．０ ｍｍｏｔ／ｌを含む０
．１ｍ！ｈＬ／Ｌ リン酸緩衝液、（ｐｕ＆８）（２
） Ｅ ８ Ｐ Ｔ １．０．ｒｎ ｍｏｌ／Ｌと
、４−アミノアンチピリン０．８ ｍ ｍａｔ／Ｌを含
む０．１ｍ ｏ ｔ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６，８）２
測定 ０〜１．ＯｍｍｏＡ″／ｌＨ，ｏ、溶液の系列の夫々０
．０２−を採シこれに試薬（１） １．５−を加え３７
℃、５分間加温後、試薬（２） １．５−を加えこれに
さらに０〜４．０ ｍｍｏｌ／ＩＨＩ Ｏ＠ 溶液の
系列を夫々０．０２−加え５分間放置後波長５５０ ｎ
ｒｍ で吸光度を測定する。その結果を表１に示す。数
値は吸光度を表わす。
上表から発色剤であるｇｓｐ丁と４−アミノアンチビリ
／を加える前に存在した過酸化水素はペルオキシダーゼ
、ＭＨＢにより完全に除去され１、後の過酸化水素の測
定に全く影響を与えていないことが明らかである。
／を加える前に存在した過酸化水素はペルオキシダーゼ
、ＭＨＢにより完全に除去され１、後の過酸化水素の測
定に全く影響を与えていないことが明らかである。
試験例２妨害物質としてのグルコースの除去効果：
１、試薬
（１） ムタロターゼ ＩＯＵ／ｄグル
コースオキシダーゼ２Ｘ１０４Ｕ／ｍペルオキシダーゼ
２Ｘ１０４Ｕ／ｍＭ ＨＢ １．
Ｏｍ ｍｏＬ／Ｌを含むホウ酸緩衝液 （ｐＨａ８） （２） １８ＰＴ １．Ｏｍｍｏｔ／
Ａ４−アミノアンチピリン０゜８ｍｍｏｔ／ｌを含むホ
ウ酸緩衝液 （ｐＨ６，８）λ 一定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行 なった。
コースオキシダーゼ２Ｘ１０４Ｕ／ｍペルオキシダーゼ
２Ｘ１０４Ｕ／ｍＭ ＨＢ １．
Ｏｍ ｍｏＬ／Ｌを含むホウ酸緩衝液 （ｐＨａ８） （２） １８ＰＴ １．Ｏｍｍｏｔ／
Ａ４−アミノアンチピリン０゜８ｍｍｏｔ／ｌを含むホ
ウ酸緩衝液 （ｐＨ６，８）λ 一定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行 なった。
（１） グルコース標準液０〜４００ ｗｅ／ｄｉの
系列および３例の血清の夫々２０μｔを 採り試薬（１）２−を加電３７℃、５分間放置後、試薬
（２）２−を加えさらに３７℃、１０分間放放置後長５
５０ ｎｍで吸光度を測定する。
系列および３例の血清の夫々２０μｔを 採り試薬（１）２−を加電３７℃、５分間放置後、試薬
（２）２−を加えさらに３７℃、１０分間放放置後長５
５０ ｎｍで吸光度を測定する。
（乃 上記グルコース標準液系列および血清の夫々２０
＃ｔを採り試薬（１） ２ ｇＩｔおよび試薬（２）
２ ｍｇを同時に加え混合し３７℃、１０分間放放置後
長５５０ ｎｍで吸光度を測定する。
＃ｔを採り試薬（１） ２ ｇＩｔおよび試薬（２）
２ ｍｇを同時に加え混合し３７℃、１０分間放放置後
長５５０ ｎｍで吸光度を測定する。
（３） グルコース標準液１００１１１７ｄｉ ２０
μｔを採りこれに試薬（１）２−を加え３７℃、５分間
放置後試薬（２）２−を加えさらに上記グルコース標準
液系列および血清 の夫々２０μｔを加え３７℃、１０分 間放放置後長５５０ ｎｍで吸光°度を測定する。
μｔを採りこれに試薬（１）２−を加え３７℃、５分間
放置後試薬（２）２−を加えさらに上記グルコース標準
液系列および血清 の夫々２０μｔを加え３７℃、１０分 間放放置後長５５０ ｎｍで吸光°度を測定する。
上記三つの測定結果を次の表２に示す。
数値は吸光度を表わす。
表 ２
上表から次のことがいえる。
一定（１）からグルコースは濃度の如何に拘らず試薬（
１）で処理することにより除去できることが、ｉ九測定
（２）からは試薬（１）、試薬（２）を混合して用いる
ことによりグルコースの種々の濃度における一定が可能
であることが、また測定（３）からは試薬（１）で最初
に存在するグルコースを予め除去した後同じ反応液に試
′ｍ （２）を用いて種々の濃度のグルコースの測定が
可能であることが明らかである。しかも測定（２）と測
定（３）の結果が測定誤差範囲で一致していることは最
初に存在する妨害物質としてのグルコースを本発明の方
法で除去しても後のグルコースの測定に何ら影響を与え
ないことが判明し丸。
１）で処理することにより除去できることが、ｉ九測定
（２）からは試薬（１）、試薬（２）を混合して用いる
ことによりグルコースの種々の濃度における一定が可能
であることが、また測定（３）からは試薬（１）で最初
に存在するグルコースを予め除去した後同じ反応液に試
′ｍ （２）を用いて種々の濃度のグルコースの測定が
可能であることが明らかである。しかも測定（２）と測
定（３）の結果が測定誤差範囲で一致していることは最
初に存在する妨害物質としてのグルコースを本発明の方
法で除去しても後のグルコースの測定に何ら影響を与え
ないことが判明し丸。
試験例３．妨害物質としてのピルビン酸の除去効果
１、 試薬
（１） チアミンピロホスフェート ０．８ｍｍｏｊ
／１ＮａＩＨＰＯ４１０ｍｍｏｔ／１ Ｍｇ（，１ｊ ３０ｍｍｏＡ／ｊＭ ＨＢ
１．Ｏｍ ｍｏｌ／ｌペルオキシダー
ゼ ０．０１ｑ／ｄピルビン酸オキシダーゼ ７Ｕ
／− を含む０．１ ｍｏｔ／ｌジメチルグルタレート緩衝液
（ｐＨ７，２） （２） Ｅ Ｓ Ｐ Ｔ １． Ｏｍ ｍ
ｏｌ／１４−アミノアンチピリン ０．８ ｍ ｍｏｌ
／ｌを含む０．１ ｍｅ々ｌジメチルグルタレート緩衝
液（ｐＨ７，２） ２ 測定 上記試薬を用いて二つの試験を行なっ た。
／１ＮａＩＨＰＯ４１０ｍｍｏｔ／１ Ｍｇ（，１ｊ ３０ｍｍｏＡ／ｊＭ ＨＢ
１．Ｏｍ ｍｏｌ／ｌペルオキシダー
ゼ ０．０１ｑ／ｄピルビン酸オキシダーゼ ７Ｕ
／− を含む０．１ ｍｏｔ／ｌジメチルグルタレート緩衝液
（ｐＨ７，２） （２） Ｅ Ｓ Ｐ Ｔ １． Ｏｍ ｍ
ｏｌ／１４−アミノアンチピリン ０．８ ｍ ｍｏｌ
／ｌを含む０．１ ｍｅ々ｌジメチルグルタレート緩衝
液（ｐＨ７，２） ２ 測定 上記試薬を用いて二つの試験を行なっ た。
（１） ピルビン酸標準液０．１ ｍ ｍｏｔ／ｌ、
１．Ｏｍ ｒｎｔｓｌ／ｌおよび１５例の血清の夫々
２０μｔを採り試薬（１） １．５−を加え３７℃、５
分間放置後試薬（２） １．５−を加えさらに３７℃、
１０分間放放置後 薬ブランクを対照に波長５５０ ｎｍ で吸光度を測定
する。
１．Ｏｍ ｒｎｔｓｌ／ｌおよび１５例の血清の夫々
２０μｔを採り試薬（１） １．５−を加え３７℃、５
分間放置後試薬（２） １．５−を加えさらに３７℃、
１０分間放放置後 薬ブランクを対照に波長５５０ ｎｍ で吸光度を測定
する。
（２）上記ピルビン酸標準液および血清の夫々２０μｔ
に試薬（１） １．５−と試薬（２）１．５−を同時に
加え混合し３７℃、 １０分間放放置後薬ブランクを対照に 波長５５０ ａｍ で吸光度を測定する。
に試薬（１） １．５−と試薬（２）１．５−を同時に
加え混合し３７℃、 １０分間放放置後薬ブランクを対照に 波長５５０ ａｍ で吸光度を測定する。
上記二つの測定結果を次の、表３に示す。
数値は吸光度を表わす。
衣 ３
上表からピルビン酸についても試験例１゜２と同様本発
明が有効であることが明らかである。
明が有効であることが明らかである。
試験何本妨害物質としてのグリセロールの除つ
去
効果：
１、試薬
（１） グリセロールキナーゼ １３ Ｕ／１Ｌ−
４１）セロ−ルー３−リン酸酸化酵素１３００Ｕ／Ａ ペルオキシダーゼ ３×１０・Ｕ／ｌ アデノシントリフオスフェート ０．４ｍ ｍｏｌ／Ｉ
Ｍ ＨＢ １． Ｏｍ ｍｏＡ／
１ＭｇＣｌ＠ ２ ｍ ｍｏｔ７’
ｔト リ ト ７Ｘ−１００１ｆ／ｌを含む１００
ｍ ｍｅｔ／Ｌ ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０） 伐） ４−アミノアンチピリン ０．８ ｍ ｍｏ４／
ＩＥ ８ Ｐ Ｔ １． Ｏｍ ｍｏνｔ
ト リ ト ７Ｘ−１００１ｆ／Ｌ を含む１００ ｍ ｍｏｔ／Ｌ）リス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０） ２ 測定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行なえ。
４１）セロ−ルー３−リン酸酸化酵素１３００Ｕ／Ａ ペルオキシダーゼ ３×１０・Ｕ／ｌ アデノシントリフオスフェート ０．４ｍ ｍｏｌ／Ｉ
Ｍ ＨＢ １． Ｏｍ ｍｏＡ／
１ＭｇＣｌ＠ ２ ｍ ｍｏｔ７’
ｔト リ ト ７Ｘ−１００１ｆ／ｌを含む１００
ｍ ｍｅｔ／Ｌ ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０） 伐） ４−アミノアンチピリン ０．８ ｍ ｍｏ４／
ＩＥ ８ Ｐ Ｔ １． Ｏｍ ｍｏνｔ
ト リ ト ７Ｘ−１００１ｆ／Ｌ を含む１００ ｍ ｍｏｔ／Ｌ）リス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０） ２ 測定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行なえ。
（１） グリセロール標準液０〜１０００１１９７ｄ
ｔ（トリグリセライド換算）の系列の夫々２０μｔを採
り、試薬（１） １．５ ｗｔを加え３７℃、５分間放
置後、試薬（２）１．５−を加えさらに３７℃、１０分
間放置後波長５５０１１ｍ で吸光度を測定する。
ｔ（トリグリセライド換算）の系列の夫々２０μｔを採
り、試薬（１） １．５ ｗｔを加え３７℃、５分間放
置後、試薬（２）１．５−を加えさらに３７℃、１０分
間放置後波長５５０１１ｍ で吸光度を測定する。
（２）上記グリセロール標準液系列の夫々２０ ｓＬ
を採り、試薬（１） １．５−および試薬（２） １．
５ ｍを同時に加え混合し、３７℃、１０分間放置後波
長５５０ ｎｍで吸光度を測定する。
を採り、試薬（１） １．５−および試薬（２） １．
５ ｍを同時に加え混合し、３７℃、１０分間放置後波
長５５０ ｎｍで吸光度を測定する。
（３） グリセロール標準液１００ｗｇ／ｄｔ（トリ
グリセライド換算）２０μｔ を採シこれに試薬（１）
１．５−を加え３７℃、５分間放置後試薬（２） １
．５−を加えさらに上記グリセロール標準液系列を加え ３７℃、１０分間放置後波長５５０ ｎｍで吸光度を測
定する。
グリセライド換算）２０μｔ を採シこれに試薬（１）
１．５−を加え３７℃、５分間放置後試薬（２） １
．５−を加えさらに上記グリセロール標準液系列を加え ３７℃、１０分間放置後波長５５０ ｎｍで吸光度を測
定する。
上記三つの測定結果を第１図に示す。
第１図から次のことがいえる′。
測定（１）からグリセロールは濃度の如何に拘らず試薬
（１）で処理することにより除去できることが、また測
定（２）からは試薬（１）、試薬（２）を混合して用い
ることによりグリセロールの種々の濃度における測定が
可能であることが、また測定（３）からは試薬（１）で
最初に存在するグリセロールを予め除去した後同じ反応
液に試薬（２）を用いて種々の濃度のグリセロールの測
定が可能であることが明らかである。しかも測定（２）
と測定（３）の結果が測定誤差範囲で一致していること
は最初に存在する妨害物質としてのグリセロールを本発
明の方法で除去しても後のグリセロールの測定に何ら影
響を与えないことが判明した。
（１）で処理することにより除去できることが、また測
定（２）からは試薬（１）、試薬（２）を混合して用い
ることによりグリセロールの種々の濃度における測定が
可能であることが、また測定（３）からは試薬（１）で
最初に存在するグリセロールを予め除去した後同じ反応
液に試薬（２）を用いて種々の濃度のグリセロールの測
定が可能であることが明らかである。しかも測定（２）
と測定（３）の結果が測定誤差範囲で一致していること
は最初に存在する妨害物質としてのグリセロールを本発
明の方法で除去しても後のグリセロールの測定に何ら影
響を与えないことが判明した。
次に実施例によυ本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１．血清中のトリグリセライドの測定１、試薬
（１） グリセロールキナーゼ １３Ｕ／ｌＬ
−グリセロール−３−リン酸酸化酵素１３００ Ｕ／
ｌ ペルオキシダーゼ ３Ｘ１０・ ｙ／ｌアデノ
シントリフオス７エート ０．４ｍ ｍｏｂ／ＩＭ Ｈ
Ｂ １．Ｏｍ ｍｏ４／ｊＭ
ｇ（／ １ 黛 ２ｍ ｍｏｌ
／ｌトリトｙＸ−１００１ｆ／ｌ を含む１００ ｍ ｍｏｌ／ｌ イミダゾール緩衝液
（ｐＨ７，０） （２） リパーゼ（リポプロティンリパーゼ作用を
有する） ５Ｘ１０藝 ｖ／１
４−アミノアンチピリン ０．８ｍ ｍｏｌ／１’！
ｌ ８ Ｐ Ｔ １．Ｏｍ ｍａｔ／
ＬトリトンＸ−１００１９／ｌ を含む１００ ｍ ｍａｔ／ｌ ）リス−塩酸緩衝液
（ｐＦＩ ７．０） ２測定 検体血清２０＃ｔに試薬（１） １．５−を加え３７℃
、５分間加温し血清中に存在する妨害成分である遊離グ
リセ−ロールを消去する。この場合妨害物質の大部分は
遊離グリセロールであるがその他グリセロールキナーゼ
以下の反応に関与する総ての血清副渾応も消去される。
−グリセロール−３−リン酸酸化酵素１３００ Ｕ／
ｌ ペルオキシダーゼ ３Ｘ１０・ ｙ／ｌアデノ
シントリフオス７エート ０．４ｍ ｍｏｂ／ＩＭ Ｈ
Ｂ １．Ｏｍ ｍｏ４／ｊＭ
ｇ（／ １ 黛 ２ｍ ｍｏｌ
／ｌトリトｙＸ−１００１ｆ／ｌ を含む１００ ｍ ｍｏｌ／ｌ イミダゾール緩衝液
（ｐＨ７，０） （２） リパーゼ（リポプロティンリパーゼ作用を
有する） ５Ｘ１０藝 ｖ／１
４−アミノアンチピリン ０．８ｍ ｍｏｌ／１’！
ｌ ８ Ｐ Ｔ １．Ｏｍ ｍａｔ／
ＬトリトンＸ−１００１９／ｌ を含む１００ ｍ ｍａｔ／ｌ ）リス−塩酸緩衝液
（ｐＦＩ ７．０） ２測定 検体血清２０＃ｔに試薬（１） １．５−を加え３７℃
、５分間加温し血清中に存在する妨害成分である遊離グ
リセ−ロールを消去する。この場合妨害物質の大部分は
遊離グリセロールであるがその他グリセロールキナーゼ
以下の反応に関与する総ての血清副渾応も消去される。
次に試薬（２） １．５−を加え混合し３７℃、１０分
間放置後波長５５０ ｎｍ で吸光度を測定する。この
方法では血清中に通常存在する遊離グリセロールの少く
とも２０倍量すなわち２ｍ ｍａｔ／Ｌ （）リグリセ
ライド１’８００ ｍｙｌｄｌ 相当）まで消去でき
るので日常の臨床検査では特別の操作を加えることなく
血清中のトリグリセライドの定量が可能である。
間放置後波長５５０ ｎｍ で吸光度を測定する。この
方法では血清中に通常存在する遊離グリセロールの少く
とも２０倍量すなわち２ｍ ｍａｔ／Ｌ （）リグリセ
ライド１’８００ ｍｙｌｄｌ 相当）まで消去でき
るので日常の臨床検査では特別の操作を加えることなく
血清中のトリグリセライドの定量が可能である。
透析患者血清３５例を用い（１）本発明方法（前処理を
行ない遊離グリセロールを消去して中性脂肪を測定する
方法）（２）無処理の方法（前処理を行なわないで遊離
グリセロールと中性脂肪を測定する方法）（３）別処理
方法（（２）無処理の方法から遊離グリセロールを別に
測定して差し引く方法）とを比較し九結果は第２図及び
第３図の通りである。
行ない遊離グリセロールを消去して中性脂肪を測定する
方法）（２）無処理の方法（前処理を行なわないで遊離
グリセロールと中性脂肪を測定する方法）（３）別処理
方法（（２）無処理の方法から遊離グリセロールを別に
測定して差し引く方法）とを比較し九結果は第２図及び
第３図の通りである。
無処理の方法は、検体２０μｔ を採り、試薬（１）
１．５−と試薬（２） １．５−を同時に混合し、３７
℃、１０分間放置後波長５５０ｎｍ で吸光度を測定す
る。
１．５−と試薬（２） １．５−を同時に混合し、３７
℃、１０分間放置後波長５５０ｎｍ で吸光度を測定す
る。
遊離グリセロールのみを測定する方法
は試薬（１） １．５−と試薬（２）からリパーゼのみ
を除い友試薬１．５−を同時に混合し、３７℃、１０分
間放放置後長５５０ ｎｍで測定する。
を除い友試薬１．５−を同時に混合し、３７℃、１０分
間放放置後長５５０ ｎｍで測定する。
以上のことから、本発明法は、無処理とは第２図のよう
に一致しないが、別処理の方法とは第３図のように、非
常によく一致することが明らかである。
に一致しないが、別処理の方法とは第３図のように、非
常によく一致することが明らかである。
′以上述べた通り本発明方法は血清中の目的成分の測定
に本来必要な試薬のみを用いて予じめ妨害物質を除去す
ることができ、それ以外の特別の試薬あるいは特別の操
作によって共存する妨害物質を除去することなく、また
検体ブランクを求めて妨害物質の影響を除去する等の余
分の操作も行なわずに簡単かつ精度よく目的成分を測定
することができるもので日常の臨床検査に当って極めて
有用である。
に本来必要な試薬のみを用いて予じめ妨害物質を除去す
ることができ、それ以外の特別の試薬あるいは特別の操
作によって共存する妨害物質を除去することなく、また
検体ブランクを求めて妨害物質の影響を除去する等の余
分の操作も行なわずに簡単かつ精度よく目的成分を測定
することができるもので日常の臨床検査に当って極めて
有用である。
第１図はグリセロール標準液と吸光度との関係を示すグ
ラフであ抄、第２図は無処理の方法によるトリグリセラ
イド測定と別処理方法によるトリグリセライド測定との
相関を示すグラフであり、第３図は別処理方法によるト
リグリセライド測定と本発明の方法によるトリグリセラ
イド測定との相関を示すグラフである。 第１図 グリ（二Ｕ−ルｐＪ１すｔこｍ９）ｄｌ （トリク゛す
ぞフィ隅舅）第２１１
ラフであ抄、第２図は無処理の方法によるトリグリセラ
イド測定と別処理方法によるトリグリセライド測定との
相関を示すグラフであり、第３図は別処理方法によるト
リグリセライド測定と本発明の方法によるトリグリセラ
イド測定との相関を示すグラフである。 第１図 グリ（二Ｕ−ルｐＪ１すｔこｍ９）ｄｌ （トリク゛す
ぞフィ隅舅）第２１１
Claims (1)
- 生体液中の成分の測定にレドックス反応を適用し生成す
る過酸化水素をペルオキシダーゼの存在下、酸化縮合に
より発色する発色剤によ抄比色定量することＫより目的
成分を測定する方法におい１全試薬を目的成分に直接作
用する基質又は酵素とＮ−エチル−Ｎ−スルホプロピル
−ｍ−トルイジンおよび４−アミノアンチピリン−ある
いｔｉ３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラジン
を含むものと、−−オキシ安息香酸を九はその低級アル
キルエステル及びペルオキシダーゼを含むその他のもの
とに分け、後者の試薬を用い予め検体中に共存する妨害
物質を除去することを特徴とする生体液中の成分の測定
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56144567A JPS606638B2 (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | 生体液中の成分の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56144567A JPS606638B2 (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | 生体液中の成分の測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5847498A true JPS5847498A (ja) | 1983-03-19 |
| JPS606638B2 JPS606638B2 (ja) | 1985-02-19 |
Family
ID=15365222
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56144567A Expired JPS606638B2 (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | 生体液中の成分の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS606638B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60228963A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-14 | Yatoron:Kk | ビリルビンの干渉を回避して行なう生体成分の測定方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6090583A (ja) * | 1983-10-24 | 1985-05-21 | 狭山精密工業株式会社 | パチンコ球の揚送清浄装置 |
| JPH0545553Y2 (ja) * | 1989-01-30 | 1993-11-22 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5783287A (en) * | 1980-11-14 | 1982-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Elimination of hydrogen peroxide |
| JPS57163497A (en) * | 1981-04-02 | 1982-10-07 | Toyobo Co Ltd | Determination of substrate or enzyme activity |
-
1981
- 1981-09-16 JP JP56144567A patent/JPS606638B2/ja not_active Expired
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5783287A (en) * | 1980-11-14 | 1982-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Elimination of hydrogen peroxide |
| JPS57163497A (en) * | 1981-04-02 | 1982-10-07 | Toyobo Co Ltd | Determination of substrate or enzyme activity |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60228963A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-14 | Yatoron:Kk | ビリルビンの干渉を回避して行なう生体成分の測定方法 |
| JPH0614879B2 (ja) * | 1984-04-27 | 1994-03-02 | 株式会社ヤトロン | ビリルビンの干渉を回避して行なう生体成分の測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS606638B2 (ja) | 1985-02-19 |
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