JPS5823786A - ペルオキシダ−ゼの安定化法 - Google Patents

ペルオキシダ−ゼの安定化法

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JPS5823786A
JPS5823786A JP57132924A JP13292482A JPS5823786A JP S5823786 A JPS5823786 A JP S5823786A JP 57132924 A JP57132924 A JP 57132924A JP 13292482 A JP13292482 A JP 13292482A JP S5823786 A JPS5823786 A JP S5823786A
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serum
amino
antipyrine
medium
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JP57132924A
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ハラルト・ガラツテイ
ハンス・ブロツドベツク
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F Hoffmann La Roche AG
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    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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    • C12Q2326/90Developer
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 酵素ペルオキシダーゼ、IP#に西洋わさびのペルオキ
シダーゼは非常に多くの用途ンもち免疫学的試験法に対
する免疫学的試験法(例えば、ハシテン、抗原または抗
体)の積繊′化九対して特に重要と考えられる。ペルオ
キシダーゼの活性または存在は容易に簡単に検出される
から、ペルオキシダーゼは免疫学的方法で用いると望ま
しい。この理由から、酵素免疫法に対する市販のキット
はその必須成分としてペルオキシダーゼが結合する免疫
学的に活性な物質を含んでいる。使用前にそのようなキ
ットは種々の場所に輸送きれ、また櫨々の期間貯そうさ
れるから、その酵素活性ができる限り長く保存されるこ
とは必須の条件である。しかしながら、酵素ペルオキシ
ダーゼはそれが他の成分に結合していると否とkかかわ
らず、特に低濃度で非常に安定ではないことが知らされ
ている。
したがって貯蔵安定性もまた低く、その事がかかるキッ
トの商業的意義Y減じている。
現在、ペルオキシダーゼ抱合体はたとえば約刀チのやぎ
血清を含むことのできる血清または血清蛋白Y含む反応
媒質に貯ぞうされている。これに関連して血清の存在が
抱合体の安定性ン増加させることが示されてきた。他方
、高温の貯蔵(例えば37°C)および/あるいは長期
の貯蔵(例えば6ケ月)後に血清は酵素からヘミン部分
を開裂させてペルオキシダーゼの不活性化に役割ン演す
ることもまた観察されている。ペルオキシダーゼのこの
不活性化は明らかにペルオキシダーゼと血清のへイン結
合蛋白との間のヘミン相互作用によりひきおこされる。
本発明の範囲においてここにベルオキダーぜのこの不活
性化t4−アミノ−アンチピリンの媒質への添加により
実質的に減少できることが発見された。反応媒質への4
−アミノ−アンチピリンの添加によりペルオキシダーゼ
の安定性はしたがって実質的に改善される。
したがって本発明は媒質へ4−アミノーアンチビリンン
添加することからなる血清または血清蛋白含有媒質にお
けるペルオキシダーゼの安定化法に関する。
西洋わさびのペルオキシダーゼが本発明に従う方法にお
けるペルオキシダーゼとしてIWFT/c考慮される。
ヤイの血清は特にこの血清として望ましいことが判明し
たが、たとえばコウシ胎仔の血清もまた使用できる。血
清蛋白としてはたとえばアルブミンが考えられる。
媒質中の4−アミノ−アンチぎリン濃度は好ましくは1
!につぎ10vから1000Wの間で。
特にIJにつき40から300岬が望ましい。特に望ま
しい場合は、4−アミノ−アンチぎリンは1ノにつき1
00呼または200呼の濃度で用いられる。
以下の例が本発明を例証する。
例 o、1wy’tの(ヤイ)抗−CIA−イk オー’P
 Vダーぜ抱合体yt、2g/ノのウシ血清アルブミン
20チの正常ヤイ血清(56@150分で不活性化した
)および0.5g/lの「テメロサール」(’I’hi
merosal ) (Fluka ) %:金含有る
pH6,5の0.2モル/Ilのりン酸す) IJウム
緩衝液に溶解する。この抗−CIA−ペルオキシダーゼ
溶液を二つに分ける。この抗−03人−ペルオキシダー
ゼ溶液の1部に0.2fi/IIの4−アミノ−アンチ
ぎリン乞添加する。この2つの抗−CIeA−ペルオキ
シダーゼ溶液を無菌r過(フィルター=0.2μ)シネ
ジ式閉鎖部をもつ無菌ガラスフラスコ中に201づつ小
分けして充填する。これらの抗−〇IeA−ペルオキシ
ダーゼ溶液t2−8℃または37°Cで貯ぞ5する。
ある一定の時間間隔tおいてそれぞれの抗−CEA−ペ
ルオキシダーゼ溶液中のペルオキシダーゼ活性ン特定の
抗−CKA−ペルオキシダーゼ溶液<91/lのNmC
j中で1=20に前もって稀釈した)の0.050 i
uに0.51の基質緩衝溶液(−5,0のクエン酸ナト
リウム0.1部モル/)に6mmo1/!のii、o、
および40 mmol / lの0−フェニレンシアイ
ン)を加えそれからその混合物を室温にて15分間イン
キュベートすることにより測定する。
過酸化反応)g I N HCl2.(Jdの添加によ
り中止させ吸収差(Δ人4osnm / RT / 1
5分)V公党Ill光的に測定する。4−アミノ−アン
チぎリンの安定化効果Y測定するために67℃で貯ぞう
した抗−01人−ペルオキシダーゼ溶液の残存活性百分
率t2−8℃で貯ぞうしたものと比較計算する。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 、(1)血清または血清蛋白Y含む媒質に4−アミノ−
    アンチピリンY添加することからなるこの媒質中のペル
    オキシダーゼの安定化法。 (2)−ペルオキシダーゼが西洋わさびのペルオキシダ
    ーゼである上記第1項の方法。 (3)血清がヤザの血清である上記第1または2項のい
    ずれか一つの方法。 (4)4−アイノーアンチピリン7kIJにつぎ10岬
    から1000TIlyのIIkrで添加する上記第1か
    ら3項までのいずれか一つの方法。 (5)4−アミノ−アンチピリンYIJにつぎ40呼か
    ら300wfの11にで添加する上記第4項の方法。 (6)4−アンノーアンチピリンY11につき100q
    かあるいは200qの濃度で添加する上記第5項の方法
    。 (71血清または血清蛋白を含有する媒質が4−アミノ
    −アンチピリンな含む該媒質中の安定化されたペルオキ
    シダーゼ。
JP57132924A 1981-07-30 1982-07-29 ペルオキシダ−ゼの安定化法 Expired JPS6054039B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH494481 1981-07-30
CH4944/81-0 1981-07-30

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JPS5823786A true JPS5823786A (ja) 1983-02-12
JPS6054039B2 JPS6054039B2 (ja) 1985-11-28

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JP57132924A Expired JPS6054039B2 (ja) 1981-07-30 1982-07-29 ペルオキシダ−ゼの安定化法

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US (1) US4448882A (ja)
EP (1) EP0070992B1 (ja)
JP (1) JPS6054039B2 (ja)
AT (1) ATE11152T1 (ja)
AU (1) AU537173B2 (ja)
CA (1) CA1186990A (ja)
DE (1) DE3261832D1 (ja)
DK (1) DK155953C (ja)
FI (1) FI71170C (ja)
NO (1) NO163745C (ja)

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NO163745B (no) 1990-04-02
DK155953B (da) 1989-06-05
US4448882A (en) 1984-05-15
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EP0070992A1 (de) 1983-02-09
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FI71170B (fi) 1986-08-14
FI822224A0 (fi) 1982-06-21
DE3261832D1 (en) 1985-02-21
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