JPS5847493A - コリスチンの製造法 - Google Patents
コリスチンの製造法Info
- Publication number
- JPS5847493A JPS5847493A JP56144398A JP14439881A JPS5847493A JP S5847493 A JPS5847493 A JP S5847493A JP 56144398 A JP56144398 A JP 56144398A JP 14439881 A JP14439881 A JP 14439881A JP S5847493 A JPS5847493 A JP S5847493A
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- colistin
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- nitrogen
- producing
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はコリスチンＯＩｌ造法に関する。
さらに１詳しくはバチルス属に属するコリスチン生産菌
株を無機リン酸濃度を無機リン酸イｔ７にして、１Ｇ−
’−５Ｘ １Ｇ−” ｆ／１ＪＯＩＩｉ［Ｔｈよびアン
モニア態窒素濃度をα０２−αＳ ｔ／Ｍの範囲で含有
する培地に培養し、培養物中にコリスチンを生成蓄積さ
せ、皺培養物よシコリスチンをＩＩＪＩＥすることを特
徴とするコリスチンの製造法に関する。
株を無機リン酸濃度を無機リン酸イｔ７にして、１Ｇ−
’−５Ｘ １Ｇ−” ｆ／１ＪＯＩＩｉ［Ｔｈよびアン
モニア態窒素濃度をα０２−αＳ ｔ／Ｍの範囲で含有
する培地に培養し、培養物中にコリスチンを生成蓄積さ
せ、皺培養物よシコリスチンをＩＩＪＩＥすることを特
徴とするコリスチンの製造法に関する。
コリスチンは、広汎なダラム陰性細曹に抗°薗作用を有
すポリペブタイド系抗生物質でＴｏシ、調料添加用抗生
物質として４１に注目されている。
すポリペブタイド系抗生物質でＴｏシ、調料添加用抗生
物質として４１に注目されている。
従来、コリスチン発酵においては、培地中の窒素源とし
ては主として硫酸ア／モエウムが、無機塩の一つとして
は、リン酸第−カリウムが使用されるのが通例であ）、
それら０ＩＩＩ！度としてハ硫酸アンモニウムで１−ｓ
ｔ／＃（アンモニア態窒素換算でＱ、２１−αｆｊ４ｆ
／ｄｉ）、リン駿第−カリウムで０．１−Ｑｌｆ／＃（
無機リン酸換算でａｏｙ−ａｔ４ｆ／ｄＪ）Ｏ範囲カ使
用されている（日本農養化学会誌３６巻２４頁（１９４
１！１４９公＠５５−１３７１１１号公報）。
ては主として硫酸ア／モエウムが、無機塩の一つとして
は、リン酸第−カリウムが使用されるのが通例であ）、
それら０ＩＩＩ！度としてハ硫酸アンモニウムで１−ｓ
ｔ／＃（アンモニア態窒素換算でＱ、２１−αｆｊ４ｆ
／ｄｉ）、リン駿第−カリウムで０．１−Ｑｌｆ／＃（
無機リン酸換算でａｏｙ−ａｔ４ｆ／ｄＪ）Ｏ範囲カ使
用されている（日本農養化学会誌３６巻２４頁（１９４
１！１４９公＠５５−１３７１１１号公報）。
本発明者らはコリスチン発−において、さらに培地中の
無機リン酸濃度およびアン毫ニア態窒素一度Ｏ影響につ
いて種々検討した結果、培地中の無機リン醗濃度を無機
リン酸イオンにしてｌｏ” −ｓ ｘ １Ｇ−” ｆ／
ｄｌの範Ｈおよびアン七ニアｍｕｍｓ度をａｏｓ−ａｓ
ｐ／＃０ＩｌｌｌｉＫして培養すると、培養物をコリス
チンが高単位に生成蓄積することを見い出し、本発明を
完成した。
無機リン酸濃度およびアン毫ニア態窒素一度Ｏ影響につ
いて種々検討した結果、培地中の無機リン醗濃度を無機
リン酸イオンにしてｌｏ” −ｓ ｘ １Ｇ−” ｆ／
ｄｌの範Ｈおよびアン七ニアｍｕｍｓ度をａｏｓ−ａｓ
ｐ／＃０ＩｌｌｌｉＫして培養すると、培養物をコリス
チンが高単位に生成蓄積することを見い出し、本発明を
完成した。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明に使用する無機リン酸塩としてはリン酸第−カリ
ウムが好ましい。
ウムが好ましい。
アンモニア態窒素源としては、硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウムなどが好ましい。
アンモニウムなどが好ましい。
無機リン酸塩とアンモニア態窒素の濃度調整は通常始発
培地で調整され、それらの濃度は、無機リン酸イオン（
ｐｏ４−）にして５ Ｘ １Ｇ−” −１０″″’ ｆ
／＃ 好ｔ Ｌ ＜ ハｔｏ−” −１ｏ−” ｙ ７
ｇ 。
培地で調整され、それらの濃度は、無機リン酸イオン（
ｐｏ４−）にして５ Ｘ １Ｇ−” −１０″″’ ｆ
／＃ 好ｔ Ｌ ＜ ハｔｏ−” −１ｏ−” ｙ ７
ｇ 。
アンモニア態窒素にしてα０２〜α５ ｆ／ ｄＪ 、
好ましくは（Ｌｌ〜α３９／ｄＪである。
好ましくは（Ｌｌ〜α３９／ｄＪである。
次に、バチルスＩＩ４に属するコリスチン生童曹株を用
いて本醗酵を実施する場合について述べる・ 使用する微生物としては、バチルス属に属する微生物で
あればいずれも使用可能であるが、具体的な例としては
、バチルス・ポリミキサ・バラエティ−（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｐｏｌｙＩＩｙｘｌＬ ｖａｒ ） ）ｌ −３
１１３（黴工研曹寄第６１４０号）があげられる。
いて本醗酵を実施する場合について述べる・ 使用する微生物としては、バチルス属に属する微生物で
あればいずれも使用可能であるが、具体的な例としては
、バチルス・ポリミキサ・バラエティ−（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｐｏｌｙＩＩｙｘｌＬ ｖａｒ ） ）ｌ −３
１１３（黴工研曹寄第６１４０号）があげられる。
主醗酵培地の糖源としては、例えば、殿粉、マルトース
、サッカ薗−ス、グルコース等、窒素源としては硫酸ア
ンモ１ウム、塩化アンモニウム等、無機塩類としてはリ
ン酸第−カリウム、硫酸マダネシクム、炭酸カルシウム
等の微量金属類、およびコーンミール等の天然有機物を
含む培地が用いられる。培養条件としては２０〜４０℃
で２〜３日間好気的に培養すれば培養液中にコリスチン
が生成蓄積する。培養物からのコリスチンの採熾は、培
養液を濾過処理して除菌し九−液＜′）ｕ、イオン交換
樹脂処理法、そＯ働の公知の操作によって行うことがで
きる。
、サッカ薗−ス、グルコース等、窒素源としては硫酸ア
ンモ１ウム、塩化アンモニウム等、無機塩類としてはリ
ン酸第−カリウム、硫酸マダネシクム、炭酸カルシウム
等の微量金属類、およびコーンミール等の天然有機物を
含む培地が用いられる。培養条件としては２０〜４０℃
で２〜３日間好気的に培養すれば培養液中にコリスチン
が生成蓄積する。培養物からのコリスチンの採熾は、培
養液を濾過処理して除菌し九−液＜′）ｕ、イオン交換
樹脂処理法、そＯ働の公知の操作によって行うことがで
きる。
以下、実施例を説明する。
°実施例Ｌ
コリスチン生童曹であるバチルス・ポリ建キｔ・バラエ
ティ−Ｈ−３１２３（ＷＪＬ工研薗寄第６１４０号）を
あらかじめペンネット寒天培地（スラント）で２８℃４
一時間培養した後、その−白金耳を第１表の種培地３０
−の入り九２５０ｄ容三角フラスコに接種し、２８℃で
２４時間振盪培養する。この種培養液ＩＴｓＩを第２９
の主醗酵培地３０ｓｌの入り九２５ Ｇ３１１容三角フ
ラスコに移植し、２８℃で３０時間培養する。第１およ
び２図は、主醗酵培地の硫酸アンモニウムとリン酸第−
カリウム濃度を変えた場合の生成コリスチン濃度を示す
。
ティ−Ｈ−３１２３（ＷＪＬ工研薗寄第６１４０号）を
あらかじめペンネット寒天培地（スラント）で２８℃４
一時間培養した後、その−白金耳を第１表の種培地３０
−の入り九２５０ｄ容三角フラスコに接種し、２８℃で
２４時間振盪培養する。この種培養液ＩＴｓＩを第２９
の主醗酵培地３０ｓｌの入り九２５ Ｇ３１１容三角フ
ラスコに移植し、２８℃で３０時間培養する。第１およ
び２図は、主醗酵培地の硫酸アンモニウムとリン酸第−
カリウム濃度を変えた場合の生成コリスチン濃度を示す
。
第１１ｉｔ 種培養培地
廃糖黴（糖濃度換算） ３ｆ／ｌｉｔコーンスチ
ープリカー １ リン酸第１カリクム ０．２ 硫酸マグネシウム （ＬＯ５ 塩化ナトジナトリウム ａ０１ 第１！表 主醗酵基本培地 ＃ １１ ４ Ｆ／＃プーンン−ル
１ 硫酸アンモニウム ２ リン酸第１カリウム ０．２ 責酸力鳥シウム １ 培養液中に生成蓄積したコリスチンは、エセリヒア、コ
リ（Ｉｇｈｅｒｉｏｈｌａａｏｌｌ） ＮＩＨＪを検定
曹とし、市販コリスチン標品を標準として生物学的定量
を行なう。
ープリカー １ リン酸第１カリクム ０．２ 硫酸マグネシウム （ＬＯ５ 塩化ナトジナトリウム ａ０１ 第１！表 主醗酵基本培地 ＃ １１ ４ Ｆ／＃プーンン−ル
１ 硫酸アンモニウム ２ リン酸第１カリウム ０．２ 責酸力鳥シウム １ 培養液中に生成蓄積したコリスチンは、エセリヒア、コ
リ（Ｉｇｈｅｒｉｏｈｌａａｏｌｌ） ＮＩＨＪを検定
曹とし、市販コリスチン標品を標準として生物学的定量
を行なう。
第１図に示すように、無機リン酸イオン湯度＆ １４
ｆ／ｄＪ条件下ではアン鴫ニア態窒素が０．２１ Ｆ／
＃テ：ｆｆすｘチｙは１３ＪＯＯＵ／ｄ。
ｆ／ｄＪ条件下ではアン鴫ニア態窒素が０．２１ Ｆ／
＃テ：ｆｆすｘチｙは１３ＪＯＯＵ／ｄ。
（Ｌ４ 意Ｆ／＃ｆ１４１−００Ｕ／ｍ で４！ＯＫ対
し、無機リン酸イオン濃度α００４ ｆ／ｄＪ条件下で
は７ン４ｘア態窒素ａ１〜０．３ｆ／＃でコリスチンは
３００００Ｕ／ＩＩｄ以上を示し、４１１に、アン＋ｘ
７１１窺素ａ１７ｆ／ｓ＃では最高４０１００ＴＪ／ｄ
ｅ）コリスチンが生成蓄積する。
し、無機リン酸イオン濃度α００４ ｆ／ｄＪ条件下で
は７ン４ｘア態窒素ａ１〜０．３ｆ／＃でコリスチンは
３００００Ｕ／ＩＩｄ以上を示し、４１１に、アン＋ｘ
７１１窺素ａ１７ｆ／ｓ＃では最高４０１００ＴＪ／ｄ
ｅ）コリスチンが生成蓄積する。
実施例２
実施例１で用いたｔのと同じコリスチン生童曹を、あら
かじめペンネット球界培地（スラント）で２８℃、４８
時間培養した後、スラント１本分の細胞を、実施例１の
第１１！ｌ！に示し九種培養培地３００１７の入ったｍ
ｌ容三角フラスコに接種し、２８℃、２４時間振盪培養
する。この種培養液１００１１ｊを、第２１１！に示し
丸主醗酵培地中の硫酸アンモニウムとリン酸第−カリウ
ム濃度を変えた第３表に示す主醗酵改良培地３Ｉの入っ
た５ｊ容ジヤー培養槽に移植し、温度２８℃、通気３ｊ
／分、攪拌ｓｏｏ回転／分の条件下で４０時間培養する
。
かじめペンネット球界培地（スラント）で２８℃、４８
時間培養した後、スラント１本分の細胞を、実施例１の
第１１！ｌ！に示し九種培養培地３００１７の入ったｍ
ｌ容三角フラスコに接種し、２８℃、２４時間振盪培養
する。この種培養液１００１１ｊを、第２１１！に示し
丸主醗酵培地中の硫酸アンモニウムとリン酸第−カリウ
ム濃度を変えた第３表に示す主醗酵改良培地３Ｉの入っ
た５ｊ容ジヤー培養槽に移植し、温度２８℃、通気３ｊ
／分、攪拌ｓｏｏ回転／分の条件下で４０時間培養する
。
第３１ｉ！ 主醗酵改良培地
殿粉 ４ｔ／ｄｌ
コーンミール １
硫酸アンモニウム α、８
炭酸カルシウム １．０
主醗酵改良培地の鳩舎、培養３５時間で培養液中Ｏ：ｙ
リスチン蓄積量は最高に達し、４１３００Ｕ／ＭＪ生成
している。同時Ｋ、主醗酵培地（第２表）で培養し九場
合、１４８００ Ｕ／ｄである。
リスチン蓄積量は最高に達し、４１３００Ｕ／ＭＪ生成
している。同時Ｋ、主醗酵培地（第２表）で培養し九場
合、１４８００ Ｕ／ｄである。
培養終了後の培養液２５１を塩酸でＰＨ２，０とし、８
０℃で３０分間加熱後・菌体および残渣を一過して除き
、−液の１＞Ｈを苛性ソーダを加えてａＯとし、活性炭
ＳＳを加えてコリスチンを吸着させた後に炉別する。こ
の活性炭に塩酸酸性メタノールを加えてコリスチンを溶
離させ、活性炭を除いた溶離液を濃縮後、５倍容のア七
トンを添加して沈殿物を得る。この沈殿物を再び酸性メ
タノールに溶かし、−縮後に再びア４）ンを加える操作
を反復して、得られた沈殿物を乾燥し、製品とする。そ
の結果、第３聚に示す主醗酵改良培地からは、１３７０
０ Ｕ／ＭＩＩの製品！５ｌｉｔを得ゐ、また、第２表
に示す主醗酵培地からはｔｚｚｏｏｔｙ７）の製品２．
１ｆを得る。
０℃で３０分間加熱後・菌体および残渣を一過して除き
、−液の１＞Ｈを苛性ソーダを加えてａＯとし、活性炭
ＳＳを加えてコリスチンを吸着させた後に炉別する。こ
の活性炭に塩酸酸性メタノールを加えてコリスチンを溶
離させ、活性炭を除いた溶離液を濃縮後、５倍容のア七
トンを添加して沈殿物を得る。この沈殿物を再び酸性メ
タノールに溶かし、−縮後に再びア４）ンを加える操作
を反復して、得られた沈殿物を乾燥し、製品とする。そ
の結果、第３聚に示す主醗酵改良培地からは、１３７０
０ Ｕ／ＭＩＩの製品！５ｌｉｔを得ゐ、また、第２表
に示す主醗酵培地からはｔｚｚｏｏｔｙ７）の製品２．
１ｆを得る。
第１図は、生成コリメチン渦度とアン篭ニアーー素ＩＫ
！［との関係を示す。 図中 ・−・： ｐｏ４− 濃度 ０．００４ｆ／１
ｔｌＯ−０： Ｉ ０．１４ｆ／＃第２
図は生成コリスチシ浪度と、無機リン酸イオン一度（Ｐ
Ｏ４−）との関係を示す。 図中 ・−・ ： アンモニア６６索 ｏｚｘｔ／ｄ
ｉＯ−０： ＃ ０．６４Ｆ／＃
手続補正書（自発） 昭和５７年１月 １３日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１４４３９８号 １発明の名称 コリスチンの製造法 ＆補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名称
（１０２）協和醗酔工業株式会社（ＴＢＬ：０３−２０
１−７２１１内線２７５１）２）回書第６頁８行 「１ｓｈｅｒｉｃｈ１ａ Ｊを（” Ｉｇｃｈ＊ｒｉｃ
ｈｉａ Ｊ Ｋ訂正する。 手続補正書 昭和５７年 １月／ゲ日 特許庁長官殿 を事件の表示 昭和ｓ６年特許願第１４４３９８号 １発明の名称 コリスチンの製造法 ３Ｌ補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番４号名称
（１０）協和醗酵工業株式会社 （Ｔ冨Ｌ：０３−２０１−７２１１内線２７５１）明細
書の発明の詳細な説明の欄 に訂正する。
！［との関係を示す。 図中 ・−・： ｐｏ４− 濃度 ０．００４ｆ／１
ｔｌＯ−０： Ｉ ０．１４ｆ／＃第２
図は生成コリスチシ浪度と、無機リン酸イオン一度（Ｐ
Ｏ４−）との関係を示す。 図中 ・−・ ： アンモニア６６索 ｏｚｘｔ／ｄ
ｉＯ−０： ＃ ０．６４Ｆ／＃
手続補正書（自発） 昭和５７年１月 １３日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１４４３９８号 １発明の名称 コリスチンの製造法 ＆補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名称
（１０２）協和醗酔工業株式会社（ＴＢＬ：０３−２０
１−７２１１内線２７５１）２）回書第６頁８行 「１ｓｈｅｒｉｃｈ１ａ Ｊを（” Ｉｇｃｈ＊ｒｉｃ
ｈｉａ Ｊ Ｋ訂正する。 手続補正書 昭和５７年 １月／ゲ日 特許庁長官殿 を事件の表示 昭和ｓ６年特許願第１４４３９８号 １発明の名称 コリスチンの製造法 ３Ｌ補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番４号名称
（１０）協和醗酵工業株式会社 （Ｔ冨Ｌ：０３−２０１−７２１１内線２７５１）明細
書の発明の詳細な説明の欄 に訂正する。
Claims (1)
- バチルス属に属するブリステン生産菌株を無機リン酸濃
度を無機リン酸イオンにして１Ｏ−４−５Ｘ１０−”ｆ
／ｄｌの範Ｓ門よびアンモニア態窒素濃度をα０２−０
．５ｆ／１１４の範囲で含有する培地に培養し、培養物
中に：ｆｌＪステンを生成蓄積させ、咳培養物よυ；コ
リスチン採取することを特徴とするコリスチンの製造法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56144398A JPS5847493A (ja) | 1981-09-12 | 1981-09-12 | コリスチンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56144398A JPS5847493A (ja) | 1981-09-12 | 1981-09-12 | コリスチンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5847493A true JPS5847493A (ja) | 1983-03-19 |
| JPS637759B2 JPS637759B2 (ja) | 1988-02-18 |
Family
ID=15361228
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56144398A Granted JPS5847493A (ja) | 1981-09-12 | 1981-09-12 | コリスチンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5847493A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008020474A1 (fr) * | 2006-08-15 | 2008-02-21 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | Procédé de production de poudre de colistine en vrac |
| CN103509839A (zh) * | 2013-10-12 | 2014-01-15 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种降低多粘菌素e发酵液中氨氮含量的方法 |
-
1981
- 1981-09-12 JP JP56144398A patent/JPS5847493A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008020474A1 (fr) * | 2006-08-15 | 2008-02-21 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | Procédé de production de poudre de colistine en vrac |
| CN103509839A (zh) * | 2013-10-12 | 2014-01-15 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种降低多粘菌素e发酵液中氨氮含量的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS637759B2 (ja) | 1988-02-18 |
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