JPS5831994A - （±）−アレスロロンの生化学的光学分割法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアレスロロンの生化学的光学分割法に関する。

さらに詳しくはエンテロバクタ−属、アルスロバクタ−
属、ブレビバクテリウム属、キャンディダ楓、クロモバ
クテリウム属、コリネバクテリウム属、サーモミセス属
、ノカルディア属、ピヒア属、シュードモナス属、ロド
トルラ属、アルカリ土類金属、アクロモバクタ−属、ク
リプトコツカス属、フラボバクテリウム属、ミクロコツ
カス属またはミコバクテリウム属に属する微生物の生産
するエステラーゼあるイｔｒｉ　動物膵臓エステラーゼ
をｅ→−７レスロロンの有機カルボン酸（炭素数７〜７
ｇ個の飽和または不飽和のカルボレ酸）エステルに作用
させて不斉加水分解して、光学純度の高い光学活性アレ
スロロンとその対掌体のエステルを得ろ工業的に有利な
（ト）−７レスロロンの生化学的光学分割法に関する。

アレスロロンと第−菊酸のエステルである７レスリンは
天然とレトリンに類似した構造を有し、強い速効的殺虫
性と温血動物に対する低毒性を兼ね備えた優れた殺虫剤
エステルとして汎用されている。

アレスロロンは１位に不斉炭素を持ち、二種の光学異性
体が存在する。アレスリンにおいてはアルコール側（ア
レスロロン）の立体異性が効力上重要な要因を占め←１
→−７レスロロンのエステルは効Ｈムする（−）−７レ
スロロンのエステルに比べ、その殺虫効力は数倍優れて
いる。従って工業的に有利に（−）→−７レスロロンを
製造する技術が望まれている。

（」−）−７レスロロンを製造する方法としては、これ
まで（→−トランス第−菊酸と（イ）−アレスロロンと
のエステルである（１）−トラン°ス（ト）−７レスリ
ンのセミカルバゾンを再結晶により単離し、次いでこれ
を加水分解して（−１−）−アレス００ンを得る方法（
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＯｒｇａｎｉＯＯｈｅｍｉｅｔ
ｒｙ　、第１９巻ｉＡ　ＩＩ！；７頁、／９５グ年）や
任）−７レスロロンをフタル酸の半エステルとし、次い
でこれに光学活性アミンを反応させ（（）アレスロ日ン
のジアステレオマー塩を生成させ、これを分＋ｒｓ　Ｌ
　フこ後使用したアミンと半エステルとしで回収し、次
いでこノ半エステルを加水分解して（−１−）アレスロ
ロンを得る方法（特開昭ｑ９−八υへ７号、！特開昭＜
／９−、ｔ、２７？ｊ、２号公報）が知られている。

（こり しかしながらこれらの方法はＪ　ｌ’４収率が低いＸ複
雑な工程を必・歩とす叩ｒよび高価な光学活性（二〇 試薬を必曹とする≦ど、工業的製ｌｂど［７ては、必ず
しも／Ｍ　ｆＭできるものではない。

また、このような有機合成化学的な光学外ｊｔｌｌＪ法
の他には、特公昭３Ａ−９９／ｌｉ！−１＋公報に記載
されているような微生物または酵素による（」］−アレ
スロロンの光栄分割法が知られている。すなわち特定の
微生物の培養物も［７くはこの培養物より分離したエス
テラーゼを用いて（ｔ）　−’　７レスロロンの脂肪酸
エステルを不斉加水分解し、（→−７レスロロンと（＋
）−７レスロロンの脂肪酸エステルに分割し後者を脱ア
リル化して（１）−アルスロロンを取得するとｂうもの
である。

この方法は複雑々工程を必要としない点で優れた方法で
はあるが、■不斉加水分解操作における１本質１ａ度が
低いこと、すなわち、等積効率が低いこと、および（２
）加水分解率も低いこと■遊離してくる←〕アレスｒ：
ｉロンが一部うセミ化シているとと、即ち、加水分解の
光学選択性が低いこと■得られる（」）アレスロロンの
収率および光学純度が必すしも高く力いなどの梓々の点
で、必ずしも満足できるものではガい。

本発明者らはこれらの諸問題点を克服し、工業的に真に
有利な（ト）−７レスロロンの生化学的光学分割法を見
い出すべく、水に不溶カニステル氷像に対して活性を有
する、リパーゼを含む広義のエステラーゼ（本明細書に
おいてエステラーゼと記載さハているのはリパーゼを含
む広義のエステラーゼを童味する。）について研究を重
ねたＭｌ、エンテロバクタ−属、アルスロバクタ−属、
ブレビバクテリウム属、キャンディダ属、クロモバクテ
リウム属、コリネバクテリウム柄、サーモミセス属、ノ
カルディア属、ピヒア稿、シュードモナス桐、ロドトル
ラ属、アルカリ土類金属、アクロモバクタ−属、クリプ
トコツカス属、フラボバクテリウム属、ミクロコツカス
属ｔたはミコバクテリウム属にか１する微生物の生産す
るエステラーゼあるいけ動物膵臓エステラーゼが７レス
ロロンの有機カルボン酸エステルに対し、高い不斉加水
分解活性を有し、これらのエステラーゼ、ｔｆＣ，Ｖ、
を上記微生物の生産するエステラーゼを含有する微生物
の培養液、培養Ｆ液もしくは菌体を（１）−７レスロロ
の有機カルボン酸エステルに作用させることによシ極め
て光学純度の高い光学活１ツ１°アレスロロンとその対
掌体のエステルが収率よく得られることを見い出しこね
に種々の横１を加え、本発明を児成するに至った。

次に本発明の詳細な説明する。本発明方法において原料
として使用される（１）−７１ノスロロンの有機カルボ
ン酸エステルは公知であり、一般の工２．チル臥１造の
常法、例えは（ト）−７レスロ口ンに有機カルボン酸の
無水物を反応させる方法あるいは有機カルボン酸クロラ
イドを有機塩基の存在下で反応させるととガどにより容
易に製造することができる。

′！）な、本発明で使用される微生物はエンテロバクタ
−属、アルスロバクタ−属、ブレビバクテリウム媚、キ
ャンディダ属、クロモバクテリウム植、コリネバクテリ
ウム属、サーモミセス属、ノカルディア属、ビヒア属、
シュードモナス属、ロドトルラ属、アルカリ土類金属、
アクロモバクタ−属、クリプトコツカス属、ワラボバク
デリウム属、ミクロコツカスＦ４ｔたはミコバクテリウ
ム属に属する微生物であって、リパーゼを含む広義のエ
ステラーゼを生産する微生物で♂）る０この微生物の具
体例として、例えば次の菌株が絡げられる。

（ハ　エンテロバクタ−クローカニ　エｙＯＪＪＪＩＢ
Ｉｎ＋−，ｅｒｏ’ｂａｃｔｏｒ　　　　　　　　　　
Ｃｌ０ａＯ＆（１（ｐ２）　　アルスロバクタ−ウレア
ファシェンス　エＩ’Ｏ／、２／４１０Ａ、ｒｔｈｒｏ
ｂａｏｔｅｒ　　　　　　ｕｒｅａｆａｏｉｅｎ。

（Ｊ）　　アルスロバクタ−シンプレックス　　　Ｉ’
ＦＯＪ５ＪθＡｒｔｈｒｏｂｅａｔｅｒ　　　　ｎｉｍ
ｐｌｅｘ（ｌｌ）　　　ブレビバクテリウム　アンモニ
アゲネス　　　　　　　ＩＡＭ　　／１，１３Ｂｒｅｂ
ｉｂａｏｔｓｒｉｕｍ　　ａｍｍｏｎｉａｇａｎｅｓ＜
Ｓ＞　　シュードモナス　フルオレッセンス　　　１Ｆ
ＯＪθに／ｒｏｅｕｄｏ＋ｎｏｎａｓ　　　　　ｆｌｕ
ｏｒｅｓａｅｎｓ（６）　　シュードモナス　セパｉ／
７　　　　　　　　工ＩＦＯ３７３りＰｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ　　　ｃｅｐａｏｉ８（７）　　アルカリゲネス
　７エーカリス　　　　　　ｉＦｏ／、２乙乙りＡｌｏ
ａｌｌ、ｐｅｎ＆ａ　　　ｆａｅｏａｌｉｓ（ｇ）　　
フラボバクテリウム　アルポレセンス　　Ｈｒｔ、＋　
、３７６θＦ１．ａｖｏｂａｃｔ：＋ｓｒｊ、ｏｎ＋ａ
ｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ（９）　　ミクロコツカス　ルテ
ウス　　　０ＴＴＴ　ｇ、２７ＡＭｊ　ｃｒａｃｎｃｃ
ｌｌａ　　　　　　　　］　ｕｔｅｕＩ！Ｉ（／θ）ク
ロモバクテリウム　ビスコサム　　　　ＡＴＯＯ６？１
ｇＯｈｒＯｍＯｔｌａＯｔｅｒｊ、ｕｍ　　　　　　Ｖ
１８００Ｅ１１２ｍ（／／）ミコバクテリウム　フレイ
　　　　　　　Ｘ１ｆＯ３／！；ｇＭｙｃｏｂａｃｔ、
ａｒｉｕｍ　　　ｐｌ〕１ａｉ（／、２）　　コリネバ
クテリウム　エクイ　　　　　　ムＴｏｏ　７Ａ？？ｏ
ｏｒｙｎｅｂａｃｔθｒｉｕｍ　　　ｅｑｕｉ（／Ｊ）
キャンディダ　ユチリス　　　　エＦＯθ３り６０ａｎ
ｄｉｒｉａ　　　　　　　　　　ｕｔｉｌｉｓ（／＆）
サーモミセス　ラヌギノザ　　　エＦＯり７３１Ｔｈｅ
ｒｍｏｍｙａｅｅ　　　１ａｎｕｇｉｎｏｓａ（／ｊ）
ピヒア　ポリモルファ　　　　　　　　工ＦＯ／／６６
Ｐｊ、ｈｉａ　　　ｐｏｌｉｍｏｒｐｈａ（／１．）ロ
ドトルラ　ルブラ　　　　　　　エＦＯθＵθＲｈ０ｄ
Ｏｔｏｒｕ１．ａ　　　　ｒｕｔ７ｒａ（／７）ロドト
ルラ　マリーナ　　　　　エＦＯθ９．２にＲｈｏｄｏ
ｔｏｒｕｌａ　　　　ｍａｒｉｎａ（ｌに）ロドトルラ
　ミヌータ　　　　　ＩＦＯ０３ｇ７Ｒｈｏｄｏｔｏｒ
ｕｌａ　　　　ｍ１ｎｕｔａ（／ワ）クリプトコツカス
　アルビダス　　　　　Ｘ　Ｆ　００３７１Ｃ１アｐｔ
ｏｏｏａｃｕｓ　　　　　ａｌｂｉｄｕｓ（ｒ）　　ノ
カルディア　アステロイデス　　　　　エＦＯ３’１３
Ｎｏｏａｒｄｉａ　　　　　　ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ（
，２／　）　　ノカルディア　エリスロポリス　　　　
　エＦＯ／２３Ｘ）Ｎｏｃａｒｄｌａ　　　　ｅｒｙｔ
ｈｒｏｐｏｌｉｓ（ＪＦ（３０）に加入の保存機関に保
存され、この保存機関より入手することがで鈷る。なお
Ｉ　ｙ（ｌは大阪市の財団法人醗酵研究ｒ９−ｒ、Ｉ　
Ａ　Ｍ　ｌｄ：東京大学応用微生物研究所、　ＯＵＴね
、大阪大学］二学部醗酩工学科を示す。

上記微生物の培養は１通常常法に従っ−（Ｆ　１４ζ培
養を行なうことによりηス養液を得る０例え１・１、滅
菌した液体培地〔かび、酵イυ゛類用には麦芽エキス・
酵母エキス培地（水／ｌにペプトン、望、θｙ１グルコ
ース／θ、θＦ、麦芽エキス３．θｙ、酵母エキス３．
θ〕を溶解し、■Ｉ）］６．３とする）、ね１（画用に
は加糖ブイヨン培地（水／ｌにグルコース／θ、θｙ、
ペプトン５．θり、肉エキス５′、θ〕、Ｎａ０１Ｊ−
θノを溶解しｐＨ７、，２とする）〕に微微生物を接種
し、通常、−θ〜ダ０°Ｃ−″Ｃ７〜３日間往復振盪培
養を行なう。また必碧に応じて固体培養を行なってもよ
い。

本発明においては上配微隼物のうちアルスｆ′！バクタ
ー属、エンテロバクタ−属、クロモバクテリウム属、キ
ャンディダ属、アルカリゲ水ス属、しｊ−トモナス属、
ノカルディア属、ロドトルラ属、ブレビバクテリウム属
およびミコバクテリウム属に属する微生物が、エステラ
ーゼ活性および不斉収部の点で特に好適であるＱ−文た
、こわらの微生苧起源のエステラーゼのなかには１１】
販されているものかあシ、容易に入・［・することがで
きる。市販エステラーゼの具体例どしては：／１．−ト
モナス属のリパーゼ（リボブ「、」ティンリパーゼ大野
製薬製））、キャンディダミノリンドラッセのリパーゼ
（リパーゼＭＹ（名糖産業ｆＪＪ））、アルカリ土類金
属のリパーゼ（リバービＰＬ（名糖産；ｔＦＷ））、ア
クロモバ’）’／−属（７）リパーゼ（リパーゼＡＩＩ
（名糖産業製））、アルスロバクタ−属のリパーゼ（リ
パーゼ合同丁、　Ｓ　Ｔ、、　（合同Ｍ　ＩＹｔ製））
、クロモバクテリウム属のリパーゼ（東洋醸造製）ガと
が挙げられる０着た。　Ｉｌ＋！＋物１１ｉｉ＜臓エス
テラーゼとし７てはステアブレン÷・バンクレアチンを
用いることができる。

木６Ｌ　ｊ！Ｉ−］方法を実施するに際し、（１）−ア
レスロロンの有機カルボン酸（炭素数７〜７ｇ個の飽和
または不飽和のカルボン酸）エステルの不斉加水分解は
、上記微生物を培養した培養液、培養液から分離した菌
体、エステラーゼを含有する培養Ｆ液、あるいは各種酵
素分割法によって菌体オたけ培養Ｐ液から分１１Ｊｌｆ
：　ｔ、た和製エステラーゼ％＃＊製エステラーゼおよ
びエステラーゼ含有抽出液または濃縮液、あるいけ動物
膵臓エステラーゼを含有する水溶液とｔＪ）−７レスロ
ロンの有機カルボン酸エステル′ｊＦｒ：１ｌｉｊ、　
合し、攪拌号たけ振盪することにより行なわれる。甘だ
、固定化菌体あるいは固定化エステラーゼも使用するこ
ともできる。

（ト）−アレスロロンの有機カルボン酸エステルの不斉
加水分解を行なう条件としては、反応温度は７０〜７０
°Ｃが適当であり、好熱菌の培養液または好熱菌の培養
により得られた面・１熱性エステラーゼではｊθ〜ｔ　
ｓ　’ｃ　、中温菌の培養液または特に耐熱性を有しな
いエステラーゼでＶ：ｌ：コθ〜Ｓθ°Ｃか好ましい。

反応時間は通常３〜ｌに時間であるが、反応温度を高め
たり酵素址を増加させるなどによりルカリ性エステラー
ゼではｐＨｇ〜／／、好アルカリ性でない微生物の培養
液や耐アルカリ性を有しないエステラーゼではｐ　Ｉ（
！；　−！；が好ましい。−また、　’ＩＩｎ水分解に
よって生成する酢酸などの酸分中和し、反応中のｐｌ（
を一定に保つだめに緩衝液の使用がｇ、ましく、リン酸
ナトリウム、リン酸カリウムなどの無機酸塩の緩衝液。

醋酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなどの有機酸塩の
緩衝液を使用することができる。

基質である（ト）−アレスロロンの有機カルボン酸エス
テルの使用濃度は反応液に対し７〜５０ｗｔ９ｇであり
、本発明における好ましい基質濃度が高いことから工業
的に有利である。

次に、このようにして不斉加水分解反応を行った後、遊
離した光学活性アレスロロンと未反応の対掌体エステル
を分離回収する。この分離回収に際しては水蒸気蒸留、
溶媒抽出、分別蒸留、カラムクロマトグラフィーなどの
Ｍ作を適宜採用することができる。例えば反応液を水蒸
気蒸留し留出物をエーテル抽出するかあるいは直接反応
液をエーテル、酢酸エチル、ベンゼンなどの有機溶媒で
抽出し、この抽出物を分別蒸留し光学活性アレスロロン
とその対掌体のエステルを分離数イ＃するか、または抽
出物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにかけ、
例えばｎ−ヘキサン−アセトン＋　３’　：　／　１溶
液で溶出することにより、先ず光学活性アレスロロンの
有機カルボン酸エステルが分離され、次いでメタノール
溶出を行なうことにより千の対常体の遊離の７レスロロ
ンが分離さレル。

また、以上のようにして分離された光学活性アレスロロ
ンのエステルは、さらに脱アシル化することにより容易
に光学活性アレスロロンに導くことができる。脱アシル
化の方法としてｄ：例えばアレスロロンの有機カルボン
酸エステルをメタノールに溶解し、微駿のナトリウムメ
チラートを加え、アルコリシス（室温にて／θ時間惺度
）を行なうかオたけアンモニア飽和メタノールを用いて
アンモノリシス（７０°Ｃにて＜ｔｇ時間程度）を行な
うことにより容易に光学活性なアレスロロンが得うレル
。

以Ｅ、詳細に説明し１こように本発明方法による仕）−
７レスロロンの光学分ＩＩＪｌｌは有機合成化学的光学
分割法に比ベニ程が簡略であり、まだ高価な光学活性試
薬を必要としないので経済的に有利である。また、従来
の生化学的光学分割法に比し、得られる光学活性アレス
ロロンの光学純度および収率が高く、また不斉加水分解
時の基質濃度を高く維持できることから効率的で工業的
シこ極めて有利である。

次に本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが本
発明がこれらに限定されるものではない。

実施例／〜乙 またはｐ　Ｈ９，ｔ、０．２Ｍ濃度のＮａ２００３→ａ
ＨＯＯ３いて搬しく攪拌しつつ反応させた。、２１Ｉ時
間反応を行なった後反応物を酢酸エチルで抽出した。抽
１］１液をガスクロマトグラフィー　（Ｊ　％　ＤＩｌ
ｃＧＢ、ハ／ｌｎ　７ＫＯ”Ｃｌ　テ分析しアレスロニ
ル力ブリレートと７レスロロンのピーク面積比より加水
分解率を算出し、表／の結采を得た。抽出液を濃縮しシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにかけｎ　−ヘキサ
ン−アセトンｆ、ｆｆ：／ｌ溶液で溶１１」し、未反応
の７レスロニルカプリレートを分離取得し１次いでメタ
ノール溶出によって遊離アレスロロンを取得した、 ここで得られた遊離アレスロロンのうち／θ■をトルエ
ン／　ｍｌにピリジンθ、　、２　ｍｌ（→−α−メト
キシーα−トリフルオロメチルフェニル酢酸クロライド
（（→−ＭＴＰＡクロライド）り５勺を加え、一時間加
納還流し、アレスロロンの（→ＭＴＰＡジアステレオマ
・−としガスクロマトグラフィー（シリコンＤ。

（／　ｊ　） ＱＦ−八　３０ｍキャピラリーカラム、／ｇＯ’ｔ、＋
　）で光学異性体分析を行々い、ＦＨ−７レスロロンの
ジアステレオマーと（→−アレスロロンのジアステレオ
マーのピーク面積比より、遊離アレスロロンの光学異性
体型および光学純度を求めた。

一方、カラムクロマトグラフィーの操作により得られた
未反応エステルはメタノール／Ｓｍｅに溶解し、７０係
ナトリウムメチラート−メタノール溶液／θμＣを加え
、−夜室温に放電Ｌ’脱アシル化を行ない減圧蒸留によ
って７レスロロンを分離取得した。このアレスロロンを
上記遊離アレスロロンの場合、と同様にして光学異性体
比を分析し、未反応エステルの光学異性体型および光学
純度を求めた。

以上の結果を表／に示す。

（／　ｔ　） １１−１Ｎ　′ 貴　　　　　　　　　　　　　−２１・；１ト　　　　
　　も　　　　　し　　　　　　　　　　　　８　　　
　　′喝　　　）　　怖ｉ′ｊ Ｈ面 傍枡 叱罐♀　τ　、↓　↓　↓　１土 （に卦　−１ 躬　　　　　　　　　　　　　　　・４７８　　・　　
　　−−−−−、、−４４ｊ謔旺 ａ！：　隘　溢　隘　さ　い迦 止層 １１　　　　　　　　　　　べ １壮 ト馴（寧９ 當イＴ　エ　？　τ上艶、１ 変卦　− べ　　　　　　　　　　　べ〒 ＼ （も 肱 駆虫・（Ｃｉ　ピ　關−４，５ 「−５， １４（転）　ｄ方１ 鼎　　１ハ ｌ　女　と　　　リ、ミ　　ａ １１　　に警＝黛４Ｆ　”、；”、１、−２−７実施例
７〜／θ （±）−７レスロニルブチレート／　Ｐ　、！：表、２
に記載の各エステラーゼ２θ■を緩衝液／θｍｌに加え
、３θ℃で攪拌子を用いて激しく攪拌しつつ反応させた
。以後、実施例／〜乙と同（手のＪＩＶＩ作を行い、表
２の結果を得た。

実施例／／〜／ｊ （±）−７レスロニルアセテ一ト八ｏｆ！ト表３に記載
した各エステラーゼ！θツを緩衝液／θｍｌに加え、以
後実施例／〜６と同様の操作を行い、表３の結果を得た
。。

／、・４′ソ・ ′μＭｆｉ例／乙〜！θ Ｓθθｒｎｅ肩付フラスコに液体培地〔酵母額用（実施
例！θ）には麦芽エキス、酵母エキス培地（水／Ａにペ
ブトンオ、θ２、グルコース／θ。θｙ１麦芽エキス３
．θ１、酵母エキス３．θグを溶解し、］１１乙Ｓとす
る。）細菌用（実施例／に〜／　？には加糖ブイヨン培
地（水／ＩＬにグルコース／θ、θ２、ペプトンＳ、θ
１、肉エキスｊ。θグ、＋ｖａｃｎ　３．θ２を溶解し
、ｐｉｆ　７．．２とする。）〕／θθｒｎｌを入れて
殺菌しノー後、表グに記載した各微生物を斜面培養から
！白金耳接ｆｔ１ｉ　ｌ、、３θ℃で４ｔに時間往復振
盪培讐した。

次いでとの培ゆ液に（±）−アレスロールアセテート７
ｇを加え、３０℃で、２グ時間往後振禰した後、反応液
を水蒸気蒸留し、留出物をエーテル抽出した。抽出物を
濃縮し、実施例／〜乙と同様のカラムクロマトグラフィ
ー操作により遊離アレスロロンを取得した。この遊離ア
レスロロンを実施例７〜乙と同様の操作により光学異性
体分析した。その結果を表表　　　　　グ 実施例２／ 実施例７にと同様の方法、でｑ＋１．＋　ｔｎ川用にノ
カルディアーアステロイデス丁）Ｈ゛０３’１２１のＩ
ン′ｔイ＊、　Ｈｙ　／　ｖ。

＊ｃ過し−ｃ培″４ｉｊＪ液ヲ＃４４　？ｒ　（、コ（
７：）　、ｌ？’ｔ　養炉’ｔｔｋ／θｍｌニ（±）−
７レスロニルフオルメート／、、！；？とｐｌ（７，θ
Ｍｃ１１ｖａｉ、ｎｅ緩ＴＭ’ｔ　？ｇ　タ解％−加λ
、３θ°Ｃで攪拌子を用いて激しく攪１１’　ｌ、っつ
反応させた。

（，２Ｊ１ 以彼、実施例／〜乙と同様の操作を行い表ｊの結果を得
た。

表　　　　　よ 実施例、２．２ 実施例！θと同様の方法で調製したロドトルラーミヌー
タエＦＯＯｇ／りの培養液／１がら遠心分離によって集
菌し、蒸留水で一回洗浄した後凍結乾燥１７た。この凍
結乾燥菌体Ｓθθｑと（：ｌ−）　−ｙレスロニルフォ
ルメート／ｇをｐＨ７，０Ｍａｌ：１ａｉｎｅ緩衝液／
θｍｌに加え、３θ℃で攪拌子を用いて激しく攪拌しつ
つ反応させ、以後実施例／〜６ど同様の操作を行い・、
表６の結果を得た。

表　　　６ （，２＆１ 第１頁の続き ７２発　明　昔　光ト［１賢 高槻市玉用−ｒ　Ｅｌ　２６＃４０９ 手　続　補　正　ｒＭ　（自発） 昭和５６’ｉ［１１月　）目 ｔ　事件の表示 昭和５６年　特許願第　１３１２８１−Ｆ’ｒ２、発明
の名称 （ト）−アレスロロンの生化学的光学分割法３、　補正
をする者 事件との関係　　　特許用１幀人 住　所　　大阪市東区北浜５丁１：、１１５番地名　称
　　（２０９）住反化学工貰株式会社代衣各　　　　　
土　　方　　　武 ４、　　代　　理　　人 住　所　　大阪市東区北浜５丁１］１５　解地（１） 玩　補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、　補正の内容 （１）明細書第４頁第２行目および第５行目に「（ト）
アレスロロン」とあるを°「（ト）−アレスロロン」と
訂正する。

（２）　　同第５頁第６行目に［（−）アレスロロン」
とあるを１（−）−アレスロロン」と訂正する。

（３）　　同ｍ　５頁第８行目に「（ト）アレスロロン
」とあるを［（＋）−アレスロロン」と訂正する。

（４）　　同第７頁下より第４行目〜第９頁下より第３
行目を下記のように訂正する。

［（１）　　　エンテロバクタ−・クローカニ　　　　
　ＩＦｏ　　３３２０Ｆ、＋１ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　
　　　ｃｌｏａｃａｅ（２１アルスロバクタ−・ウレア
ファシェンス　　Ｉ　ＦＯ１２１４０Ａｒｔｂｒｏｂａ
ｃｔｅｒ　　　　ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｇ（３）　　　
アルスロバクタ−・シンプレックス　　　　ＩＦＯ３５
３０Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　　ｓ　ｉｍｐｌｅｘ（
４）ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス　　ＩＡＭ
　　１６４５Ｂｒｅｂｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　　ａ＋
１ｍｎｏｎｉａｇｅｎｅｓ（２） （５）　　　シュードモナス・フルオレッセンス　　　
　　Ｉ　Ｆｏ　　３０８１Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　
　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ（６）　　シュードモナス・
フライ　　　　　　　ＴＦＯ３４５８Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ　　ｆｒａｇｉ（７）　　　アルカリゲネス・フ
エーカリス　　　　　”　０１２６６０Ａｌｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ　　　ｆａｅｃａｌｉｓ（８）　　　フラボバ
クテリウム・アルボレセンス　　　　　ＴＩ’０　３７
５０Ｆｌａｖｏｂａｏｔｅｒｉｕｍ　　ａｒｂｏｒｅｓ
ｃｅｎｓ（９）　　　ミクロコツカス・ルテウス　　　
　　Ｑ［ＪＴ８２７６ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　　　　
１ｕｔｅｕｓ＋Ｉｎ）　　　クロモバクテリウム・ビス
コサム　　　ＡＴ（・Ｃ６９１８Ｃｈｒｏ＋ｎｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　　ｖｉｓｃｏｓｕ＋ｎＯ］）　　ミコバ
クテリウム・フレイ　　　　　ｒ　Ｆｏ　　３１５Ｂ＋
Ｊｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　　ｐｌｓ　１ｅｉＯの
　コリネバクテリウム・エクイ　　　　に”−’に　　
７６９９Ｇｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｅｑｕｉ
（１３キャンディダ・ユチリス　　　　　Ｔ　ＦＯ０３
９６Ｃａｎｄｉｄａ　　　　ｕｔｉｌｉｓ Ｏ■　サーモミセス・ラヌギノザ　　　ＩＦＯ９７３８
Ｔｂｅｒｍａｎｙｃｅｓ　　　ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ（
３） θ０　ピヒア・ポリモルファ　　　　　ＩＦＯ１１６６
Ｐｉｈｉａ　　ｐｏｌｉｒｎｏｒｐｈａ（１（９ロドト
ルう・ルブラ　　　　　　ＩＦＯ０８７０ＲＩ＋ｏｄｏ
ｔｏｒｕｌａ　　　　ｒｕｂｒａθη　ロドトルう・マ
リーナ　　　　Ｉ　ＦＯ０９２８Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌ
ａ　　　＋ｎａｒｉｎａ（噂　ロドトルラ　・　ミヌー
タ　　　Ｉ　ＦＯ０３８７１Ｌｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　
　　　ｍ１ｎｕｔａ（１１クリプトコツカス・アルビダ
ス　　　　Ｉ　ＦＯ０３７８Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
　　　ａｌｂｉｄｕｓ（イ）　ノカルディア・アステロ
イデス　　　　Ｉ　ＦＯ３４２４Ｎｏｃａｒｄｉａ　　
　　ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ（２１）　　ノカルディア・
エリスロポリス　　ＩＦＯ１２３２ＯＮｏｃａｒｄｉａ
　　　ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ　　　　　　　　　　
　ｊ（５）同第１０頁第８行目に「かび、酵母類」とあ
るを「かび類、酵母類」と訂正する。

（６）　　同第１０頁第１１〜第１２行目に「細菌用」
とあるを「細菌類用」と訂正する。

（７）同第１１１頁第８〜第９行目に［リポプロテイン
リハーゼ大野製薬製）」とあるを［大野（４） ａ店製」と訂正する。

（８）　　同第１１頁第９〜第１０行日に「キャンディ
ダシリンドラフセラッセ」とあるを「キャンディダ・シ
リンドラッセ」と訂正する。

（９）同第１６頁Ｆより第６ｄ目に「トルエン１ｍｌに
」とあるを「トルエンＩ　１ｎｉに溶解し、これに」と
訂正する。

（１０同第１８頁の衣１中、実施側番（Ｊ゛５のニス道 、ｔｌ あるを「シュードモナス禽」と訂正する。

０］）同第２２頁の表３中、実施例附畦１４のエステラ
ーゼ起源の欄に 弧 一ドモナス碓」と訂正する。

θの　同第２３頁第６行目に「細菌用」とあるを「細菌
類用」と訂正する。

０３　　同第２３頁第７行目に１１６〜１９には」とあ
るを「１６〜１９　）には」と訂正する。

（５） （１４）　　同第２３頁下より第８行目に「（ト）−ア
レスロール」トするをｒ　ＩＪ−アレスロニル」と訂正
する。

（１９同第２４頁の表４を下記のように訂５正する。

（６） ０（争　　同第２４頁下より第７行目〜下より第６行目
に「ノカルディアーアステロイデス」とあるを「ノカル
ディア・アステロイデス」と訂正する。

θη　同第２５頁第８行〜第９行目に［ロド）／レラー
ミヌータ　ＩＦＯ０８１９Ｊ　トアルヲｒ　ロドトルラ
・ミヌータ　０８７９　Ｊ　と訂正する。

以　　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 エンテロバクタ−属、アルスロバクタ−属。 ブレビバクテリウム属、キャンディダ属、クロモバクテ
   リウム属、コリネバクテリウム属、サーモミセス属、ノ
   カルディア属、ピヒア属、シ、！４−トモナス属、ロド
   トルラ属、アルカリ土類金属、アクロモバクタ−属、ク
   リプトコツカス属、フラボバクテリウム属、ミクロコツ
   カス属またはミコバクテリウム属に属する微生物の生産
   するエステラーゼあるいけ動物膵曜エステラーゼを（ト
   ）−７レスロロンの有機カルボン酸（炭素数７〜７ｇ個
   の飽和または不飽和のカルボン酸）エステルに作用させ
   て、これを不斉加水分解して、光学活性なアレスロロン
   とその対掌体のエステルに分割することを特徴とする（
   ホ）−７レスロロンの生化学的光学分割法。