NO163745B - Stabiliseringsmetode. - Google Patents
Stabiliseringsmetode. Download PDFInfo
- Publication number
- NO163745B NO163745B NO822609A NO822609A NO163745B NO 163745 B NO163745 B NO 163745B NO 822609 A NO822609 A NO 822609A NO 822609 A NO822609 A NO 822609A NO 163745 B NO163745 B NO 163745B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peroxidase
- serum
- antipyrine
- amino
- medium
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 title 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 title 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 27
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 13
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 5
- 239000011149 active material Substances 0.000 claims description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 24
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical group CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZZMTSNZRBFGGU-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-7-fluoroquinazolin-4-amine Chemical compound FC1=CC=C2C(N)=NC(Cl)=NC2=C1 FZZMTSNZRBFGGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- VEQOALNAAJBPNY-UHFFFAOYSA-N antipyrine Chemical compound CN1C(C)=CC(=O)N1C1=CC=CC=C1 VEQOALNAAJBPNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960005222 phenazone Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/90—Developer
- C12Q2326/96—4-Amino-antipyrine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
- Laminated Bodies (AREA)
- Synchronisation In Digital Transmission Systems (AREA)
- Nonmetallic Welding Materials (AREA)
- Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Enzymet peroksidase, spesielt pepperrotperoksidasen, er meget bredt anvendelig og kommer særlig på tale for markering av immunologiske reaksjonspartnere, f.eks. haptener, antigener eller antistoffer for immunologiske prøvemetoder. Da aktiviteten hhv, tilstedeværelsen av peroksidase er lett og enkel påviselig, anvendes spesielt gjerne peroksidase ved immunologiske metoder. Av denne grunn inneholder da også i handelen tilgjengelige testsett for en enzymatisk immunologisk metode som vesentlig bestanddel et immunologisk aktivt materiale som peroksidasen er koblet på. Da slike testsett må transporteres og lagres forskjellig tid før anvendelsen, er det påkrevet at enzymets aktivitet opprettholdes så lenge som mulig. Nå er det imidlertid kjent av enzymet peroksidase, uavhengig om det er bundet til en annen komponent, spesielt i lave konsentrasjoner, ikke er meget stabilt. Derfor er også lagringsstabiliteten liten, hvilket påvirker den kommersielle betydning av slikt testsett.
For tiden oppbevares peroksidase-konjugater i et reåksjons-medium som inneholder et serum eller serumprotein, hvilket f.eks. kan inneholde omtrent 20% geiteserum. Herunder har det vist seg at tilstedeværelsen av serum øker stabiliteten til konjugatet. På den annen side fant man ved høyere lagringstemperaturer (f.eks. 37'C) og/eller etter lengre lagringsvarighet (f.eks. 6 måneder) også at serumet bidrar til inaktivering av peroksidasen, idet det avspalter hemindeler fra enzymet. Denne inaktivering av peroksidasen er åpenbart betinget ved heminpåvirkningen mellom peroksidasen og serumets heminbindende proteiner. I US patent nr.
4.252.896 blir det beskrevet å stabilisere peroksidasen med tilsetning av 8-anilin-l-naftalensulfonsyre. Innenfor rammen av foreliggende oppfinnelse har man nå funnet at inaktiver-ingen av peroksidasen kan reduseres vesentlig ved tilsetning av 4-amin-antipyrin til mediet. Ved tilsetning av 4-amino-antipyrin til reaksjonsmediet forbedres følgelig peroksi-dasens stabilitet vesentlig.
Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig en fremgangsmåte ved stabilisering av peroksidase til hvilket det er koblet et .immunologisk aktivt materiale i et serum eller serumproteinholdig medium, hvilket er karakterisert ved å man tilsetter mediet 4-amino-antipyrin.
Ved foreliggende oppfinnelse kommer som peroksidase spesielt pepperrotperoksidase i betrakning. Som serum har spesielt geiteserum vist seg å være foretrukket, men også f.eks. fosterkalveserum kan anvendes. Som serumprotein kommer f.eks. albumin i betrakning.
Konsentrasjonen av 4-amino-antipyrin i mediet ligger fortrinnsvis mellom 10 mg og 1000 mg pr. liter, spesielt 40-300 mg pr. liter. Ifølge et spesielt foretrukket aspekt anvendes 4-amino-antipyrinet i en konsentrasjon på 100 mg eller 200 mg pr., liter.
Det foreliggende eksempel anskueliggjør oppfinnelsen.
Eksempel
0,1 mg/l (geit) anti-CEA-peroksidase-konjugat oppløses i 0,2 mol/l natriumfosfatpuffer med pH 6,5 med 2 g/l storfeserum-albumin, 20% normalt geiteserum (inaktivert ved 56°C/30min.) samt 0,5 g/l thimerosal. Denne anti-CEA-peroksidaseløsning oppdeles i 2 deler. En del av denne anti-CEA-peroksidase-løsning tilsettes 0,2 g/l 4-amino-antipyrin. De to anti-CEA-peroksidaseløsninger sterilfiltreres (filter:0,2u) og fylles i fraksjoner på 2 0 ml i sterile glassflasker med skrue-lukning. Disse anti-CEA-peroksidaseløsninger oppbevares ved 2-8°C resp. 37°C.
Etter bestemte tidsintervaller bestemmes peroksidase-aktiviteten i de enkelte anti-CEA-peroksidaseløsninger, idet 0,05 ml av den enkelte anti-CEA-peroksidaseløsning (forfor-tynnet 1:20 i 9 g/l NaCl) tilblandes 0,5 ml substratpuffer-løsning (0,1 mol/l natriumsitrat med pH 5,0 med 6 mmol/1 H202 og 40 mmol/1 o-fenylendiamin) og idet man så inkuberer ved romtemperatur i 15 min. Ved tilsetning av 2,0 ml av IN HC1 avbrytes peroksidasereaksjonen og absorpsjonsdifferansen (<AA>492nm/RT/15 m^n) måles fotometrisk. For bestemmelse av den stabiliserende virkning til 4-amino-antipyrinet beregnes den prosentuelle restaktivitet av anti-CEA-peroksidase-løsningen som er lagret ved 37°C i forhold til den som ble oppbevart ved 2-8°C.
Den følgende tabell angir resultatene av det.ovenfor beskrevne forsøk og viser den stabiliserende virkning av 4-amino-antipyrin.
Claims (7)
1. Fremgangsmåte ved stabilisering av peroksidase,
til hvilket det er koblet et immunologisk aktivt materiale i et serum eller serumproteinholdig medium, karakterisert ved at man tilsetter mediet 4-amino-antipyrin.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at man som peroksidase velger pepperrotperoksidase.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at man som serum velger geiteserum.
4. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1-3,
karakterisert ved at man tilsetter 4-aminoantipyrin i en konsentrasjon på fra 10 - 1000 mg pr. liter.
5. Fremgangsmåte ifølte krav 4, karakterisert ved at man tilsetter 4-amino-antipyrin i en konsentrasjon på fra 40-300 mg pr. liter.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at man tilsetter 4-amino-antipyrin i en konsentrasjon på fra 100-200 mg pr. liter.
7. Stabilisert peroksidase til hvilket det er koblet et immunologisk aktivt materiale i et serum eller serumproteinholdig medium, karakterisert ved at mediet inneholder 4-amino-antipyrin.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH494481 | 1981-07-30 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO822609L NO822609L (no) | 1983-01-31 |
| NO163745B true NO163745B (no) | 1990-04-02 |
| NO163745C NO163745C (no) | 1990-07-11 |
Family
ID=4285239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO822609A NO163745C (no) | 1981-07-30 | 1982-07-29 | Stabiliseringsmetode. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4448882A (no) |
| EP (1) | EP0070992B1 (no) |
| JP (1) | JPS6054039B2 (no) |
| AT (1) | ATE11152T1 (no) |
| AU (1) | AU537173B2 (no) |
| CA (1) | CA1186990A (no) |
| DE (1) | DE3261832D1 (no) |
| DK (1) | DK155953C (no) |
| FI (1) | FI71170C (no) |
| NO (1) | NO163745C (no) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5084379A (en) * | 1983-04-29 | 1992-01-28 | Biowhittaker, Inc. | Fluorometric assay of chymopapain hypersensitivity and reagents therefor |
| JPS60188067A (ja) * | 1984-03-09 | 1985-09-25 | Takeda Chem Ind Ltd | ペルオキシダ−ゼ含有組成物 |
| US4622294A (en) * | 1985-02-08 | 1986-11-11 | Kung Viola T | Liposome immunoassay reagent and method |
| GB8505899D0 (en) * | 1985-03-07 | 1985-04-11 | Boots Celltech Diagnostics | Assay reagents |
| DE3509238A1 (de) * | 1985-03-14 | 1986-09-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisierung der aktivitaet von peroxidase in loesung |
| DE3511327A1 (de) * | 1985-03-28 | 1986-10-02 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisierung der aktivitaet von peroxidase in loesung |
| US4824784A (en) * | 1985-04-08 | 1989-04-25 | Hygeia Sciences, Incorporated | Chromogenic solution for immunoassay |
| US4931385A (en) * | 1985-06-24 | 1990-06-05 | Hygeia Sciences, Incorporated | Enzyme immunoassays and immunologic reagents |
| US4868108A (en) * | 1985-12-12 | 1989-09-19 | Hygeia Sciences, Incorporated | Multiple-antibody detection of antigen |
| US5102788A (en) * | 1988-11-21 | 1992-04-07 | Hygeia Sciences, Inc. | Immunoassay including lyophilized reactant mixture |
| US5460944A (en) * | 1991-10-28 | 1995-10-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Storable protein solution |
| KR100375159B1 (ko) * | 2000-05-16 | 2003-03-08 | 김일한 | 팔미토일 보효소 ａ를 이용한 포유동물의 혈청알부민의 과산화효소 활성을 증가시키는 방법 |
| EP1865054B1 (en) * | 2006-06-09 | 2010-10-06 | Roche Diagnostics GmbH | Inhibition of peroxidase enzymatic activity |
| ATE483799T1 (de) * | 2006-06-09 | 2010-10-15 | Hoffmann La Roche | Hemmung der enzymatischen peroxidaseaktivität |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3065827D1 (en) * | 1979-08-23 | 1984-01-12 | Ivan Endre Modrovich | Method of stabilizing an enzyme solution for use in total cholesterol determination, stabilized solution and test kit therefor |
| US4378429A (en) * | 1979-08-23 | 1983-03-29 | Modrovich Ivan Endre | Enzymatic method and stabilized solutions for determining total cholesterol in human serum |
| US4252896A (en) * | 1980-01-07 | 1981-02-24 | Abbott Laboratories | Method of stabilizing peroxidase in a serum protein based medium |
-
1982
- 1982-05-25 AT AT82104551T patent/ATE11152T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-05-25 DE DE8282104551T patent/DE3261832D1/de not_active Expired
- 1982-05-25 EP EP82104551A patent/EP0070992B1/de not_active Expired
- 1982-06-08 CA CA000404739A patent/CA1186990A/en not_active Expired
- 1982-06-21 FI FI822224A patent/FI71170C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-07-01 AU AU85526/82A patent/AU537173B2/en not_active Ceased
- 1982-07-12 US US06/397,613 patent/US4448882A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-07-28 DK DK337482A patent/DK155953C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-07-29 JP JP57132924A patent/JPS6054039B2/ja not_active Expired
- 1982-07-29 NO NO822609A patent/NO163745C/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO822609L (no) | 1983-01-31 |
| CA1186990A (en) | 1985-05-14 |
| DE3261832D1 (en) | 1985-02-21 |
| EP0070992A1 (de) | 1983-02-09 |
| DK337482A (da) | 1983-01-31 |
| FI71170C (fi) | 1986-11-24 |
| DK155953B (da) | 1989-06-05 |
| FI822224L (fi) | 1983-01-31 |
| JPS6054039B2 (ja) | 1985-11-28 |
| AU8552682A (en) | 1983-02-03 |
| JPS5823786A (ja) | 1983-02-12 |
| NO163745C (no) | 1990-07-11 |
| AU537173B2 (en) | 1984-06-14 |
| FI71170B (fi) | 1986-08-14 |
| FI822224A0 (fi) | 1982-06-21 |
| ATE11152T1 (de) | 1985-01-15 |
| EP0070992B1 (de) | 1985-01-09 |
| DK155953C (da) | 1989-12-18 |
| US4448882A (en) | 1984-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO163745B (no) | Stabiliseringsmetode. | |
| Hirsch | Spermine oxidase: an amine oxidase with specificity for spermine and spermidine | |
| London et al. | Renaturation of Escherichia coli tryptophanase after exposure to 8 M urea: evidence for the existence of nucleation centers | |
| Carroll et al. | A colorimetric serum glucose determination using hexokinase and glucose-6-phosphate dehydrogenase | |
| Patrick | The degradative metabolism of L-cysteine and L-cystine in vitro by liver in cystinosis | |
| Van Heyningen et al. | Reduction of glutathione coupled with oxidative decarboxylation of malate in cattle lens | |
| Gralnick | Factor VIII/von Willebrand factor protein. Galactose a cryptic determinant of von Willebrand factor activity. | |
| Campagne et al. | Amino acid and energy requirements of protein synthesis in rat pancreatic tissue in vitro | |
| JPS61249389A (ja) | 安定化サルコシンオキシダ−ゼ組成物 | |
| JPH0335920B2 (no) | ||
| JPS585668B2 (ja) | 血清蛋白質を主体とする媒質中の過酸化酵素安定化法 | |
| US4504579A (en) | Stabilized peroxidase compositions | |
| US4764468A (en) | Process for stabilizing the activity of peroxidase in solution | |
| US4757016A (en) | Process for stabilizing the activity of peroxidase in solution | |
| Wassler et al. | Proteolytic cleavage of haptoglobin occurs in a subcompartment of the endoplasmic reticulum: evidence from membrane fusion in vitro. | |
| WO1996030503A1 (en) | Reagent stabilized using coenzyme reduction system | |
| Ratnoff et al. | The evolution of clot-promoting and amidolytic activities in mixtures of Hageman factor (factor XII) and ellagic acid: The enhancing effect of other proteins | |
| Werber et al. | Asparaginase activities in vitro are highly sensitive to different buffer conditions | |
| AU640090B2 (en) | Storable protein solution | |
| NO175541B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av human vevtype plasminogenaktivator | |
| Elgue et al. | The use of a commercial ELISA for assay of thrombin-antithrombin complexes in purified systems | |
| Kennedy et al. | Papain, chymotrypsin and related proteins—a comparative study of their beer chill-proofing abilities and characteristics | |
| Wagley et al. | The inactivation of Rh-antibodies by peroxidase | |
| JPH11218533A (ja) | ヘモグロビン試料の安定化 | |
| Goll et al. | An effect of trypsin on the actin-myosin interaction |